乙肝病毒感染的檢測手段和診斷指標.ppt

1、乙肝病毒感染的檢測手段和診斷指標,乙肝病毒HVB（hepatitis B virus）,引起人類急、慢性肝炎的DNA病毒，也稱丹氏顆粒。 我國的乙肝病毒感染率約60%-70%；乙肝表面抗原攜帶率約占總人口的7.18%。,乙肝病毒的檢測手段,免疫學方法 酶免疫法（ELISA） 時間分辨熒光分析技術（TRFIA） 膠體金法 分子生物學方法 HBV-DNA法（PCR） bDNA法,乙肝病毒檢測指標,酶免疫法（ELISA）,酶免疫法（ELISA）,酶免疫法（ELISA）,酶免疫法（ELISA）,目的：對乙肝血清標志物進行定性的分析 優(yōu)點：簡單、快速、穩(wěn)定 缺點：敏感度相對較低；出現(xiàn)鉤狀效應（前帶/后帶

2、）和受到交叉污染的可能性較大；不能夠對乙肝病毒標志物實施動態(tài)觀察；對低水平HBV感染標志物的漏檢率相對較高。,時間分辨熒光分析技術（TRFIA）,示蹤劑：鑭系元素 流程： 具有雙功能基團的鑭系元素對抗原或抗體進行標記 通過時間延遲將非特異性的熒光去除 發(fā)生特異性結合時，抗原抗體復合物在可以增強液中發(fā)生解離，在特定的激發(fā)光的激發(fā)作用下發(fā)出一種特定波長的熒光，在固定的時間對特異性熒光進行檢測即可 意義：適用于急診或手術前對HBV病毒進行定性檢查，其主要優(yōu)點在于檢測速度較快、操作簡單方便，對操作技術和檢測環(huán)境的要求相對較低。,膠體金法,膠體金：由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸

3、鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負電的疏水膠溶液，由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。 原理：膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。 類型：免疫膠體金光鏡染色法 免疫膠體金電鏡染色法 膠體金免疫層析法 等,膠體金法,優(yōu)點：檢測速度相對較快，在取得血清的情況下，一般情況下在十分鐘之內就可以對結果進行判讀。 缺點：只能對乙肝病毒實施定性檢測，準確率與酶聯(lián)免疫吸附試驗比較相對低，且對于弱陽性的表現(xiàn)度相對較差，造成弱陽性標本的漏讀和誤讀的可能性相對較大，性價比跟準確

4、度方面都要略遜于ELISA。,傳統(tǒng)PCR PCR-ELISA 實時定量PCR,HVB-DNA法（PCR）,原理：探針雜交 方法：bDNA是人工合成的側鏈DNA片段，每個側鏈上都可以帶標記物。在用于檢測的微孔板上包被有一套人工合成的HBV-DNA特異性核苷酸捕獲探針，當HBV-DNA從細胞中釋放出來時，被板上的捕獲探針所捕獲。另一套靶向延伸探針既能與捕獲的HBV-DNA雜交，又能與預放大探針雜交。隨后，放大探針與預放大探針雜交，形成bDNA復合物。標記有多個堿性磷酸酶的探針固定到該復合物上，與發(fā)光底物共同孵育，記錄發(fā)光強度，并根據(jù)標準曲線求得HBV-DNA濃度。 意義：目標物不被擴增,但檢測信號

5、被放大,從而提高了靈敏度。,bDNA法（branched DNA）,參考文獻,【1】胡曉丹,目前乙肝病毒不同臨床檢測方法的對照研究J.國際病毒學雜志,2015,Vol.22,supplement.142-143. 【2】王健,閔福援,乙肝病毒血清標志物的檢測方法及其臨床意義J.中華檢驗醫(yī)學雜志，2005，Vol.28, No.1.113-115. 【3】張寶華,黃婷,乙型肝炎病毒檢測方法的相關性分析J.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志 ,2010, Vol.7, No.4.69-71. 【4】王家杰,何慶明,劉佳文,李寶玲,李金紅,乙型肝炎病毒標志物定量檢測方法的評價J.國際檢驗醫(yī)學雜志 ,2015, Vol.3, N