藥物分析 第十四章 維生素類藥物的分析.ppt

1、第十四章維生素類藥物的分析,概 述,維生素維持正常生理功能所必需的、微量營養(yǎng)物質(zhì)，人體不能合成維生素。必須從外界食物中攝取。,維生素的發(fā)現(xiàn)是20世紀(jì)的偉大發(fā)現(xiàn)之一。1897年,C.艾克曼在爪哇發(fā)現(xiàn)只吃精磨的白米即可患腳氣病，未經(jīng)碾磨的糙米能治療這種病。并發(fā)現(xiàn)可治腳氣病的物質(zhì)能用水或酒精提取,當(dāng)時稱這種物質(zhì)為“水溶性B”。,Christiaan Eijkman 1929 諾貝爾生物醫(yī)學(xué)獎,The Discovery of Vitamin,發(fā)現(xiàn)簡史,必需維生素 13種,維生素A，維生素B，維生素C，維生素D，維生素E，維生素K，維生素H（生物素），維生素P，維生素PP，維生素M，維生素T，維生素U

2、，水溶性維生素。,分類,A,B1,C,D,E,Vitamins,Contents,維生素A的簡介,是魚類肝臟中提取的一種不飽和脂肪醇，又稱魚肝油。目前主要采用人工合成。,在體內(nèi)以視黃醇的形式儲存，缺乏會影響視色素的合成，導(dǎo)致夜盲癥，視力減退。,第一節(jié) 維生素A的分析,全反式,第一節(jié) 維生素A的分析,結(jié)構(gòu),共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烯,黃色棱形，62-64 ,淡黃色棱形，57-58,無定型，28-29,去氫維生素 VitA2,去水維生素 VitA3,易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng),第一節(jié) 維生素A的分析,溶解性:與三氯甲烷、乙醚、環(huán)已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 不穩(wěn)定性：含有多個不飽

3、和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被空氣中氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂解，特別是在加熱和金屬離子存在時更易氧化變質(zhì)從而失活。,第一節(jié) 維生素A的分析,性質(zhì),紫外吸收：共軛多烯醇側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，在325-328nm之間有最大吸收，可用于鑒別。,第一節(jié) 維生素A的分析,第一節(jié) 維生素A的分析,天然維生素A主要是反式,CHCl3,可用于鑒別和含量測定,與三氯化銻呈色:三氯甲烷+三氯化銻=不穩(wěn)定的藍(lán)色,與三氯化銻呈色反應(yīng),第一節(jié) 維生素A的分析,鑒別實(shí)驗(yàn),（一）Carr-Price反應(yīng),藍(lán)色,紫紅,第一節(jié) 維生素A的分析,條件： 無水、無醇,SbCl3,水,SbOCl,乙醇可使碳正離子的正電荷消失,第一節(jié) 維生素A的分析

4、,要求儀器和試劑必須干燥無水， 三氯甲烷必須無醇,第一節(jié) 維生素A的分析,max為326nm 一個吸收峰,max為350390nm 三個吸收峰,五個共軛雙鍵,六個共軛雙鍵,最大吸收峰紅移,（二）UV法,第一節(jié) 維生素A的分析,第一節(jié) 維生素A的分析,維生素A在無水乙醇溶液中溶解,立即進(jìn)行UV掃描,在360nm處有一最大吸收峰. 當(dāng)鹽酸水浴加熱30s,迅速冷卻,此過程發(fā)生脫水反應(yīng),掃描時出現(xiàn)三個吸收峰,USP 顯色劑 磷鉬酸 規(guī)定斑點(diǎn)顏色和Rf值,BP 對照品法 顯色劑 三氯化銻,（三）TLC法,第一節(jié) 維生素A的分析,展開劑： 環(huán)己烷-乙醚（80：20）,均顯藍(lán)色斑點(diǎn)，維生素醇（ Rf= 0.

5、1） 維生素醋酸酯（ Rf= 0.45） 維生素棕櫚酸酯（ Rf= 0.7）,酸值,取乙醇與乙醚各15ml，置錐形瓶中，加酚酞指示劑5滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）至顯粉紅色，再加本品2.0g，振搖使溶解，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，酸值應(yīng)不大于2.0（附錄VIIH）,雜質(zhì)檢查,過氧化值,取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振搖使溶解，加碘化鉀的飽和溶液1ml，振搖1分鐘，加水100ml與淀粉指示液1ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）滴定至紫藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/L）不得過1.5ml

6、。,雜質(zhì)檢查,第一節(jié) 維生素A的分析,含量測定,（一）UV法（三點(diǎn)校正法）,第一節(jié) 維生素A的分析,維生素A在325328nm的波長范圍內(nèi)有最大吸收，可用紫外法進(jìn)行含量測定但維生素A原料?；煊须s質(zhì)如：,第一節(jié) 維生素A的分析,維生素A的氧化產(chǎn)物,第一節(jié) 維生素A的分析,維生素A在光照下產(chǎn)生的無活性的聚合物,第一節(jié) 維生素A的分析,第一節(jié) 維生素A的分析,第一節(jié) 維生素A的分析,測定對象：VitA醋酸酯時，ChP2015規(guī)定,第一法 等波長差法,第一節(jié) 維生素A的分析,第二法 等吸收比法,測定對象： VitA醇時，ChP2015規(guī)定,第一節(jié) 維生素A的分析,合成的或天然的維生素A 均為酯式維生素

7、A，根據(jù)供試品中干擾雜質(zhì)的多少，可采用： （1）直接測定法 （2）皂化法,第一節(jié) 維生素A的分析,求,求效價,（1）基本步驟,4. 測定方法,A選擇，A328測定或A328校正,求標(biāo)示百分含量,（1）第一法（直接測定法，適用于純度高的維生素A醋酸酯的測定） 1）方法 取樣品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解 在300、316、328、340、360nm測吸收度，以確定最大吸收波長（ A328或A328校正）。,第一節(jié) 維生素A的分析,b.判斷法 最大吸收波長在326-329nm之間，且5個波長下的絕對值差值均不超過0.02時，可直接用328nm波長處的測得的吸收度值求得吸收系數(shù)。,a.計算吸收度比值

8、（Ai/A328）：與中國藥典的吸收度比值相比較，判斷每個差值的絕對值是否超過0.02。,第一節(jié) 維生素A的分析,最大吸收波長在326-329nm之間，計算5個波長下的絕對差值，如果有一個或幾個超過0.02，應(yīng)按以下的方法進(jìn)行判斷：,A328校正=3.52（2 A328 A316-A340）,第一節(jié) 維生素A的分析,（1）第一法（直接測定法，適用于純度高的維生素A醋酸酯的測定） 1）方法 取樣品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解 在300、316、328、340、 360nm測吸收度， 確定A 2）計算 a.吸光系數(shù)E1%1cm,第一節(jié) 維生素A的分析,b.求效價（IU/g）：效價指每g供試品所含維

9、生素的A的國際單位數(shù)。,第一節(jié) 維生素A的分析,1IU=0.344g全反式維生素A醋酸酯,IU/g=,第一節(jié) 維生素A的分析,每克純品相當(dāng)多少個單位（IU）?,1IU=0.344g全反式維生素A醋酸酯,第一節(jié) 維生素A的分析,第一節(jié) 維生素A的分析,c.求維生素A占標(biāo)示量的百分含量,AA328或A328校正 D供試品的稀釋倍數(shù) 換算因子維生素A醋酸酯在環(huán)己烷中1900； 維生素A醇在異丙醇中1830 W為平均內(nèi)容物重量；W為稱取內(nèi)容物重量（供試品取用量） L 比色池厚度 標(biāo)示量為處方中規(guī)定的每粒中所含的國際單位數(shù),第一節(jié) 維生素A的分析,VitAD膠丸中VitA的含量測定 精密稱取本品(規(guī)格1

10、0000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.08262g/丸）的內(nèi)容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度為,第一節(jié) 維生素A的分析,A300 ：0.354 A316 ：0.561 A328 ：0.628 A340 ：0.523 A360 ：0.216,A300 /A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811 A360/A328 ：0.299

11、,求本品中維生素A的含量？,第一節(jié) 維生素A的分析,A300 /A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.833 A360/A328 ：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+ 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04, ,= = = = =,第一節(jié) 維生素A的分析,第一節(jié) 維生素A的分析,適用于維生素A醇,（等吸收比法）,第一法無法消除雜質(zhì)干擾時用此法, 皂化法、6/7A法 ,（2）第二法,第一節(jié) 維生素A的分析,水溶性,脂溶性,第一節(jié) 維生素A的分析,判斷max是否在32

12、3327nm之間,取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定,計算,是,否,第一節(jié) 維生素A的分析,判斷 A300 /A325 是否大于0.73,是,否,取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定,計算A325(校正),0,3%,3%,f,第一節(jié) 維生素A的分析,高效液相色譜法,流動相：正己烷異丙醇（9973） 檢測波長：325nm 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)考察分離度 是否能將維生素A醋酸酯順式和反式分開,第一節(jié) 維生素A的分析,三氯化銻比色法,max 618nm620nm,標(biāo)準(zhǔn)曲線法,第一節(jié) 維生素A的分析,優(yōu)點(diǎn)： 簡便 快速,第一節(jié) 維生素A的分析,小結(jié),維生素A共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)乙烯 性質(zhì)：脂溶性；不穩(wěn)定，可與三

13、氯化銻呈色 鑒別：三氯化銻反應(yīng)；UV；TLC 含量測定： 紫外-分光光度法（三點(diǎn)校正） 三氯化銻比色法,A,B1,C,D,E,Vitamins,Contents,維生素B1廣泛分布于米糠、麥麩和酵母中，具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導(dǎo)與消化的正常功能。主要用于治療維生素B1缺乏癥、多發(fā)性神經(jīng)炎及胃腸疾病。,第一節(jié) 維生素B1的分析,氨基嘧啶環(huán),噻唑環(huán),亞甲基,氯化4-甲基-3(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基-5-（2-羥基乙基）噻唑鎓鹽酸鹽,結(jié)構(gòu)與性質(zhì),維生素B1（鹽酸硫胺）,第二節(jié) 維生素B1的分析,結(jié)構(gòu)與性質(zhì),維生素B1為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末 易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚 水溶液呈酸性,

14、1. 溶解性,性質(zhì),噻唑環(huán)、嘧啶環(huán)共軛雙鍵 12.5g/ml鹽酸溶液（9 1000）,max = 246nm,2.硫色素?zé)晒夥磻?yīng),3.UV,雜原子的反應(yīng)，能與某些生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測定。,4.與生物堿沉淀試劑反應(yīng),5.氯化物的特性,與NaOH共熱，形成硫化鈉，硝酸鉛生成黑色沉淀；,6.硫元素反應(yīng),7.紅外光譜特征,二、鑒別試驗(yàn),（一）硫色素?zé)晒夥磻?yīng)為維生素B1所特有,H2O,溶于丁醇，顯藍(lán)色熒光,維生素B1,VitB1,H+,H+,H+,沉淀反應(yīng),H+,S元素反應(yīng),Cl-反應(yīng),硫元素反應(yīng)和氯化物反應(yīng),H+,Company Logo,三、含量測定,高氯酸滴定

15、液（0.1mol/L）的滴定度(T)為16.86mg/ml。 喹那啶紅亞甲藍(lán) (紫紅天藍(lán)),非水溶液滴定法,紫外分光光度法,維生素B1分子中具有共軛雙鍵，在紫外區(qū)有吸收,注意,維生素B1片的測定,片劑、注射劑,= 421,（每片）相當(dāng)于標(biāo)示量的%=,A = ECL,ChP,1,1,（每ml）相當(dāng)于標(biāo)示量的,NaOH,硫色素?zé)晒夥ǎ壕S生素B1的專屬性反應(yīng),2. 方法,小結(jié),維生素B1（鹽酸硫胺）氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過亞甲基連接而成季銨鹽。 性質(zhì)：水溶性；硫色素反應(yīng)；可與生物堿沉淀劑反應(yīng) 鑒別：硫色素反應(yīng)；沉淀反應(yīng)；Cl、S反應(yīng) 含量測定：非水滴定；紫外分光光度法； 硫色素?zé)晒夥?A,B1,C,D

16、,E,Vitamins,Contents,第三節(jié) 維生素C的分析,維生素C是膠原蛋白形成所必需的，有助于保持間質(zhì)的完整，維生素C 缺乏可導(dǎo)致齒齦腫脹，出血，皮下瘀點(diǎn)，關(guān)節(jié)及肌肉疼痛，毛囊角化，嚴(yán)重缺乏可引起壞血病。所以維生素C又稱為抗壞血酸。,L-抗壞血酸,(有生物活性),L-二酮古羅糖酸,L-去氫抗壞血酸,無生物活性,第三節(jié) 維生素C的分析,結(jié)構(gòu)與性質(zhì),C3OH的 pKa = 4.17,C2OH的 pKa = 11.57,2.酸性,一元酸,性質(zhì),1. 溶解性,易溶于水，水中呈酸性；略溶于乙醇，不溶于三氯甲烷或乙醚,L(+)抗壞血酸 活性最強(qiáng) 比旋度+20.5+21.5,手性C（C4、C5）,

17、3. 旋光性,*,*,含有四個光學(xué)異構(gòu)體,有活性,有活性,無活性,4.還原性,二烯醇結(jié)構(gòu),與堿反應(yīng),5. 水解反應(yīng),弱堿中生成單鈉鹽， 強(qiáng)堿中水解,糖類的顯色反應(yīng),50,結(jié)構(gòu)與糖類相似,6. 具糖的性質(zhì),五碳糖,維生素C,7. UV特征,維生素C具有共軛雙鍵,利用還原性：與氧化劑的反應(yīng),鑒別試驗(yàn),（一）與AgNO3反應(yīng),去氫抗壞血酸,黑色,（二）與2，6 - 二氯靛酚反應(yīng),氧化型,玫瑰紅色 （酸性）,藍(lán)色(堿性),無色,與堿性酒石酸銅反應(yīng),與KMnO4反應(yīng),（三）與其他氧化劑反應(yīng),磚紅色沉淀,試劑褪色,磷鉬酸 鉬藍(lán),與磷鉬酸反應(yīng),（四）薄層色譜法,（五）糖類反應(yīng),H2O,維生素C可在三氯醋酸或

18、鹽酸存在下水解、脫羧、生成戊糖，再失水，轉(zhuǎn)化為糠醛，加入吡咯，加熱至50 產(chǎn)生藍(lán)色,0.01mol/L HCl,（五）紫外光譜法,BP2010,雜質(zhì)檢查,（一）溶液的澄清度與顏色檢查,內(nèi)酯環(huán)水解,糠醛縮合呈色,高于或低于pH.0-6.0,空氣、光線、溫度,維生素C,脫羧,控制有色雜質(zhì),維生素C,（二）鐵、銅離子,（三）草酸的檢查,草酸與金屬離子作用形成沉淀；所以對Vc的原料，尤其是注射液，要進(jìn)行草酸檢查； 加入CaCl2，比濁法；,原子吸收分光光度法,（二）鐵、銅離子,原子吸收分光光度法,四、含量測定,維生素C,維生素C制劑,碘量法,二氯靛酚法,紫外分光光度法,高效液相色譜法,指示劑 淀粉指示

19、液,（一）碘量法,原理：利用Vc強(qiáng)的還原性,HAc,取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6。,2、方法,原料藥,（2）酸性環(huán)境 稀醋酸,（1）新沸冷H2O,減慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,趕走水中O2，,減少O2的干擾,3、注意事項(xiàng),（4）附加劑干擾的排除,片劑 過濾,（二）2，6 - 二氯靛酚滴定法,快速滴定，專屬性強(qiáng)，用于含Vit C的制劑與食品分析,自身指示終點(diǎn),1. 原理,2

20、. 方法,（2）快速滴定 2min內(nèi),（1）酸性環(huán)境 HPO3-HAc,穩(wěn)定VitC,防止其他還原性物質(zhì)干擾,（3）亦可剩余比色測定,（定量過量）,（測剩余染料）,3.注意事項(xiàng),（4）二氯靛酚不穩(wěn)定，須臨用前配制并標(biāo)定,專屬性強(qiáng)，多用于含 Vc的制劑和食品的分析,配制方法：NaHCO3 42mg+水50 ml，加二氯靛酚鈉二水合物0.5g +水200 ml,過濾，即得。 標(biāo)定方法：用干燥的維生素C對照品進(jìn)行標(biāo)定,（三）高效液相色譜法,人血漿中VitC濃度的HPLC法測定,小結(jié),維生素C（L抗壞血酸） 烯二醇結(jié)構(gòu) 性質(zhì)：水溶性；酸性；旋光性；還原性；水解性 糖類性質(zhì)；紫外吸收特性 鑒別：硝酸銀反

21、應(yīng)；二氯靛酚鈉反應(yīng)； 氧化反應(yīng)；TLC；糖類反應(yīng)；紫外 雜質(zhì)檢查：澄清度與顏色檢查 鐵、銅離子檢查 草酸檢查 含量測定：碘量法；二氯靛酚滴定法； 高效液相色譜,A,B1,C,D,E,Vitamins,Contents,Sources,Sunlight Foods Fortified Milk Fish Oils,Deficiency,佝僂病 牙齒松動 雞胸 骨質(zhì)疏松 腳成弓形,Function,促進(jìn)鈣、磷的吸收； 促進(jìn)骨骼和牙齒的正常生長； 調(diào)節(jié)檸檬酸的代謝,第四節(jié) 維生素D的分析,維生素D是一類抗佝僂病維生素的總稱，目前有10多種，都是甾醇衍生物。,維生素D2 維生素D3,第四節(jié) 維生素D的

22、分析,維生素D2、D3無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭，無味；遇光或空氣均易變質(zhì)。,溶解性:維生素D2在三氯甲烷中極易溶解,在丙酮乙醇乙醚中易溶；維生素D3在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚極易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。 不穩(wěn)定性:毒性增強(qiáng).含有多個烯鍵，所以極不穩(wěn)定，宜氧化變質(zhì)，效價降低，毒性增強(qiáng)。,第四節(jié) 維生素D的分析,旋光性:有五到六個手性碳原子,均具有旋光性. 維生素D2 6個手性碳原子 維生素D3 5個手性碳原子,第四節(jié) 維生素D的分析,顯色反應(yīng) 甾類化合物 氯仿溶液 黃色 紅色 紫色 綠色 紫外吸收特性 無水乙醇 265nm 維生素D2 為460490 維生素D3 為4

23、65495,醋酐 硫酸,E,1cm,1%,E,1%,1cm,二、鑒別試驗(yàn),（一）顯色反應(yīng),1與醋酐-濃硫酸反應(yīng),氯仿溶液 黃色 紅色 紫色 綠色,醋酐 硫酸,2與三氯化銻反應(yīng),本品,1,2-二氯乙烷,三氯化銻試液,橙紅色,粉紅色,3其它顯色反應(yīng),維生素D,三氯化鐵,橙黃色,二氯丙醇 乙酰氯,綠色,（二）比旋度鑒別,無水乙醇溶液,維生素D2,比旋度為102.5至107.5,維生素D3,比旋度為105至112,（三）其它鑒別方法,薄層色譜法、HPLC法 制備衍生物測熔點(diǎn),紫外、紅外吸收光譜,（四）維生素D2、D3的區(qū)別反應(yīng),維生素D2,維生素D3,96%乙醇,10ml,取0.1ml,乙醇1ml 和

24、85%硫酸5ml,紅色max570nm,黃色 max495nm,三、雜質(zhì)檢查,（一）麥角甾醇的檢查,維生素D290%乙醇溶液,洋地黃皂苷溶液,不得發(fā)生渾濁或沉淀,（二）前維生素D的光照產(chǎn)物,（三）有關(guān)物質(zhì)檢查,Ch.P 2010NP-HPLC,含量測定,USP34-NF29,化學(xué)法,色譜法,微生物法,BP2010,化學(xué)法,色譜法,光譜法,四、含量測定,正相高效液相色譜法,（一）維生素D測定法,含量以單位表示 每單位相當(dāng)于維生素D 0.025g,注意：計算的是維生素D及前維生素D經(jīng)折 算成維生素D的總量,固定相：硅膠 流動相：正己烷正戊醇（997：3） 檢測波長：254nm,第一法：用于無維生素

25、A醇及其他干擾的供試品 第二法：(1)皂化提取 ;(2)凈化用色譜柱系統(tǒng)分離收集維生素D，得供試品溶液B;(3)按第一法進(jìn)行測定。 第三法：當(dāng)樣品經(jīng)皂化提取及凈化用色譜系統(tǒng)分離收集后，前維生素D峰仍受干擾時，采用此法。,小結(jié),維生素D抗佝僂病維生素的總稱 性質(zhì)：脂溶性；不穩(wěn)定；旋光性； 顯色反應(yīng)；紫外 鑒別：顯色反應(yīng)；比旋度； VD2、VD3區(qū)別 雜質(zhì)檢查：麥角甾醇； 前維生素D光照產(chǎn)物；有關(guān)物質(zhì) 含量測定： 三法,A,B1,C,D,E,Vitamins,Contents,主要講解,第五節(jié) 維生素E的分析,維生素E早在20世紀(jì)20年代就被人們發(fā)現(xiàn)，Evans和他的同事在研究生殖過程中發(fā)現(xiàn)，酸敗

26、的豬油可以引起大鼠的不孕癥。 是與生育有關(guān)的維生素的總稱 1936 年分離出結(jié)晶體 1938 年被瑞士化學(xué)家人工合成,維生素E的顯微照片,維生素E膠囊,維生素E類結(jié)構(gòu)與相對活性,維生素E的結(jié)構(gòu),2R*(4R*,8R*)-3,4-二氫-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基)-2H-苯并吡喃-6-醇醋酸酯,-生育酚醋酸酯,生物效價 右旋體 ： 消旋體 = 1.4 ：10,（天然品）,（合成品）,維生素E的性質(zhì),性狀:黃色或金黃色粘稠狀透明液體 脂溶性:溶于丙酮、乙醇、乙醚或植物油等有機(jī)溶劑中 水溶性:不溶于水 穩(wěn)定性:無氧時對熱、酸穩(wěn)定，對堿不穩(wěn)定， 對氧敏感，遇光可被氧化，

27、色漸變深，,UV：乙醇溶液中max284nm,（一）,硝酸反應(yīng),二、鑒別試驗(yàn),維生素E在硝酸酸性條件下，水解生成生育酚,水解,三氯化鐵聯(lián)吡啶反應(yīng),（二）,生育酚,對-生育醌,紅色,Fe3+,O,max = 284nm,min = 254nm,0.01%無水乙醇中,薄層板 硅膠G,展開劑 環(huán)己烷 -乙醚（4 ：1）,顯色劑 硫酸（105 5）,VitE Rf = 0.7 -生育酚 Rf = 0.5 -生育醌 Rf = 0.9,維生素E合成過程,2,3,5-三甲基對二苯酚,植醇,+,-生育酚,-生育酚醋酸酯,三、雜質(zhì)檢查,三、雜質(zhì)檢查,（一）酸度,游離醋酸,（二）生育酚,硫酸鈰滴定液（0.01mo

28、l/L） 二苯胺（亮黃灰紫）,利用游離生育酚的還原性， 將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰,三、雜質(zhì)檢查,1.原理,2.試劑,問藥典中規(guī)定的維生素E中所含的游離生育酚的限量是多少？,計算 每ml硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于0.002154g的游離生育酚,2.15,限量,(三)有關(guān)物質(zhì)的檢查,(四)殘留溶劑：環(huán)己烷的檢查,四、含量測定,GC法,（一）,GC特點(diǎn),1、,選擇性好 靈敏度高 速度快 分離效能好,揮發(fā)性低、不穩(wěn)定、極性強(qiáng)衍生化。易受樣品蒸氣壓限制,載氣N2 固定液硅酮（OV-17） 擔(dān)體硅藻土或高分子多孔小球 柱溫265 檢測器氫火焰離子化檢測器(FID) 內(nèi)標(biāo)正三十二烷 n 500 R2,內(nèi)標(biāo)法加校正因子定量,2、VitE測定的色譜條件,內(nèi)標(biāo)法,供試液（樣品+內(nèi)標(biāo)）,內(nèi)標(biāo)物,對照液（對照+內(nèi)標(biāo)）,是樣品中不存在的物質(zhì) 與被測組分峰靠近 能與各組分完全分離 與被測組分的量接近,樣品 dl生育酚 固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠 流動相甲醇-水（49 ：1） 檢測波長292nm R2.6 RSD0.8%,（二）HPLC法（外標(biāo)法）,（三）熒光分光光度法,對照品 dl生育酚 在220400nm波長范圍內(nèi)，以發(fā)射、激發(fā)波長間隔為40