生物安全柜性能測試項目與方法

1、生物安全柜性能測試項目與方法（依據(jù)生物安全柜應用指南原理、使用和驗證李勁松主編，化學工業(yè)出版社）A.1 柜體泄漏檢測試驗壓力衰減及皂泡/示蹤氣體檢測試驗A.1.1 壓力衰減及皂泡試驗A.1.1.1 目的該測試應在所有壓力排風系統(tǒng)的外表面進行，目的是檢測焊縫、密封墊、壓力排風系統(tǒng)檢漏口以及級柜手套接口是否存在泄漏。A.1.1.2 儀器壓力計、壓.力表或壓力傳感系統(tǒng)，測量范圍為0500Pa、精確度為5 Pa。滲漏檢測試劑（25g/L肥皂液，或其他稀釋10倍的中性洗滌劑)。塑料布(0.5mm耐沖擊性聚苯乙烯膜)。管道密封膠帶。A.1.1.3 （壓力衰減測試）方法將安全柜密封（對于I級、級安全柜即密閉

2、正面的觀察窗和排風口）。為方便測試，必要時應除去裝飾嵌板及其他通道障礙部件以暴露壓力排風系統(tǒng)。將壓力計、壓力表或壓力傳感系統(tǒng)連接到測試區(qū)域以指示內(nèi)部壓力見圖A-1(a)將安全柜充氣加壓至500Pa，停止充氣，并在30min后測量壓力。允許的泄漏量為原壓力的10%。如果安全柜的壓力達到此標準，則使用皂泡法來確定泄漏位置。A.1.1.4 （皂泡測試）方法將安全柜密封（對于1級、級安全柜即密閉正面的觀察窗和排風口）。為方便測試，必要時應除去裝飾嵌板及其他通道障礙部件以暴露壓力排風系統(tǒng)。將壓力計、壓力表或壓力傳感系統(tǒng)連接到測試區(qū)域以指示內(nèi)部壓力見圖A-1(a)。圖A-1 生物安全柜柜體泄漏試驗安全柜充

3、氣加壓至。沿著安全柜壓力排風系統(tǒng)外表面上所有的焊縫、密封墊、檢漏口和級柜手套接口噴灑或擦拭液態(tài)滲透檢測試劑（25g/L肥皂液，或其他稀釋10倍的中性洗滌劑）。小的泄漏點將會形成氣泡顯示出來。而較大的泄漏點則在洞口處還沒有形成氣泡時，就把探測液體吹走，而且可以感覺到氣體輕微的流動或聽到聲音。A.1.1.5 合格標準安全柜應能保持在500Pa50Pa的氣壓下30min，或者當壓力維持在500Pa50Pa時，安全柜壓力排風系統(tǒng)外表面上所有的焊縫、密封墊、檢漏口和密封處沒有皂泡產(chǎn)生。A.1.2 氦氣泄漏測試A.1.2.1 目的該測試在可能受生物污染的壓力排風系統(tǒng)中進行，目的是檢測焊接、密封墊或密封劑密

4、封的連接處是否存在泄漏，這些泄漏可能使具有潛在危害的物質(zhì)釋放進入大氣。A.1.2.2 儀器氦氣泄漏檢測器：用前應按照使用說明進行標定。A.1.2.3 方法進行測試的房間內(nèi)事先應徹底排空測試氣體，并且盡可能減少空氣流動。測試區(qū)應禁煙。將安全柜密封(對于級、級安全柜即密閉正面的觀察窗和排風口)。安全柜充氣加壓至500Pa。如果30min后，安全柜壓力變化不超過10%，則減壓至正常。如果安全柜不能保持這一壓力，則使用滲漏檢測試劑檢查泄漏處（見A.1.1），修復后再次進行測試。氦氣泄漏檢測：向安全柜內(nèi)充入純氦氣，直至排風口氦氣濃度達15%，然后將安全柜加壓至500Pa?；蛘呤褂门蛎洑饽以诎踩駜?nèi)部排出

5、15%的空氣，在氣囊向安全柜外排氣的同時將氦氣注入安全柜，然后加壓至500Pa。打開安全柜的送風機使氣體循環(huán)30s。按照使用說明調(diào)整氦氣泄漏檢測器的靈敏度至110-5ml/s。沿縫隙、級柜手套接口、檢漏口、面板密封墊以及其他可能的泄漏處移動探頭。注意不使儀器震動。在探測表面以約2.5cm/s的速度移動探頭，探頭與表面的距離保持在6.3 13mm之間見圖A-1(b)。A.1.2.4 合格標準(氦氣泄漏測試)當以15%以土的氦氣濃度加壓至500Pa時，安全柜任意位置的泄漏率不得超過1x10-5ml/s。注意：檢測的靈敏度，保持正壓在整個柜體為103ml/s，肥皂水法每一處為10-2ml/s，鹵素漏

6、泄試驗整個柜體為10-5ml/s。保持正壓操作的關(guān)鍵是前面開口的密閉。只要密閉完全，操作很簡單。但出現(xiàn)漏時，確定漏泄點比較困難。肥皂水法在密閉操作不完美時也可進行，但需要柜內(nèi)能持續(xù)保持一定壓力。大的泄漏點因不易形成肥皂泡反而會被疏忽，要充分注意這一點。A.1.3 六氟化硫（SF6）泄漏測試A.1.3.1 目的該測試在可能受生物污染的壓力排風系統(tǒng)中進行，目的是檢測焊接、密封墊或密封劑密封的連接處是否存在泄漏，這些泄漏可能使具有潛在危害的物質(zhì)釋放進入大氣。A.1.3.2 儀器工業(yè)型SF6泄漏檢測器(或靈敏度110-7ml/s的鹵化物檢測儀)，使用前需按照使用說明校準。A.1.3.3 方法進行測試的

7、房間內(nèi)事先應徹底排空測試氣體，并.且盡可能減少空氣流動。測試區(qū)應禁煙。將安全柜密封（即密閉正面的觀察窗和排風口）。安全柜充氣加壓至500Pa。如果30min后，安全柜壓力變化不超過10%，則減壓至正常。如果安全柜不能保持這一壓力，則使用滲漏檢測試劑檢查泄漏處(見A.1.1，修復后再次進行測試。向安全柜內(nèi)充入SF6氣體，加壓至500Pa。打開安全柜的送風機使氣體循環(huán)30s。按照使用說明調(diào)整SF6泄漏檢測器的靈敏度至510-7ml/s。沿縫隙、連接處、檢漏口、面板密封墊以及其他可能的泄漏處移動探頭。注意不使儀器震動。在探測表面以約2.5cm/s的速度移動探頭，探頭與表面的距離保持在6.313mm之

8、間見圖A-1(b)。A.1.3.4 合格標準（SF6泄漏檢測）安全柜任意位點的泄漏速率不得超過510-7ml/s。A.2 高效空氣粒子（HEPA）過濾器泄漏檢測A.2.1 目的檢測下排送風HEPA過濾器和排風HEPA過濾器本身、過濾器外殼以及過濾器固定框架的完整性。檢測時安全柜以額定風速0.025m/s運行。A.2.2 儀器A.2.2.1 線性或?qū)?shù)刻度顯示的氣溶膠光度計。對于濾器上游平均粒徑0.3 m，濃度為10g/L的多分散性鄰苯二甲酸二辛酚（DOP）氣溶膠顆粒，能夠100%顯示。靈敏度為110-3g/L，采樣流量510-4m3/s10%以上，噴霧口面積在11cm2以下。光度計使用前應按照

9、說明進行標定。A.2.2.2 氣溶膠發(fā)生器。氣噴式，產(chǎn)生粒子的平均粒徑0.3m。A.2.2.3 壓力表。量程0550kPa，分辨率7kPa，使用前按照說明進行校準。A.2.3 檢剛方法及合格標準A.2.3.1 適于掃描操作的過濾器如果安全柜裝有過濾擴散器和保護外罩，監(jiān)測前應移除。打開安全柜的風機和照明，按照使用說明安放氣溶膠發(fā)生器，井將氣溶膠通過有螺紋插塞的貫穿物向被測生物安全柜的遠離過濾器的靜壓箱內(nèi)引入。氣溶膠的引入點應按照適于與柜內(nèi)氣流均勻混合的原則確定?？稍跉馊苣z發(fā)生器的出口安裝一個T形接頭，以使檢測氣溶膠分布到單一風機的多個入口之內(nèi)或多個風機的入口之內(nèi)。按照使用說明啟動并調(diào)整氣溶膠光度

10、計。在上游臨近過濾器處測量氣溶膠濃度，測點最少為3點，分別為中心1點，距兩邊50mm處各一點，樣品濃度應大于10g/L。線性刻度光度計（刻度0100）需調(diào)整滿讀數(shù)至100。對于對數(shù)刻度光度計，將過濾器上游側(cè)濃度調(diào)整至一個分刻度所代表濃度的10000倍（采用儀器校準曲線）。在HEPA過濾器的整個下游面以及每個過濾器接縫的四周用光度計作掃描檢漏。過濾器的四周邊緣必須單獨掃過，過濾器濾材與邊框之間要沿著接縫掃描，過濾器與安全柜之間要圍繞密封部位掃描。探頭與檢測面距離保持在2.5cmn以內(nèi)，掃描速度小于5cm/s，線路應重疊。任何點上氣溶膠的持續(xù)滲透不得超過上游濃度的0.01%。A.2.3.2 不適于

11、掃描操作的過濾器如果安全柜的管道連接不適于對排風過濾器進行掃描操作，就在過濾器下游的通風管的某一位置鉆一個直徑大約為1cm（0.3in）的孔，開孔的位置要宜于氣溶膠與柜內(nèi)空氣均勻混合，然后用剛性伸縮管將光度計的采樣探頭插入小孔中來進行泄漏試驗。氣溶膠的持續(xù)滲透不得超過上游濃度的0.005%。注意：排風高效空氣粒子過濾器也可用下述方法檢漏。只開排風機，不開送風機，使生物安全柜吸入普通環(huán)境空氣，含塵濃度不低于100000粒/L（0.5m）。用粒子計數(shù)器的采樣口在排風高效過濾器出風面和邊框縫隙處之上20處，做掃描檢漏，掃描移動速度520mm/s，路線應重疊。合格標準為級、級和級柜第一級排風濾器3粒/

12、L，級柜第二級排風濾器1粒/L。除級柜外其他型號的安全柜送風濾器均應達到3粒/L。檢測管的直徑和流量對檢測靈敏度影響很大。掃描試驗的最佳條件是等速吸風。流量一般設(shè)定為510-4m3/s，檢測口的直徑最好是25mm。DOP具有微弱致癌性。它的替代品，例如聚一烯烴（polyalpha olefin, PAO），二（2乙基己基）癸二酸酯di(2-ethylhexyl)sebacate、聚乙二醇以及藥用級輕質(zhì)礦物油，雖然氣溶膠數(shù)據(jù)齊全，但尚不能保證安全可靠，因此目前仍采用DOP。A.3 噪聲水平測試A.3.1 目的測量安全柜的機械噪聲水平，有助于設(shè)法減少操作人員的疲勞。檢測可在普通房間里進行。A.3.

13、2 儀器聲測儀，精度為1dB，分辨率為1dB，最小范圍為50100dB，應按使用說明將加權(quán)值設(shè)為“A”。A.3.3 方法A.3.3.1 打開安全柜的照明燈，使安全柜在額定風速0.025m/s（5ft/min）運行。A.3.3.2 將儀器加權(quán)值設(shè)定為“A”。A.3.3.3 在安全柜前窗中心水平向外30cm，工作臺面向上38cm位置測量噪聲水平（參見圖A-2）。A.3.3.4 測量環(huán)境的噪聲水平時，關(guān)閉安全柜的送風機和照明燈，遠程排風機應繼續(xù)運行，并按A.3.3.3項進行測量。A.3.4 合格標準在環(huán)境噪聲不超過57dB(A)級的情況下，安全柜前方的總噪聲水平不應超過7OdB(A)。當周圍環(huán)境噪聲

14、超過57dB(A)時，按附錄A中A.3.3.3R測得的讀數(shù)應當根據(jù)聲測儀操作手冊中所提供的曲線或表格進行修正。如果操作手冊沒有提供修正資料，則使用標準的校正曲線或校正表（見表A-1）表A-1 噪聲讀數(shù)修正表噪聲測量值與背景噪聲間的差值/dB(A)從測量值中減去的數(shù)值噪聲測量值與背景噪聲間的差值/dB(A)從測量值中減去的數(shù)值02扣除背景噪聲值610133100452A.4 照明強度測試A.4.1 目的測定安全柜工作臺面的照明強度，單位為h，幫助減少安全柜操作人員的疲勞。A.4.2儀器精確度為10%的便攜式光度計。使用前應按照說明進行標定。A.4.3 方法A.4.3.1 關(guān)閉安全柜的照明燈，沿著

15、工作臺中央縱軸測量背景光強度，起始測量點離一側(cè)15cm，然后以大約30cm的相等間距逐點測定(見圖A-3)。A.4.3.2 打開照明燈和送風機，再在相同點讀取數(shù)據(jù)。圖A-3 光強度測試A.4.4 合格標準背景光平均強度不大于160lx情況下，平均照明強度應不低于480lx。A.5 振動測試A.5.1 目的測定安全柜運行時的機械振動量，有助于設(shè)法減少操作人員的疲勞，防止損壞組織培養(yǎng)物等脆弱的試驗材料。A.5.2 儀器振幅達到微米量級的振動分析儀。A.5.3 方法A.5.3.1 打開安全柜的照明燈，并使安全柜在額定風速0.025m/s內(nèi)運行。A.5.3.2 測定垂直軸的震動位移時，可使用適當工具將

16、震動測試儀的傳感器元件固定在工作臺面的幾何中心點。測試位置見圖A-4。圖A-4振動測試A.5.3.3 測定安全柜運行時的總振幅。A.5.3.4 關(guān)閉安全柜的送風機，僅運行排風機，測定背景振幅。A.5.3.5 安全柜總振幅減去背景振幅即得到安全柜凈振幅。A.5.4合格標準安全柜正常運行條件下，工作臺面中央振動頻率在1010000Hz時，凈振幅應50m均方根振幅。A.6 溫升測試A.6.1 目的測定安全柜運行一段時間后柜內(nèi)溫度上升幅度。應在環(huán)境溫度1928的房間內(nèi)進行試驗。A.6.2儀器2個溫度汁：精密度為0.1。A.6.3 方法將一個溫度計安裝在操作臺面中心上方30cm的位置上，測量安全柜內(nèi)的溫

17、度。同時用另一個溫度計測量房間內(nèi)的溫度。啟動送風機、點亮照明燈，使安全柜在額定風速0.025m/s內(nèi)運行。記錄4h以后的兩個溫差。A.6.4 合格標準生物安全柜正常運行4h后，柜內(nèi)與環(huán)境的溫度差應小于8。A.7人員、樣品和交叉污染保護測試驗證(微生物學)A.7.1 目的以生物學方法測試生物安全柜對人員、產(chǎn)品、交叉污染保護性能，接受下述檢測的生物安全柜送風機、排風機均應以額定轉(zhuǎn)速運行，并在整個測試期間持續(xù)穩(wěn)定運行。級生物安全柜不提供產(chǎn)品保護，工作面氣流為亂流，只進行人員保護試驗一項檢測；級生物安全柜需進行人員、樣品、交叉污染保護三項檢測；級安全柜前部封閉，工作面氣流為亂流，不需要進行人員、樣品保

18、護和交叉污染保護試驗。A.7.2材料和儀器、設(shè)備A.7.2.1 黏質(zhì)沙雷菌（Serratia marcescens ATCC.8039)菌懸液的配置第1步 高濃度的磷酸鹽緩沖液（PDB）34g磷酸二氫鉀（KH2P04）溶于500ml蒸餾水中；在25（77F）下用1mo/L NaOH調(diào)溶液pH值至7.20.5；用蒸餾水稀釋至1L。第2步 最終的PBS稀釋液蒸餾水1L（1L蒸餾水在25調(diào)pH值至7.00.1，在120高壓滅菌15min）；第1步的高濃度PBS溶液1.25ml；最終pH至7.20.5；120（250F）高壓滅菌15min。第3步黏質(zhì)沙雷菌（Serratia marcescens）菌懸

19、液的制備在無菌條件下將黏質(zhì)沙雷菌菌種劃線接種到普通瓊脂培養(yǎng)基平皿（100mm15mm）上。（350.5）培養(yǎng)（242）h。在無菌條件下從特征性菌落表面上挑取一接種環(huán)細菌轉(zhuǎn)移到裝有5ml肉湯液體培養(yǎng)基的試管中。(370.5)搖床(160r/min)培養(yǎng)(482)h。4保存。使用前用平皿稀釋計數(shù)法確定菌液濃度。用第2步配置的PBS稀釋液稀釋黏質(zhì)沙雷菌菌液，使其平均濃度為1.010-8/mI。用PBS稀釋液稀釋后黏質(zhì)沙雷菌菌懸液即可應用。注：黏質(zhì)沙雷菌菌落為玫瑰紅色，微凸，光滑濕潤，邊緣整齊。A.7.2.2 指示微生物也可以選用恥垢分枝桿菌(M.Smegmatis ATCC.19420)噬菌體懸液的

20、制備和使用方法。第1步 宿主菌菌液的制備將在改良L-J培養(yǎng)基上生長1周的恥垢分枝桿菌接種于7H9（另加10OADC+1mmol/L CaCl2）液體培養(yǎng)基，37 150r/min振蕩培養(yǎng)48h，菌液麥氏比濁法應為5mg/mL，4保存?zhèn)溆?。?步分枝桿菌噬菌體的增殖采用半固體雙層瓊脂平皿法。下層用含1.5瓊脂的7H9（50時加10小牛血清+1mmol/L CaCl2）7ml鋪皿；上層培養(yǎng)基4mL（瓊脂含量0.7%），在50時加入恥垢分枝桿菌和噬菌體混合懸液0.4ml（1：1混合），鋪皿，37培養(yǎng)48h，加入9ml SM液37孵1l小時，吸取液體，用0.2m濾膜過濾，所得擴增液效價檢查應為1.01

21、081.0109pfu/ml，4保存（如效價不足，可重復增殖數(shù)次）。第3步指示平板的制備和使用雙層平皿法。下層鋪皿方式同第2步，放入采樣器中進行噬菌體采樣后取出，在無菌條件下倒入48混有1ml宿主菌的上層瓊脂4ml。放在臺面上搖勻。使上層培養(yǎng)基鋪滿乎板。待凝固后，37培養(yǎng)24h，計數(shù)噬菌斑。A.7.2.3 氣溶膠發(fā)生和采樣儀器、設(shè)備空氣壓縮機、氣體過濾裝置、壓力表、流量計、連接軟管、支架等。氣溶膠發(fā)生器1個，性能見附錄B。含營養(yǎng)瓊脂或其他適用的生長介質(zhì)，無抑制劑或其他添加劑的平皿（100mm15mm或150mm22mm）。6個分別裝有20ml無菌PBS稀釋液的AGI-30型沖擊式空氣采樣器（流

22、量校準到12.312.6L/min)。2個額定流量為(28.30.2)Lmin的安德森2級空氣微生物采樣器。一個外徑63mm、末端密閉的不銹鋼、鋁質(zhì)或有機玻璃圓筒模擬操作者手臂干擾氣流。長度由安全柜內(nèi)部的空間大小決定。管子的一端頂在工作區(qū)域的后壁，另一端經(jīng)由安全柜操作口凸入實驗室至少15cm。計時器1個。操作人員個人防護用具，防護服、口罩、防護鏡等。A.7.3 人員保護測試用1.01088.0108的黏質(zhì)沙雷菌攻擊5min。(級生物安全柜不需作此項測試)A.7.3.1 方法開啟安全柜待其風機達到額定風速。用軟管連接空氣壓縮機、氣體過濾裝置、壓力計、流量計、氣溶膠發(fā)生器。將裝備的黏質(zhì)沙雷菌懸液放

23、入冰浴槽中，連接到氣溶膠發(fā)生器上。氣溶膠發(fā)生器放置于安全柜左右內(nèi)壁中央，噴口位于工作臺面上方35cm處，噴射軸平行于工作面。噴口距觀察窗100mm，朝向觀察窗(見圖A-5)。圖A-5人員安全性試驗正面視圖將一個模擬手臂的金屬圓筒置于安全柜中央，圓筒的中心軸位于工作臺面上方70mm。圓筒的一端緊靠安全柜的后壁，另端應伸出安全柜外150mm以上。圍繞圓筒放置4個撞擊采樣器，采樣口均位于安全柜觀察窗向外63cm處。其中兩個采樣器的采樣口軸線相隔15cm，位于圓筒頂緣水平切面。另外兩個采樣器的采樣口軸線相隔5.0cm，位于圓筒底部下方3cm的水平面。一個有支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒中心軸下方，前進風格

24、柵上方或下方10mm處，使其對進入氣流干擾最小，作為陽性對照。(見圖A-6圖A-8。)圖A-6人員安全性試驗側(cè)面視圖放置2個裂隙式空氣采樣器，采樣口水平面與工作臺面持平，垂直軸在安全柜前15cm、同側(cè)壁20cm處。另放置兩個撞擊式采樣器，采樣口位于工作臺面上方36cm，安全柜觀察窗外側(cè)5.0cm、安全柜中線兩邊各15cm處（見圖A-8）。測試時間為30min，測試順序為：重復進行3次測試。時間/min操作時間/min操作0啟動安德森2級空氣微生物采樣器11關(guān)閉AGI-30型沖擊式空氣采樣器5啟動噴霧器11.5關(guān)閉噴霧器6啟動AGI-30型沖擊式空氣采樣器30關(guān)閉安德森2級空氣微生物采樣器用直徑

25、47.0mm、孔徑0.22m微孔濾膜過濾撞擊式采樣器中的所有采樣液，無菌條件下將濾膜轉(zhuǎn)移有普通瓊脂平皿中。含有濾膜的平皿和取自裂隙式空氣采樣器的平皿在37.0培養(yǎng)，2428h觀察結(jié)果。生物安全柜進行型式檢驗時應當在下述條件下重復上面檢測步驟。吸入口風速偏離標準風速（-0.050.015）m/s，下送風風速偏離標準風速(+0.050.015)m/s；吸入口風速偏離標準風速(-0.050.01)m/s，下送風風速偏離標準風速(-0.050.01)m/s。試驗結(jié)束后對安全柜內(nèi)表面進行擦拭消毒。A.7.4 樣品保護測試方法（級和級生物安全柜不需作此項測試。）開啟安全柜待其風機達到額定風速，安全柜前開口

26、開啟至生產(chǎn)商設(shè)定的最大高度。在工作臺面上滿布100mm15mm瓊脂平皿，然后依次打開培養(yǎng)皿蓋子。用軟管連接空氣壓縮機、濾油裝置、壓力計、流量計、氣溶膠發(fā)生器。將黏質(zhì)沙雷菌懸液用PBS稀釋液稀釋100倍后，冰浴放置，連接到氣溶膠發(fā)生器上。氣溶膠發(fā)生器放置于安全柜的水平中心，其水平噴射軸應與前操作開口的上邊緣平齊，且平行于工作面。氣溶膠發(fā)生器的噴嘴應置于觀察窗外側(cè)100mm處，并朝向觀察窗。將一個兩端密封、外徑為6.3cm的模擬手臂金屬圓筒置于安全柜中央。中心軸位于工作臺面向上70mm處。圓筒的一端緊靠安全柜的后壁，另一端應伸出安全柜外至少150mm(見圖A-9圖A-11)。圖A-9受試樣品保護試

27、驗培養(yǎng)皿擺放位置平面圖作為陽性對照，將一個有支撐架的瓊脂培養(yǎng)皿放在安全柜內(nèi)圓筒中心軸下方，且位于前進風格柵上方或下方10mm，使其對進入隔柵的氣流干擾最小。啟動氣溶膠發(fā)生器min后停止噴霧。氣溶膠發(fā)生器停止后再等待5min，然后迅速蓋好瓊脂平皿。試驗結(jié)束后對安全柜內(nèi)各表面進行擦拭消毒。在37.0培養(yǎng)，2428h觀察結(jié)果。對于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計的生物安全柜在下述條件下按7.9和7.10的程序分別重復進行試驗：吸入口風速偏離標準風速(-0.050.015)m/s，送風風速偏離標準風速(+0.050.015)m/s；吸入口風速偏離標準風速(-0.050.015)m/s，送風風速偏離標準風速(-

28、0.050.015)m/s。A.7.4.2 合格標準每次試驗中，瓊脂平皿上黏質(zhì)沙雷菌的菌落數(shù)不得超過5個。對照平皿必須是陽性結(jié)果。當對照培養(yǎng)皿內(nèi)含有300個黏質(zhì)沙雷菌的菌落，稱其為陽性。試驗重復3次。A.7.5 交叉污染測試用11048104的黏質(zhì)沙雷菌攻擊5min（級和級生物安全柜不需作此項測試)。A.7.5.1 方法開啟安全柜待其風機達到額定風速。裝有55ml黏質(zhì)沙雷菌懸液(11048104/mL)的噴霧器，其水平噴射位于工作臺面上方76130mm處，且平行于工作面。噴霧器的背面緊靠左（右）內(nèi)壁的氣流分界面，噴嘴正對右（左）內(nèi)壁。將瓊脂平皿按下述方法排布于工作臺面（見圖A-12、圖A13）

29、，然后依次打開培養(yǎng)皿蓋子：在噴霧器噴嘴下方布置2列對照平皿；距噴嘴一側(cè)內(nèi)壁36cm處布置一列平皿；距噴嘴一側(cè)內(nèi)壁36cm以外位置一至兩列平皿。啟動噴霧器，5min之后關(guān)閉噴霧器。試驗結(jié)束后對環(huán)境內(nèi)各個表面進行擦拭消毒。把噴霧器放在安全柜內(nèi)對面一側(cè)內(nèi)壁的中線，重復步驟。停止噴霧15min之后，迅速蓋好瓊脂平皿。在37.0培養(yǎng)，2428h觀察結(jié)果。如果結(jié)果為陰性，則放回恒溫箱繼續(xù)培養(yǎng)至4448h后再計數(shù)。對于新產(chǎn)品或經(jīng)過重大改型設(shè)計的生物安全柜在下述條件下按上述程序分別重復進行試驗：吸入口風速偏離標準風速（-0.050.015）m/s，送風風速偏離標準風速(+0.050.015)m/s；吸入口風速

30、偏離標準風速（-0.050.01）m/s，送風風速偏離標準風速(-0.050.01)m/s。A.7.5.2合格標準距離攻擊側(cè)壁36cm之內(nèi)的一些瓊脂平皿可以得到枯草芽孢桿菌菌落，它們用作陽性對照。每次測試時，在大于38cm中心處的瓊脂平皿所得到的菌落總數(shù)不得超過2個。在安全柜的左側(cè)和右側(cè)各做3次重復實驗。A.8穩(wěn)定性測試A.8.1 目的通過施加靜態(tài)力并測定安全柜的變形和偏移，來測試生物安全柜以下幾方面的結(jié)構(gòu)完整性和穩(wěn)定性：抵抗外力作用造成的翻倒；抵抗外力作用造成的變形；抵抗負載造成的工作臺面偏移；傾斜時的穩(wěn)定性；工作臺面水平性。A.8.2 儀器測力計或彈簧秤，精確度為0.1kg千分尺；水平儀。

31、A.8.3抗翻倒試驗將安全柜的前后支架調(diào)至最高，然后固定使其不能晃動。沿任一方向，自水平位置傾斜10。合格的安全柜應不翻倒。A.8.4抗柜體變形試驗用螺栓將安全柜固定在基座或地板上，使其不能移動。在安全柜頂端的背面和一個側(cè)面水平加載1078N (110kg)的外力(加載區(qū)域不小于250mm250mm，且均勻受力)。用千分尺測量安全柜頂部正面和另一側(cè)面邊緣的偏移(見圖A-14和圖A-15)。安全柜頂部正面和側(cè)面邊緣向前移動的距離應小于0.2cm。A.8.5 工作臺面抗變形試驗測量工作臺面正面邊緣中心點到地板的距離。然后將一個面積為25cmX25cm、質(zhì)量為225.4N(23kg)的測試負載均勻地

32、施加于被測生物安全柜臺面中央，在載重條件下測量安全柜臺面前部邊緣中心至地面的距離(見圖A-16)。負載及空載條件下安全柜臺面前部邊緣中心至地板的變化距離應小于5mm。A.8.6抗傾斜試驗(級安全柜試驗之前應將前面板卸下)在安全柜前前窗操作口前沿的中心加載1078N(110kg)的壓力，測量安全柜后底部與地面的距離(見圖A-17)。安全柜背面的底部離開地板的距離應小于0.20cm。圖A-17前窗負載抗前傾試驗A. 8.7 工作臺面水平性測試 (級安全柜試驗之前應將前面板卸下)將安全柜的前后支架調(diào)齊并固定。以10cm間隔等分安全柜工作臺面，用水平儀在等分格點測量，任意位點均應為水平。A.9 下送氣

33、流速度A.9.1 目的測量安全柜內(nèi)操作區(qū)下送氣流氣流速度。級、級生物安全柜操作區(qū)為亂流，不進行此項檢測。測試時風機和安全柜前開口高度均應處于生產(chǎn)商設(shè)定的狀態(tài)。A.9.2 裝置熱風速儀，精確度為指示值土0.015ms或土3。使用前按照說明進行儀器校準。支架(如環(huán)形支架和夾具)，可準確定位氣流測量頭，并且不影響氣流模式。A.9.3 方法A.9.3.1 下送氣流均衡的安全柜測量通過安全柜操作口上邊沿上方10cm處水平面上的氣流速度，位置設(shè)定方法：將安全柜內(nèi)非運行所必需的可卸設(shè)備(可選組件)拆除后，在距離內(nèi)側(cè)壁板及觀察窗15cm圍成的平面矩形區(qū)域內(nèi)，測量點按行、列均為15cm的網(wǎng)格布置。若去除測量邊界

34、后凈尺寸不等于15的整數(shù)倍，允許修正測量點距離，但每列至少測量3點，每行至少測量了點(見圖A-18)。將熱風速儀測量頭固定在獨立式支架上，要求定位準確，并且不擾亂氣流模式。報告每一個格點的測定值以及所有測定值的平均數(shù)。以平均數(shù)為依據(jù)確定額定風速。測定的額定風速應符合制造商指定的結(jié)果0.025m/s，單個讀數(shù)的變化不得超出平均速度的20或上0.08m/s(取較大一種)。圖A-18下降氣流流速測量試驗A.9.3.2下送氣流有區(qū)域差異的安全柜在距離安全柜操作口上邊沿上方10cm處水平面(測試高度)上，分區(qū)測量工作空間多個位點的氣流速度。使用說明書中應標明測量區(qū)域的位置、每個區(qū)域內(nèi)測定點的數(shù)目以及位置

35、。在測定額定風速以前，應將非運行所必需的可卸設(shè)備(可選組件)拆除。報告每個區(qū)域中的每個測定值以及該區(qū)域的平均值。按照安全柜使用說明，依據(jù)上述資料確定額定風速。測定的額定風速應符合制造商指定的結(jié)果0.025m/s，單個讀數(shù)的變化不得超出相應區(qū)域平均速度的20或0.08m/s(取較大一種)。A.10 操作口向內(nèi)氣流速度測試A.10.1 目的測量操作口向內(nèi)氣流的速度，以及排風速度。A.10.2 儀器直讀式向內(nèi)氣流測量儀(DIM)，精確度為測定值3或0.002m。s。熱風速儀，精確度為測定速度0.015ms或3(取較大的一個)。風速計探針夾具，可將風速計探針精確定位在測量點并且不影響氣流模式，如環(huán)狀夾

36、和鉗夾都可以使用。A.10.3 測試方法A.10.3.1 風量計前窗流量測量法用密封條帶將風量計的捕獲罩密封在微生物安全柜的前窗操作口中心。捕獲罩兩邊留有開口區(qū)域時也要密封。運行安全柜，讀取風量計至少5次，得到相應的氣體流量測量值，計算平均值，得到流入氣流的平均流量。應注意，不要影響氣流通過風量計入口。流入氣流的平均流量(m3/s)除以前窗操作口面積(m2)，為計算的流入氣流平均流速(m/s)。流入氣流的平均流量(m3/s)除以工作臺面寬度(m)得出工作臺面每單位寬度的流入量(m2/s)。測試報告應包括各次的實測流量、計算的平均流量、前窗操作口尺寸和面積、平均流速、工作臺面寬度、每米寬工作臺面

37、的流入量和所使用的測量方法。A.10.3.2 風速計測量法這類方法由廠商提供并驗證，需經(jīng)測試機構(gòu)審核。廠商的驗證程序包括不少于10個重復測試的結(jié)果。測試機構(gòu)的認可在對這些數(shù)據(jù)審查以及成功再現(xiàn)測試結(jié)果的基礎(chǔ)上進行。（1）排氣流速測量法用熱式風速計多點測量穿過排氣過濾器面的氣流流速，測量點為不大于100mm100mm的格柵點，邊界點距過濾器邊緣約100mm，測量面與過濾器面的距離約100mm（見圖A-19）。圖A-19排氣流速測量試驗排氣過濾器或排氣口的有效開口面積應由廠商確定和提供，并經(jīng)測試機構(gòu)確認。對于安全柜的排氣過濾器不易拆卸、排氣口不均勻，則應按測試機構(gòu)核準的方法進行檢測。計算各測點排氣流

38、速平均值即平均排氣度率(m/s)，平均排氣度率乘以排氣面積(m2)，得到排氣流量(m3/s)。排氣流量(m3/s)除以前窗操作口面積(m2)，得到平均流入氣流流速(m/s)。測試報告應包括各測量點實測排氣流速、平均排氣流速、排氣口尺寸和面積、排氣流量、前窗操作口尺寸和面積、流入氣流流速和所用的測定方法。（2）前窗操作口流入氣流流速用風速計在前窗操作口平面的兩排點測量氣流流速，第一排在前窗操作口上沿下約25開口高度位置；第二排在前窗操作口上沿下約75開口高度位置(見圖A-20)。圖A-20流入氣流流速測量試驗測量點間隔100mm，距前窗操作口的側(cè)邊不少于100mm，用所有測量值的平均值表示流入氣

39、流流速。測試報告包括各測點流入氣流流速實測值、平均流入流速以及測定所用的方法。（3）B2型安全柜流入氣流流速的測定打開安全柜垂直下送氣流吹風機和排氣系統(tǒng)吹風機。將窗框（觀察窗）按廠商建議的操作高度設(shè)定。測定和計算排氣體積?？砂凑諟y試機構(gòu)驗證的方法，或氣流流速測定的國標。在下降氣流擴散器下方150mm水平面，起始點距各側(cè)壁50mm，對大約100mm100mm柵格點測定供給氣流流速，氣流測定探針應牢固地夾持在一獨立夾具（環(huán)夾或夾鉗）上，此夾具可精確的定位，且不影響氣流模式（見圖A-21）。將氣流流速測量值平均，并且乘以測定速率的平面面積(m2)，得出過濾空氣供給的總數(shù)(m3/s)。圖A-21 B2

40、型安全柜經(jīng)過濾的供氣量測量試驗將供給空氣的體積速率(m3/s)從總排氣體積速率中減去，此差值表示所計算的流入體積速率(m3/s)。用開口的面積(m2)除計算所得的流入空氣的體積速率，得平均流入速率(m/s)。報告資料應包括各個排氣流速實測值、計算出的平均排氣流速、排氣輸送管面積、計算出的排氣體積、各個供氣流速實測值、平均供氣流速、有效供氣面積、計算出的供氣體積、工作開口面積算出的流入空氣體積、計算出的開口平均流入速率，以及測定所用的方法。A.10.3.3 級安全柜手套連接口氣流流速測量開放安全柜的一個手套連接口，用熱式風速計在連接口中心測量氣流流速，至少測量1min。在另一連接口進行重復測量。

41、A.10.4 合格標準A.10.4.1 級和A1型生物安全柜操作口向內(nèi)氣流速度應大于0.4m/s。A.10.4.2 B1、B2和A2型生物安全柜操作口向內(nèi)氣流速度應大于0.5m/s。A.10.4.3 級生物安全柜當一只手套脫落時，開口處的向內(nèi)氣流速度應大于0.7m/s。A.11煙霧流型測試A.11.1 目的通過目視觀察煙霧的流動狀態(tài)，檢驗安全柜內(nèi)氣流模式。A.11.2 儀器煙霧發(fā)生裝置及煙霧劑，提供可視煙霧。A.11.3 實驗方法測試前使生物安全柜以正常狀態(tài)運行，前窗開啟高度為生產(chǎn)商規(guī)定的最大值。A.11.3.1 下降氣流模式測試煙霧沿著工作表面的中心線，在前窗操作口頂端以上100mm的高度，

42、從安全柜的一端到另一端。A.11.3.2 觀察屏保留測試煙在觀察屏后25mm、前窗操作口頂端以上150mm高度從安全柜的一端到另一端。A.11.3.3 前窗操作口邊緣測試煙在安全柜外大約38mm處沿著整個前窗操作口的周界經(jīng)過，特別應注意角落和垂直邊緣。A.11.3.4上下滑動窗密閉性測試煙在滑動窗內(nèi)從距安全柜側(cè)壁50mm處沿工作區(qū)上沿經(jīng)過。A.12排水槽滲漏測試A.12.1 目的確定工作臺面下方排水槽的防滲漏性能。A.12.2 方法向排水槽注入4L的水并保持1h，1h后目視檢查是否有明顯的漏水現(xiàn)象。A.12.3 合格標準排水槽應能容納4L水，并在盛放1h后沒有明顯的漏水現(xiàn)象。A.13電機風機性

43、能A.13.1 目的該試驗用于證實電機風機可以在符合7.14的靜態(tài)壓力要求下正常運行。A.13.2 裝置熱風速儀，精確度為測定速度0.015m/s或3(取較大的個)。使用前按照說明進行儀器校準。套管。壓力計，精確度為檢測值2。A.13.3 方法及合格標準將安全柜設(shè)定在額定風速0.015m/s狀態(tài)下運行。測量總的送風流量(m3/s)，安全柜的送風體積按A.10的方法確定。生產(chǎn)廠家應在柜上安裝正壓測量接頭和負壓測量接頭。正壓測量接頭安裝在下送風HEPA濾器上方，但不可正對送風機出口。負壓測量接頭安裝在送風機吸風口前，距離吸風口至少1.5倍其直徑的位置。將壓力計與壓力測量接頭相連，并記錄測得的初始正

44、壓和負壓值。通過減小安全柜下送氣流（即堵住部分工級和A1、B1、A2型安全柜的前格柵或B2和級安全柜的送風入口)，使安全柜負壓增幅達到初始正壓值的50左右。測量安全柜風機在限制運行時的送風總流量(m3/s)（見A.10）。合格的安全柜在不控制風機轉(zhuǎn)數(shù)情況下，總氣流流量(m3/s)的減小不應超過10。A.14 壓差A.14.1概述檢測各種類型的生物安全柜柜體內(nèi)外壓力差是否符合性能要求。A.14.2 裝置壓力計2個，精確度為檢測值2。A.14.3 方法及合格條件將一個壓力計置于安全柜操作臺面中央，另一個置于室內(nèi)。將安全柜設(shè)定在額定風速0.015m/s下運行。待安全柜運行狀態(tài)穩(wěn)定，測量柜內(nèi)壓力值。同

45、時記錄室內(nèi)壓力，計算兩者之差。級、級和級生物安全柜柜體的操作區(qū)相對于實驗室均應為負壓。級生物安全柜柜體內(nèi)與環(huán)境的壓差應大于-127Pa。A.15電氣安全測試A.15.1概述電氣安全應符合GB4793.1-1995的標準。A.15.2裝置萬用表。A.15.3方法及合格標準接觸電流。按GB4793.1-1995接觸電流和保護導體電流的測量方法進行試驗，可觸及表面的泄漏電流應小于50mA。接地電阻。被測生物安全柜所有的功能開關(guān)均置于“斷”位，用萬用表測量電源插頭“地”插銷與可觸及件之間的電阻，可觸及金屬表面與電源插頭“地”插銷間的電阻值應小于0.15。耐電壓。被測生物安全柜電源輸入端各極插銷與箱體接

46、地端之間應能承受50Hz正弦電壓1500V，有效值工頻電壓持續(xù)1min，應無擊穿和閃絡(luò)現(xiàn)象。生物安全柜 現(xiàn)場測試D.1現(xiàn)場認證目的和頻率為確保安全柜符合規(guī)定的運行標準，每臺安全柜初次安裝時都應進行現(xiàn)場測試，并且此后每年應進行至少一次。此外，更換HEPA過濾器、內(nèi)部組件保養(yǎng)維修以及重新安放后，都應進行重新認證。進行特殊危害性工作時，應加大安全柜再認證的頻度。符合現(xiàn)場測試標準的安全柜應粘貼性能良好的標志。D.2物理防護(即個人或環(huán)境保護)和樣品保護的相關(guān)測試現(xiàn)場應進行下列物理測試：下送氣流速度測試；操作口向內(nèi)氣流速度測試；煙霧流型測試；HEPA過濾器滲漏測試；安全柜完整性測試(僅針對工級和Al型安

47、全柜)；現(xiàn)場安裝評價測試(包括報警功能、風機互鎖功能、排風系統(tǒng)性能測試)D.3人員舒適性和安全性的相關(guān)測試進行過微生物操作的生物安全柜，在修理或更換位于污染區(qū)的部件之前，或在安全柜重新安放之前，以及重新進行認證以前，均應先凈化除污。進行過毒性化學物質(zhì)或放射性物質(zhì)操作的生物安全柜，在清除化學污染時應穿著防護服并采用安全操作程序。下列測試關(guān)系操作人員的舒適和安全性，這些測試在用戶要求時進行，或由認證提供機構(gòu)決定：照度測試；振動測試；噪聲水平測試；漏電、接地電阻和極性測試。D.4生物學檢測驗證新安裝或更換高效空氣粒子過濾器后，必須進行生物學檢測驗證。如果實驗室工作有分工，那么從事細菌、真菌和寄生蟲工

48、作的，用黏質(zhì)沙雷菌進行生物學檢測驗證；從事病毒工作的，應用恥垢分枝桿菌噬菌體進行生物學檢測驗證。生物學檢測驗證包括以下三方面：人員保護試驗；受試樣品保護試驗；受試樣品交叉污染保護試驗。D.5現(xiàn)場安裝評估測試D.5.1目的驗證生物安全柜在實驗室中的安裝是否正確，能否達到正常工：作時的性能要求。按生物安全柜操作手冊進行。D.5.2測試內(nèi)容D.5.2.1報警功能（1）氣流報警器(建筑物自動化系統(tǒng)除外)使用報警器 監(jiān)測氣流狀況時，每一次安全柜認證時，都要對報警器性能進行驗證。按照操作手冊的步驟進行。安全柜設(shè)定于合適的氣流范圍內(nèi)，則當排風量減少20%時，要求聲光警報器應能在15s內(nèi)報警指示。（2）觀察窗

49、報警器 將觀察窗提升到生產(chǎn)商推薦高度上方2.5cm處。檢測是否有聲音報警信號。D.5.2.2風機互鎖功能B2型安全柜使用風機互鎖： 在驗證報警器時進行互鎖測試； 一旦安全柜設(shè)定于合適的氣流范圍內(nèi)，減少20排風量，驗證聲光警報器能否在15s內(nèi)報警。在報警器被激活的同時，安全柜內(nèi)置風機應互鎖關(guān)閉。D.5.2.3排風罩性能使用可視煙源檢驗排風罩連接間隙的負壓性。煙霧一旦進入排風系統(tǒng)，應不能逸出進入房間。對于硬管連接式的排風系統(tǒng)，應測量位于柜體和排風管風閥之間位置的靜壓力。D.6現(xiàn)場測試記錄附錄F列出了現(xiàn)場安裝后的檢測項目，測試指標均合格的生物安全柜的性能要求，除非使用者另有指定，應在生物安全柜正面易

50、于看到的部位張貼下列信息：認證測試日期；重新認證期限（）之前；測試項目及結(jié)果；認證測試機構(gòu)的名稱、地址、電話號碼；檢測者簽名。附錄F 生物安全柜 檢測項目檢驗項目表格序號檢驗項目試驗方法型式檢驗出廠檢驗安裝測試l外觀檢驗5.1.12箱體檢漏附錄A.13排風高效過濾器檢漏附錄A.24送風高效過濾器檢漏附錄A.25噪聲附錄A.36照度附錄A.47振動幅值附錄A.58溫升附錄A.69人員安全性附錄A.710受試樣本安全性附錄A.711交叉污染附錄A.712抗翻倒附錄A.813抗變形附錄A.814工作臺面抗偏移附錄A.815工作臺面水平性附錄A.816下送氣流速度附錄A.917操作口向內(nèi)氣流速度附錄A

51、.1018煙霧流型附錄A.1119排水槽滲漏性附錄A.1220電機風機性能附錄A.1321壓差附錄A.1422接觸電流附錄A.1523接地電阻附錄A.1524耐電壓附錄A.15注：表中有“”者表示在該檢驗中應檢驗的項目E.14 氨濃度的檢測1范圍本標準規(guī)定了公共場所空氣中氨濃度的測定方法。本標準適用于公共場所空氣中氨濃度的測定，也適用于居住區(qū)大氣和室內(nèi)空氣中氨濃度的測定。第一法 靛酚藍分光光度法2原理空氣中氨吸收在稀硫酸中，在亞硝基鐵氰化鈉及次氯酸鈉存在下，與水楊酸生成藍綠色的靛酚藍染料，根據(jù)著色深淺，比色定量。3試劑和材料本法所用的試劑均為分析純，水為無氨蒸餾水制備方法見附錄A。3.1吸收液c(H2SO4)=0.005： 量取2.8mL濃硫酸加入水中，并稀釋至1L。臨用時再稀釋10倍。3.2水楊酸溶液(50g/L)：稱取10.0 g水楊酸C6H4(OH)COOH和10g檸檬酸鈉(Na3C6O72H2O加水約50mL，再加55 mL氫氧化鈉溶液c(NaOH)=2m