【優(yōu)化方案】2013高中生物 第四章第2節(jié)蛋白質的提取和分離課件 北師大版選修1

1、第2節(jié)蛋白質的提取和分離,學習導航 1.嘗試蛋白質的提取和分離。 2解釋蛋白質提取和分離的基本原理。,一、乳酸脫氫酶同工酶的提取和分離 1實驗原理 (1)特點：可以與特定的底物進行反應，形成特殊的藍紫色產物。 (2)提取時的要求：必須提供必要的_ 和_環(huán)境以保持其生物活性。 (3)分離方法：_。,緩沖系統(tǒng),低溫,瓊脂糖凝膠電泳,2實驗步驟 (1)提取過程 制備勻漿：取5 g_的動物心臟，漂洗干凈后、剪碎到預冷的玻璃勻漿器中，加入25 mL_、_研磨成勻漿 獲取酶：將勻漿收集到冰浴的離心管中，在4 條件下12000 rpm離心10 min。吸取_ 在4 條件下保存?zhèn)溆?新鮮,磷酸提取緩沖液,冰浴

2、,上清液,(2)分離過程 制瓊脂糖凝膠電泳板：用_配制質量分數(shù)為1%的瓊脂糖凝膠，加熱溶解后混勻，緩緩倒入膠床中，插入適當?shù)氖嶙?，室溫冷卻至凝膠凝固。拔出梳子，將凝膠放入 _中，向電泳槽中加入適量的TBE電泳緩沖液 ,TBE電泳緩沖液,電泳槽,加樣、電泳：取適量同工酶提取液與_ 的_混勻，取20L加入 _內，100 V條件下進行電泳30 min。 染色、觀察：當溴酚藍指示劑電泳到 _時切斷電源，取出凝膠板浸入染色液中，37 染色1530 min后，取出 _，觀察電泳結果,等量,載樣緩沖液,樣品孔,凝膠底部,水洗,為什么提取乳酸脫氫酶同工酶時選擇的材料要用新鮮的？ 【提示】新鮮的材料細胞中酶的活

3、性高。,想一想,二、相關基礎知識 1同工酶 指催化相同的化學反應，而酶蛋白的 _、_乃至免疫學性質不同的一組酶。 2乳酸脫氫酶 (1)種類：一般含有5種同工酶。 (2)特點：相對分子質量相同，但所帶電荷不 同，電泳的結果應該形成_個條帶。,分子結構,理化性質,5,(1)同工酶之間的空間結構一定不同() (2)乳酸脫氫酶的催化底物是乳酸() (3)乳酸脫氫酶同工酶具有不同凈電荷、相同的分子大小和形狀(),判一判,1概念 指帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。 2原理 不同蛋白質的帶電性質、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力方向、大小、阻力不同，導致不同蛋白質在電場中的運動方向和運動速度不

4、同。,3常用方法 (1)瓊脂糖凝膠電泳：由于瓊脂糖本身不帶電 荷，所以，各種分子在電場中的遷移速度因各種分子的帶電性質差異、分子大小、形狀不同而不同，從而得以分離。 (2)聚丙烯酰胺凝膠電泳,右圖表示對某蛋白質溶液進行瓊脂糖凝膠電泳的結果(相似于紙層析法分離色素)，下列相關敘述不正確的是(),A蛋白質上某些基團解離后可使蛋白質帶電，電場中帶電的蛋白質分子(或多肽)會向著與其所帶電荷相反的電極移動 B蛋白質在瓊脂糖凝膠中的遷移速度完全取決于其所帶凈電荷多少 C蛋白質在瓊脂糖凝膠中的遷移速度主要取決于相對分子質量的大小、形狀、所帶凈電荷 D電泳結果表明溶液中蛋白質可能有兩種,【解析】蛋白質的氨基與

5、羧基可發(fā)生解離，使其帶正電或負電，在電場中發(fā)生遷移。蛋白質在凝膠中遷移速率主要取決于其所帶凈電荷的多少和性質、分子的大小和性狀。 【答案】B,(1)如果蛋白質指的乳酸脫氫酶同工酶，B選項說法正確嗎？ (2)如果是乳酸脫氫酶同工酶，電泳結果會出幾條色帶？ 【提示】(1)正確，因為乳酸脫氫酶同工酶相對分子質量相同，所帶凈電荷不同。 (2)5條。,互動探究,1凝膠材料 所用的凝膠實際上是一些微小的多孔球體，這些小球體大多數(shù)是由多糖類化合物構成的，如葡聚糖或瓊脂糖。小球體內部有許多貫穿的通 道。,2原理 凝膠色譜法也稱作分配色譜法，是根據(jù)相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。分子量大的分子通過多孔凝

6、膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內部，路程長，流動慢。,用凝膠色譜法分離蛋白質時，分子量大的蛋白質() A路程較長，移動速度較慢 B路程較長，移動速度較快 C路程較短，移動速度較慢 D路程較短，移動速度較快,【答案】D,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法中加入SDS的作用是() A增大蛋白質的相對分子質量 B改變蛋白質分子的形狀 C掩蓋不同蛋白質分子間的電荷差別 D減少蛋白質分子的相對分子質量,變式訓練,解析：選C。在樣品和凝膠中加入SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白質SDS復合物，所帶的負電荷大大超過了蛋白質原有的電荷量，這樣就消除了不同分

7、子間的電1荷差異和結構差異，從而達到僅根據(jù)蛋白質相對分子質量的不同而分離蛋白質的目的。,對凝膠色譜法和電泳法分離蛋白質混淆不清 有關凝膠色譜法和電泳法的說法正確的是() A它們都是分離蛋白質的重要方法 B它們的原理相同 C使用凝膠色譜法需要使用緩沖溶液而電泳不需要 D以上說法都正確,【解析】凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質量的大小分離蛋白質的一種有效方法；電泳法是利用待測樣品中各種分子帶電性質的差異和分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離或鑒定。所以A正確，B錯；這兩種方法都用到緩沖溶液，以調節(jié)溶液的酸堿度，所以C錯誤。綜上所述，答案選A。,【答案】A 【糾錯總結】(1)分離不同蛋白質的基本原理 根據(jù)蛋白質各種特性的差異分離蛋白質。如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質和多少、溶解度、吸附性質和對其他分子的親和力等等。 (2)緩沖溶液 無論是凝膠色譜法還是電泳法均使用緩沖溶液，其目的是維持蛋白質的活性，或維持蛋白質所帶電荷。,(