高壓滅菌鍋的驗證報告

1、立式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ-LS-75G儀器驗證報告驗證報告審批表程序審批部門簽名日期起草第三B組2013.2.28審核班主任2013.03.11批準系主任-立式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ-LS-75G儀器驗證報告目錄1. 概述2. 驗證目的3. 驗證依據(jù)及采用文件4. 驗證內容4.1. 設計確認4.2. 安裝確認4.3. 運行確認4.4. 性能確認5. 再驗證周期6. 驗證報告審批1. 概述本消毒器是利用高壓高溫濕熱蒸汽殺菌，用于微生物限度檢查用培養(yǎng)基、器皿及污染物過期菌種等滅活，滅菌條件設定為121，15min。2. 驗證目的通過驗證確認立式壓力蒸汽滅菌器能達到設備性能指標，滿足檢驗需求。驗證結果

2、必須證明生產(chǎn)中采用的滅菌過程對經(jīng)過滅菌的物品能夠保證殘存微生物污染的概率或可能性低于10-63. 驗證依據(jù)及采用文件藥品生產(chǎn)驗證指南藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范中華人民共和國藥典2010年版二部4. 驗證內容4.1設計確認容積：75L 滅菌工作溫度：109 135 設定溫度時間：4120分鐘；設定干燥時間范圍：15240；電源：220V 10V,50Hz； 滅菌加熱功率：3.5KW干燥加熱功率：1KW額定工作壓力：0.212Mpa；額定工作溫度：135；工作壞境：溫度540;相對濕度： 80%RH;設備安全類別：I類；毛重：60kg(75L)4.2安裝確認4.2.1資料檔案名稱存放處使用說明書實訓樓6

3、15辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）備料清單實訓樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）合格證實訓樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）開箱驗收記錄實訓樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）設備卡實訓樓615辦公室檔案存放處（高壓滅菌器）檢驗人： 日期：2013.2.28復核人： 日期：2013.2.284.2.2安裝確認序號項 目標 準檢測結果是否符合要求1立式壓力蒸汽滅菌鍋YXQ-LS-75GYXQ-LS-75GYYXQ-LS-75G符合2出廠編號有有符合3出廠日期有有符合4數(shù)量1臺1臺符合5裝箱單有有符合6合格證有有符合7使用說明書有有符合8第三方質量檢驗書有有符合9保修卡有有符合10設備完

4、整性、牢固性無缺陷、無松動無缺陷、無松動符合11表面裂痕、焊縫無裂痕、打磨光滑無裂痕、打磨光滑符合12表面劃痕無劃傷、碰痕無劃傷、碰痕符合13各種零部件，備品備件齊備齊備符合14破裂管線無破裂、接口可靠無破裂、接口可靠符合15松脫電線聯(lián)接緊固、無松脫聯(lián)接緊固、無松脫符合16電源220V 50HZ220V 50HZ符合17環(huán)境溫度540；相對濕度80%RH540；相對濕度80%RH符合18安裝的環(huán)境背景化驗室化驗室符合檢驗人： 日期：2013.2.28復核人： 日期：2013.2.284.3運行確認4.3.1儀表校正1. 校正的溫度指示、傳感器、溫度記錄儀的讀數(shù)值與標準電偶指示值之間的誤差應+0

5、.5。2. 校正的時間記錄儀與標準時間指示裝置之間的誤差應+1.3. 校正的壓力表/真空表與標準表之間的誤差應+10%。4.3.2真空度試驗用特定的化學指示劑（試紙）檢查，化學指示劑（試紙）在運行抽真空程序后，經(jīng)134暴露3min，其化學指示劑（試紙）的顏色應呈現(xiàn)均勻一直的改變。4.3.3真空狀態(tài)下滅菌腔室內泄漏實驗泄漏率：在10min內，腔室內壓力變化應130Pa/min（1mm Hg/min)4.3.4將滅菌器重加入純化水等，準備工作做好后，設置為121,15分鐘，啟動設備，該設備應在121保溫15分鐘，連續(xù)運行3次，且用秒表計時。編號一次二次三次秒表計時15min20s15min24s1

6、5min23s判斷：校正的事件記錄儀與標準時間指示裝置之間的誤差應+1% 符合標準 檢驗人： 日期：2013-03-01復核人： 日期：2013-03-034.3.5熱分布測試4.3.5.1空載熱分布取13支經(jīng)過校驗的留點溫度計，其中2支的探頭分別置于滅菌器的2個排氣接口處，1支探頭置于滅菌器檢測接口處，1支探頭置于滅菌器的溫度傳感器處，其余留點溫度計均與分布在腔內各處。開啟滅菌器箱，按照標準操作程序進行，運行結束后記錄各個點的溫度，連續(xù)運行3次，檢查其重現(xiàn)性。以證明空載滅菌器腔室內個點的溫度在每次滅菌程序運行過程中的差值+1。運行結束后各點溫度記錄如下：編號1234567891011121次

7、119.7120.0124.0119.8119.2120.3122.0119.7119.9117.0120.0124.32次119.0119.7123.8120.0119.0120.9122.0119.0119.4118.0120.0123.93次118.0120.0122.9119.0118.0120.0121.0119.0119.0116.0120.0124.0（注：2 安全氣閥處 3排氣口處 3-7 上層 8-12 下層）測定結果： 檢驗人： 日期：2013-03-03復核人： 日期：2013-03-044.3.5.2滿載熱分布將滅菌器內裝滿洗后清潔且裝滿培養(yǎng)基的錐形瓶，自下而上擺放，取

8、13支經(jīng)過校驗的留點溫度計，其中2支的探頭分別置于滅菌器的2個排氣接口處，1支探頭置于滅菌器檢測接口處，1支探頭置于滅菌器的溫度傳感器處，其余留點溫度計均與分布在腔內各處。開啟滅菌器箱，按照標準操作程序進行，運行結束后記錄各個點的溫度，連續(xù)運行3次，檢查其重現(xiàn)性。運行結束后各點溫度記錄如下：編號1234567891011121次123.0118.0122.1121.9120.2122.0121.3119.9118.5119.5121.5119.22次123.8117.7122.1122.0119.2121.6121.4118.4118.4118.4120.0118.23次112.2119.81

9、19.4118.8118.8120.0120.2117.6118.0117.0119.0118.2（注：1 安全氣閥處 2 排氣口處 3-7 上層 8-12 下層）運行結果： 檢驗人： 日期：2013-03-02復核人： 日期：2013-03-044.3.6熱穿透試驗4.3.6.1裝載類型：最大裝載、裝滿4.3.6.2器皿選擇：500ml錐形瓶，90ml培養(yǎng)皿滅菌程序：121，15分鐘4.3.6.3測試過程在最大裝載情況下，取13支經(jīng)過校驗的留點溫度計，其中2支的探頭分別置于滅菌器的2個排氣接口處的待滅菌瓶內，1支探頭置于滅菌器檢測接口處處的待滅菌瓶內，其余留點溫度計置于其余待滅菌瓶中。開啟滅

10、菌器箱，按照標準操作程序進行，運行結束后記錄各個點的溫度，連續(xù)運行3次，檢查其重現(xiàn)性。最大負載狀態(tài)下，熱穿透實驗的結果達到最冷點滅菌物品的暴露時間為12115min，即F015.最小負載狀態(tài)下，熱穿透實驗的結果達到最冷點滅菌物品的暴露時間為12115min，即F015.=t*10（T1-T2)/Z-溫度最低點的相應滅菌時間T-某實際滅菌時間所持續(xù)的時間T1-實際滅菌溫度T2-理論滅菌溫度Z-各溫度下的微生物滅菌速率常數(shù)15.3*10（117.8-121）/10=45.9運行結束后各點溫度記錄如下：編號123456781次122.3121.5121.0122.5120.5119.8118.22次

11、122.0122.0120.0121.0121.0120.0118.03次120.2119.0117.8118.0118.4119.0117.8（注：上層1-4 下層5-8 水銀柱斷裂）運行結果：因水銀柱斷裂，放棄第4組 數(shù)據(jù)，繼續(xù)試驗 ，出現(xiàn)此情況，需重新驗證 。 檢驗人： 日期：復核人： 日期：4.4性能確認4.41生物指示劑紙上活菌數(shù)和活芽孢數(shù)的確認 (1)無菌打開 5 個生物指示劑小瓶(美國 3M 公司 Aiiesi 生物指示劑，No1262)，將 5 條芽孢紙片轉移至一個無菌研缽中，加入 0.5ml 生理鹽水，研碎紙片，制成芽孢懸液。 (2)分別吸取lml 芽孢懸液加入已有 9 ml

12、 鹽水的試管中，將試管標明 1號和2號。 (3)將1號試管80水浴中放置15min，作為熱處理。 (4)用鹽水分別將上述兩管作連續(xù) 10倍稀釋(101，10*2，103)。 (5)分別吸取熱處理組(1號)和未處理組(2號)后兩個稀釋度(102，103)懸液lml，各加入兩個無菌平皿中，然后倒入 1520ml 冷卻至50左右的TSA(胰蛋白胨大豆瓊脂)培養(yǎng)基，混合后待冷卻。 (6)倒置平皿，在56下培養(yǎng)48h。 (7)培養(yǎng)結束后，計數(shù)每個平皿碟上的菌落數(shù)，計算處理組和未處理組各稀釋液中的平均菌落數(shù)，然后算出生物指示劑紙片上平均實際活菌數(shù)和活芽孢數(shù)。 (8)如果每條紙片上的平均活菌數(shù)不小于制造商標

13、明的平均數(shù)的 95， 同時，紙片上 的活芽孢數(shù)也不小于活菌數(shù)的一半，則該生物指示劑可以使用。 (9)將結果記錄在“生物指示劑的活性確認表”上。 (10)每批購買的生物指示劑均需進行本項檢查。 2根據(jù)驗證需要，將適量的生物指示劑小瓶送往制劑或合成車間，或者用于實驗室高壓滅菌柜。 3生物指示劑法確認滅菌效果檢查可與熱穿透試驗同時進行，也可單獨進行，每次檢查應至少使用 5 個生物指示劑，在生物指示劑上標明滅菌器名稱，指示劑放置位置，編號及使用日期等。 4將各生物指示劑盡可能置于熱電偶旁。 5按照相應的高壓滅菌柜驗證規(guī)程或原位滅菌驗證規(guī)程運行一個滅菌周期。 6滅菌結束后，待滅菌柜冷卻，打開柜門，立即取

14、出所有生物指示劑送微生物實驗室培養(yǎng)。 7壓碎生物指示劑中的安瓿瓶， 同時用一個未經(jīng)滅菌處理的生物指示劑作為陽性對照 (也壓碎內部的安瓿瓶)，一同于56下培養(yǎng)48h。 二、結果觀察及分析 1。分別在培養(yǎng)24h后及48h后檢查生物指示劑是否有顏色變化，如果呈黃色(陽性顯 示)則表明有細菌生長，如果沒有顏色變化，則表明已進行了充足的滅菌循環(huán)。 2陽性對照生物指示劑必須在 24h內出現(xiàn)顏色變化。 3將結果記錄在“生物指示劑檢查表”上，將該表放入蒸汽滅菌工藝的驗證文件中。 4所有陽性的生物指示劑必須在 121下高壓滅菌30min。項目第一次第二次第三次稀釋倍數(shù)10-210-310-210-310-210

15、-3未經(jīng)熱處理經(jīng)熱處理備注表未出結果判斷：實驗結果不可用4.4.2嗜熱脂肪桿菌 D值測定法 1 材料及儀器(表415) 2 方法步驟 21 將菌膜或孢子懸浮液分別放入注射用水或磷酸緩沖液PBS中，用VF1振動使溶解。制備濃度約為108個/ml 的懸浮液，然后在沸水中加熱l0min以殺滅可能存在的芽孢繁殖體。 22 將上述BStK3l 懸浮液分別用微量注射器注入1618根毛細管(必要時可采用離心法去除氣泡)，使每支管的菌量約為106個孢子。用酒精燈封口。每次進樣前后，進樣器必須用1：1酒精丙酮以及蒸餾水交替淋洗，以提高接種準確度。 表 415 嗜熱脂肪桿菌 D值測定的材料及儀器 BStK31 孢

16、子懸浮液 濃度約在 45108個/ml BStK31 菌膜每片含量約在 13106個至 16106個 培養(yǎng)基TSA/胰蛋白大豆瓊脂及 TSB/胰蛋白大豆肉湯振動器VF-1 2500 次/min可調式恒溫油浴型號 000-9601，精度01，調溫范圍 20220毛細管0811mm90mm 微量進樣器(圖 455) 500l，針頭長 90mm23 將校驗過的油浴設在121下工作。 24 分別將每組的1416支毛細管放入毛細管架，迅速放入油浴曝熱，并計時。每隔 13min 從毛細管架同時取出兩支毛細管，迅速放入冰水浴中冷卻35min。 取出， 首先用清潔劑除去油滴再用?5酒精棉花消毒毛細管表面，然后

17、分別放入一個裝有 5ml 無菌 TSB的試管。用無菌玻璃棒搗碎毛細管。定量稀釋，制成 30300CFUml 菌液。 在5260用TSA 培養(yǎng)24h， 計數(shù)。 未經(jīng)曝熱的毛細管，也應用同樣的方法理并進行培養(yǎng)計數(shù)。 3 結果 4 討論 41 D值的確定及影響因素 孢子在蒸汽滅菌過程中，其死亡的規(guī)律可以用下式表示： lgNtlgN0+kt 式中 N0零點孢子的濃度； Nt曝熱t(yī) 時間(min)后孢子的濃度； t曝熱時間，min； k斜率。 D1/k 4.4.3細菌生物指示劑驗證將一定量的耐熱菌放入待滅菌的產(chǎn)品中，在設定的滅菌條件下進行滅菌，以驗證設定的滅菌工藝是否確實賦予產(chǎn)品必須的滅菌值（FH）。驗

18、證菌選擇：嗜熱脂肪芽孢桿菌指示劑（3M中國有限公司），含量1x106CFU/支。驗證方法取嗜熱脂肪芽孢桿菌指示劑，均勻分布于滅菌鍋的隔層位置，其中三支置于熱穿透試驗的最冷點，按照SOP進行滅菌操作，溫度121，滅菌時間15分鐘。經(jīng)過一個滅菌周期后，取出生物指示劑，擠破內含的安培瓶，在60培養(yǎng)24-48小時，同時取1支未滅菌的指示劑做陽性對照。連續(xù)試驗三次。（培養(yǎng)后，指示管不變色呈紫色，表示滅菌通過；培養(yǎng)后，指示管變紅，呈黃色表示滅菌不通過。同時培養(yǎng)的對照管應為陽性呈黃色。）（必須及時查出滅菌失敗原因）。生物指示劑培養(yǎng)結果記錄如下：編號123456789101112陽性對照1次-+2次-3次-備

19、注+表示未通過 -表示通過 未做結果判斷及評價： 符合標準 檢驗人： 日期：2013-03-06復核人： 日期：2013-03-114.4.2滅菌后培養(yǎng)基質量驗證按照中華人民共和國藥典2010年版附錄J規(guī)定的檢查方法，從消毒后的營養(yǎng)瓊脂和玫瑰紅鈉培養(yǎng)基中每次取10瓶（注意分別從消毒器中不同位置）分別放皿。并同時做空白。在30-35和23-28下培養(yǎng)細菌培養(yǎng)3天，霉菌和酵母菌培養(yǎng)5天，記錄菌落生長情況。最大負載、最小負載狀態(tài)下，微生物標的物試驗的結果可以保證微生物存活概率10-6細菌培養(yǎng)記錄：編號天數(shù)123456789101 次第一天00000000000000000000第二天00110000000000300000第三天001500000200003000002次第一天00000000000000000000第二天00110000000000300000第三天002500000001703000003次第一天00000000000000000000第二天00110000000000100000第三天00210000000000200000霉菌培養(yǎng)記錄：編號天數(shù)123456789101