靜脈采血、血涂片的制備與染色.ppt

1、,實(shí)驗(yàn)四 靜脈采血、血涂片制備與染色,一、普通靜脈采血法,原理：將注射器針頭刺入靜脈后， 利用后抽拉針?biāo)〞r(shí)所形成的負(fù)壓使血液被吸入針筒實(shí)驗(yàn)用品：1、器材 一次性注射器、壓脈帶、消毒棉簽、試管。2、試劑 30g/L碘酊、75%乙醇。標(biāo)本 靜脈血,操作,準(zhǔn)備試管 仔細(xì)閱讀受檢者申請(qǐng)單，決定采血量，準(zhǔn)備每個(gè)試驗(yàn)所需的試管，并應(yīng)按一定順序排列，如患者僅作凝血試驗(yàn)一項(xiàng)，最初1ml血液必須丟棄。如做血細(xì)胞沉降率測定，需取試管1支，加入適當(dāng)抗凝劑（109mmol/L枸櫞酸鈉0.4ml）。,標(biāo)記試管,在試管上貼上標(biāo)簽，著名患者姓名、項(xiàng)目名稱、采集日期、門診或住院號(hào)。 消毒雙手 采血前，操作人員應(yīng)用肥皂或消毒液

2、和水洗手。 選擇靜脈 采血前，要求受檢者坐在實(shí)驗(yàn)臺(tái)前。將前臂放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，掌心向上，并在肘下放一枕墊。臥床受檢者要求前臂申展，暴露穿刺部位。常用采血位置是肘前靜脈，因其粗大、容易辨認(rèn)。,檢查注射器,打開一次性注射器包裝，左手持針頭下座，右手持針筒，將針頭和針筒緊密連接，并使針頭斜面對(duì)準(zhǔn)針筒刻度，抽拉針?biāo)z查有無阻塞和漏氣。最后排盡注射器中的空氣，備用。使用前，保持針頭無菌狀態(tài)。,操作前準(zhǔn)備,操作前準(zhǔn)備,操作前準(zhǔn)備,扎壓脈帶,在采血部位上端約6cm處，將壓脈帶繞手臂一圈打一活結(jié)，壓脈帶末端向上。要求患者緊握和放松拳頭幾次，使靜脈隆起。壓脈帶應(yīng)能減緩遠(yuǎn)端靜脈血液回流，但又不能緊到壓迫動(dòng)脈血流。 選

3、擇進(jìn)針部位 采用左食指，觸摸進(jìn)針部位的靜脈。,操作中,靜脈采血的常用部位,貴要靜脈 正中靜脈 頭靜脈,消毒皮膚 用30g/L碘酊棉簽自所選靜脈穿刺處從內(nèi)向外，順時(shí)針方向消毒皮膚，待碘酊揮發(fā)后，再用75%乙醇棉簽以同樣的方式拭去碘酊，待干。,穿刺皮膚,取下針頭無菌冒，以左手拇指固定靜脈穿刺部位下端，右手持注射器，食指固定針頭下座。保持針頭斜面和針筒刻度向上，沿靜脈走向使針頭與皮膚成30角斜行快速刺入皮膚，然后成5角向前穿破靜脈壁進(jìn)入靜脈腔。確認(rèn)穿刺入靜脈中心位置，并沿著靜脈走向?qū)⑨橆^推入1015mm。,操作中,抽血,用左手緩緩向后拉注射器針?biāo)?，見少量回血后，松開壓脈帶。然后，向后拉針?biāo)ǖ竭_(dá)采血量

4、刻度。若使用一次性真空采血裝置，當(dāng)針頭進(jìn)入血管后會(huì)見少量回血，將真空采血管插入試管托內(nèi)采血針中，因試管內(nèi)負(fù)壓作用，血液自動(dòng)流入試管，到達(dá)采血量刻度后拔出試管即可。,止血,囑受檢者松拳，用消毒棉簽壓住進(jìn)針部位，迅速向后拔出針頭。繼續(xù)緊按住消毒棉簽3min。 放血 從注射器上取下針頭。將血液沿試管壁緩緩注入，到達(dá)標(biāo)記處。含抗凝劑試管需迅速輕輕顛倒混勻幾次。,操作中,注意事項(xiàng),1、采血前準(zhǔn)備 采血前應(yīng)向患者耐心解釋，以消除不必要的凝慮和恐懼心理。如遇個(gè)別患者進(jìn)針時(shí)或采血后發(fā)生眩暈，應(yīng)立即拔出針頭讓其平臥休息片刻，即可恢復(fù)。必要時(shí)可給患者嗅吸芳香酊、針刺（或拇指按掐）人中和合谷等穴位。若因低血糖誘發(fā)眩

5、暈，可立即靜注葡萄糖或囑患者服糖水即可。如有其它情況，應(yīng)立即找醫(yī)師共同處理。,2、準(zhǔn)備試管 不同檢查項(xiàng)目可根據(jù)試驗(yàn)需要選擇不同的抗凝劑及與血液的稀釋比例，如血細(xì)胞計(jì)數(shù)及MCV、MPV等參數(shù)測定時(shí)應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)目鼓齽灰酶嗡乜鼓齽?，因?yàn)楦嗡乜鼓龝?huì)影響RBC和PLT的計(jì)數(shù)結(jié)果。,選擇靜脈,如果肥胖患者的靜脈暴露不明顯，可以左手示指經(jīng)碘酊、乙醇消毒后，在采血部位觸摸，發(fā)現(xiàn)靜脈走向后憑手感方向與深度試探性穿刺。 檢查注射器 靜脈采血前要仔細(xì)檢查針頭是否安裝牢固，針筒內(nèi)是否有空氣和水分。所用針頭應(yīng)銳利、光滑、通氣，針筒不漏氣。抽血時(shí)針?biāo)ㄖ荒芟蛲獬?，不能向靜脈內(nèi)推，以免形成空氣栓塞，造成嚴(yán)重后果。,扎壓

6、脈帶,采靜脈血時(shí)止血帶壓迫時(shí)間不能過長、綁扎不能過緊，以避免淤血和血液濃縮，最好不超過1min，否則會(huì)影響某些試驗(yàn)結(jié)果，如造成血紅蛋白和血細(xì)胞比容增高。 穿刺皮膚 不能從靜脈側(cè)面進(jìn)針。針頭進(jìn)入靜脈的感覺是：皮膚有一定阻力，而靜脈壁阻力較小，更富有彈性。,抽血,血液加入抗凝試管中應(yīng)與抗凝劑充分混勻達(dá)到抗凝目的；無需抗凝時(shí)則將血液直接注入試管中。要防止血液標(biāo)本溶血，因?yàn)槿苎髽?biāo)本不僅紅細(xì)胞和血細(xì)胞比容減低，還會(huì)使血清（漿）化學(xué)成分發(fā)生變化。造成溶血的原因有：注射器和容器不干燥、不清潔；壓脈帶捆扎時(shí)間太久，淤血時(shí)間長；穿刺過程中損傷組織過多；抽血速度太快；血液注入容器時(shí)未取下針頭或用力推出時(shí)產(chǎn)生大量

7、氣泡；抗凝血用力振蕩；離心時(shí)速度過快等。,止血 不能彎曲手臂，以免形成血腫。 放血 顛倒混勻時(shí)，需防止溶血和泡沫產(chǎn)生。切忌振蕩 試管。 標(biāo)本檢測與保存 血液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，實(shí)驗(yàn)室接到標(biāo)本后應(yīng)盡快地檢查?？鼓o脈血可穩(wěn)定812h，如不能及時(shí)測定，應(yīng)將其置于較穩(wěn)定的環(huán)境中，如4冰箱，減少和降低條件的變化。測定前，將其從冰箱內(nèi)取出，恢復(fù)至室溫狀態(tài)，混勻后再測定。用于生物化學(xué)檢查的標(biāo)本若不能及時(shí)檢查，應(yīng)將血清或血漿與細(xì)胞分離，進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼?一次性器材 只能使用一次，不能反復(fù)使用。,二、血涂片制備,目的：掌握普通手工制備血涂片的方法。 實(shí)驗(yàn)用品： 1、器材：一次性采血針、消毒棉簽、推波片、載玻

8、片等。 2、試劑：75%乙醇、30g/L碘酊。 標(biāo)本：EDTA-K2抗凝靜脈血或末梢血。,操作方法 步驟：可分5個(gè)步驟進(jìn)行消毒取血推片染色觀察 消毒與取血消毒先按摩取血部位，使血流通暢；再用酒精消毒取血部位（如指尖）。,取血待酒精干后，刺破皮膚，使血自然流出，勿擠。取干凈載片，讓血滴在離載片一端中45毫米處，注意手指 持握載片的邊緣，勿觸及其表面。不能使載片接觸取血部位的皮膚。,推片 取一塊邊緣光滑的載片做推片。將其一端置于血滴前方，向后移動(dòng)到接觸血滴，使血液均勻分散在推片與載片的接觸處。然后使推片與載片呈3040角，向另一端平穩(wěn)地推出。涂片推好后，迅速在空氣中揮干，使之自然干燥。,血涂片制備

9、,推片,載玻片,血液,一張滿意的血涂片應(yīng)厚薄均勻 頭 體 尾鮮明,涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭 部寫上姓名和編號(hào),李四,B 1 2 3,取另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動(dòng)輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀。,不良血涂片,標(biāo)準(zhǔn)血涂片：標(biāo)準(zhǔn)的血涂片為舌形，邊緣整齊，厚薄適宜，頭體尾分明的血膜片，長約4cm,兩端和兩側(cè)留有空隙（1.5cm和0.3cm),三、血涂片的染色,染色原理： (1)瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)組成的復(fù)合染料。 (2)細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對(duì)各種染料的親和力也不一樣。因此，用本染料液染后

10、，在同一血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。,(3)PH對(duì)細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均為蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)。,染色方法： 1、 取病料涂片、自然干燥 2、 滴加瑞氏染液染0.5-1分鐘,使標(biāo)本被其中甲醇所固定; 3、 加等量PH6.4的磷酸鹽緩沖液(或等量 超純水)輕輕晃動(dòng)玻片,均勻靜置5-10分鐘; 4、 水洗、吸干、鏡檢。,血涂片染色,勿沖洗再加瑞氏染色液5-8滴后將液和液充分混勻靜置10分鐘,直接流水沖洗3-5分鐘 （切勿先倒掉染液）,涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡 分類計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞,李四123,涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆