生物工程大四畢業(yè)實(shí)習(xí)報(bào)告

1、南京理工大學(xué)生產(chǎn)實(shí)習(xí)報(bào)告學(xué) 院： 環(huán)境與生物工程學(xué)院 專 業(yè)： 生物工程 姓 名： 徐宏森 學(xué) 號： 8 組 員： 蔣晶晶、楊子云 2017年9月10日目錄1實(shí)習(xí)目的22實(shí)習(xí)單位和時(shí)間23浙江錢江生物化學(xué)股份有限公司23.1公司概況23.2實(shí)習(xí)安排23.3工廠的選址與總體布局33.4發(fā)酵車間243.4.1車間概況43.4.2主要設(shè)備43.4.3發(fā)酵流程43.4.4滅菌與除菌工藝43.4.5火焰接種73.4.6發(fā)酵參數(shù)的檢測與調(diào)控83.5 提取車間83.6 噴霧干燥93.7 冷卻加熱系統(tǒng)103.8 純水制備系統(tǒng)103.9 污水處理站工程103.9.1前言103.9.2工程概況103.9.3處理工

2、藝114乾元浩生物股份有限公司南京生物藥廠134.1 實(shí)習(xí)安排134.2 公司概況134.3 工廠選址與環(huán)境簡介134.4 質(zhì)檢車間134.4.1 車間概況144.4.2 獸用生物制品的檢測144.4.3 主要檢測疫苗144.5疫苗生產(chǎn)工藝154.5.1 疫苗分類154.5.2 組織疫苗154.5.3 細(xì)胞疫苗174.5.4 中央空調(diào)系統(tǒng)195報(bào)告分工201實(shí)習(xí)目的課本上學(xué)到的理論知識不夠直觀，實(shí)驗(yàn)室里面的實(shí)際操作也有一定的限制，因此前往生物工程工廠去熟悉生產(chǎn)環(huán)境，掌握生產(chǎn)概況，并對典型的生物技術(shù)進(jìn)行直觀的了解，會(huì)有利于我們將理論與實(shí)際更好地結(jié)合起來，從而印證、鞏固和加深所學(xué)基本理論知識和專業(yè)

3、知識，也為后續(xù)的畢業(yè)設(shè)計(jì)打下基礎(chǔ)，同時(shí)也為我們以后就業(yè)方向的選擇提供了參考。2實(shí)習(xí)單位和時(shí)間浙江錢江生物化學(xué)股份有限公司 6.266.30乾元浩生物股份有限公司南京生物藥廠 8.218.253浙江錢江生物化學(xué)股份有限公司3.1公司概況公司位于中國觀潮勝地海寧市，創(chuàng)建于1970年，1997年成為中國生物農(nóng)藥行業(yè)和浙北地區(qū)首家上市公司，面積26萬平方米，現(xiàn)有正式員工757人。該企業(yè)是國家重點(diǎn)高新技術(shù)企業(yè)，中國農(nóng)藥100強(qiáng)企業(yè)、中國農(nóng)藥殺蟲劑50強(qiáng)企業(yè)，國內(nèi)規(guī)模最大的新型生物農(nóng)藥、獸藥生產(chǎn)企業(yè)之一，主要生產(chǎn)生物農(nóng)藥(包括殺菌劑、殺蟲劑、植物生長調(diào)節(jié)劑等)、生物獸藥、生物醫(yī)藥中間體、飼料添加劑等四大系

4、列三十多個(gè)產(chǎn)品，其中高純度赤霉素制劑、阿維菌素被認(rèn)定為浙江省高新技術(shù)產(chǎn)品，60%高純度井岡霉素粉劑列入國家火炬計(jì)劃項(xiàng)目及國家高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目。3.2實(shí)習(xí)安排6月26日 下午 廠區(qū)總體布局情況參觀6月27日 上午 公司概況介紹、實(shí)習(xí)要求及相關(guān)實(shí)習(xí)安全工作培訓(xùn)6月27日 下午 產(chǎn)品及生產(chǎn)工藝介紹 6月28日 上午 廠區(qū)環(huán)保治理工藝介紹6月28日 下午 發(fā)酵車間實(shí)習(xí)6月29日 上午 參觀主要生產(chǎn)車間6月29日 下午 發(fā)酵車間實(shí)習(xí)6月30日 上午 參觀污水處理6月30日 下午 返回南京3.3工廠的選址與總體布局 該廠區(qū)位于東南方向，遠(yuǎn)離居民區(qū)，并位于居民區(qū)的下風(fēng)側(cè)，該處地形也較為平整，有利于工廠的總平

5、面布置，另外，廠區(qū)旁邊有一條河流，使得生產(chǎn)用水較為方便，一些冷卻水的排放也更加方便。但是，廠區(qū)周圍依然有浙江大學(xué)海寧校區(qū)、紫薇初級中學(xué)等學(xué)校，以及海寧市婦幼保健院等，這些機(jī)構(gòu)的存在對于廠區(qū)生產(chǎn)的環(huán)境要求就越發(fā)嚴(yán)苛，特別是噪聲，廢氣，廢水等的產(chǎn)生量需要嚴(yán)格控制，因此廠房周圍通過種樹來減小噪音，企業(yè)在環(huán)境治理方面投入的財(cái)力物力近年來有所增加。該工廠有建立污水處理站，并于后期對污水處理站進(jìn)行擴(kuò)建，能將廢水處理后達(dá)國家要求的廢水排放標(biāo)準(zhǔn)，并能對廢水廢渣進(jìn)行綜合利用。圖3-1 廠區(qū)總體布局圖3.4發(fā)酵車間23.4.1車間概況該車間用于赤霉素的發(fā)酵生產(chǎn)，其發(fā)酵的原料為：淀粉、玉米粉為碳源，花生粉、黃豆粉為

6、氮源，磷酸二氫鉀、硫酸鉀為無機(jī)鹽。該發(fā)酵周期一般為8天，發(fā)酵過程中初始碳源充足，發(fā)酵期間流加氮源花生粉，取樣周期為2天。發(fā)酵過程中的溫度、壓力、電流以及各設(shè)備的運(yùn)行狀態(tài)全通過電腦在線監(jiān)控。該車間一共三層，第一層主要用于拌料和出料，第二層設(shè)有取樣口和菌種保藏室，第三層進(jìn)行投料。3.4.2主要設(shè)備3m一級種子罐，12m二級種子罐，50-60m發(fā)酵罐，配料罐。圖3-2 60m發(fā)酵罐3.4.3發(fā)酵流程上罐斜面孢瓶一級種子罐培養(yǎng)二級種子罐培養(yǎng)發(fā)酵罐培養(yǎng)測定GA3含量3.4.4 滅菌與除菌工藝（1）無菌空氣的制備1）流程名稱：兩級冷卻、分離、加熱除菌流程。2) 具體流程：布袋過濾器空壓機(jī)緩沖罐冷卻器旋風(fēng)分

7、離器冷卻器絲網(wǎng)分離器加熱器棉花過濾器膜過濾器發(fā)酵罐圖3-3 兩級冷卻、分離、加熱除菌流程示意圖圖3-4棉花過濾器（2）設(shè)備及管路的滅菌1）罐和容器的排料系統(tǒng)、取樣口的蒸汽滅菌罐和容器的排料口必須設(shè)在最低點(diǎn)，并且與罐體間完全無縫隙，以便于清洗、排污及滅菌，也能保證徹底排干凈料液。為了實(shí)現(xiàn)無菌排料以及取樣時(shí)的無雜菌的環(huán)境，在排料口處和取樣口處均會(huì)設(shè)置蒸汽閥門。圖3-5排料管蒸汽滅菌配置 圖3-6取樣口處管路設(shè)置2）管道系統(tǒng)的蒸汽滅菌水平安裝的管道會(huì)在凹陷低點(diǎn)安裝排污閥，蒸汽總管道內(nèi)的蒸汽通往需要滅菌的各管線和設(shè)備，但是管路中依然會(huì)存在不可避免的滅菌死角，不容易滅菌的死角總會(huì)支出一根與大氣相通的蒸汽

8、細(xì)管道，使死角也能殺菌徹底。 圖3-7彎管死角處支出蒸汽細(xì)管3.4.5火焰接種 （1）接種前預(yù)備工作:1）實(shí)消罐壓0.12MPa,罐溫121123，30min；2) 冷卻打開冷卻水閥，向夾套通水，快速冷卻；3）保壓罐壓降至0.05Mpa時(shí)，打開空氣閥門，向罐內(nèi)通入無菌空氣，保持罐壓為0.05Mpa，繼續(xù)通冷卻水，知道罐內(nèi)培養(yǎng)基溫度降至略高于接種溫度時(shí)，關(guān)閉閥門，停止通冷卻水。4）接種材料準(zhǔn)備：酒精火把、酒精棉、鑷子、手套、培養(yǎng)好的液體搖瓶種子。（2）操作要領(lǐng);1)關(guān)閉進(jìn)氣閥，降低罐壓約為0.02Mpa；2)擰松接種口螺帽（留1-2扣），將酒精火把置于接口處，點(diǎn)燃，擰掉螺帽，將菌種瓶口在火焰處拔

9、塞、過火，此時(shí)向罐內(nèi)通氣，使接種口有空氣排出；3）將菌種盡快倒入罐內(nèi)；4）將接種口蓋在火焰上滅菌后擰緊，罐壓保持在0.03Mpa0.07Mpa，調(diào)節(jié)通風(fēng)量。3.4.6發(fā)酵參數(shù)的檢測與調(diào)控（1）檢測系統(tǒng)組成部分：測定元件、控制部分、執(zhí)行元件。（2）檢測參數(shù)：溫度、罐壓、攪拌功率等。（3）調(diào)控方式溫度通過開啟或關(guān)閉冷卻或加熱裝置，使罐溫維持恒定。罐壓通過調(diào)節(jié)進(jìn)口或出口閥門，改變進(jìn)入或排出的空氣（或氣體）量，以維持工藝所需壓力。pHpH下降補(bǔ)加氮源，pH上升補(bǔ)糖。溶氧溶氧過低時(shí)，可以適當(dāng)增加攪拌速度，結(jié)合增加氣體流速調(diào)節(jié)。3.5提取車間（1）提取流程以硫酸黏菌素原料藥生產(chǎn)工藝流程為例：發(fā)酵液預(yù)處理發(fā)

10、酵濾液樹脂吸附解析液脫鹽中和液納濾濃縮液精濾液（2）陶瓷膜過濾系統(tǒng)圖3-8提取車間陶瓷膜過濾系統(tǒng)（3）精濾 圖3-9精濾器（4）洗脫液甲醇以及萃取液乙酸乙酯通過相應(yīng)的回收塔進(jìn)行回收利用。3.6 噴霧干燥該工藝采用離心噴霧干燥器將待干燥的濃縮液通過噴霧的方式在幾秒至幾十秒內(nèi)迅速干燥，成品則以粉末狀態(tài)沉降于干燥室底部，再從卸料器排出。 圖3-9離心噴霧干燥流程 3.7 冷卻加熱系統(tǒng)采用蒸汽作為推進(jìn)力，利用Li2Br蒸發(fā)吸熱來進(jìn)行冷卻，其冷卻規(guī)模更龐大。 圖3-10發(fā)酵罐冷卻加熱裝置3.8純水制備系統(tǒng)目前利用反滲析方法來制備純水，該方法具有脫鹽率高，產(chǎn)水量大，化學(xué)試劑消耗少等優(yōu)點(diǎn)。3.9 污水處理站

11、工程3.9.1前言隨著城市化推進(jìn)，浙江錢江生化股份有限股份公司硤石分廠（二分廠）周圍已是居民樓密布，企業(yè)的生存和發(fā)展空間日益受到擠壓，根據(jù)海寧市政府統(tǒng)一安排，公司決定關(guān)停二分廠，配套完善三分廠，與此同時(shí)，對三分產(chǎn)已有1000m/d處理能力廢水處理設(shè)施進(jìn)行擴(kuò)建，使廢水處理總能力提升至4000m/d，并配套完善相應(yīng)的廢棄收集處理設(shè)施，使生產(chǎn)性廢水和污水站廢氣均得到有效處置。3.9.2工程概況1) 項(xiàng)目名稱 浙江錢江生物化學(xué)股份有限公司三分廠污水處理站擴(kuò)容改造工程。2) EPC單位 浙江省環(huán)境有限公司3) 工程投資 擴(kuò)建工程投資3000萬元，原有工程投資1500萬元，總投資4500萬元。4) 處理能

12、力 新增3000m/d處理能力，與原有1000m/d處理能力，形成4000m/d總處理能力。5) 進(jìn)水水質(zhì) （1）高氨氮廢水：Q300m/d，NH3-H3500mg/L,CODCr25000/L。 （2）其它廢水：Q3700m/d，NH3-H80mg/L,CODCr6000/L。6) 排放標(biāo)準(zhǔn) 執(zhí)行污水排入城鎮(zhèn)下水道水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（CJ343-3010），即：CODCr500/L, NH3-H45mg/L。3.9.3處理工藝1) 高氨氮廢水進(jìn)入高濃度廢水調(diào)節(jié)池經(jīng)提升并調(diào)節(jié)pH后進(jìn)行氨吹脫，含氨廢氣經(jīng)稀硫酸吸收，吸收下來的硫銨作為發(fā)酵原料，經(jīng)脫氨后廢水提升至EGSB厭氧反應(yīng)塔去除大量有機(jī)物后進(jìn)入脫氣池

13、，經(jīng)曝氣脫除部分H2S和氨氣后進(jìn)入綜合廢水調(diào)節(jié)池，沼氣經(jīng)脫硫除濕預(yù)處理后送常壓沼氣熱水鍋爐焚燒，熱水用于待脫氨廢水加熱。2) 綜合廢水調(diào)節(jié)池廢水經(jīng)提升并調(diào)節(jié)pH進(jìn)入高效兼氧池,兼氧池中設(shè)置曝氣推流器，出水經(jīng)一沉淀池澄清后清液去三級AO池，A池設(shè)置水下環(huán)流攪拌機(jī)，使污泥保持懸浮狀態(tài)，O池中設(shè)置可提升為空曝氣系統(tǒng)，通過池中活性污泥的生物作用大量降解水中污染物，并通過硝化反硝化作用脫氮，其中O硝化液通過內(nèi)回流泵部分回流至A池、O硝化液通過內(nèi)回流泵回流至A池，O混合液經(jīng)二沉池澄清后達(dá)標(biāo)排放。3) 一沉淀池部分回流至高效兼氧池、二沉污泥部分回流至三級A/O池，剩余污泥均打入污泥濃縮池，經(jīng)濃縮后污泥加藥后

14、進(jìn)行板框過濾，泥餅送熱電廠焚燒處置。4) 高濃度廢水調(diào)節(jié)池、綜合廢水調(diào)節(jié)池、高效兼氧池、一沉池、A1、A2池、脫氣池、濃縮池等均采用預(yù)制玻璃鋼集氣罩密封，并采用負(fù)壓吸風(fēng)系統(tǒng)，廢氣由引風(fēng)機(jī)抽送電熱廠焚燒處置。 5) 具體流程圖 高效兼氧池一沉池三級A/O池二沉池標(biāo)排口集水井EGSB厭氧反應(yīng)塔高氨氮廢水高濃度廢水調(diào)節(jié)池氨吹脫塔調(diào)PH氨吸收塔發(fā)酵原料脫硫塔除濕塔雙膜儲(chǔ)氣柜常壓熱水鍋爐脫氣池綜合廢水調(diào)節(jié)池調(diào)PH污泥濃縮池板框過濾池焚燒藥 圖3-11 污水處理流程圖4乾元浩生物股份有限公司南京生物藥廠4.1 實(shí)習(xí)安排 8月21日 實(shí)習(xí)培訓(xùn)、安全培訓(xùn)、注意事項(xiàng)介紹 8月22日 參觀質(zhì)檢車間總體布局 8月2

15、3日 參觀ELASA檢測實(shí)驗(yàn)室 8月24日 參觀ELASA檢測實(shí)驗(yàn)室 8月25日 廠區(qū)生產(chǎn)工藝介紹，廠區(qū)總體布局參觀4.2 公司概況乾元浩生物股份有限公司南京生物藥廠成立于1931年，原為國民政府中央畜牧實(shí)驗(yàn)所，是我國最早從事畜牧實(shí)驗(yàn)和畜禽疫苗研究與生產(chǎn)的企業(yè)。2004年7月，資產(chǎn)重組后更名為乾元浩生物股份有限公司南京生物藥廠，是乾元浩生物股份有限公司凍干疫苗生產(chǎn)基地。 該廠于1990年、2000年分別興建了兩座符合獸藥GMP規(guī)范的潔凈廠房，總建筑面積8078平方米，凈化面積4500平方米。獸藥GMP車間采用自動(dòng)控制系統(tǒng)，具有自動(dòng)化程度高、性能穩(wěn)定、技術(shù)先進(jìn)的特點(diǎn)。 2002年12月，該廠率先

16、通過農(nóng)業(yè)部獸藥GMP認(rèn)證，成為國內(nèi)第一個(gè)通過GMP認(rèn)證的獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)，也是國內(nèi)第一個(gè)通過GMP動(dòng)態(tài)驗(yàn)收的獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)。該廠目前擁有3個(gè)GMP車間，9條自動(dòng)化生產(chǎn)線，年生產(chǎn)能力為160億羽（頭）份，并擁有一座由世界銀行投資興建、符合國際標(biāo)準(zhǔn)的SPF雞場。產(chǎn)品分為禽活疫苗、禽滅活疫苗、牲畜活疫苗、牲畜滅活疫苗四大類。4.3工廠選址與環(huán)境簡介 公司位于南京市雨花臺區(qū)小行里51號，由于該廠的GMP車間對環(huán)境的要求很嚴(yán)格，因此廠區(qū)擁有大片綠化，為了防止泥土裸露，還在廠區(qū)內(nèi)種有一大片草地。4.4 質(zhì)檢車間 我們小組被分配至質(zhì)檢車間進(jìn)行實(shí)習(xí)，對該車間的主要組成部分和ELASA檢測進(jìn)行了了解。

17、4.4.1 車間概況 質(zhì)檢車間主要是對產(chǎn)品的各項(xiàng)性能指標(biāo)進(jìn)行檢測，從而檢驗(yàn)產(chǎn)品是否符合中華人民共和國獸藥典里面所規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，是判定各批次產(chǎn)品是否被淘汰的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。該車間實(shí)驗(yàn)室主要有細(xì)胞制備室、支原體檢測室、核酸提取室、熒光觀察室、PCR檢測室等，另外還有控制區(qū)、設(shè)備室、儲(chǔ)存室、留樣室等。4.4.2 獸用生物制品的檢測（1）一般檢測項(xiàng)目：性狀檢驗(yàn)、無菌檢驗(yàn)、真空度測定、剩余水分測定、甲醛，苯酚或汞類防腐劑殘留量測定、安全檢驗(yàn)、效力檢驗(yàn)、剩余水分測定、真空度測定等。（2）不同的疫苗對應(yīng)的檢測項(xiàng)目會(huì)有差別，因此每一種疫苗又會(huì)有與之對應(yīng)的具體檢測項(xiàng)目。雞新城疫活疫苗的檢驗(yàn)項(xiàng)目：性狀檢驗(yàn)、無菌檢驗(yàn)、支原

18、體檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn)、效力檢驗(yàn)。圖4-1外源病毒的質(zhì)控流程圖4.4.3 主要檢測疫苗 口蹄疫（A型）滅活疫苗（AF/72株）、雞傳染性法式囊病活疫苗（B87）雞傳染性支氣管炎活疫苗（H120株）、雞痘活疫苗（鵪鶉化弱毒株）、雞馬立克氏病活疫苗（814株）、雞新城疫活疫苗等。4.5疫苗生產(chǎn)工藝該廠生產(chǎn)獸用生物制品，按性質(zhì)主要分為疫苗、診斷制品和抗病血清，而此次我們主要了解是該廠制備疫苗的工藝流程。4.5.1 疫苗分類（1）活疫苗又稱弱毒疫苗，是目前使用最廣泛的疫苗。指在特定條件下，通過人工定向培育，使微生物毒力減弱，但仍保持其良好的免疫原性，或篩選自然弱毒株制成的疫苗為弱毒疫

19、苗，如雞成立克氏病疫苗、雞新城疫活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、小鵝瘟活疫苗等。（2）滅活疫苗又稱死疫苗，是目前較受歡迎的疫苗。以選用免疫原性良好的病原微生物經(jīng)人工培養(yǎng)后用理化方法將其滅活制成的疫苗。如禽流感滅活疫苗、豬偽狂犬病滅活疫苗、雞大腸埃希菌病滅活疫苗等。4.5.2 組織疫苗（1）生產(chǎn)模式將病毒種子接入雞（鴨、鵝）胚，利用胚的生理功能，使病毒在胚體中增殖，及時(shí)收取尿囊液、胚體： 組織活疫苗加入保護(hù)劑，經(jīng)凍干制成。組織滅活疫苗將抗原滅活，加入佐劑，乳化制成。（2）生產(chǎn)工藝簡介1)孵胚a.選擇雞胚必須選擇單枚重量在48-60g之間，大小均勻一致SPF蛋，蛋殼表面致密，鈣質(zhì)分布均勻。b.雞胚

20、孵化過程中的技術(shù)控制雞蛋入孵前進(jìn)行熏蒸消毒；孵化溫度37.538.5，相對濕度5570；翻蛋頻率為2h/次；孵化至57日齡時(shí)須照蛋（頭照），剔除未受精的雞蛋和死胚；孵化至10日齡時(shí)備用。2）種毒準(zhǔn)備必須選擇SPF雞蛋制作種毒；種毒類型分為原始種毒、基礎(chǔ)種毒、種毒批；種毒效價(jià)達(dá)需一定含量，如ND：108.5EID50/0.1ml；種毒無細(xì)菌、霉菌、支原體和外源病毒。將種毒作數(shù)萬倍稀釋；3）接種a.接種途徑一般根據(jù)接種材料選擇不同的接種途徑和不同日齡的蛋胚，常用的蛋胚接種途徑有：尿囊腔9-11日齡蛋胚；絨毛尿囊膜10-12日齡蛋胚；卵黃囊接種5-7日齡蛋胚。b.接種方法單孔接種在蛋胚氣室的中心位置

21、打一個(gè)小孔，垂直刺入針頭約2cm，接入接種物，封口，放入孵箱內(nèi)孵化。也可在氣室范圍內(nèi)距邊緣處打一小孔（避開大血管），沿胚長徑平行方向刺入針頭，注入接種物。雙孔接種在離氣室0.30.5cm無大血管處作一標(biāo)記，作為接種孔的位置，在氣室和標(biāo)記處各打一小孔，自接種孔接入接種物。4）收獲接種后，置37左右，相對濕度5570%環(huán)境中繼續(xù)孵72120h，即可進(jìn)行收獲，收獲物稱為抗原。a.尿囊液的收獲：取出冷藏好的蛋胚，直立于蛋盤，氣室向上，用碘酊消毒氣室部位，除去卵殼，刺開內(nèi)層殼膜和絨毛尿囊膜，直接用無菌吸管或注射器吸取尿囊液。b.胚胎的收獲：除去氣室部卵殼后，用無菌鑷子撕破內(nèi)層殼膜和絨毛尿囊膜，夾起胚胎，剪斷卵黃囊?guī)?，置滅菌平皿或瓶?nèi)。5）中間檢測對抗原進(jìn)行效價(jià)檢測，抗原效價(jià)必須達(dá)一定的含毒量，且無細(xì)菌、霉菌、支原體和外源病毒。6）活疫苗的包裝添加保護(hù)劑根據(jù)配苗比例，添加保護(hù)劑以期產(chǎn)品的均一與穩(wěn)定；分裝用自動(dòng)分裝機(jī)進(jìn)行定量分裝（半加