檢驗項目標準操作規(guī)程-HIV AbAg

1、檢驗項目標準操作規(guī)程LIAISON 人類免疫缺陷病毒抗原及抗體聯(lián)合檢測 （HIV Ab/Ag）(化學發(fā)光法，CLIA)類別信息用途本產品用于體外定性檢測人血清或血漿中的人類免疫缺陷病毒1 型（HIV-1）的P24 抗原，以及兩種人類免疫缺陷病毒1 型（M 群和O 群）和/或人類免疫缺陷病毒2 型（HIV-2）特異性抗體。此試劑僅用于全自動化學發(fā)光免疫分析儀（LIAISONXL）系列。臨床意義獲得性免疫缺陷綜合癥（艾滋?。┑陌l(fā)病原因已被確定為兩種類型的逆轉錄病毒，統(tǒng)稱指定為人類免疫缺陷病毒（HIV）。HIV是由HIV感染者之間的性接觸、接觸到受污染的血液或者血液制品進行傳播的，以及受感染的母親傳

2、染給胎兒或圍產期感染給新生兒。艾滋病患者和HIV感染的無癥狀個體中可以檢測到HIV抗體；通過細胞培養(yǎng)或者病毒RNA和/或前病毒DNA的擴增后在艾滋病患者和陽性個體中能檢測到HIV病毒感染。通過系統(tǒng)進化分析HIV-1可以分成M群（主要的或較多的），N群（新的，非-M群，非-O群），O群（外部的）和P群（Plantier 等，Nat. MED. 2009年）。全球艾滋病的流行主要是由M群的病毒引起的，而N群和O群病毒相對少見，而且是非洲西中部特有的。然而，已經確定在歐洲和美國存在O群感染。 HIV-1 M群由遺傳亞型（A，B，C，D，F(xiàn)，G，H，J和K）組成，而且是循環(huán)重組的形式（CRFs）。 H

3、IV-1 B亞型是在美國，歐洲，日本和澳大利亞的主要亞型，但在歐洲新的HIV-1病毒感染的很大比例是由非B亞型引起的。與之密切相關但不同類型的免疫缺陷病毒是人類免疫缺陷病毒2型（HIV-2）。人類免疫缺陷病毒2型與HIV-1在形態(tài)結構，基因組組織，細胞嗜性、體外致細胞病變性，傳播途徑，以及導致艾滋病的能力方面都是類似的。 HIV-2比HIV-1致病性弱些，相比HIV-1而言，HIV-2從感染到全面爆發(fā)有一個較長的潛伏期，疾病進展慢，病毒滴度較低，垂直和水平傳播概率低。 HIV-2的西非流行，但在美國，歐洲，亞洲，非洲等地區(qū)感染HIV-2的頻率比HIV-1低。HIV-1和HIV-2之間的血清學交

4、叉反應已經顯示出不同樣本的高度可變性。這種變異需要HIV-1和HIV-2兩種病毒的抗原來篩選HIV-1和HIV-2的抗體。 HIV-1和/或HIV-2抗體和/或p24抗原在血液中的存在表明潛在感染HIV-1和/或HIV-2。HIV感染后的早期，但在轉陰之前，在血清或血漿標本中可檢測HIV抗原。最經常作為抗原血癥標記使用的HIV結構性蛋白是一種核心蛋白， P24。人類免疫缺陷病毒抗原及抗體聯(lián)合檢測試劑盒（化學發(fā)光法）使用HIV P24單克隆抗體檢測轉陰之前的HIV p24抗原，從而降低轉陰窗口期并提高HIV感染的早期檢測。樣本信息樣本類型樣本管/抗凝劑最小樣本量血清200 L 標本+ 150 L

5、 死體積血漿 檸檬酸鹽 EDTA 肝素 草酸鉀 ACD CPDA標本保存樣本在收集后7天內檢測，可保存在 2-8C 條件下; 否則，標本需要分包裝冷凍保存 (20C 或更低)。如果標本冷凍保存，使用前需要解凍并混勻。標本的特定要求 含有顆粒物質、渾濁、脂血或紅細胞殘片的樣本使用前需要過濾或離心。 嚴重溶血或脂血樣本以及含有。顆粒物質或明顯微生物污染的樣本不能用于檢測。 檢測前檢查并去除泡沫。方法學HIV 特異性抗體的定性測定采用抗原夾心化學發(fā)光免疫檢測(CLIA)技術。HIV p24抗原的定性測定采用P24抗原的單克隆抗體夾心化學發(fā)光免疫檢測(CLIA)技術。試劑1. LIAISON HIV抗

6、體檢測試劑盒1.1 磁微粒：(2.5mL) 包被有HIV-1 gp41（M群和O群）以及HIV-2 gp35重組抗原（兩者都從大腸桿菌中獲得）的磁性微粒，BSA，PBS緩沖液，0.1%的疊氮化鈉1.2 校準品：(1.8 mL ) 含有低濃度HIV抗體的人血清/血漿，BSA，PBS緩沖液，EDTA，0.2的ProClin300，惰性黃色染料。校準品的值可溯源到廠家的室內參考品。1.3 樣本稀釋液：(11 mL) 綿羊血清，BSA，PBS緩沖液，EDTA，0.2的ProClin300，防腐劑。1.4 結合物稀釋液：(2*21 mL ) 牛血清，BSA，TRIS緩沖液，0.2的ProClin300，

7、防腐劑。1.5 結合物：(4.4 mL ) HIV-1 gp41（M群和O群）以及HIV-2 gp35重組抗原（兩者都從大腸桿菌獲得），與異魯米諾衍生物結合，BSA，PBS緩沖液，0.2的ProClin300，防腐劑。2. LIAISON HIV抗原檢測試劑盒2.1 磁微粒：(2.5mL) 包被有鏈霉親和素的磁性微粒，BSA，PBS緩沖液，0.1疊氮化鈉。2.2 校準品：(1.8 mL ) 低水平HIV p24重組抗原（從大腸桿菌中獲得），重組牛抑肽酶，酪蛋白，PBS緩沖液，0.2的ProClin300，惰性黃色染料。校準品的值可溯源到廠家的室內參考品。2.3結合物B：(4.4 mL) HIV

8、 p24抗原的抗體（單克隆）生物素結合物，人血清/血漿，非特異性IgG抗體（小鼠多克隆），BSA，PBS緩沖液，0.2的ProClin300，防腐劑。2.4 結合物A：(13 mL ) HIV p24抗原的IgG抗體（單抗），與異魯米諾衍生物結合，非特異性人IgG，非特異性IgG（小鼠多克?。?，BSA，PBS緩沖液，EDTA，Igepal 300 CA-630，0.2的ProClin300，防腐劑。3. 試劑盒儲存條件3.1試劑盒必須豎直放置以利于磁微粒的重新懸浮。不能冷凍保存。過效期的試劑盒不能再使用。3.2 當試劑盒處于密封和豎直放置的儲藏條件下，能夠在2-8C 條件下穩(wěn)定至效期。3.3

9、打開密封膜后，試劑盒可在2-8C 條件下或儀器試劑區(qū)中穩(wěn)定儲藏4 周。4. 試劑有效期試劑盒的有效期為12 個月。定標使用試劑盒中包含的校準品定標，分析儀可設置檢測項目的臨界值（cut-off值）。每個校準品可定標四次。為了正確測試，檢測化驗必須定標。 如果出現(xiàn)以下的情況需要重新定標，每次定標需要做3份重復測試: 使用新批號的試劑盒或啟動試劑。 距上次定標時間超過4周。 分析儀經過維護。 質控結果超出期望范圍值。質量控制分析儀需做質控一次進行分析性能監(jiān)控，本項目須通過檢測人類免疫缺陷病毒抗原及抗體質控品來進行。(a)使用當天至少一次，(b)使用新的試劑盒時，(c)對試劑盒進行定標后，(d)使用

10、新批號的啟動試劑，(e)評價打開的超過四個星期的試劑盒的性能時，或者按照地方性法規(guī)或者認證組織的要求或者指南進行時。質控值必須在靶值范圍內：一個質控品或兩個質控品檢測值都超出靶值范圍時，需要重新進行定標并對質控品重新進行檢測。如果定標成功后，質控值仍然超出靶值范圍，則應使用未開封的質控品重新檢測。如果質控值仍然超出靶值范圍，則不能報告患者結果。使用其他質控品前，應先評估質控品與本項目的匹配性。然后建立合適的質控范圍。檢測程序1. 試劑盒的準備在打開試劑盒中各組分的封口膜前，水平輕搖試劑盒，避免產生泡沫。打開各組分的封口膜并轉動磁微粒組分底部的齒輪直到懸浮液變?yōu)楹稚?。該步驟可使磁微粒重新懸浮。然

11、后，使試劑盒上的條形碼面向左側將試劑盒滑入分析儀中的試劑區(qū)，使用前需在分析儀中放置30分鐘。 分析儀可自動攪動使磁微粒充分懸浮。根據分析儀操作手冊的規(guī)定裝載標本并開始檢測。2. 必要時申請定標3. 加載樣本4. 申請檢測5. 按下START檢測檢驗方法的局限性要得到準確可靠的結果，必須嚴格地遵照操作手冊使用熟練操作儀器。細菌污染或熱滅活樣本可能會影響檢測結果。此測試只適用于單個樣本，不適用于稀釋樣本，樣本池或熱滅活標本。只有以兩種試劑同時檢測的樣本結果才能聯(lián)合起來。單一檢測結果不能視為特定診斷方法得到的確定結果，不能用于與其他診斷分析比較，或建立臨床狀態(tài)。此試劑盒不得單獨用于檢測HIVp24抗

12、原。分析靈敏度使用HIV-1 p24抗原的第一國際參考試劑進行本研究，NIBSC代碼：90/636，顯示靈敏度為1.26 IU/ mL。分析特異性分析特異性可定義為此項目在含有潛在干擾因子或交叉反應抗體的樣本(例如，抗凝劑、溶血、樣本處理的影響)中準確檢測出特定分析物的能力。 干擾因子： 針對潛在干擾物或臨床情形的研究表明，本項目性能不受抗凝劑(檸檬酸鈉，鉀乙二胺四乙酸，肝素鋰，肝素鈉，草酸鉀，ACD，CPDA)、溶血(高達1000mg/dL的血紅蛋白)、脂血(高達3000mg/dL的甘油三酯)、膽紅素血(高達20mg/dL膽紅素)或樣本凍融循環(huán)的影響。結果不受同一天新鮮樣本的使用的影響，對于比較研究25份（抗-HIV抗體）+25份（HIV-1 p24抗原）新鮮收集的樣本的比較分析都是陽性的。 交叉反應：人類免疫缺陷病毒抗原及抗體聯(lián)合檢測試劑盒（化學發(fā)光法）的交叉反應性研究旨在評估可能引起傳染疾病的其他微生物抗體 (EBV、hCMV、風疹病毒、細小病毒B19 IgG、剛地弓形蟲、梅毒螺旋體、萊姆病螺旋體、HSV、VZV、HAV、HBV、HCV、HTLV-I/II)以及其他條件下可能導致非典型免疫系統(tǒng)活動的抗體(抗核自身抗體、類風濕因子、人抗鼠抗體)的潛在干擾。此研究中的樣本已預先通過另一種商業(yè)HIV檢測試劑盒的篩查。