課件：食品安全快速檢測技術(shù)(2).ppt

第二章 快速的樣品前處理技術(shù),基本概念 一般方法 固相萃取和固相微萃取技術(shù) 微波溶樣技術(shù) 其他技術(shù),基本概念,樣品前處理=樣品制備 樣本分析測定前的一系列準(zhǔn)備工作，包括：樣本的整理、清洗、勻化、縮分、粉碎、勻漿、消化、提取、凈化、濃縮、衍生化等,一般方法,提取：待測組分與樣品分離的過程 靜置法、勻漿法、振蕩提取法、專用裝置提取法等 凈化：待測組分與雜質(zhì)分離的過程 固相萃取法、液液分配法、化學(xué)處理法、低溫冷凍凈化法等 濃縮 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、氮氣吹干,固相萃取和固相微萃取技術(shù)Solid Phase Extraction SPE And Solid phase Micro-Extraction SPME,SPE是發(fā)展于上世紀(jì)70年代的一種樣品預(yù)處理技術(shù)，主要用于樣品的分離、凈化和濃縮 一個液-固的物理萃取過程。在SPE過程中，固相對分析物的吸附力大于樣品母液，當(dāng)樣品通過SPE柱時，分析物被吸附在固體表面，其他組分則隨樣液通過柱子，最后用適當(dāng)?shù)娜軇⒎治鑫锩撓聛?在2003版的“食品衛(wèi)生檢測方法”標(biāo)準(zhǔn)系列中，有很多項目，尤其是農(nóng)藥項目的前處理普遍使用了固相萃取技術(shù),經(jīng)典的真空固相萃取裝置,SPE的分類及一般操作程序,正相固相萃取所用的吸附劑都是極性的取決于目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)與吸附劑表面的極性官能團(tuán)之間相互作用，其中包括了氫鍵，鍵相互作用，偶極偶極相互作用和偶極誘導(dǎo)偶極相互作用以及其他的極性極性作用。 反相固相萃取所用的吸附劑和目標(biāo)化合物通常是非極性的或極性較弱的，主要是靠非極性非極性相互作用，是范德華力或色散力。 離子交換固相萃取是靠目標(biāo)化合物與吸附劑之間的相互作用是靜電吸引力 固相萃取的一般操作程序：活化吸附劑、上樣、洗滌和洗脫,課后思考題,請比較2003年前后農(nóng)殘檢測方法標(biāo)準(zhǔn)中的樣品預(yù)處理步驟，并談?wù)劜捎肧PE后，檢測時間可縮短至多少？（是指從樣品預(yù)處理到最后檢測結(jié)果出來）,SPE的操作,SPE的操作,試樣20g,加入內(nèi)標(biāo)，劇烈搖均后放置10min,萃取,丙酮15ml,液-液萃?。弘姶艛嚢?min+15min； 靜置分層（時間視情況而定）,水300ml NaCl3g 正己烷3.5ml,小心吸取獲得有機相,40攝氏度，氮氣吹干,乙酸乙酯溶解,GC/MS,微量液-液萃取操作步驟,SPME的發(fā)展歷史,在SPE基礎(chǔ)上，迅速發(fā)展的新型的、環(huán)境友好的樣品前處理技術(shù) 具有便于實現(xiàn)自動化、易于與色譜、電泳等高效分離檢測手段聯(lián)用等突出的優(yōu)點 1989年，Pawliszyn 提出 1993年，商品化Fiber-SPME 1993年， In-Tube-SPME -GC 1996年，商品化Fiber-SPME-HPLC 1997年，商品化Fiber-SPME-GC 1997年， In-Tube-SPME-HPLC 1999年，Pat Sandra 提出SBSE技術(shù) 2001年，一種新形式In-Tube SPME-GC,SPME裝置,裝置外型如一只微量進(jìn)樣器，由手柄（holder）和萃取頭或纖維頭（fiber）兩部分構(gòu)成，萃取頭是一根1長，涂有吸附劑（萃取相）的熔融纖維，接在不銹鋼絲上，外套細(xì)不銹鋼管（保護(hù)纖維不被折斷），纖維頭在鋼管內(nèi)可伸縮或進(jìn)出，細(xì)不銹鋼管可穿透橡膠或塑料墊片進(jìn)行取樣或進(jìn)樣。手柄用于安裝或固定萃取頭，可永遠(yuǎn)使用,SPEM原理,當(dāng)萃取達(dá)到平衡時，進(jìn)入萃取相的分析物的量為：N=KfsV1CoV2/KfsV1+V2其中，Co為萃取前分析物在樣品中的濃度；Kfs為分析物在萃取相和試樣間的分配系數(shù)； V1 為萃取相的體積；V2為樣品的體積 萃取原理： 相似相溶機理,Fiber-SPME-HPLC,課后思考題,SPE、SPME與液-液萃取相比，有何優(yōu)點？ 在應(yīng)用上，有何局限,固體萃取和液液萃取相比，其長處在于方便和消耗試劑少，短處在于批次間的重復(fù)性難以保證 固相萃取對液體樣品有其額外的苛刻要求 SPME的一次提取水平大大低于常用的液-液萃取方法，但絕對進(jìn)樣量一般大于液-液萃取方法，靈敏度很高，也易于掌握，在一個簡單過程中同時完成了取樣、萃取和富集 SPME商品化纖維種類較少，且容易破碎,優(yōu)缺點,微波溶樣技術(shù),大多數(shù)樣品是用液體狀態(tài)進(jìn)行定量分析的，因此,溶樣技術(shù)的改革仍是分析化學(xué)中的重大研究課題 微波溶樣技術(shù)是使用微波加速酸消化的一種技術(shù)，速度是常規(guī)消化法的10-100倍 特點： 溶樣速度快 溶樣效果好、重現(xiàn)性好 操作簡便、安全、易于控制和自動化 不易污染或損失,微波溶樣技術(shù),分子內(nèi)加熱原理，離子傳導(dǎo)和偶極旋轉(zhuǎn)機理同時起作用 樣品消化過程的運行參數(shù)選擇非常重要 樣品用量、酸用量、消化的溫度、壓力及微波的輸出功率等因素 起始溫度升溫時間保溫時間及磁控管的最大輸出功率選擇應(yīng)根據(jù)樣品與酸液之間反應(yīng)的劇烈程度而定,思考題,微波溶樣技術(shù)可用于哪些檢測項目上？,其他技術(shù),使用含有干粉培養(yǎng)基和冷水可溶性凝膠的細(xì)菌培養(yǎng)平板進(jìn)行微生物測定減少了培養(yǎng)基配置的時間 涂抹棒快速取樣技術(shù) 疏水性柵格濾膜過濾樣品微生物檢測時，方便計數(shù) 采用分子印跡或親和層析快速捕捉目標(biāo)物,圖示【大腸菌群】,1,2,3,4,5,6,平面,凹面,大腸菌群測試片,是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng)，含有VRB 培養(yǎng)基，冷水可溶性凝膠和TTC指示劑，可增強菌落計數(shù)效果。表面覆蓋的膠膜，可截留發(fā)酵乳糖的大腸菌群產(chǎn)生的氣體。培養(yǎng)結(jié)束后計數(shù)紅點周圍有氣泡的菌落為大腸菌群數(shù)。,培養(yǎng)24h 2h后應(yīng)立即計數(shù)，可目測、用標(biāo)準(zhǔn)菌落計數(shù)器、顯微鏡、或自動判讀儀來計數(shù)。紅色有氣泡的菌落確認(rèn)為大腸菌群數(shù)。培養(yǎng)圓形面積邊緣上及邊緣以外的菌落不作計數(shù)。當(dāng)培養(yǎng)區(qū)域出現(xiàn)大量氣泡，大量不明顯小菌落或培養(yǎng)區(qū)呈暗紅色三種情況，表明大腸菌群的濃度較高，需要進(jìn)一步稀釋樣品來獲得準(zhǔn)確的讀數(shù)。,3MTM快速涂抹棒（Quick Swab),干式取樣 當(dāng)待測表面潮濕時,1. 標(biāo)記每個涂抹棒,2. 擰扭管子使球莖末端和涂抹棒管相連處分開,3. 30度角緩慢并全面涂抹待測表面,每涂抹一次注意翻轉(zhuǎn)涂抹棒頭的方向,4. 取樣后, 完整地把涂抹棒放回管中,5. 用大拇指掰斷球莖中的紅色閥門, 聽到啪的一聲, 閥門打開, Leetheen 肉湯流入管中和浸濕涂抹棒,6. 用力擠壓球莖末端, 使Leetheen 肉湯流入管中,7. 在實驗室里, 充分振蕩涂抹棒至少10分鐘, 使菌與涂抹棒分離,8. 在管壁上擠擰出涂抹棒頭上的內(nèi)容物, 按通常工業(yè)用標(biāo)準(zhǔn)方法處置棄去涂抹棒,9. 小心地傾注管中的全部內(nèi)容物到3M PetrifilmTM測試片上,10. 按包裝內(nèi)說明培養(yǎng)測試片,3MTM快速涂抹棒（Quick Swab),濕式取樣 當(dāng)待測表面干燥時,1. 標(biāo)記每個涂抹棒,4. 擰扭管子使球莖末端和涂抹棒管相連處分開,5. 30度角緩慢并全面涂抹待測表面,每涂抹一次注意翻轉(zhuǎn)涂抹棒頭的方向,6. 取樣后, 完整地把涂抹棒放回管中,2. 用大拇指掰斷球莖中的紅色閥門, 聽到啪的一聲, 閥門打開, Leetheen 肉湯流入管中和浸濕涂抹棒,3. 用力擠壓球莖末端, 使Leetheen 肉湯流入管中,7. 在實驗室里, 充分振蕩涂抹棒至少10分鐘, 使菌與涂抹棒分離,8. 在管壁上擠擰出涂抹棒頭上的內(nèi)容物, 按通常工業(yè)用標(biāo)準(zhǔn)方法處置棄去涂抹棒,9. 小心地傾注管中的全部內(nèi)容物到3M PetrifilmTM測試片上,10. 按包裝內(nèi)說明培養(yǎng)測試片,Hygicult 瓊脂載片是一塊兩面覆有為特定細(xì)菌生長的瓊脂培養(yǎng)基的塑料載片并根據(jù)歐盟（EU）相關(guān)法規(guī)而設(shè)計，用來檢測各類表面、原材料、食品原料中的微生物（菌落總數(shù)、大腸菌群、霉菌和酵母菌）存在狀況（其使用不會影響被采樣本的質(zhì)量）。該培養(yǎng)基上另含有吐溫和卵磷脂以中和殘留的消毒劑對微生物生長的影響。,Hygicult瓊脂載片檢測微生物介紹,TPC：菌落總數(shù) CF：大腸菌群 E：大腸桿菌 Y&F：霉菌和酵母,操作步驟,接種,培養(yǎng),判讀,第一步,第二步,第三步,其他幾種微生物菌落生長情況及結(jié)果判讀,TPC E E/beta-GUR Y&F 細(xì)菌總數(shù) 腸桿菌科 大腸桿菌 酵母菌&真菌,后面內(nèi)容直接刪除就行 資料可以編輯修改使用 資料可以編輯修改使用 資料僅供參考，實際情況實際分析,主要經(jīng)營：課件設(shè)計，文檔制作，網(wǎng)絡(luò)軟件設(shè)計、圖文設(shè)計制作、發(fā)布廣告等 秉著以優(yōu)質(zhì)的服務(wù)對待每一位客戶，做到讓客戶滿意！ 致力于數(shù)據(jù)挖掘，合同簡歷、論文寫