《交叉配血知識(shí)講座》PPT課件.ppt

1,2019/6/22,交叉配血知識(shí)講座,2,2019/6/22,3,2019/6/22,一標(biāo) 本 的 采 集 及 要 求,1.標(biāo)本要新鮮: 前三個(gè)月內(nèi)病人輸過(guò)血或已經(jīng)妊娠,則配血試驗(yàn)使用的標(biāo)本不得在這次輸血的48小時(shí)前抽取,避免因回憶反應(yīng)產(chǎn)生的抗體漏檢。新近的輸血或妊娠可以引起意外抗體的迅速出現(xiàn),如果對(duì)病人的輸血史或人身史不明,使用的標(biāo)本必須是輸血前48小時(shí)內(nèi)抽取的。血量約為5ml 。,2.病人在使用右旋糖酐、pvp等治療前抽取病人血液標(biāo)本備用,以防止紅細(xì)胞緡錢狀凝集對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾。,4,2019/6/22,標(biāo) 本 的 采 集 及 要 求,3.在24小時(shí)內(nèi)輸了12單位血后,可以輸注未經(jīng)交叉配血的ABO、RH同型的血液,因?yàn)樵冀徊媾溲玫难逡巡荒艽砘颊哐宓那闆r。,4.標(biāo)本必須有正確的標(biāo)簽,要防止血樣的稀釋和溶血的產(chǎn)生,溶血的標(biāo)本一般不能使用,因?yàn)檠逯械挠坞x血紅蛋白可以掩蓋在輸血前實(shí)驗(yàn)中抗體反映引起的溶血。標(biāo)本標(biāo)簽上的內(nèi)容與血液申請(qǐng)單上的內(nèi)容要一致。,5,2019/6/22,標(biāo) 本 的 采 集 及 要 求,5.血清或血漿均可用于輸血前檢查,但使用血漿標(biāo)本時(shí),應(yīng)注意排除纖維蛋白原的干擾,因?yàn)檠獫{有時(shí)有少許纖維蛋白凝塊,容易導(dǎo)致凝集結(jié)果的判斷。,6.輸血后所有的標(biāo)本均應(yīng)妥善保存于2-8冰箱中,至少一周。,6,2019/6/22,二、血 型,1.紅細(xì)胞懸液的配制 用于血型鑒定、配血等的紅細(xì)胞至少要用大量生理鹽水洗一次,其目的是通過(guò)洗滌可以去除紅細(xì)胞表面的物質(zhì),如少量的血漿蛋白、已溶解紅細(xì)胞的基質(zhì),他們有競(jìng)爭(zhēng)抗體的作用,還有抗凝劑,他們有抗補(bǔ)體的作用。,7,2019/6/22,2. 紅 細(xì)胞懸 液的常 用濃度,2%的紅細(xì)胞懸液一般用于抗體效價(jià)的測(cè)定,5%的紅細(xì)胞懸液一般用于血型鑒定、配 血試驗(yàn)、及抗球蛋白試驗(yàn)等大多數(shù)血型血 清學(xué)試驗(yàn),10%的紅細(xì)胞懸液一般用于測(cè)定抗體的親 和力試驗(yàn),8,2019/6/22,3.離心力的標(biāo)準(zhǔn),不同規(guī)格離心機(jī)，力矩不同，統(tǒng)一離心轉(zhuǎn)速，但沒(méi)有統(tǒng)一離心力。離心轉(zhuǎn)速換算公式：RCF = 1.118 10-5 (rpm) 2 R (cm),將試管成30-45角拿在手上，細(xì)胞扣朝上，手腕輕輕用力，用液體去沖細(xì)胞扣，如果為陰性，則細(xì)胞成細(xì)沙狀沿試管壁流下，如果為陽(yáng)性，細(xì)胞成塊狀脫落細(xì)胞壁或成齒狀沿試管壁留下。切不可用力使勁搖試管，那樣凝集顆粒會(huì)被搖散，弱凝集則會(huì)誤判為陰性。,4.離心后結(jié)果觀 察注意事項(xiàng),9,2019/6/22,5.加樣時(shí)先加血清再加紅細(xì)胞，以避免漏加；抗體和抗原的比例一般為2：1。 6.必須要做正反定型實(shí)驗(yàn)才能確定血型。 7.正定型試驗(yàn)如果有條件可加做抗AB,可用來(lái)檢測(cè)弱A和弱B ,反定型一定要加做O細(xì)胞,可用來(lái)發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體。,10,2019/6/22,8.鹽水試驗(yàn)多采用立即離心法,正確的操作是紅細(xì)胞懸液加到血清后立即離心并觀察結(jié)果。反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而延誤立即離心的時(shí)間對(duì)ABO血型系統(tǒng)的抗體檢出影響較大。 如果在室溫放置2分鐘后離心,可能使3+-4+的凝集減弱為0+-1+,并伴有溶血現(xiàn)象。 如果在室溫放置5分鐘后離心,原有的凝集可能消失,并有溶血。,11,2019/6/22, 有的標(biāo)本在延遲離心后,本來(lái)應(yīng)有的凝集會(huì)變?yōu)榧炔荒?也不溶血,因而難以發(fā)現(xiàn)ABO血型的不配合。這多數(shù)發(fā)生在O 型人的血清抗體與A型、B型或AB型紅細(xì)胞反應(yīng)的試驗(yàn)中,發(fā) 生率為2%-3%。發(fā)生上述的原因是反應(yīng)強(qiáng)的抗A、抗B和抗 原強(qiáng)度強(qiáng)的A、B抗原作用,補(bǔ)體C1在有Ca2+存在的條件下, 固定到紅細(xì)胞膜上,妨礙了紅細(xì)胞的凝集,進(jìn)一步可能引起溶 血。解決的方法： A:血清與紅細(xì)胞混合后立即離心。 B:用血漿或滅活的血清做試驗(yàn) C:用EDTA鹽水配制紅細(xì)胞懸液, D:稀釋血清,12,2019/6/22,9. 正反定型不一致的原因,一般正反定型結(jié)果不一致有技術(shù)原因也有受檢紅細(xì)胞或血清 本身的的問(wèn)題。 （1）技術(shù)和管理錯(cuò)誤-ABO定型中產(chǎn)生異常結(jié)果主要原因 標(biāo)本和試劑搞錯(cuò)，造成假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果。 器材不潔產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。 試劑污染或不足，產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果。 離心過(guò)度或不足，產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果。 陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。 漏加試劑，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。 結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤，產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。,13,2019/6/22,正反定型不一致的原因,（2）標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。,（3）紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò)淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。,（4）血清異常 華通膠或血清蛋白異常引起串錢狀形成，影響反定性結(jié)果。,（5）紅細(xì)胞致敏 在含高蛋白介質(zhì)的試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。,14,2019/6/22,（6）近期曾異型輸血，使病人血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時(shí)顯示“混合 外觀凝集”現(xiàn)象。,（7）疾病因素導(dǎo)致抗原減弱 某些白血病病人 ABO血型抗原可受到抑制，檢出困難。,（8）紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象 紅細(xì)胞因遺傳或獲 得性的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。,（9）獲得性類B 由于革蘭氏陰性桿菌的作 用，紅細(xì)胞可獲得“類B”活性。,15,2019/6/22,正反定型不一致的原因,（10）近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療，影響抗體效價(jià)，造成反定型困難。,（11）異常血漿蛋白 病人血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例異常和高濃度的纖維蛋白原等能導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象。,（12）不規(guī)則抗體的產(chǎn)生 受檢者血漿中，含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，如自身抗I，與試劑A、B細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。,16,2019/6/22,（13）低丙種球蛋白血癥 可能會(huì)因免疫球蛋白 水平全面下降使血清定型時(shí)不見(jiàn)凝集或僅見(jiàn)弱凝集 反應(yīng)。,（14）藥物等因素 藥物、右旋糖酐等靜脈注射 某些造影劑可引起紅細(xì)胞聚集而類似凝集。,（15）年齡因素 如新生兒、老年人等。,17,2019/6/22,正反定型不一致的處理方法,如發(fā)現(xiàn)ABO正反定性不一致，首先要重做試驗(yàn)一次。嚴(yán)格 執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察結(jié)果，可 解決明顯的問(wèn)題，對(duì)一些疑難問(wèn)題需進(jìn)一步檢查?？沙醪讲?取以下措施：,（1）另從受檢者采取1份新鮮血液標(biāo)本，這樣 可以糾正因污染或搞錯(cuò)標(biāo)本造成的不符合。,（2）將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細(xì)胞懸 液，用抗A、抗B、抗A+B做實(shí)驗(yàn)，可以得到其他有用的信息。有條件的可加做抗H試驗(yàn)。,18,2019/6/22,（3）對(duì)受檢者作直接抗人球蛋白試驗(yàn)，看紅細(xì)胞有沒(méi) 有被致敏,（4）如疑為A抗原或B抗原減弱，可將受檢紅細(xì)胞與抗 A或抗B血清作吸收放散試驗(yàn),（5）如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞成緡錢狀排列，加等滲鹽水1 滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。,（6）做反定型試驗(yàn)時(shí)需要加做O細(xì)胞,19,2019/6/22,常用的記錄符號(hào)及所示的凝集強(qiáng)度,4+:一個(gè)大的凝集塊,背景透明,無(wú)游離細(xì)胞 3+:數(shù)個(gè)大凝集塊,背景透明,無(wú)游離細(xì)胞 2+:許多小凝集塊,肉眼可見(jiàn),大小均勻,背景基本透明,有游離細(xì)胞 1+:很小的凝集塊,肉眼可見(jiàn),背景不透明,游離細(xì)胞較多,需要用顯微鏡觀察 W+:微小凝集塊,肉眼很難看清,背景混濁,需要用顯微鏡觀察 O:無(wú)凝集,無(wú)溶血,全部是游離細(xì)胞,要用顯微鏡觀察 PH:部分溶血 H:完全溶血 WF:混合外觀,20,2019/6/22,疑難血型病例 1.白血病血型變異 2.血漿蛋白紊亂 3. 類B 4.多/全凝集 5.冷凝集 6.ABO亞型,21,2019/6/22,三、不規(guī)則抗體的篩選,1.所謂不規(guī)則抗體是指抗A、抗B以外的血型抗體，其多為抗體。主要是經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生。進(jìn)行不規(guī)則抗體的篩選的目的是發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體，以確保安全用血，有效用血，有條件或時(shí)間允許的情況下最好獻(xiàn)血者血清也作不規(guī)則抗體的篩選，如有發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體，鑒定此抗體，找出能與其相配合的血液，不可隨便用于輸血。因?yàn)槎酁榭贵w，在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞,必須通過(guò)特殊介質(zhì)(酶、抗人球蛋白、等)才能使致敏紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集反應(yīng)，這些方法的選擇可按抗體的血清學(xué)行為和試驗(yàn)的具體條件來(lái)確定。臨床上通常所稱的“同型血”實(shí)際上是指血型系統(tǒng)和血型系統(tǒng)相同,其它紅細(xì)胞血型系統(tǒng)未必相同。如果交叉配血不仔細(xì),或者只用鹽水介質(zhì)配血,則有可能檢查不出血型系統(tǒng)之外的不規(guī)則抗體,而此抗體與相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng),可導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。,22,2019/6/22,2.篩選細(xì)胞通常是由2-3個(gè)單人份的O型紅細(xì)胞組成一 套篩選細(xì)胞試劑，包括以下常見(jiàn)的抗原：Rh系統(tǒng) 、 MNSs系統(tǒng)、P系統(tǒng)、Lewis系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)等。,3.抗體篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的不 規(guī)則抗體。一些抗低頻率抗原的抗體則可能漏檢。,23,2019/6/22,不規(guī)則抗體篩選的操作步驟,病人/被檢血清 + 抗體篩選細(xì)胞 鹽水介質(zhì) 非鹽水介質(zhì)（聚凝胺、抗球蛋白、酶） 1、取試管四支，標(biāo)明、和自身對(duì)照并向各管加病人血清（血漿）100ul，加5%篩選細(xì)胞（、）各50ul于、 管中和5%自身細(xì)胞于自身對(duì)照管中。 2、各加LIM0.6ML，混合均勻后，靜置15秒,再各加Polybrene 溶液100ul(約2滴)，并混合均勻。 3 、以1300G離心，離心15秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ML液體。 4、輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)凝集，如無(wú)凝集，則必須重作。 5、最后加入Resuspending 100ul(約2滴) ，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。如果凝集散開(kāi)，表示是由Polybrene引起的非特異性聚集，抗體篩檢結(jié)果為陰性；如凝集不散開(kāi)，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，抗體篩檢結(jié)果為陽(yáng)性，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定。,24,2019/6/22, 抗篩陰性，交叉配血相容, 抗篩陰性，鹽水直接離心交叉配血不相容原因有： 獻(xiàn)血者紅細(xì)胞是ABO血型不相容 存在在室溫反應(yīng)的同種異體抗體 獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞是多凝集紅細(xì)胞,4. 抗體篩選和交叉配血試驗(yàn)結(jié)果分析,25,2019/6/22, 抗篩陰性，酶試驗(yàn)、抗球蛋白交叉配血試驗(yàn)等不相容 獻(xiàn)血者紅細(xì)胞DAT試驗(yàn)為陽(yáng)性 受血者血清抗體活性很弱，則抗篩試驗(yàn)成陰性 抗體與低頻率抗原反應(yīng), 抗篩陽(yáng)性，交叉配血相容 自身抗-H 抗-Lebh 抗篩陽(yáng)性，但獻(xiàn)血者紅細(xì)胞可能正好不含與相應(yīng)的抗原，因此配血可以相合。,26,2019/6/22, 抗篩陽(yáng)性，交叉配血不相容 同種異體抗體存在，自身對(duì)照成陰性 同種異體抗體存在，自身對(duì)照成陽(yáng)性 冷反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽(yáng)性 溫反應(yīng)自身抗體能引起難以確定的陽(yáng)性 “錢串狀”紅細(xì)胞形成引起非真實(shí)的陽(yáng)性結(jié)果,27,2019/6/22,輸血前試驗(yàn)“三保險(xiǎn)”:血型、抗篩、交叉配血 相合% 隨機(jī) 64 ABO 99.4 Rh 99.8 抗篩 99.94 交叉配血 99.95 自身輸血 100,28,2019/6/22,四、交叉配血,交叉配血試驗(yàn)也稱配合性試驗(yàn)，實(shí)際上是檢查不配合 性，使病人，獻(xiàn)血者血液之間沒(méi)有可測(cè)到的不相配合的 抗原，抗體成分，試驗(yàn)應(yīng)在37下進(jìn)行。試驗(yàn)方法除作 鹽水介質(zhì)外，還有抗球蛋白試驗(yàn)法、酶法、聚凝胺法或 其改良法。在配血的任何步驟中均不產(chǎn)生溶血或凝集獻(xiàn) 血者的血液才能給予病人輸注。,29,2019/6/22,30,2019/6/22,3.酶處理細(xì)胞的凝集試驗(yàn),紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電菏，是紅細(xì)胞互相 排斥的原因。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì) 胞表面的負(fù)電菏。Zata電勢(shì)減少，紅細(xì)胞的間距縮短， 抗體分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。酶法能顯著 增強(qiáng)Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)，但蛋白酶能破壞M、N、 S、s、Fya和Fyb抗原，酶法不適應(yīng)這些抗原的檢測(cè)。常用的 酶有菠蘿酶、木瓜酶、無(wú)花果酶等。酶的濃度為0.5%。,31,2019/6/22,32,2019/6/22,4.抗人球蛋白,AGT試驗(yàn)又稱Coombs試驗(yàn),是檢查IgG抗體的最有效的方法.抗球蛋白血清除了可測(cè)定紅細(xì)胞上的IgG抗體外,還可以測(cè)定IgM和IgA,也可以測(cè)補(bǔ)體組分(C3、C4).AGT包括直接抗人球試驗(yàn)和間接抗人球試驗(yàn). 直接抗人球試驗(yàn)試驗(yàn)是檢查體內(nèi)致敏紅細(xì)胞的一種方法,用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏,如新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng) 、自身免疫性溶血性貧血. 間接抗人球蛋白試驗(yàn)是一種檢測(cè)血清中不完全抗體的方法,常用于血型鑒定、抗體的檢出和鑒定、輸血前交叉配血試驗(yàn)等.,33,2019/6/22,5.微柱凝膠法,微柱凝膠法 利用分子篩原理,34,2019/6/22,35,2019/6/22,幾種交叉配血方法的比較,36,2019/6/22,疑難配血病例,1.患冷凝集素綜合征,有自身冷凝集抗體, “O”,病人血清自身抗體4+.采用抗人球蛋白法配血可消除此現(xiàn)象,輸“O”洗滌紅細(xì)胞. 2.輸血前:“A”,輸A型紅細(xì)胞4u,無(wú)明顯反應(yīng),僅見(jiàn)少許Hb尿,很快消失,但Hb從入院時(shí)12g降至4g,該院誤定血型而輸血前沒(méi)做交叉配血而造成本次事故. -A -B