DB33T555-2005植物源食品中甲醛殘留量的測(cè)定高效液相色譜法.doc

DB33/T 2005浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布2005-05-27實(shí)施2005-04-27發(fā)布植物源食品中甲醛殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法Determination of formaldehyde in vegetable Food-High-performance liquid chromatographyDB33/T 5552005DB33浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS67.040C53備案號(hào)：1DB33/T 5552005前 言本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：農(nóng)業(yè)部稻米及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心、寧波市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢中心，杭州市標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)、浙江大地農(nóng)作物產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳銘學(xué)、金連登、牟仁祥、周華英、楊挺、施勇烽、章林平。I植物源食品中甲醛殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜法測(cè)定植物源性食品中甲醛殘留量的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物源性食品中甲醛殘留量的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)檢出限和定量測(cè)定范圍：本方法最小檢出量為510-11g，若稱取5g試樣，萃取后定容至5mL，進(jìn)樣量為10L，本標(biāo)準(zhǔn)的最低檢出質(zhì)量濃度為0.05mgkg。衍生物經(jīng)石油醚提取凈化后，可以消除干擾而直接測(cè)定試液中的甲醛殘留量。警告使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有的安全問題使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 5009.1 食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 理化部分 總則GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理試樣經(jīng)60水浴萃取，從食品中萃取的甲醛被水吸收，萃取液在酸性條件下，與2，4二硝基苯肼于室溫避光下過夜進(jìn)行衍生化。衍生物經(jīng)提取凈化后，進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離后，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積進(jìn)行定性和定量。4 試劑4.1 除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑，水為GB/T 6682二級(jí)。4.2 甲醇:色譜純。4.3 石油醚：沸程6090，重蒸餾。4.4 鹽酸（HCl）, 1.19g/mL。4.5 冰乙酸（CH3COOH），1.05g/mL。4.6 鹽酸溶液（2mol/L）：量取84mL鹽酸（4.4），加水稀釋至500mL。4.7 乙酸溶液（11）：量取250mL冰乙酸（4.5），加水稀釋至500mL。4.8 乙酸鋅溶液Zn（CH3COO）22H2O（219.0g/L）：稱取21.90g乙酸鋅，加3mL冰乙酸（4.5），加水溶解并稀釋至100mL。4.9 2，4二硝基苯肼溶液（C6H6N4O4）（2.5g/L）：稱取0.25g 2，4二硝基苯肼于100mL容量瓶中，加少量甲醇和少量鹽酸（4.4）溶解，加鹽酸溶液（4.6）定容至刻度。將配好的2，4二硝基苯肼溶液置于250mL分液漏斗中，加石油醚100mL劇烈振搖，靜置，棄去石油醚層，重復(fù)操作一次。4.10 乙酸銨溶液（CH3COONH4）（0.01mol/L）：稱取0.77g乙酸銨，加水950mL水使溶解，用乙酸溶液（4.7）調(diào)節(jié)pH 為4.0后，加水至1000mL，過0.45m濾膜。4.11 甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg/L），國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。4.12 甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液（2.5 mg/L）：臨用前將甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.11）用水經(jīng)逐級(jí)稀釋配制。4.13 無水硫酸鈉（Na2SO4）：650灼燒4h，在干燥器內(nèi)冷卻至室溫，貯于密封瓶中備用。5 儀器5.1 高效液相色譜儀（附紫外檢測(cè)器）5.2 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀5.3 離心機(jī)5.4 無水硫酸鈉柱：60mm20mm短標(biāo)漏斗，底部墊5mm高脫脂棉，再裝50mm高無水硫酸鈉。6 取樣6.1 采樣步驟為制備實(shí)驗(yàn)室樣品的采樣過程應(yīng)按GB/T 5009.1的規(guī)定的方法進(jìn)行。6.2 試樣的制備 將采集的樣品去除其中雜物，取可食部分?；靹蚝笥盟姆址s分至約50g，經(jīng)粉碎混勻后貯于玻璃瓶中備用。 7 分析步驟7.1 樣品處理7.1.1 提取7.1.1.1 對(duì)一般植物源性食品樣品：稱取5g粉碎的均勻試樣（精確到0.01g）于100mL具塞刻度試管中，加水30mL，混勻并定容至50mL。塞緊塞子，于60水浴中加熱40min，取出后于冰水浴中快速冷卻。然后于3 000r/min離心5min，取上清液。7.1.1.2 對(duì)食用菌類樣品：稱取5g粉碎的均勻試樣（精確到0.01g）于100mL具塞刻度試管中，加入約25mL水，慢慢加入10mL乙酸鋅（4.8）溶液，混勻并定容至50mL，靜置30min。塞緊塞子，于60水浴中加熱40min，取出后于冰水浴中快速冷卻。然后于3 000r/min離心5min，取上清液。7.1.2 衍生化 7.1.2.1 樣品衍生移取25.0mL上清液于50mL試管中，加入2.5mL2，4二硝基苯肼，于暗處室溫下靜置過夜。移衍生液于分液漏斗中，加50mL石油醚劇烈振搖，靜置，將石油醚層過無水硫酸鈉柱至平底燒瓶，水層中再加入50mL石油醚，重復(fù)上述操作一次，合并石油醚層，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上55以下減壓蒸干，用甲醇溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?mL，經(jīng)濾膜（0.45m）過濾后待測(cè)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。7.1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的衍生準(zhǔn)確移取甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液（4.12）5.00mL于50mL試管中，加水20.0mL，按7.1.2規(guī)定的步驟進(jìn)行衍生。該溶液相當(dāng)于甲醛濃度為2.5mg/L。7.2 測(cè)定7.2.1 測(cè)定色譜條件7.2.1.1 色譜柱：反相C18不銹鋼柱，125 mm4.0mm, 5m。7.2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)：365nm。7.2.1.3 流動(dòng)相：甲醇0.01mol/L乙酸銨溶液（7030）。7.2.1.4 柱溫：室溫。7.2.1.5 流速：0.5mL/min。7.2.1.6 進(jìn)樣量：10L。7.2.2 樣品測(cè)定按儀器條件，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液等體積交替進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。8 結(jié)果計(jì)算樣品中甲醛含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)W計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式計(jì)算：W式中：C試樣衍生液中甲醛質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；C0空白試驗(yàn)溶液中甲醛質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V試樣衍生液的定容體積，單位為毫升（mL）；V1衍生用提取液的體積，單位為毫升（mL）；V2樣品提取液的體積，單位為毫升（mL）；m試樣的質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果表示到二位有效