DB51T 1369-2011 姬菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程.docVIP

ICS65.020.20B39備案號：32713-2012DB51四川省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 51/ T13692011姬菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程2011 - 12 - 28發(fā)布2012 - 03 - 01實施四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB51/ T13692011目次前言II1范圍12規(guī)范性引用文件13術(shù)語和定義14生產(chǎn)條件15生產(chǎn)工藝3附錄A（資料性附錄）母種常用培養(yǎng)基及其配方6前言本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌開發(fā)研究中心負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：姜鄰、唐利民、倪建英、陳曉娟、郭勇、周潔、辜際忠。6姬菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了姬菇各級菌種生產(chǎn)的生產(chǎn)條件和生產(chǎn)工藝。本標(biāo)準(zhǔn)適用于姬菇各級菌種生產(chǎn)。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 12728 食用菌術(shù)語NY 5099 無公害食品 食用菌栽培基質(zhì)安全技術(shù)要求NY/T 528 食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程DB51/T 1027 出口姬菇菌種中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第62號令（2006） 食用菌菌種管理辦法3 術(shù)語和定義 下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1 母種stock culture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，也稱一級種。GB/T 12728食用菌術(shù)語2.5.73.2 原種 pre-culture spawn由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物，也稱二級種。GB/T 12728術(shù)語和定義2.5.83.3 栽培種 spawn由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物，也稱三級種。栽培種只能用于栽培，不可再次擴(kuò)大繁殖菌種。GB/T 12728術(shù)語和定義2.5.94 生產(chǎn)條件4.1 技術(shù)人員按照食用菌菌種管理辦法的規(guī)定配備生產(chǎn)技術(shù)人員和檢驗人員。4.2 場地環(huán)境要求應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。4.3 廠房設(shè)置與布局4.3.1設(shè)置應(yīng)設(shè)有各自隔離的原材料庫、曬料場、配料分裝場、滅菌間、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、菌種檢驗室、菌種貯存室和出菇試驗場等。廠房建造從結(jié)構(gòu)和功能上滿足食用菌菌種生產(chǎn)的基本需要。4.3.2 布局按照菌種制種工藝流程布局，各操作環(huán)節(jié)順序形成一條流水線，滅菌前的操作區(qū)域與滅菌后的操作區(qū)域相隔離，出菇場與菌種生產(chǎn)、培養(yǎng)車間隔離。儲料室（庫）、曬料場、廢物堆集場等帶有雜菌的區(qū)域應(yīng)處于場地的下風(fēng)口。4.4 設(shè)施設(shè)備4.4.1 基本設(shè)施4.4.1.1 原材料庫防潮防雨、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源。4.4.1.2 配料分裝場水電齊備，空間充裕，通風(fēng)良好，地面便于沖洗。4.4.1.3 滅菌間水電齊備，空間充裕，通風(fēng)散熱。4.4.1.4 冷卻室配備散熱設(shè)備，墻壁和地面便于沖洗消毒。4.4.1.5 接種室配備降溫、除塵設(shè)備，四周墻面及屋頂、地面光潔，可清洗消毒。4.4.1.6 培養(yǎng)室具有與生產(chǎn)量相適應(yīng)的培養(yǎng)室面積。具備防蚊蟲、鼠害設(shè)施，通風(fēng)良好，無直射陽光，能密閉熏蒸消毒殺蟲。部分培養(yǎng)室應(yīng)具備控溫設(shè)備和通風(fēng)換氣設(shè)備。4.4.1.7 貯存室具備低溫貯存條件。4.4.1.8 檢驗室水電齊備，利于安裝相應(yīng)的檢驗設(shè)備和儀器。4.4.2 基本設(shè)備各類必須的稱量用具、蒸煮設(shè)備、母種培養(yǎng)基分裝設(shè)備、拌料機(jī)、裝袋機(jī)、高壓滅菌和常壓滅菌設(shè)備、接種工具、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、烘箱、除濕機(jī)、電冰箱、質(zhì)量檢測儀器設(shè)備及其它工器具。5 生產(chǎn)工藝5.1 菌種分級菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）、栽培種（三級種）。5.2 母種5.2.1 容器及試管塞18mm180mm 或20mm200mm標(biāo)準(zhǔn)玻璃試管。試管塞為棉塞（梳棉制作）或硅膠塞。5.2.2 工藝流程原材料稱量、處理配制分裝滅菌冷卻擺斜面無菌檢驗接種培養(yǎng)檢驗成品。5.2.3 培養(yǎng)基5.2.3.1 培養(yǎng)基配方見附錄A。5.2.3.2 培養(yǎng)基配制以配制1000ml PDA培養(yǎng)基為例，選無青皮、未發(fā)芽的新鮮馬鈴薯洗凈、去皮、去芽眼，稱取200g切成5厚的薄片。 加水1200ml左右煮2030分鐘，煮至熟而不爛，用先預(yù)濕的4層紗布過濾。取濾液加入事先用熱水軟化的20g瓊脂，邊煮邊攪拌至瓊脂全部溶化。加入20g葡萄糖攪拌溶化，加水定容至1000ml。趁熱分裝，裝量為試管長度的1/51/4，管口不能粘上培養(yǎng)基。5.2.3.3 滅菌將分裝好的試管直立放入內(nèi)鍋，用牛皮紙包住棉塞，鍋內(nèi)要留有一定的空隙。檢查鍋內(nèi)水位，及時滅菌。壓力升到0.05Mpa時，打開放汽閥排除冷空氣，如此重復(fù)一次。壓力升至0.14MPa，安全閥自動放氣后，恒壓35min40min。5.2.3.4 擺斜面滅菌結(jié)束，自然降壓至零。打開鍋蓋，自然降溫20 min30 min，并利用余熱烘干棉塞。將試管的一端斜放在1厚的木條上擺出斜面，斜面頂端距試管口不少于50mm。5.2.4 滅菌效果檢查隨機(jī)抽取數(shù)支母種培養(yǎng)基置于28恒溫培養(yǎng)48h，無微生物長出，即為滅菌合格。5.2.5 接種5.2.5.1 接種室（箱）或凈化工作臺的消毒方法清潔接種室（箱）后，用氣霧消毒劑熏蒸，接種室熏蒸2h3h，接種箱熏蒸30min。并用紫外燈照射。凈化工作臺臺面先用75%酒精或其它消毒劑擦拭消毒，開機(jī)30min后接種。5.2.5.2 接種操作檢查、核對菌種。接種人員的手用75%酒精棉球擦拭消毒，接種針和母種試管口用酒精燈火焰消毒。左手平托母種試管和待接種試管，并使管口位于火焰上方無菌區(qū)域，但不直接灼燒管口，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種針切取3535的一塊母種迅速轉(zhuǎn)接于待接試管斜面中央，塞好試管塞。接完種及時貼好標(biāo)簽。5.2.6 培養(yǎng)接種后置于2425的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。定期檢查，及時揀出污染和不合格菌種。5.2.7 菌種質(zhì)量參照DB51/T 1027出口姬菇菌種的規(guī)定。5.3 原種5.3.1 容器及封口材料使用750ml無色或近無色專用玻璃菌種瓶，或850ml1000ml耐126高溫白色半透明塑料菌種瓶。所有容器均應(yīng)用棉塞或可滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋封口。5.3.2 工藝流程按培養(yǎng)基配方備料預(yù)濕和拌料配制培養(yǎng)基裝瓶高壓滅菌冷卻（至30左右）接種培養(yǎng)、檢查成品。5.3.3 培養(yǎng)基5.3.3.1 培養(yǎng)基配方見附錄B。所用原材料應(yīng)符合NY5099的規(guī)定。5.3.3.2 原材料處理玉米芯、粉碎木屑等顆粒較大，吸水較慢的原材料要進(jìn)行預(yù)濕處理。5.3.3.3 培養(yǎng)料配制按照配方量取各種原材料放入攪拌機(jī)內(nèi)混合，糖和石灰等溶入水中加入，充分?jǐn)嚢?，混合均勻，?yán)格掌控含水量60%65%，調(diào)節(jié)pH值89。5.3.3.4 裝瓶培養(yǎng)料裝至瓶肩處，稍作壓實，上緊下松，松緊適度。將瓶口和外瓶壁洗擦干凈，封瓶口。5.3.3.5 滅菌裝瓶完成后及時滅菌，壓力升到0.05Mpa時，打開放汽閥排放冷氣，直至鍋內(nèi)冷空氣排凈。壓力升至0.14MPa開始計時，滅菌2.5h3h。滅菌完畢后，應(yīng)自然降壓。5.3.3.6 冷卻滅菌鍋壓力歸零后，開鍋取出菌種瓶，移入預(yù)先清潔和消毒的冷卻室或接種室內(nèi)冷卻。待冷卻至30左右準(zhǔn)備接種。5.3.4 接種室（箱）消毒接種室（箱）用氣霧消毒劑熏蒸，接種室熏蒸2h3h，接種箱熏蒸40min，并用紫外線燈照射。接種前30min，用衛(wèi)生消毒劑噴霧降塵消毒。5.3.5 接種接種的前一天應(yīng)將需要接的菌種檢查準(zhǔn)備好。接種時再對菌種進(jìn)行檢查、核對，確保所接菌種無誤。接種人員換上接種專用工作服。接種人員的手用75%酒精棉球擦拭消毒，接種鉤和母種試管口用酒精燈火焰消毒。一人或兩人操作，取下封口材料，將菌種瓶斜靠接種架上，瓶口位于火焰上方無菌區(qū)域，但不直接灼燒瓶口，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種鉤切取1212的一塊母種迅速接入瓶內(nèi)，封好瓶口，每支母種接原種35瓶。及時貼好標(biāo)簽標(biāo)識。接種完畢，做好接種場所的清潔衛(wèi)生并消毒。5.3.6 培養(yǎng)培養(yǎng)室內(nèi)控制室溫2225，空氣相對濕度60 %70%，保持空氣清新，避光培養(yǎng)。定期檢查菌種萌發(fā)情況，及時揀出污染和不合格菌種。5.3.7 菌種質(zhì)量參照DB51/T 1027出口姬菇菌種的規(guī)定。5.4 栽培種栽培種與原種生產(chǎn)工藝基本相同，現(xiàn)將不同點表述如下：栽培種的容器還可選用規(guī)格為12cm15cm28 cm的折角聚丙烯菌種袋，或其它規(guī)格的菌種袋；菌種袋裝料時要求袋面平整無皺褶，袋內(nèi)料面無空隙，松緊適度，用手輕壓袋面有彈性為宜；栽培種也可以采用常壓滅菌。常壓滅菌時，宜在4h內(nèi)使滅菌鍋內(nèi)溫度達(dá)100，保持恒溫12h16h；接種時，原種瓶的瓶口內(nèi)外和外瓶壁用消毒液清洗消毒。瓶口表層菌種和已形成原基的部份要去掉不用，每瓶原種可接栽培種30瓶50瓶。5.5 入庫完成培養(yǎng)的菌種要及時登記入庫并在適齡期使用。5.6 記錄生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)詳細(xì)記錄。5.7 留樣各級菌種都應(yīng)留樣備查。各級菌種各個批次留樣數(shù)量不得少于5支（瓶、袋），至該批菌種正常生產(chǎn)條件下出菇后方可處置。AA附錄A （資料性附錄）母種常用培養(yǎng)基及其配方PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）馬鈴薯200g（用浸出汁），葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，pH值自然。A.2 馬鈴薯麥麩葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯200g（用浸出汁），麥麩50 g（用浸出汁），葡萄糖20g，瓊脂20g，水10