GB5009.149-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中梔子黃的測(cè)定.pdf

中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 6食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中梔子黃的測(cè)定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3發(fā)布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)國(guó) 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 總 局發(fā) 布G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 6 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替G B5 0 0 9.1 4 92 0 0 3 食品中梔子黃的測(cè)定 。本標(biāo)準(zhǔn)與G B5 0 0 9.1 4 92 0 0 3相比, 主要變化如下: 標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)修改為“ 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中梔子黃的測(cè)定” ; 原標(biāo)準(zhǔn)第一法高效液相色譜法測(cè)定梔子苷修改為高效液相色譜法測(cè)定藏花素和藏花酸; 改進(jìn)了樣品前處理分析方法; 擴(kuò)大了方法適用范圍; 刪除了第二法 薄層色譜法。G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 61 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中梔子黃的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中梔子黃的代表性成分: 藏花素、 藏花酸的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于冰淇淋、 蜜餞、 腌菜、 干杏仁、 巧克力、 糕點(diǎn)、 熟肉、 醬油、 果汁、 配制酒、 果凍、 薯片中藏花素和藏花酸的測(cè)定。2 原理試樣用甲醇超聲提取后, 通過(guò)C1 8反相色譜柱分離, 用高效液相色譜/可見(jiàn)光檢測(cè)器于4 4 0n m下檢測(cè)梔子黃的主要顯色成分藏花素和藏花酸, 以保留時(shí)間定性, 外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 甲醇(CH3OH) : 色譜純。3.1.2 乙腈(CH3C N) : 色譜純。3.1.3 冰乙酸(CH3C OOH) 。3.1.4 乙酸銨(CH3C OONH4) 。3.2 試劑配制3.2.1 乙酸-乙酸銨溶液(p H=4) : 準(zhǔn)確稱(chēng)取0.7 7g乙酸銨置于1L容量瓶?jī)?nèi), 加9 0 0m L水溶解, 用冰乙酸調(diào)節(jié)p H=4.0, 加水定容至1L, 混勻, 經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過(guò)濾后使用。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 藏花素標(biāo)準(zhǔn)品(C4 4H6 4O2 4,C A S號(hào):4 2 5 5 3 - 6 5 - 1) , 純度9 0.0%。3.3.2 藏花酸標(biāo)準(zhǔn)品(C2 0H2 4O4,C A S號(hào):2 7 8 7 6 - 9 4 - 4) , 純度9 0.0%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 藏花素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液: 準(zhǔn)確稱(chēng)取5 .0 0m g( 精確至0 .0 1m g) 藏花素標(biāo)準(zhǔn)品, 用甲醇溶解, 轉(zhuǎn)移到1 0m L容量瓶中, 用甲醇定容, 混勻, 藏花素濃度為0 .5m g/m L, 于4保存。3.4.2 藏花酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液: 準(zhǔn)確稱(chēng)取1 .0 0m g( 精確至0 .0 1m g) 藏花酸標(biāo)準(zhǔn)品, 用甲醇溶解, 轉(zhuǎn)移到1 0m L容量瓶中, 用甲醇定容, 混勻, 藏花酸濃度為0 .1m g/m L, 于4保存。3.4.3 藏花素、 藏花酸混合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)工作液: 分別均吸取藏花素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、 藏花酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0 .0 5m L、0.1m L、0.2m L、0.5m L、1.0m L于1 0m L容量瓶中, 用甲醇定容, 混勻, 藏花素系列標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度分G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 62 別均為2.5g/m L、5g/m L、1 0g/m L、2 5g/m L、5 0g/m L, 藏花酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度分別均為0.5g/m L、1g/m L、2g/m L、5g/m L、1 0g/m L, 于4保存。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀, 配置可見(jiàn)檢測(cè)器。4.2 分析天平: 感量為0.0 1m g和0.0 1g。4.3 離心機(jī): 轉(zhuǎn)速50 0 0r/m i n。4.4 酸度計(jì)。4.5 超聲波清洗儀。4.6 食品粉碎機(jī)。4.7 有機(jī)相型微孔濾膜: 孔徑0.4 5m。5 分析步驟5.1 試樣制備及保存5.1.1 液體樣品將飲料、 酒類(lèi)、 醬油等樣品搖勻分裝, 密閉常溫或冷藏保存。5.1.2 半固態(tài)樣品對(duì)果凍等樣品取可食部分勻漿后, 攪拌均勻, 分裝, 密閉冷藏或冷凍保存。5.1.3 固體樣品餅干、 糕點(diǎn)、 熟肉制品、 可可制品等低含水量樣品, 經(jīng)高速粉碎機(jī)粉碎、 分裝, 于室溫下避光密閉保存。5.2 試樣處理5.2.1 液體樣品稱(chēng)取2g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣( 若試樣中含二氧化碳應(yīng)先超聲除去) 置于燒杯中, 用適量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2 5m L容量瓶中, 加甲醇定容, 搖勻。吸取1m L溶液過(guò)0.4 5m有機(jī)濾膜, 待測(cè)。5.2.2 半固體試樣及固體試樣稱(chēng)取2g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣于5 0m L離心管中, 準(zhǔn)確量取2 5m L甲醇溶液加入其中, 超聲2 0m i n后渦旋2m i n,40 0 0r/m i n離心1 0m i n, 吸取1m L上清液過(guò)0.4 5m有機(jī)濾膜, 待測(cè)。5.2.3 醬油稱(chēng)取1g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣置于燒杯中, 用適量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 0m L容量瓶中, 加甲醇定容, 搖勻。吸取1m L溶液過(guò)0.4 5m有機(jī)濾膜, 待測(cè)。注:5.2過(guò)程應(yīng)在避免強(qiáng)光照射的環(huán)境下進(jìn)行。5.3 儀器參考條件儀器參考條件列出如下:G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 63 a) 色譜柱:C1 8色譜柱, 柱長(zhǎng)2 5 0mm, 內(nèi)徑4.6mm, 粒徑5m, 或同等性能的色譜柱;b) 流動(dòng)相:A: 乙酸-乙酸銨緩沖溶液,B: 乙腈, 梯度洗脫見(jiàn)表1;c) 進(jìn)樣量:1 0L;d) 流速:1.0m L/m i n;e) 檢測(cè)波長(zhǎng):4 4 0n m。表1 流動(dòng)相及梯度洗脫條件時(shí)間m i n流速m L/m i n流動(dòng)相A%流動(dòng)相B%01.08 02 011.08 02 081.04 06 08.11.03 07 01 31.029 81 51.08 02 02 01.08 02 05.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作液分別注入高效液相色譜儀中, 測(cè)定藏花素和藏花酸相應(yīng)的峰面積, 以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo), 以色譜峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)( 標(biāo)準(zhǔn)圖譜見(jiàn)圖A.1) 。5.5 試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中, 得到藏花素和藏花酸的峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到待測(cè)液中藏花素和藏花酸的濃度。6 分析結(jié)果的表述試樣中藏花素和藏花酸的含量按式(1) 計(jì)算:X=V10 0 0m10 0 010 0 0F(1) 式中:X 試樣中藏花素或藏花酸的含量, 單位為克每千克(g/k g) ; 由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求得試樣溶液中藏花素或藏花酸的濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 樣品溶液定容體積, 單位為(m L) ;10 0 0 換算系數(shù);m 最終樣液代表的試樣質(zhì)量, 單位為克(g) ;F 標(biāo)準(zhǔn)品的純度折算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的1 5%。G B5 0 0 9.1 4 92 0 1 64 8 其他方法檢出限(L O D) : 醬油樣品當(dāng)稱(chēng)樣量為1.0g時(shí), 藏花素為5 0m g/k g, 藏花酸為1 0.0m g/k g, 其他樣品取樣量為2.0g時(shí), 藏花素為1 2.5m g/k g, 藏花酸為2.5m g/k g。方法定量限(L OQ) : 醬油樣品當(dāng)稱(chēng)樣量為1.0g時(shí), 藏花素為2 5 0m g/k g, 藏花酸為5 0.0m g/k g, 其