GB5009.255-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中果聚糖的測(cè)定.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 6食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中果聚糖的測(cè)定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 7 - 0 3 - 0 1實(shí)施中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā) 布G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 61 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中果聚糖的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中果聚糖含量的離子色譜法測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于乳及乳制品、 嬰幼兒配方食品、 嬰幼兒谷類輔助食品、 固體飲料、 配制酒中單獨(dú)添加的低聚果糖、 多聚果糖或菊粉含量的測(cè)定。2 原理試樣經(jīng)熱水浸提, 樣液中的蔗糖經(jīng)蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖, 葡萄糖和果糖經(jīng)硼氫化鈉還原成相應(yīng)的糖醇, 多余的硼氫化鈉用乙酸中和。樣液中的果聚糖經(jīng)過果聚糖酶水解成果糖和葡萄糖, 經(jīng)離子色譜-脈沖安培檢測(cè)器測(cè)定果糖含量, 通過換算系數(shù), 折算得到果聚糖的含量。3 試劑和材料3.1 試劑除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。3.1.1 氫氧化鈉(N a OH) 。3.1.2 馬來酸(C4H4O4) 。3.1.3 蔗糖酶: 來源于酵母, 酶活力3 0 0U。3.1.4 硼氫化鈉(N a B H4) 。3.1.5 冰乙酸(CH3C OOH) 。3.1.6 三水乙酸鈉(CH3C OON a3 H2O) 。3.1.7 果聚糖酶: 來源于黑曲霉, 酶活力1 00 0 0U。3.1.8 5 0%氫氧化鈉溶液(N a OH) : 色譜純。3.1.9 無水乙酸鈉(CH3C OON a) : 純度9 9.0%。3.1.1 0 氮?dú)?N2) : 純度9 9.9%。3.2 試劑配制3.2.1 氫氧化鈉溶液(1m o l/L) : 稱取4 0g氫氧化鈉( 精確至0.0 1g) , 溶于水并稀釋至10 0 0m L, 室溫下可放置2個(gè)月。3.2.2 馬來酸鈉緩沖溶液(1 0 0mm o l/L,p H6.5) : 稱取1.1 6g馬來酸( 精確至0.0 1g) 于1 5 0m L燒杯中, 加入約7 0m L水溶解, 用1m o l/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)p H6.5, 用水稀釋至1 0 0m L。4保存, 可放置3個(gè)月。3.2.3 蔗糖酶溶液(4.5U/m L) : 將蔗糖酶( 活力為3 0 0U) 溶解于6 6m L馬來酸鈉緩沖溶液, 分裝到2m L的離心管中,-2 0保存, 可放置6個(gè)月。使用前需測(cè)定酶活力。3.2.4 氫氧化鈉溶液(5 0mm o l/L) : 稱取2g氫氧化鈉( 精確至0.0 1g) , 溶于水并稀釋至10 0 0m L, 室G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 62 溫下可放置2個(gè)月。3.2.5 硼氫化鈉溶液(1 0m g/m L) : 準(zhǔn)確稱取適量硼氫化鈉( 精確至0.0 0 1g) 于聚丙烯離心管中, 用5 0mm o l/L氫氧化鈉溶液溶解, 最終質(zhì)量濃度為1 0m g/m L, 用時(shí)現(xiàn)配。3.2.6 乙酸溶液(2 0 0mm o l/L) : 吸取0.6m L冰乙酸, 用水稀釋至5 0m L,4保存, 可放置2個(gè)月。3.2.7 乙酸鈉溶液(2 0 0mm o l/L) : 稱取1.3 6g三水乙酸鈉( 精確至0.0 1g) , 溶于水并稀釋至5 0m L,4保存, 可放置2個(gè)月。3.2.8 乙酸鈉緩沖溶液(p H4.5) : 吸取1 4m L乙酸溶液和1 1m L乙酸鈉溶液混合, 并用水稀釋至5 0m L, 用時(shí)現(xiàn)配。3.2.9 果聚糖酶溶液(4 5 5U/m L) : 將果聚糖酶( 活力為1 00 0 0U) 溶解于2 2m L乙酸鈉緩沖溶液, 分裝到2m L的離心管中,-2 0保存, 可放置6個(gè)月。使用前需測(cè)定酶活力。3.2.1 0 氫氧化鈉溶液(2 0 0mm o l/L) : 取1 0.4m L5 0%氫氧化鈉溶液, 用水稀釋至10 0 0m L, 通入氮?dú)獗Ｗo(hù), 緩慢搖勻, 室溫下可放置7d。3.2.1 1 氫氧化鈉(1 5 0 mm o l/L) 乙酸鈉(5 0 0 mm o l/L) 混合溶液: 稱取4 1g無水乙酸鈉( 精確至0.0 1g) , 用約5 0 0m L水溶解,0.2 2m濾膜過濾, 脫氣1 0m i n, 加入7.8m L5 0%氫氧化鈉溶液, 并用水稀釋至10 0 0m L, 通入氮?dú)獗Ｗo(hù), 緩慢搖勻, 室溫下可放置7d。3.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)果糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(C6H1 2O6) : 純度9 9.0%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制3.4.1 果糖貯備溶液(20 0 0m g/L) : 準(zhǔn)確稱取0.0 5g( 精確至0.1m g)8 0烘干至恒重的果糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于5 0m L燒杯中, 加入約1 0m L熱水, 待果糖溶解后, 冷卻至室溫, 用水稀釋至2 5m L容量瓶中, 搖勻,4保存, 可放置1個(gè)月。3.4.2 果糖中間溶液(8 0.0m g/L) : 吸取果糖貯備溶液1m L, 用水稀釋至2 5m L容量瓶中, 用時(shí)現(xiàn)配。3.4.3 果糖標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液: 取適量果糖中間溶液, 用水配制成質(zhì)量濃度為0.8 0 0m g/L、1.6 0m g/L、4.0 0m g/L、8.0 0m g/L、1 6.0m g/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液。3.5 材料3.5.1 凈化柱: 反相固相萃取柱, 填料為苯乙烯二乙烯基苯,2.5m L。3.5.2 微孔濾膜: 水相,0.2 2m。4 儀器和設(shè)備4.1 離子色譜儀: 配有三元及以上梯度泵, 脈沖安培檢測(cè)器,A u工作電極。4.2 天平: 感量為0.1m g、0.0 0 1g和0.0 1g。4.3 p H計(jì): 精度為0.0 1p H。4.4 旋渦振蕩器。4.5 恒溫水浴搖床: 控溫精度1。4.6 離心機(jī): 轉(zhuǎn)速30 0 0r/m i n。G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 63 5 分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 試樣預(yù)處理5.1.1.1 固體樣品: 用“ 四分法” 縮分至約2 0 0g樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎, 混勻, 備用。5.1.1.2 液體樣品: 將試樣裝入能夠容納2倍試樣體積的帶蓋容器中, 搖勻, 備用。5.1.2 提取準(zhǔn)確稱取1g 5g( 精確至0.0 0 1g, 至少含有果聚糖5m g) 試樣于1 5 0m L錐形瓶中, 加入8 01熱水約5 0m L, 置于8 01恒溫水浴搖床中,1 5 0r/m i n振搖1 5m i n后, 取出, 冷卻至室溫, 轉(zhuǎn)移至1 0 0m L容量瓶中, 用水分三次沖洗錐形瓶, 定容, 搖勻, 溶液經(jīng)濾紙過濾或者離心, 濾液或上清液依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍確定稀釋倍數(shù), 備用。取上述備用樣液2 0 0L于1 0m L具塞玻璃試管中, 估算樣液中可能的蔗糖含量, 按照每毫克蔗糖加入3 0 0L蔗糖酶溶液, 旋渦振蕩混勻, 置于4 01恒溫水浴搖床中,1 5 0r/m i n振搖6 0m i n后,加入3 0 0L硼氫化鈉溶液, 旋渦振蕩混勻, 置于4 01恒溫水浴搖床中,1 5 0r/m i n振搖3 0m i n后, 取出, 冷卻至室溫。加入7 5 0L乙酸溶液, 靜置1 0m i n。估算樣液中可能的果聚糖含量, 按照每毫克果聚糖加入1.2m L果聚糖酶溶液, 旋渦振蕩混勻, 置于4 01恒溫水浴搖床中,1 5 0r/m i n振搖3 0m i n后, 取出, 冷卻至室溫。轉(zhuǎn)移至1 0m L容量瓶中, 用水分三次沖洗玻璃試管, 定容, 搖勻。活化凈化柱, 試樣溶液依次通過0.2 2m水相濾膜和凈化柱, 棄去前面3倍柱體積洗脫液, 收集后面洗脫液待測(cè)。同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。5.2 儀器參考條件5.2.1 儀器參考條件15.2.1.1 色譜柱: 可兼容梯度洗脫的高容量陰離子交換色譜柱。5.2.1.2 淋洗液:A: 水;B: 氫氧化鈉溶液(2 0 0mm o l/L) ;C: 氫氧化鈉(1 5 0mm o l/L) 乙酸鈉(5 0 0mm o l/L)混合溶液。梯度洗脫條件見表1。表1 梯度洗脫條件時(shí)間m i n流速m L/m i n淋洗液%ABC曲線02 01.08 02 00線性2 0.13 01.0001 0 0線性3 0.14 01.001 0 00線性4 0.15 01.08 02 00線性5.2.1.3 檢測(cè)器: 脈沖安培檢測(cè)器,A u工作電極,A g/A g C l參比電極, 檢測(cè)池溫度3 0, 果糖檢測(cè)波形參見表2。G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 64 表2 果糖檢測(cè)波形時(shí)間s電位V積分時(shí)間s電位V積分0.0 0+0.1 00.4 2-2.0 00.2 0+0.1 0開始0.4 3+0.6 00.4 0+0.1 0結(jié)束0.4 4-0.1 00.4 1-2.0 00.5 0-0.1 05.2.1.4 柱溫:3 0。5.2.1.5 進(jìn)樣體積:1 0L。5.2.2 儀器參考條件25.2.2.1 色譜柱: 可兼容梯度洗脫的高容量陰離子交換色譜柱。5.2.2.2 淋洗液:A: 氫氧化鈉溶液(9 0mm o l/L) ;B: 氫氧化鈉(1 5 0mm o l/L) 乙酸鈉(5 0 0mm o l/L) 混合溶液。梯度洗脫條件見表3:表3 梯度洗脫條件時(shí)間m i n流速m L/m i n淋洗液%AB曲線02 21.01 0 00線性2 2.13 51.001 0 0線性3 5.16 01.01 0 00線性5.2.2.3 脈沖安培檢測(cè)器,A u工作電極,P d參比電極, 檢測(cè)池溫度3 5, 果糖檢測(cè)波形參見表4:表4 果糖檢測(cè)波形時(shí)間s電位V積分0.0 0+0.0 50.2 0+0.0 5開始0.3 0+0.0 5結(jié)束0.3 5+0.5 50.5 5-0.1 05.2.2.4 柱溫:3 2。5.2.2.5 進(jìn)樣體積:2 0L。5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液從低到高依次注入離子色譜儀中, 測(cè)定相應(yīng)的響應(yīng)值( 峰面積) , 以標(biāo)準(zhǔn)工作液G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 65 中果糖的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo), 以響應(yīng)值( 峰面積) 為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖參見附錄A。5.4 試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入離子色譜儀中, 記錄色譜圖。根據(jù)保留時(shí)間定性, 記錄峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中果糖的質(zhì)量濃度。同時(shí)測(cè)定試劑空白。6 分析結(jié)果的表述試樣中果聚糖含量按式(1) 、 式(2) 、 式(3) 計(jì)算:X=k1k2(c-c0)V1 0m0.210 0 0(1)k1=1 8 0+1 6 2(n-1)1 8 0n(2)k2=nn-1(3) 式中:X 試樣中果聚糖的含量, 單位為克每千克(g/k g) ;k1 對(duì)果聚糖水解過程中增加的水分子進(jìn)行校正;k2 對(duì)于Fn型果聚糖末端果糖基被還原和G Fn型果聚糖末端葡萄糖不被檢測(cè)進(jìn)行校正;c 試樣測(cè)定液中果糖的質(zhì)量濃度, 單位為毫克每升(m g/L) ;c0 試劑空白測(cè)定液中果糖的質(zhì)量濃度, 單位為毫克每升(m g/L) ;V 試樣定容體積, 單位為毫升(m L) ;1 0 試樣酶解液定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) ;0.2 用于酶解的樣品溶液體積, 單位為毫升(m L) ;10 0 0 單位轉(zhuǎn)換系數(shù);n 平均聚合度, 對(duì)于低聚果糖, 按照n=4計(jì)算; 對(duì)于多聚果糖, 按照n=2 3計(jì)算; 對(duì)于菊粉, 按照n=1 0計(jì)算。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示, 保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的1 0%。8 其他當(dāng)稱樣量為5g時(shí), 檢出限為0.4g/k g, 定量限為2.0g/k g。G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 66 附 錄 A果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液、 奶粉樣品色譜圖A.1 果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖( 參考條件1)果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖( 參考條件1) 見圖A.1。圖A.1 果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖A.2 奶粉樣品色譜圖( 參考條件1)奶粉樣品色譜圖( 參考條件1) 見圖A.2。圖A.2 奶粉樣品色譜圖G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 67 A.3 果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖( 參考條件2)果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖( 參考條件2) 見圖A.3。圖A.3 果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖A.4 奶粉樣品色譜圖( 參考條件2)奶粉樣品色譜圖( 參考條件2) 見圖A.4。圖A.4 奶粉樣品色譜圖G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 68 附 錄 B酶活力測(cè)定方法B.1 蔗糖酶活力測(cè)定方法B.1.1 原理蔗糖酶(S u c r a s e,E C3.2.1.2 6) 又稱轉(zhuǎn)化酶, 可以從果糖末端切開蔗糖的果糖糖苷鍵, 使蔗糖水解生成葡萄糖和果糖, 葡萄糖和果糖是還原糖, 其含量可通過3,5 -二硝基水楊酸比色法測(cè)定, 從而度量酶活力的大小。由于蔗糖酶在堿性條件下極易失活, 所以可用堿終止反應(yīng)。3,5 -二硝基水楊酸和還原糖共熱后生成棕紅色氨基化合物, 在最大吸收波長(zhǎng)5 4 0n m處測(cè)定, 在一定濃度范圍內(nèi)吸光值與還原糖含量呈線性關(guān)系, 因此可用于還原糖含量的測(cè)定, 從而測(cè)定蔗糖酶的活力大小。蔗糖酶活力定義為: 在3 7、p H6.5條件下, 每分鐘水解產(chǎn)生1m o l葡萄糖所需的酶量( 活性) 定義為1個(gè)酶活力單位。B.1.2 試劑除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。B.1.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(C6H1 2O6) : 純度9 9.0%。B.1.2.2 蔗糖(C1 2H2 2O1 1) : 純度9 9.0%。B.1.2.3 氫氧化鈉(N a OH) 。B.1.2.4 馬來酸(C4H4O4) 。B.1.2.5 二硝基水楊酸(C7H4N2O7) 。B.1.2.6 酒石酸鉀鈉(C4H4KN a O6) 。B.1.2.7 苯酚(C6H5OH) 。B.1.2.8 亞硫酸鈉(N a2S O3) 。B.1.3 試劑配制B.1.3.1 2.5m o l/m L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液: 準(zhǔn)確稱取0.0 4 5g( 精確至0.1m g)8 0烘干至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于5 0m L燒杯中, 加入約1 0m L熱水, 待葡萄糖溶解后, 冷卻至室溫, 用水稀釋至1 0 0m L容量瓶中, 搖勻,4保存, 可放置1個(gè)月。B.1.3.2 氫氧化鈉溶液(1m o l/L) : 稱取4 0g氫氧化鈉( 精確至0.0 1g) , 溶于水并稀釋至10 0 0m L, 室溫下可放置2個(gè)月。B.1.3.3 馬來酸鈉緩沖溶液(0.1m o l/L,p H6.5) : 稱取1.1 6g馬來酸( 精確至0.0 1g) 于1 5 0m L燒杯中, 加入約7 0m L水溶解, 用1m o l/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)p H至6.5, 用水稀釋至1 0 0m L,4保存, 可放置3個(gè)月。B.1.3.4 1.0m o l/L蔗糖溶液: 準(zhǔn)確稱取3 4.2g( 精確至0.0 1g) 蔗糖, 用約5 0m L水溶解, 用馬來酸鈉緩沖溶液稀釋至1 0 0m L, 搖勻, 用時(shí)現(xiàn)配。B.1.3.5 氫氧化鈉溶液(2m o l/L) : 稱取8 0g氫氧化鈉( 精確至0.0 1g) , 用水溶解并稀釋至10 0 0m L,室溫下可放置2個(gè)月。B.1.3.6 3,5 -二硝基水楊酸溶液: 將6.3g二硝基水楊酸和2 6 2m L2m o l/LN a OH溶液, 加到5 0 0m L含有1 8 5g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中, 再加5g苯酚和5g亞硫酸鈉, 攪拌溶解, 冷卻后用水稀釋至G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 69 10 0 0m L, 貯于棕色瓶中備用。B.1.4 儀器和設(shè)備B.1.4.1 恒溫水浴鍋: 控溫精度1。B.1.4.2 分光光度計(jì): 帶1c m玻璃比色皿。B.1.4.3 微量移液器:1 0 0L、10 0 0L。B.1.5 分析步驟B.1.5.1 待測(cè)酶的制備準(zhǔn)確稱取測(cè)試酶樣品約0.1g( 精確0.0 0 1g) , 用0.1m o l/L馬來酸鈉緩沖溶液溶解并稀釋, 控制酶活力濃度在1U/m L5U/m L范圍內(nèi)。B.1.5.2 測(cè)定B.1.5.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取6支1 0m L刻度試管, 編號(hào), 按表B.1配制不同濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:表B.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液管號(hào)123456葡萄糖原液量/m L00.1 0 00.2 0 00.3 0 00.4 0 00.5 0 0加水量/m L1.0 00.9 0 00.8 0 00.7 0 00.6 0 00.5 0 0葡萄糖濃度/ (m o l/m L)00.2 5 00.5 0 00.7 5 01.0 01.2 5 在上述各試管中分別加入0.5m L 3,5 -二硝基水楊酸溶液, 混勻后于沸水浴中加熱1 0m i n。取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫, 用水定容至5m L, 混勻, 以1號(hào)試管為空白, 用分光光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)5 4 0n m處的吸光值。以吸光值為縱坐標(biāo), 葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。B.1.5.2.2 蔗糖酶活力的測(cè)定取1 0m L刻度試管, 用微量移液器準(zhǔn)確移取1.0m o l/L蔗糖溶液0.8m L, 準(zhǔn)確加入待測(cè)酶0.1m L,在3 71恒溫水浴保溫3 0m i n, 取出后立即加入0.1m L1m o l/LN a OH溶液, 搖勻以終止酶促反應(yīng)。在相同的條件下, 以沸水浴鈍化酶液作為試劑空白。再向該溶液中加入0.5m L3,5 -二硝基水楊酸溶液, 混勻后于沸水浴中加熱1 0m i n。取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫, 用水定容至5m L, 混勻。用分光光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)5 4 0n m處的吸光值, 由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)酶測(cè)定液中和試劑空白測(cè)定液中葡萄糖的質(zhì)量濃度。B.1.6 計(jì)算蔗糖酶活力按式(B.1) 計(jì)算:X=(c-c0)VVx3 0(B.1) 式中:X 蔗糖酶活力, 單位為活力單位每毫升(U/m L) ;c 待測(cè)酶測(cè)定液中葡萄糖的摩爾濃度, 單位為微摩爾每毫升(m o l/m L) ;G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 61 0 c0 試劑空白測(cè)定液中葡萄糖的摩爾濃度, 單位為微摩爾每毫升(m o l/m L) ;V 酶水解液最終定容體積(5m L) , 單位為毫升(m L) ;Vx 待測(cè)酶的用量, 單位為毫升(m L) ;3 0 反應(yīng)時(shí)間, 單位為分(m i n) 。B.2 果聚糖酶活力測(cè)定方法B.2.1 原理果聚糖酶(I n u l i n a s e,E C3.2.1.8 0) 又稱菊粉酶, 是能夠水解- 2,1 - D -果聚糖果糖苷鍵的一類水解酶, 使菊粉水解生成葡萄糖和果糖, 葡萄糖和果糖是還原糖, 其含量可通過3,5 -二硝基水楊酸比色法測(cè)定, 從而度量酶活力的大小。3,5 -二硝基水楊酸和還原糖共熱后生成棕紅色氨基化合物, 在最大吸收波長(zhǎng)5 4 0n m處測(cè)定, 在一定濃度范圍內(nèi)吸光值與還原糖含量呈線性關(guān)系, 因此可用于還原糖含量的測(cè)定, 從而測(cè)定果聚糖酶的活力大小。果聚糖酶活力定義為: 在5 5、p H4.5條件下, 每分鐘水解產(chǎn)生1m o l果糖所需的酶量( 活性) 定義為1個(gè)酶活力單位。B.2.2 試劑B.2.2.1 果糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(C6H1 2O6) : 純度9 9.0%。B.2.2.2 菊粉: 純度9 0.0%。B.2.2.3 冰乙酸(CH3C OOH) 。B.2.2.4 三水乙酸鈉(CH3C OON a3 H2O) 。B.2.2.5 二硝基水楊酸(C7H4N2O7) 。B.2.2.6 酒石酸鉀鈉(C4H4KN a O6) 。B.2.2.7 苯酚(C6H5OH) 。B.2.2.8 亞硫酸鈉(N a2S O3) 。B.2.3 試劑配制B.2.3.1 2.5m o l/m L果糖標(biāo)準(zhǔn)溶液: 準(zhǔn)確稱取0.0 4 5g( 精確至0.1m g)8 0烘干至恒重的果糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于5 0m L燒杯中, 加入約1 0m L熱水, 待果糖溶解后, 冷卻至室溫, 用水稀釋至1 0 0m L容量瓶中,搖勻,4保存, 可放置1個(gè)月。B.2.3.2 乙酸溶液(2 0 0mm o l/L) : 吸取0.6m L冰乙酸, 用水稀釋至5 0m L,4保存, 可放置2個(gè)月。B.2.3.3 乙酸鈉溶液(2 0 0mm o l/L) : 稱取1.3 6g三水乙酸鈉( 精確至0.0 1g) , 溶于水并稀釋至5 0m L,4保存, 可放置2個(gè)月。B.2.3.4 乙酸鈉緩沖溶液(p H4.5) : 吸取1 4m L乙酸溶液和1 1m L乙酸鈉溶液混合, 并用水稀釋至5 0m L, 用時(shí)現(xiàn)配。B.2.3.5 1 0%菊粉溶液: 準(zhǔn)確稱取1 0g( 精確至0.0 1g) 菊粉, 用約5 0m L熱水溶解, 冷卻至室溫, 用乙酸鈉緩沖溶液稀釋至1 0 0m L容量瓶中, 搖勻,4保存, 可放置1個(gè)月。B.2.3.6 氫氧化鈉溶液(2m o l/L) : 稱取8 0g氫氧化鈉( 精確至0.0 1g) , 溶于水中并稀釋至10 0 0m L,室溫下可放置2個(gè)月。B.2.3.7 3,5 -二硝基水楊酸溶液: 將6.3g二硝基水楊酸和2 6 2m L2m o l/LN a OH溶液, 加到5 0 0m L含有1 8 5g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中, 再加5g苯酚和5g亞硫酸鈉, 攪拌溶解, 冷卻后用水稀釋至10 0 0m L, 貯于棕色瓶中備用。G B5 0 0 9.2 5 52 0 1 61 1 B.2.4 儀器和設(shè)備B.2.4.1 恒溫水浴鍋: 控溫精度1。B.2.4.2 分光光度計(jì): 帶1c m玻璃比色