遺傳學實驗-果蠅唾腺染色體.ppt

遺傳學實驗二,果蠅唾腺染色體的制備與觀察,一、實驗?zāi)康?1.練習剖取果蠅三齡幼蟲唾腺的方法； 2.掌握制作果蠅唾腺染色體標本的技術(shù)； 3.觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征。,二、實驗原理,雙翅類昆蟲(搖蚊、果蠅等)幼蟲期的唾腺細胞很大，其中的染色體稱為唾腺染色體(salivary chromosome)； 這種染色體比普通染色體大得多，寬約5m，長約400m，相當于普通染色體的100-150倍，因而又稱為巨大染色體； 唾腺染色體經(jīng)過多次復制而并不分開，大約有1000-4000根染色體絲的拷貝，所以又稱多線染色體(polytene chromosome)；,唾腺細胞中同源染色體互相靠攏呈現(xiàn)聯(lián)會狀態(tài)體聯(lián)會； 各染色體的異染色質(zhì)多的著絲粒部分互相靠攏形成染色中心(chromocenter)； 唾腺染色體經(jīng)染色后，出現(xiàn)深淺不同、密疏各別的橫紋(band)，其數(shù)目和位置是恒定的，代表著種的特征； 如果染色體有缺失、重復、倒位、易位等畸變，很容易在唾腺染色體上識別出來，因此唾腺染色體是研究染色體畸變的好材料。,三、實驗材料,黑腹果蠅的三齡幼蟲 為了得到更好的染色體標本，需要在2025和營養(yǎng)良好的條件下飼養(yǎng)幼蟲。選擇行動遲緩、肥大，爬上管壁的三齡幼蟲（化蛹之前）做標本最佳。,三齡幼蟲照片,四、實驗儀器與試劑,. 器具： 雙筒體視解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、吸水紙等。 . 試劑： 改良苯酚品紅溶液、生理鹽水、1N鹽酸。,五、實驗步驟,實驗前知識準備： 果蠅三齡幼蟲的唾腺位于幼蟲的頭部附近，可以看看顯微照片中的位置,（點擊圖片觀察放大圖）,實驗開始,1.唾腺剖取 把載玻片置于雙筒鏡下。載玻片上滴加生理鹽水1-2滴，取三齡幼蟲放在其中，操作者兩手各握一枚解剖針，左手的解剖針壓住幼蟲后端1/3處，固定幼蟲。右手的解剖針按住幼蟲頭部，用力向右拉，把頭部從身體拉開，唾腺隨之而出，唾腺是一對透明的棒狀腺體 。用針剔除脂肪組織。,圖示,解離： 在載玻片上除去幼蟲其它部分，用吸水紙吸去生理鹽水，然后在腺體上加 1-2滴1NHCl溶液，作用5-10 min。 沖洗： 用吸水紙吸去HCl ，滴加蒸餾水于腺體上進行沖洗（兩次）。 染色： 吸去蒸餾水，加1-2滴苯酚品紅溶液，染色10min。 5. 壓片觀察：用鑷子加蓋玻片，壓片。鏡檢。,六、實驗結(jié)果,1.先用低倍物鏡觀察，找到好的染色體圖像后，放到視野中心，再用高倍鏡觀察。,2. 黑腹果蠅染色體是2n=24=8（圖一），但由于體細胞配對，又因短小的第4染色體和X染色體的著絲粒在端部，所以染色體的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一條線狀和點狀染色體。只有第2和第3染色體的著絲粒在中央，它們從染色中心以V字形向外伸出（2L，2R，3L，3R），因此共有6條（圖二）。,在顯微鏡下，短小的第4染色體有時不易觀察到，所以最容易識別的是5條（圖三）。,雄果蠅的Y染色體幾乎包含在染色中心里，因為是異染色質(zhì)，看起來染色可能深些。有經(jīng)驗的人可以發(fā)現(xiàn)雄果蠅的X染色體比雌果蠅X染色體要細些，因為雄性只有一條X染色體。,3.唾腺染色體上的橫紋寬窄、深淺是一定的，但在果蠅的特定發(fā)育時期，它們會出現(xiàn)不連續(xù)的膨脹，這稱為疏松區(qū)（puff），目前人們認為這是這部分基因被激活的標志。,七、繪圖,繪制你所觀察到的清晰的果蠅唾腺染色體的圖像。,八、實驗分析與討論,1、根據(jù)實驗的觀察可以確定果蠅的染色體數(shù)目嗎？ 2、制備果蠅唾腺染色體需注意哪幾個關(guān)鍵步驟？ 3、利用果蠅唾腺染色體可以進行哪些遺傳學研究？,九、參考文獻,張貴友，普通遺傳學實驗指導， 北京：清華大學出版社，2003 盧龍斗、常重杰，遺傳學實驗技術(shù)， 合肥：中國科學技術(shù)大學出版社，1996 劉祖洞、江紹慧，遺傳學實驗， 北京：高等教育出版社，1987,實驗結(jié)束,果蠅三齡幼蟲,下一張,果蠅三齡幼蟲,下一張,果蠅三齡幼蟲,返 回,果蠅唾腺位于頭部附近,返 回,果蠅唾腺位于頭部附近（放大圖）,返 回,1、兩手各握一枚解剖針，左手解剖針壓住幼蟲后端1/3處，固定幼蟲；右手的解剖針按住幼蟲的頭部用力向右拉，把頭部從身體拉開，唾腺隨之而出。,2、已剝離出的唾腺染 色體一對透明的棒狀腺