Luteolin 對(duì)實(shí)驗(yàn)性胰腺炎的保護(hù)作用【推薦論文】 .doc

精品論文luteolin 對(duì)實(shí)驗(yàn)性胰腺炎的保護(hù)作用熊杰1，胡國(guó)勇2，倪建波1，萬(wàn)榮1，王興鵬2（1. 同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院消化內(nèi)科，上海 200072；52. 上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科，上海 200080） 摘要：目的：觀察 3,4,5,7-四羥黃酮（lut）治療小鼠重癥急性胰腺炎（sap）的效果并探討 其作用機(jī)制。方法：50 只雄性 c57bl/6 小鼠隨機(jī)分為生理鹽水注射、重癥急性胰腺炎模型 組、低劑量 lut 給藥組（50mg/kg）、中劑量 lut 給藥組（100mg/kg）、高劑量 lut 給藥組（200mg/kg），每組 10 只，各給藥組均與開始造模前 2 小時(shí)灌胃給藥。造模完成后 6 h 處10死各組小鼠，he 染色法觀察胰腺組織病理改變并測(cè)定各組小鼠血清淀粉酶水平及胰腺組織mda 和 mpo 含量；elisa 法檢測(cè)血清 ho-1、tnf-、il-10 含量；realtime-pcr 法檢測(cè) 胰腺組織 ho-1、tnf-、il-10 mrna 水平變化；western bolt 法檢測(cè)胰腺組織 ho-1、tnf- 、il-10、nf-b 蛋白水平變化。結(jié)果：較 sap 模型組，三組 lut 給藥組均可不同程度 地改善胰腺損傷程度，降低胰腺組織病理評(píng)分與胰腺濕重比（p0.05）；升高血清、組織15mrna 水平及組織蛋白水平的 ho-1、il-10 含量（p0.05 或 p0.01），降低 tnf-含量（p0.05 或 p0.01）。同時(shí)三組 lut 給藥組均可不同程度地降低胰腺組織中 mda、mpo 含量。結(jié)論：lut 可發(fā)揮對(duì) sap 胰腺的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與增高組織 ho-1 活力，降低 氧化應(yīng)激水平、減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、促進(jìn)抗炎因子 il-10 的表達(dá)及抑制 nf-b、tnf-表達(dá)有關(guān)。20關(guān)鍵詞：3,4,5,7-四羥黃酮；血紅素加氧酶；腫瘤壞死因子-；白介素- 10；核轉(zhuǎn)錄因子-b中圖分類號(hào)：r576protect effects of luteolin on experimental acute pancreatitis25in micexiong jie1, hu guoyong2, ni jianbo1, wan rong1, wang xingpeng2(1. department of gastroenterology,shanghai tenth peoples hospital, tongji university schoolof medicine, shanghai 200072;2. department of gastroenterology, shanghai first peoples hospital, shanghai jiaotong30university school of medicine, shanghai 200080)abstract: objective：to investigate the protect effects of luteolin on the pancreas in severe acutepancreatitis (sap) mouse model, and explore its possible mechanism. method: a total of 50 malec57bl/6 mice were randomly divided into 5 groups (n=10 in each group): group 1, normal saline-treated group; group 2, sap model group; group 3, 4, 5, sap + luteolin-treated （50, 100,35200 mg/kg, per os ,respectively, luteolin was administrated 2 h before the model establishment. 6 h after the model establishment, all mice were sacrificed,the pancreas weight / body weight ratio was calculated, the histopathological changes in each group were graded, the amylase levels in serum and the contents of malondialdehyde (mda) and myeloperoxidase (mpo) in pancreastissue were detected. the heme oxygenase-1( ho-1)、tumor necrosis factor alpha (tnf-)、40interleukin-10（il-10）and nuclear factor kappa b (nf-b) levels in serum and pancreas tissure were detected by elisa, realtime-pcr and western blot. result：pretreatment with luteolinsignificantly attenuated the severity of pancreatitis as evidenced by effective reductions in pancreas weight / body weight ratio, histopathology scores, mpo activity, mda formation,tnf- level, nf-b activity(p0.05 or p0.01), and conspicuous increases in ho-1 and il-10.45conclusion: the result of the study demonstrated that luteolin has protective effects on the pancreas in sap. upregulation of ho-1 and il-10,down regulation of nf-b and tnf- might be severd as its potential mechanism.基金項(xiàng)目：高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目（編號(hào) 20090072110022）作者簡(jiǎn)介：熊杰，（1987-），男，碩士研究生，急性胰腺炎的基礎(chǔ)研究。通信聯(lián)系人：王興鵬，（1965-），男，教授，胰腺疾病的基礎(chǔ)與臨床。 e-mail: - 9 -keywords: luteolin; heme oxygenase-1; tumor necrosis factor alpha; interleukin-10; nuclear factor kappa b500引言急性胰腺炎(acute pancreatitis，ap)是由于多種原因引起的胰腺自身消化性疾病，急性重 癥胰腺炎(severe acute pancreatitis，sap)由于并發(fā)多臟器功能衰竭，病情兇險(xiǎn)，常常危及患 者的生命1。氧化應(yīng)激(oxidative stress)是在機(jī)體內(nèi)活性氧生成和抗氧化物質(zhì)失衡狀態(tài)下，直55接或間接通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引起細(xì)胞的損傷，是許多疾病的病因，同時(shí)又是許多疾病發(fā)生、 發(fā)展的結(jié)果。目前研究表明，氧化應(yīng)激在 ap 的發(fā)病中發(fā)揮重要作用，還與胰腺炎時(shí)胰腺外 器官的損傷有密切的聯(lián)系2,3。3,4,5,7-四羥黃酮（luteolin，lut）又名木犀草素，屬于天然黃酮類化合物，近年研究 表明 lut 具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用4。本研究通過(guò)觀察 lut 對(duì)雨蛙素聯(lián)60合脂多糖誘導(dǎo)的小鼠重癥急性胰腺炎組織病理、生化指標(biāo)、促炎及抗炎因子表達(dá)水平、血紅 素加氧酶（heme oxygenase-1，h0-1）表達(dá)水平以及核因子 kappa b p65（nuclear factor kappa b,nf-b p65）的影響，初步探討 lut 對(duì)小鼠重癥急性胰腺炎的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。1材料與方法1.1材料與試劑65健康雄性 c57bl/6 小鼠 50 只，體重 20-22 g，購(gòu)自中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。lut 購(gòu)自 上海同田生物科技有限公司，雨蛙素(cerulein，cn)和脂多糖(lipopolysaccharide，lps)均購(gòu)自 美國(guó) sigma 公司。血淀粉酶試劑盒、丙二醛(mda)試劑盒、髓過(guò)氧化物酶(mpo)試劑盒均購(gòu) 自南京建生生物制品研究所。ho-1、tnf-、il-10 elisa 試劑盒均購(gòu)自美國(guó) r&d 公司。 trizol 試劑購(gòu)自美國(guó) invitrogen 公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、realtime-pcr 試劑盒均購(gòu)自日本 tankara70公司。兔抗鼠 ho-1、tnf-、il-10、nf-b p65、均購(gòu)自美國(guó) santa cruz 公司。內(nèi)參抗體 -actin、lamin b 及羊抗兔熒光標(biāo)記二抗均購(gòu)自巴傲德生物公司。1.2方法1.2.1動(dòng)物分組及模型制作按照隨機(jī)分配原則將小鼠分為 5 組，即生理鹽水組(normal saline,ns)、模型組、低劑量75lut 給藥組、中劑量 lut 給藥組和高劑量 lut 給藥組，每組 10 只。受試動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)前禁食18h，自由飲水。模型組小鼠腹腔內(nèi)注射雨蛙素 50ug/kg，連續(xù) 6 次，每次間隔 1h，在末次 雨蛙素注射后，即向腹腔內(nèi)注射脂多糖 10mg/kg；低、中、高三組 lut 給藥組分別于第一次 注射雨蛙素 2 小時(shí)前予以口服灌入 100mg/kg、200mg/kg 和 400mg/kg lut，其造模步驟同模 型組。ns 組用相同體積生理鹽水代替雨蛙素及脂多糖予以注射。801.2.2取材各組小鼠均于最后一次雨蛙素注射后第 6 小時(shí)眼球取血，脫頸法處死，剖腹，肉眼觀察 腺及胰外各器官變化。仔細(xì)分離全部胰腺，稱胰腺濕重，計(jì)算濕重比（胰腺濕重與體重的比）， 一部分胰腺于 4%多聚甲醛溶液中固定，石蠟包埋，供形態(tài)學(xué)檢測(cè)；其余部分-80保存，用 于組織 mda、mpo 水平測(cè)定以及 western blot。851.2.3血清各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定采用碘-淀粉比色法測(cè)血清淀粉酶含量，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清 ho-1、tnf-、il-10 的含量，各項(xiàng)操作過(guò)程嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書指示。1.2.4胰腺組織 mda 及 mpo 含量測(cè)定 取部分胰腺組織稱重后，加人相應(yīng)比例的生理鹽水，用低溫勻漿機(jī)制成 l的勻漿，4 903000 g/min 離心 lomin,取上清，雙縮脲法測(cè)定蛋白含量，硫代巴比妥酸（tba）法檢測(cè) mda含量。另取部分胰腺組織稱重后，加入相應(yīng)比例的生理鹽水，用低溫勻漿機(jī)制成 10%勻漿， 取出 0.1 ml 上清，用酶化學(xué)法測(cè)定 mpo 含量，各項(xiàng)操作過(guò)程嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書指示。1.2.5胰腺組織病理檢查及評(píng)分各組取胰腺常規(guī)切片，he 染色，顯微鏡下觀察。用雙盲法按 schmidt 標(biāo)準(zhǔn)行胰腺組織95病理評(píng)分5，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表 1。表 1 schmidt s 胰腺組織病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)tabl e 1 schmi dts scor e standard of pancr eati c hist opathl ogy0123間質(zhì)水腫無(wú)小葉間小葉內(nèi)腺泡間炎癥浸潤(rùn)實(shí)質(zhì)壞死 實(shí)質(zhì)出血無(wú)無(wú) 無(wú)20%5%1-2 處20% -50%5% -20%3-5 處50%20%20%病理改變 分值1001051101151.2.6胰腺組織 ho-1、tnf-、il-10 mrna 水平測(cè)定按說(shuō)明書用 trizol 試劑盒提取肺組織總 rna，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定 rna 濃度，逆轉(zhuǎn) 錄法生成 cdna。采用 realtime-pcr 法檢測(cè)各組胰腺組織 ho-1、tnf-、il-10 mrna 水 平變化,以 -actin 為內(nèi)參照，ct 法計(jì)算各組間 mrna 倍數(shù)關(guān)系。 ho-1 正向引物：5-gatagagcgcaacaagcagaa-3 ， 反 向 引 物 ： 5-cagtgaggcccatacc agaag-3；tnf- 正向引物：5-tctcttcaagggacaaggctg-3，反向引物：5- ata gcaaatcggctgacggt -3；il-10 正向引物：5- cttactgactggcatgaggatca-3， 反 向引物： 5- gcagctctaggagcatgtgg-3 ；-actin 正 向 引物： 5- gtcc ctcaccctcccaaaag-3，反向引物：5- gctccctcaac-acctcaaccc -3。1.2.7western blotting 檢測(cè)取-80 保存的胰腺組織，液氮研磨后分別提取總蛋白與核蛋白，測(cè)定蛋白濃度，經(jīng) sds-pade 電泳分離，將目的蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上，脫脂奶粉封閉，加兔抗鼠 ho-1（稀 釋倍數(shù) 1:100）、tnf-（稀釋倍數(shù) 1:100）、il-10（稀釋倍數(shù) 1:100）、一抗，4 孵育過(guò) 夜，加熒光標(biāo)記二抗，洗膜后機(jī)器曝光，采用 image- pro plus 像分析系統(tǒng)對(duì)各條帶平均灰度 值（a）進(jìn)行分析，以目的條帶的 a 值與內(nèi)參照 -actin 的 a 值比值為相對(duì)表達(dá)量。1.2.8統(tǒng)計(jì)處理分組所得計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均數(shù)比較用 snk-q 檢驗(yàn)。病理組織評(píng)分 等級(jí)差異用 ridit 分析，數(shù)據(jù)用樣本例數(shù)表示。p0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果1201252.1各組胰腺組織病理變化及評(píng)分如圖 1 所示，生理鹽水組，胰腺組織正常（圖 1a）；模型組即 cn+lps 組，胰腺高度 水腫，廣泛腺泡細(xì)胞壞死，細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊不清，腺泡內(nèi)空泡形成，壞死區(qū)有大量中心粒細(xì)胞 和單核細(xì)胞浸潤(rùn)。胰腺間質(zhì)內(nèi)動(dòng)脈痙攣，靜脈明顯擴(kuò)張淤血，炎性細(xì)胞附邊，局部血管出血、 壞死（圖 1b）；低、中、高 lut 給藥組相比模型組有不同程度的水腫、浸潤(rùn)及壞死程度的 減輕（圖 1c、1d、1e）。各組評(píng)分結(jié)果見表 2。表 2 schmidts 胰腺組織病理評(píng)分結(jié)果tabl e 2 the results of pancr eati c hist opathol ogy score病理變化ns 組分值 總數(shù)0 1 2 3間質(zhì)水腫 9 1 0 0 10 炎癥浸潤(rùn)10 0 0 0 10 實(shí)質(zhì)壞死10 0 0 0 10實(shí)質(zhì)出血 10 0 0 0 10sap 模型組間質(zhì)水腫 0 0 4 6 10a炎癥浸潤(rùn) 0 0 4 6 10a實(shí)質(zhì)壞死 0 0 3 7 10a實(shí)質(zhì)出血 0 6 4 0 10a低 lut 給藥組間質(zhì)水腫 0 2 4 4 10ab炎癥浸潤(rùn) 0 2 5 3 10ab 實(shí)質(zhì)壞死 0 2 5 3 10ac 實(shí)質(zhì)出血 2 6 2 10ab中 lut 給藥組間質(zhì)水腫 0 5 3 2 10ac 炎癥浸潤(rùn) 0 6 2 2 10ac 實(shí)質(zhì)壞死 0 4 5 1 10ac 實(shí)質(zhì)出血 7 3 0 0 10ac高 lut 給藥組間質(zhì)水腫 0 7 2 1 10ac 炎癥浸潤(rùn) 0 8 2 0 10ac 實(shí)質(zhì)壞死 0 7 3 0 10ac實(shí)質(zhì)出血 9 1 0 0 10c注：a：與生理鹽水組相比 p0.05；b：與模型組相比 p0. 05；c：與模型組相比 p0.01130135圖 1 各組胰腺組織病理比較。a：正常胰腺；b：急性胰腺炎模型組；c：低劑量 lut 給藥組；d：中劑量lut 給藥組；e：高劑量 lut 給藥組figure 1. comparision of pancreas among each group (he,400). a：normal pancreas; b：ap model group; c：low dose luteolin group; d：middle dose luteolin group; e：high dose luteolin group2.2各組胰腺組織濕重比及 mda、mpo 含量測(cè)定結(jié)果如表 3 所示，與生理鹽水組相比，模型組胰腺濕重比、mda 含量以及 mpo 含量均顯 著增高（p0.05),低、中、高 lut 給藥組相比模型組三項(xiàng)指標(biāo)均有不同程度的下降（p0.05 或 p0.01）。140表 3 各組胰腺組織濕重比、mda 含量及 mpo 含量tabl e 3 the pancreas wei ght/ body wei ght、mda and mpo level i n pancr eas ti ssure組別 例數(shù) 胰 腺 濕 重 比（mg/ g）mda 含量（nmol/ mg.pr ot）mpo 含量（u/mg）ns 組64. 870.251. 721.240. 100.04sap 模型組69. 240.48a7. 342.16a0. 670.10a低lut 給藥組68. 320.35ab6. 181.20ab0. 530.05ab中l(wèi)ut 給藥組67. 780.29ab5. 721.32ac0. 450.07ac高lut 給藥組66. 920.25ac4. 771.53ac0. 380.10ac注：a：與生理鹽水組相比 p0.05；b：與模型組相比 p0. 05；c：與模型組相比 p0.011452.3各組血清淀粉酶、ho-1、tnf-、il-10 值測(cè)定結(jié)果如表 4 所示，與生理鹽水組相比，模型組血清淀粉酶、tnf- 水平顯著增高（p0.05）， 低、中、高 lut 給藥組可不同程度降低血清淀粉酶水平、tnf- 水平（p0.05 或 p0.01）。 模型組血清 ho-1、il-10 水平相對(duì)生理鹽水組已有比較明顯升高（p0.05），然而低、中、 高 lut 各給藥組血清 ho-1、il-10 水平相比模型組而言又均有不同程度的增高（p0.05 或 p0.01）。150表 4 各組血清淀粉酶、ho-1、tnf-、il-10 含量tabl e 4 the level of amylase、ho-1、tnf- and il-10 in ser um組別 例數(shù) 淀粉酶（u/ml）ho-1（ng/ ml）tnf-(pg/ ml)il-10(pg/ ml)ns 組 6 27801328 0. 280.05 28.88.9 12.52.3sap 模型組 6 177852370a 0. 560.06a 98.722. 9a 56.35.9a低lut 給藥組6136763354ab0.730.05 ab82.314. 5ab79.48.4ac 中l(wèi)ut 給藥組6115432128ac0.820.07ac71.210. 6ac89.86.9ac 高lut 給藥組6103801896ac0.960.04ac63.08.9ac 104. 710.2ac 注：a：與生理鹽水組相比 p0.05；b：與模型組相比 p0. 05；c：與模型組相比 p0.011551601651701752.4各組胰腺組織 ho-1、il-10 mrna 水平測(cè)定結(jié)果如圖 2 所示，與生理鹽水組相比，模型組 tnf- mrna 水平增高倍數(shù)明顯（p0.05）， 低、中、高 lut 給藥組可不同程度降低胰腺組織 tnf-mrna 水平增高倍數(shù)（p0.05 或 p0.01）。模型組 ho-1 mrna、il-10 mrna 水平較生理鹽水組已有小幅度增高，低、中、 高 lut 各給藥組可使 ho-1 mrna、il-10 mrna 水平增高幅度更為明顯（p0.05 或 p0.01）。圖 2 各組胰腺組織 ho-1、tnf-、il-10 mrna 水平表達(dá)情況。a 代表與生理鹽水組相比，p0.05；b 代 表與模型組相比，p0.05；c 代表與模型組相比，p0.01figure 2 the mrna level of ho-1, tnf-, il-10 in pancreas tissure among each group. ap0.01 vs. ns group；bp0.05 vs. ap group；cp0.01 vs. ap group2.5各組胰腺組織 ho-1、tnf-、il-10、nf-b p65 蛋白水平表達(dá)結(jié)果如圖 3 所示，與生理鹽水組相比，模型組 tnf-、nf-b p65 蛋白表達(dá)水平顯著升高（p0.05），低、中、高給藥組可不同程度降低 tnf-、nf-b p65 蛋白表達(dá)水平（p0.05 或 p0.01）。模型組 ho-1、il-10 蛋白表達(dá)水平較生理鹽水組已有小幅度升高（p0.05）， 低、中、高 lut 給藥組可使 ho-1、il-10 蛋白表達(dá)水平增高幅度更為明顯（p0.05 或 p0.01）。圖 3 各組胰腺組織 ho-1、tnf-、il-10 及 nf-b 蛋白表達(dá)情況。a：各組胰腺組織 ho-1、tnf-、 il-10 及 nf-b 蛋白表達(dá)變化；b-e：各組胰腺組織 ho-1、tnf-、il-10 及 nf-b 蛋白相對(duì)表達(dá) 量的變化。a 代表與生理鹽水組相比，p0.05；b 代表與模型組相比，p0.05；c 代表與模型組相比，p0.01fi gure 3. the pr otei n levels of ho-1,tnf-, il-10, nf-b in pancreas tissure among each gr oup. a： changes of ho-1、tnf-、il-10 and nf-b expr essi on at pr otei n level among each gr oup；b-e： relat i ve expressi on l evel of ho-1、tnf-、il-10 and nf-b among each gr oup. ap0.01 vs. ns group； bp0.05 vs. ap group；cp0.01 vs. ap group精品論文1801851901952002052102153討論在 sap 的發(fā)病過(guò)程中，早期胰蛋白酶原被激活轉(zhuǎn)化為胰蛋白酶，誘發(fā)局部炎癥反應(yīng)， 炎性介質(zhì)產(chǎn)生，多核中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞釋放溶酶體酶、氧自由基(oxygen free radicals，ofr)、血管活性物質(zhì)和促炎反應(yīng)介質(zhì)6。ofr 及其衍生物作為分子起源在胰腺損 害的過(guò)程中起重要作用，這些高度的活化物質(zhì)可通過(guò)脂肪酸過(guò)氧化作用造成的類脂膜破壞及 溶酶體膜破壞。此外 ofr 可激活補(bǔ)體，促進(jìn)白細(xì)胞黏附、活化和遷移，能夠損傷內(nèi)皮細(xì)胞 的完整性，增加毛細(xì)血管的通透性，造成循環(huán)血量的丟失，引起微循環(huán)障礙，加重胰腺損傷 7-9。ho-1 也被稱為熱休克蛋白-32(hsp-32)，為一種應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白，是降解血紅素為膽綠素、 一氧化碳(co)和亞鐵的限速酶。近來(lái)研究顯示，應(yīng)激狀態(tài)下，ho-1 通過(guò)抗氧化、維持微循 環(huán)正常功能和抗炎性介質(zhì)反應(yīng)等機(jī)制保護(hù)細(xì)胞10-12。急性胰腺炎一旦發(fā)生即可引起氧化應(yīng)激 反應(yīng)基因的強(qiáng)烈上調(diào)，尤其是 ho-1 基因顯著上調(diào)最為顯著。這表明機(jī)體具有對(duì)抗應(yīng)激的代 償機(jī)制，然而胰腺的局部病變并未因此停止，原因在于對(duì)抗炎性介質(zhì)反應(yīng)的應(yīng)激基因表達(dá)難 以拮抗和抑制大量釋放的促炎細(xì)胞因子基因表達(dá)13。lut 作為一種天然抗氧化劑，已被多種 體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有上調(diào) ho-1 表達(dá)水平的功能14。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)口服不劑量的 lut 進(jìn)而不同 程度地提高了機(jī)體 ho-1 表達(dá)水平，lut 給藥組可呈劑量依賴性地顯示出對(duì)小鼠 sap 的保護(hù) 作用，主要表現(xiàn)為血清淀粉酶水平的降低，胰腺組織病理評(píng)分的降低以及胰腺濕重比的下降。 mda 是氧自由基引起細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，而過(guò)氧化脂質(zhì)是自由基與脂質(zhì)作用的產(chǎn)物， 可間接映機(jī)體細(xì)胞受氧自由基攻擊的嚴(yán)重程度。mpo 作為衡量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)程度的指標(biāo)， sap 時(shí)胰腺組織含量顯著增高，提示中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)增多。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，lut 給藥組可 呈劑量依賴性地降低胰腺組織 mda 和 mpo 含量，提示 lut 能夠在有效改善胰腺組織的抗 氧化能力并減輕機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化程度的同時(shí)減少胰腺組織中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，發(fā)揮對(duì)胰腺炎 的保護(hù)作用。在 sap 的炎癥應(yīng)答過(guò)程中，致炎因子和氧化應(yīng)激產(chǎn)物發(fā)揮協(xié)同作用，觸發(fā)共同的信號(hào) 傳導(dǎo)通路，主要通過(guò) nf-b 的激活，導(dǎo)致了炎癥因子的級(jí)聯(lián)擴(kuò)增。nf-b 是以同或異二聚 體形式存在的核轉(zhuǎn)錄因子。通常，非激活狀態(tài)下，nf-b 二聚體與其抑制蛋白 ib 非共價(jià)結(jié) 合于胞漿內(nèi)以無(wú)活性形式存在。許多因素通過(guò)激活一個(gè)或數(shù)個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，導(dǎo)致 ikb 磷 酸化、ib 迅速泛素化，從 nf-b /ib 復(fù)合體中釋出。nf-b 活化并向核內(nèi)轉(zhuǎn)移，其活化 形式是 p65 和 p50 組成的異二聚體15。nf-b 的激活可促進(jìn) tnf- 的釋放，而 tnf- 的大 量釋放又促進(jìn) ib 的磷酸化使 nf-b 進(jìn)一步激活，導(dǎo)致最初的炎癥信號(hào)不斷放大，這是一 類正反饋。tnf- 是 sap 早期轉(zhuǎn)錄水平增加較早的炎癥因子，其升高可誘導(dǎo) il-6、il-8 及 其自身表達(dá)的增高，從而引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)，造成炎性介質(zhì)的失控性釋放16。此外 tnf- 還能 促進(jìn)炎癥部位白細(xì)胞聚集和活化，活化的白細(xì)胞又可產(chǎn)生大量 ofr。因此，致炎因子特別 是 tnf- 和氧化應(yīng)激的相互作用形成了一個(gè)惡性循環(huán)，是導(dǎo)致 sap 的重要根源6,17,18。目前 研究表明，抑制氧化應(yīng)激可抑制 nf-b 活性，顯著減少 tnf- 等炎癥因子的合成和釋放， 延緩緩急慢性炎癥的發(fā)展19。il-10 作為體內(nèi)一種重要的抗炎因子，其可抑制 tnf-、il-2、 il-3 等細(xì)胞因子的合成并可負(fù)反饋抑制 nf-b 的激活 ，對(duì) sap 所致多器官損傷有保護(hù)作 用，在 sap 早期機(jī)體開始釋放 tnf- 等促炎因子導(dǎo)致疾病惡化的同時(shí)，機(jī)體也開始釋放 il-10 等抗炎細(xì)胞因子，但仍難以阻止全身過(guò)度炎性介質(zhì)反應(yīng)和胰腺壞死。提高 sap 狀態(tài)下抗炎 細(xì)胞因子 il-10 表達(dá)和抑制促炎細(xì)胞因子 tnf- 表達(dá)可緩解或阻斷胰腺的局部病變和 sap220225所致的多器官功能衰竭20,21。本研究顯示，口服給予不同劑量 lut 致機(jī)體 ho-1 水平劑量依 賴性高表達(dá)時(shí)，血清和胰腺組織中的 il-10 含量也呈劑量依賴性增高，而 nf-b、tnf- 表 達(dá)水平卻相應(yīng)地降低。由此推論，可能是 ho-1 提高 il-10 表達(dá)抑制 tnf- 的釋放或者通過(guò) 抑制 nf-b 的活化進(jìn)而抑制 tnf- 的釋放?？傊?，本研究證實(shí) lut 對(duì) sap 小鼠模型的保護(hù)作用，其部分機(jī)制可能與 lut 增高組織ho-1 活力，降低氧化應(yīng)激水平、減少中心粒細(xì)胞浸潤(rùn)、促進(jìn)抗炎因子 il-10 的表達(dá)及抑制nf-b、tnf- 表達(dá)有關(guān)。盡管如此，lut 對(duì) sap 的保護(hù)作用仍需進(jìn)一步的理論與臨床論證。參考文獻(xiàn) (references)2302352402452502552602652702751 lopez martin a, carrillo alcaraz a. oxidative stress and acute 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