[地方標(biāo)準(zhǔn)]-DB33T 616-2006 配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定 液相色譜法.doc

db db33浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布2006-12-27實(shí)施2006-11-27發(fā)布配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定 液相色譜法determination of nitrofurazone and furazolidone in formula feed-liquid chromatographydb33/t 6162006浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)ics 67.050b 541db33/t 6162006前 言本標(biāo)準(zhǔn)附錄a為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省海洋與漁業(yè)局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質(zhì)檢中心（舟山）。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳雪昌、鄭斌、劉士忠、鐘志。1配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定 液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料中呋喃西林和呋喃唑酮的測(cè)定。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。gb/t 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法gb/t 14699.1 飼料采樣方法3 原理樣品中呋喃西林和呋喃唑酮經(jīng)乙腈提取，正己烷脫脂，固相萃取柱凈化，反相色譜柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。4 試劑本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑在呋喃西林和呋喃唑酮出峰處應(yīng)無(wú)干擾峰，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合gb/t 6682中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。4.1 呋喃西林標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%。呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度99%。4.2 正己烷：分析純。4.3 乙腈：分析純。4.4 甲醇：色譜純。4.5 磷酸二氫鈉: 分析純。4.6 0.05mol/l磷酸二氫鈉溶液。4.70.01mol/l磷酸鹽緩沖溶液(ph=2.5)，分析純。4.8乙二胺四乙酸(edta)溶液（50g/l），分析純。4.9 hlb固相萃取柱(150mg/3ml)。4.10標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100mg/l，準(zhǔn)確稱取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品, 用少量乙腈溶解后, 再用甲醇定容為100 mg/ l 的儲(chǔ)備液, 避光冷藏保存，保存期為一個(gè)月。4.11標(biāo)準(zhǔn)中間液：2mg/l，用流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。臨用時(shí)配制。5 儀器與設(shè)備5.1 液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。5.2 樣品粉碎機(jī)。5.3 均質(zhì)機(jī)。5.4 離心機(jī)，4000rpm。5.5 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。5.6 固相萃取裝置。5.7 超聲儀。5.8 旋渦混勻器。5.9 氮吹儀。5.10天平，感量為0.01g和0.0001g。6 色譜條件6.1 色譜柱：ods c-18，5m，4.6mm250mm，或同類型號(hào)色譜柱。6.2 柱溫：室溫。6.3 流動(dòng)相：乙腈-0.05mol/l磷酸二氫鈉溶液（ph= 4.0，體積比20：80）。6.4 流速：1.0ml/min。6.5 進(jìn)樣量：20l。6.6 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：365nm。7 分析步驟7.1試樣制備按gb/t 14699.1采集實(shí)驗(yàn)室樣品。將實(shí)驗(yàn)室樣品（通常500g）粉碎，使之全部通過(guò)1mm篩，充分混勻。貯于磨口瓶中備用。7.2提取 稱取樣品5g（準(zhǔn)確至0.01g），置于50ml聚丙烯離心管，加入乙腈20ml，搖勻，超聲波輔助提取10min，均質(zhì)（10000r/min）2min，4000r/min離心5min，過(guò)濾，用20ml乙腈重復(fù)提取，合并濾液于125ml分液漏斗。7.3凈化分液漏斗中加入25ml經(jīng)乙腈飽和的正己烷，振搖5min，靜置分層后，將乙腈層放入旋發(fā)瓶中，于40減壓蒸餾濃縮近干，加入5ml 0.01mol/l磷酸鹽緩沖液(4.7)溶解，待凈化。固相萃取柱依次以10ml甲醇，10ml純水， 2ml 5%edta溶液，10ml純水預(yù)淋洗，上樣，以10ml甲醇洗脫，氮?dú)獯抵两?，流?dòng)相準(zhǔn)確定容至2ml，經(jīng)0.45m濾膜過(guò)濾，待hplc分析。注意：所有操作都應(yīng)在避光條件下進(jìn)行。7.4 工作曲線取呋喃西林和呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)中間液，用流動(dòng)相稀釋成濃度為0.1mg/l2. 0 mg/l的標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別取20l進(jìn)樣，以峰高為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)樣品中呋喃西林和呋喃唑酮含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。7.5 色譜測(cè)定取試樣濾液20l進(jìn)樣，記錄峰高，從工作曲線查得樣品提取液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量。若樣液濃度超過(guò)線性范圍，用流動(dòng)相稀釋。8 計(jì)算樣品中呋喃西林和呋喃唑酮的含量按下式計(jì)算。式中：x試樣中呋喃西林和呋喃唑酮的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；c試樣溶液中呋喃西林和呋喃唑酮的含量，單位為毫克每升（mg/l）；m試樣質(zhì)量，單位為克（g）；v試樣溶液體積，單位為毫升（ml）。f提取液的稀釋倍數(shù)。9 方法準(zhǔn)確度和精密度本方法回收率為81.6%-91.6%。本方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為10%。10 方法檢出限本方法檢出限為1.0 mg/kg。11 線性范圍本方法的呋喃西林和呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍為0.10 mg/l -2.0