流式多因子檢測技術(shù).ppt

流式高通量多因子檢測技術(shù)及應(yīng)用,題綱,II. AimPlex多因子檢測技術(shù)的原理和特質(zhì),III.需具備什么樣的實驗條件，才能開展AimPlex檢測工作？,VI. AimPlex產(chǎn)品應(yīng)用,I.多因子檢測技術(shù)在生物醫(yī)藥研究中的應(yīng)用,流式多因子檢測技術(shù) 在生物醫(yī)藥研究中的應(yīng)用,細胞因子與疾病,免疫調(diào)節(jié)作用： 調(diào)節(jié)著每個細胞乃至組織活動； 直接參與了細胞間相互作用以及細胞外微環(huán)境的變化,參與疾病發(fā)生： 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎； 強直性脊柱炎 SLE； 銀屑?。?細胞因子風(fēng)暴,以Th淋巴細胞為樞紐的細胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng),細胞因子與疾病治療,多因子檢測技術(shù),流式多重定量技術(shù) -檢測細胞表面蛋白或胞內(nèi)蛋白,多因子檢測與疾病研究,腫瘤生物學(xué) 免疫相關(guān),代謝 心血管疾病,干細胞研究 神經(jīng)生物學(xué),腫瘤移植 細胞凋亡,更少樣本,高通量,更短時間,多因子檢測涵蓋了很多研究領(lǐng)域,多因子檢測產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于疾病的研究,腫瘤 (如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宮頸癌等) 心血管疾病 (如高血壓、動脈粥樣硬化) 糖尿病、肥胖癥 自閉癥、老年癡呆癥 自身免疫性疾病 (系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、 過敏反應(yīng)等) 炎癥感染 (如結(jié)腸炎、克羅恩氏病、敗血癥等) 傳染性疾病 (如艾滋病、肝炎等) 其它 (如多發(fā)性硬化癥、營養(yǎng)不良、青光眼、阻塞性肺病、銀 屑病等),多因子檢測應(yīng)用領(lǐng)域,開發(fā)研究 大學(xué) 政府專業(yè)管理機構(gòu) 醫(yī)學(xué)中心,藥物研發(fā) 生物技術(shù)企業(yè) 藥物公司,臨床研究 醫(yī)院 醫(yī)學(xué)中心,早期診斷 臨床實驗室 大學(xué)檢測測試中心,實驗室診斷 醫(yī)院 專業(yè)檢測機構(gòu),所有流式細胞儀客戶,基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、生物學(xué)研究 基礎(chǔ)免疫學(xué)研究 細胞生物學(xué)如信號傳導(dǎo)、凋亡 癌癥研究、傳染病等 藥物開發(fā)和療效研究,什么是AimPlex多因子檢測技術(shù)？,AimPlex多因子檢測技術(shù)： 利用不同尺寸、不同熒光強度的多個微球群實現(xiàn)多因子的檢測 利用該技術(shù)，配合任何一臺配備488nm激發(fā)光的流式細胞儀，即可實現(xiàn)24個指標(biāo)的同步檢測。,AimPlex技術(shù)原理,流式細胞儀檢測熒光，從而實現(xiàn)對蛋白抗原的檢測； 結(jié)合抗原標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可實現(xiàn)對蛋白抗原的定量檢測。,一系列熒光強度不同的微球包被有特異性捕獲抗體，與待 測樣本孵育后，加入檢測抗體，形成“三明治”復(fù)合物,不同大小種類微球分布,AimPlex檢測過程,具有488nm激發(fā)光源,AimPlex結(jié)果的提取和分析,流式細胞儀： 幾乎所有流式細胞儀都可以使用，只要,FCAP Array 3.0 軟件可計算被測樣本中待檢物的濃度,標(biāo)準(zhǔn)曲線分析 FCAP array 3.0 Software,曲線自動生成 線性或?qū)?shù)形式顯示 回歸曲線擬合,Human Th1/Th2 Standard: Blank,樣本檢測舉例,Human Th1/Th2 Standard: 14 pg/ml,Human Th1/Th2 Standard: 42 pg/ml,Human Th1/Th2 Standard: 123 pg/ml,Human Th1/Th2 Standard: 370 pg/ml,Human Th1/Th2 Standard: 1,111 pg/ml,Human Th1/Th2 Standard: 3,333 pg/ml,Human Th1/Th2 Standard: 10,000 pg/ml,Human Th1/Th2 unknown 1,Human Th1/Th2 unknown 2,AimPlex優(yōu)勢,高通量，多指標(biāo) 同時檢測一個標(biāo)本多達24個指標(biāo) 需要標(biāo)本量少 節(jié)省樣品（25 L）、試劑、實驗空間、儀器設(shè)備 選擇靈活 研究人員可以根據(jù)實驗需要，自由組合檢測指標(biāo) 耗時短 整個過程只需3個多小時 要求低 - 適用于所有含488激發(fā)光的流式細胞儀 寬范圍，高靈敏 -更寬檢測范圍，高靈敏度，高特異性，高重復(fù)性,更寬的檢測范圍,Lower concentration range standard curve for better calculation of samples with very low AFP concentration,藥明康德客戶需求：檢測小鼠肝癌模型的AFP濃度,AimPlex and Luminex產(chǎn)品對比,人外周血不同處理后分別用Aimplex Th1/Th2/Th17 (7個指標(biāo)）檢測和Luminex試劑盒檢測結(jié)果對比,AimPlex ELISA,VS,例子：40個樣本 7個指標(biāo)：IFN-gamma,IL-10,IL-17A,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha,可供測試的樣品來源高度多樣化,血清 血漿 腦脊液 條件培養(yǎng)基 各種細胞裂解液 各種組織裂解液 - 肺、支氣管、子宮內(nèi)膜組織、肝、脾、腦、宮頸等組織。,淚液 前列腺液 初乳、羊水 各種膿腫液 腹水、肝囊腫液 支氣管肺泡灌洗液 骨裂解液、滑液等 齦溝液、唾液、痰液 血凝塊,普通常見樣品,非常規(guī)樣品,幾乎所有液質(zhì)(fluids)的生物樣本！,小鼠血凝塊樣本檢測,Serum and blood clot lysate samples of mice treated with or without (Con) LPS were tested using AimPlex mouse cytokine assays. This experiment indicates that besides serum, blood clot (after lysed with AimPlex lysis buffer) can be used for measurements of many cytokines in blood and precious serum samples can be saved for other assays.,Page 35,AimPlex產(chǎn)品形式,單因子檢測試劑盒,預(yù)混多因子檢測試劑盒,種屬：人、小鼠、大鼠、靈長類，狗,低價定制,Th1/Th2/Th17 7-plex kit,T輔助細胞對免疫系統(tǒng)的建立和功能健全起重要作用。AimPlex人和鼠及NH PTh 17多重檢測系列產(chǎn)品可同步定量檢測由Th1， Th2，Th17和Treg細胞分泌的細胞因子，為Th細胞功能鑒定提供有效的檢測工具。,IFNgamma, IL-2, IL-4,