07第七章_芳香胺類藥物的分析2

,第二節(jié) 苯乙胺類藥物,Phenethylamine,結構 (Structure),擬腎上腺素類藥物，分子結構中具有苯乙胺基本結構,腎上腺素 (adrenaline) 鹽酸克倫特羅 (clenbuterol hydrochloride) 硫酸沙丁胺醇 (salbutamol sulfate) 鹽酸麻黃堿 (ephedrine hydrochloride),R1 R2 R3 HX,化學性質 (feature),弱 堿 性： 烴胺基側鏈，仲胺氮弱堿性，游離堿難溶于水，易溶于有機溶劑；其鹽可溶于水 酚羥基特性： 鄰苯二酚（或苯酚）結構，與金屬離子絡合呈色；在空氣中或遇光、熱易氧化，色澤變深；在堿性溶液中更易變色。 光學活性：手性碳原子，具有旋光性。 苯環(huán)取代基特性：如鹽酸克倫特羅芳伯氨基； 紫外、紅外吸收特性進行定性、定量分析。,鑒別試驗 (identification),與三氯化鐵反應、與甲醛硫酸反應,鑒別試驗 (identification),氧化反應（酚羥基，易被碘、過氧化氫、鐵氰化鉀氧化呈現(xiàn)不同顏色）,腎上腺素,碘或過氧化氫,中性或酸性,腎上腺素紅,放置,棕紅色多聚體,鹽酸異丙腎上腺素,偏酸性條件,碘,異丙腎上腺素紅,硫代硫酸鈉,重酒石酸 去甲腎上腺素,酒石酸氫鉀飽和液,pH 3.56,碘試液,放置5min,硫代硫酸鈉,溶液為無色或僅顯微紅色或淡紫色,腎上腺素 或鹽酸異丙腎上腺素,明顯的紅棕色 或紫色,淡紅色溶液,鑒別試驗 (identification),紫外特征吸收,紅外特征吸收：上述藥物還可采用紅外吸收光譜進行鑒別。,鑒別試驗 (identification),與亞硝基鐵氰化鈉反應(Rimini試驗),重酒石酸間羥胺,水,溶解,亞硝基鐵氰化鈉試液,丙酮數(shù)滴，碳酸氫鈉少量,紅紫色,脂肪伯氨基的專屬反應 丙酮不含有甲醛,重酒石酸間羥胺的脂肪伯氨基,鑒別試驗 (identification),雙縮脲反應 鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿，芳環(huán)側鏈具有氨基醇結構，可顯雙縮脲特征反應。 例：Chp2000，鑒別鹽酸麻黃堿 方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸銅試液2滴與20%氫氧化鈉液1ml，即顯藍紫色，加乙醚1ml振搖、放置，乙醚層顯紫紅色，水層變?yōu)樗{色。,特殊雜質檢查 (Detection of specific impurities),酮體檢查 生產(chǎn)工藝：酮體氫化還原制得，若氫化不完全則引入酮體雜質。,紫外分光光度法檢查酮體的條件及要求,特殊雜質檢查 (Detection of specific impurities),TLC法檢查有關物質 例：鹽酸去氧腎上腺素、硫酸沙丁胺醇,檢查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取上述溶液適量，加甲醇稀釋成每1ml中含0.10mg的溶液，作為對照溶液。吸取上述兩種溶液各10l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇氯仿濃氨溶液(80:5:15)為展開劑，展開后，晾干，噴以重氮苯磺酸試液使顯色。供試品溶液如顯雜質斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更深。,特殊雜質檢查 (Detection of specific impurities),鹽酸苯乙雙胍中有關雙胍的檢查（Chp2000版） 有關雙胍 取本品1.00g ，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，照紙色譜法（附錄 A）試驗，精密吸取上述溶液0.2ml ，分別點于兩張色譜濾紙條(7.5cm 50cm) 上，并以甲醇作空白點于另一色譜濾紙條，樣點直徑均為0.5 1cm ；照下行法，將上述色譜濾紙條同置展開室內，以醋酸乙酯乙醇水(6:3:1) 為展開劑，展開至前沿距下端約7cm 處，取出，晾干，用顯色劑（取10鐵氰化鉀溶液1ml ，加10 亞硝基鐵氰化鈉溶液與10氫氧化鈉溶液各1ml ，搖勻，放置15min，加水10ml與丙酮 12ml，混勻）噴其中一張點樣紙條（有關雙胍顯紅色帶，Rf值約為0.1 ），參照此色譜帶，在另一張點樣及空白紙條上，剪取其相應部分并向外延伸1cm ，并分剪成碎條，精 密吸取甲醇各20ml分別進行萃取后，照分光光度法（附錄 A），在232nm 的波長處測定吸收度，不得過0.48。,含量測定 (Assay),原 料：非水溶液滴定法、溴量法 制 劑：,比色法,提取容量法,紫外分光光度法,高效液相色譜法,含量測定 (Assay),1、非水溶液滴定法弱堿性 冰醋酸為溶劑 醋酸汞消除氫鹵酸的干擾 結晶紫為指示劑 （鹽酸甲氧明的指示劑為萘酚苯甲醇，也可電位法指示終點） 若堿性較弱則加醋酐使突躍明顯,例：重酒石酸去甲腎上腺素直接滴定 鹽酸克倫特羅加醋酸汞消除氫鹵酸干擾； 由于堿性較弱，電位法指示終點 硫酸沙丁胺醇加入醋酐以增大突躍，結晶紫為指示劑,注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解樣品后應放冷后再加醋酐。,含量測定 (Assay),2、溴量法 基本原理：,測定方法：取本品約0.1g，精密稱定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴 滴定液(0.1mol/L)50ml，再加鹽酸5ml,立即密塞，放置15分鐘并時時振搖，注意微開瓶 塞，加碘化鉀試液10ml ，立即密塞，振搖后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至 近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結果用空白試驗校正。每 1ml溴滴定液(0.1mol/L)相當于3.395mg 的C9H13NO2HCl。,含量測定 (Assay),3、比色法 測定原理：,注意：由于偶合劑（N-(1-萘基)-乙二胺）與亞硝酸也能顯色干擾測定，所以在重氮化后，應加入氨基磺酸銨分解剩余的亞硝酸。,比色法含量測定,例：鹽酸克倫特羅栓（Chp2005） 【含量測定】 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸克侖特羅對照品適量，加鹽酸溶液 (9100)制成每1ml 中含7.2g的溶液。 供試品溶液的制備 取本品20粒，精密稱定，切成小片，精密稱取適量（約相當于 鹽酸克侖特羅0.36mg），置分液漏斗中，加溫熱的氯仿20ml使溶解，用鹽酸溶液(9 100)振搖提取3 次(20ml、15ml、10ml) ，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用鹽酸溶液(9 100)稀釋至刻度，搖勻，濾過，收集續(xù)濾液，即得。 測定法 精密量取對照品溶液與供試品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加鹽酸溶 液(9100)5ml 與0.1 亞硝酸鈉溶液1ml ，搖勻，放置3 分鐘，各加0.5 氨基磺酸 銨溶液1ml ，混勻，時時振搖10分鐘，再各加0.1 鹽酸萘乙二胺溶液1ml,混勻，放置 10分鐘，用鹽酸溶液(9100)稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法（附錄 B），在 500 nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得。,含量測定 (Assay),4、提取酸堿滴定法 原理：溶解性鹽酸鹽或硫酸鹽可溶于水，游離堿不溶于水，溶于有機溶劑。 方法：供試品溶于水或礦酸，加入適量堿性試劑使藥物游離，用適當?shù)挠袡C溶劑提取，將提取液蒸干，殘渣中加中性乙醇溶解，用標準酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量過量的標準酸滴定液，蒸去有機溶劑后，再用標準堿滴定液回滴定）。 例：硫酸苯丙胺加水溶解加氫氧化鈉試液8ml 加氯化鈉使飽和乙醚多次提取合并乙醚液精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振搖低溫蒸去乙醚放冷至室溫加甲基紅指示液2滴用氫氧化鈉（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相當于18.42mg的C18H26N2H2SO4。,含量測定 (Assay),5、熒光分光光度法 基本原理：腎上腺素含有的鄰苯二酚結構，被弱氧化劑氧化，生成腎上腺素紅，發(fā)生轉位為N-甲基-3,5,6-三羥基吲哚（THI）。(Tri- Hydroxyl- Indole-),本法還可用于測定微量兒茶酚胺類藥物。,含量測定 (Assay),6、高效液相色譜法 高效分離，高靈敏度和高選擇性可用于制劑常規(guī)分析，臨床藥物監(jiān)測和體內藥物動力學研究。 例1：重酒石酸去甲腎上腺素注射液分析 色譜條件：色譜柱：ODS 流動相：0.14%庚烷基磺酸鈉溶液甲醇(65:35)，用磷酸調pH至3.00.1，流速：1.0ml/min 檢測波長：280nm 測定方法：精密量取本品適量（約相當于重酒石酸去甲腎上腺素4mg），置25ml量瓶中， 加醋酸溶液（125）稀釋至刻度，搖勻，取2l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重酒石 酸去甲腎腺素對照品適量，精密稱定，加醋酸溶液（125）制成每1ml中含0.16mg的溶液， 同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。,含量測定 (Assay),6、高效液相色譜法 例1：HPLC-EChD法測定血漿中兒茶酚胺類藥物 色譜條件：色譜柱：ODS型鍵合相 流動相：離子對試劑 檢測器：電化學檢測器 供試品溶液的制備：氧化鋁吸附洗脫,含量測定 (Assay),7、衍生化氣相色譜法 例：鹽酸芬氟拉明 (fenfluramine hydrochloride),由于結構中的仲胺基極性極強，使得氣相色譜法測定值波動較大，因此將樣品溶解后經(jīng)堿化乙酸乙酯提取，加入內標，提取液用三氟乙酸酐進行酰化衍生化，將衍生化產(chǎn)物在5%SE-30的色譜柱上分析，用FID檢測器檢測。,第三節(jié) 芳氧丙醇胺類藥物,典型藥物： 氧烯洛爾 (Oxprenolol, 別名烯丙氧心胺，心得平，Tracosal, Trasacor, Trasieor ) 腎上腺素受體阻滯藥 鹽酸卡替洛爾 (Carteolol hydrochloride) 受體阻滯藥,鑒別反應 (identification),化學鑒別 氧烯洛爾：取本品0.1g，加乙醇2ml溶解后，滴加0.1mol/L高錳酸鉀溶液1ml，振 搖數(shù)分鐘，高錳酸鉀顏色消褪，并產(chǎn)生棕色沉淀。 鹽酸卡替洛爾：取本品約0.1g，加水5ml使溶解，加硫氰酸鉻銨試液5滴，即生成淡紅色沉淀。,紫外吸收峰特征 氧烯洛爾水溶液 (40g/ml): 在275nm 的波長處有最大吸收。 鹽酸卡替洛爾 (8g/ml): 在215nm 與252nm的波長處有最大吸收。,鹽酸卡替洛爾的有關物質檢查,TLC法，自身對照法 檢查方法：取本品0.20g，加甲醇10ml使溶解，作為供試品溶液；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照薄層色譜法 (附錄 B)試驗，吸取上述兩種溶液備10l，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨溶液 (50:20:1)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質斑點，與對照溶液的 主斑點比較，不得更深。,含量測定,鹽酸卡替洛爾原料 取本品約0.5g，精密稱定，加冰醋酸30ml，在水浴上加熱溶解，放冷，加醋酐70ml，照電位 滴定法(附錄 A)，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定 液(0.1mol/L)相當于32.88mg的C16H24N2O3HCl。,含量測定,鹽酸卡替洛爾滴眼液 精密量取本品適量，用水定量稀釋制成每1ml中約含鹽酸卡替洛爾16g的溶液，照分光光度法(附錄 A)，在252nm