3種經(jīng)典工藝生產(chǎn)的金銀花提取物中糖類成分含量比較.docVIP

3種經(jīng)典工藝生產(chǎn)的金銀花提取物中糖類成分含量比較作者：陳有根張蓉鄔國慶王志斌【摘要】：目的比較3種經(jīng)典工藝生產(chǎn)的金銀花提取物中果糖、葡萄糖、蔗糖和總糖的含量差異,為指導含金銀花中成藥的生產(chǎn)和質(zhì)量控制提供科學依據(jù)。方法用經(jīng)典的水-醇法、石-硫法和改良石-硫法生產(chǎn)金銀花提取物樣品,用高效液相-梯度洗脫法測定3種提取物樣品中果糖、葡萄糖和蔗糖含量,用分光光度法測定3種提取物樣品中總糖含量。結(jié)果3種提取物中果糖含量分別為5.44%、3.47%、4.74%,葡萄糖含量分別為4.35%、2.73%、4.21%,蔗糖含量分別為17.41%、8.47%、14.47%,總糖含量分別為50.63%、41.12%、35.90%。結(jié)論測定了金銀花提取物中除綠原酸類以外的36%51%總成分含量,并揭示了其中19%27%的化學成分組成為果糖、葡萄糖、蔗糖?！娟P(guān)鍵詞】金銀花提取物果糖葡萄糖蔗糖Abstract：ObjectiveTodeterminethecontentsoffructose,glucose,sucroseandtotalsaccharideinhoneysuckleextractswhichwereproducedbythreeclassicalmethods,toprovidescientificdataforproducingandcontrollingofthosepatentmedicinescontaininghoneysuckleextract.MethodsThreeclassicalextractmethodswereusedforproducinghoneysuckleextracts.HPLC-ELSDmethodwasusedfordeterminingthecontentsoffructose,glucose,sucrose,andaspectrophotometricdeterminationmethodwasusedfordeterminingthecontentsoftotalsaccharide.ResultsThecontentsoffructoseinthreehoneysuckleextractswere5.44%,3.47%,4.74%,glucosewere4.35%,2.73%,4.21%,glucosewere17.41%,8.47%,14.47%,andtotalsaccharidewere50.63%,41.12%,35.90%,respectively.ConclusionAbout36%51%oftotalcomponentsofhoneysuckleextractsweredeterminedexceptchlorogenicacids,and19%27%ofcomponentsintheextractswerefructose,glucose,sucrose.Keywords：honeysuckleextract；fructose；glucose；sucroses金銀花為常用中藥,來源于忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾,具有清熱解毒、涼散風熱的功能。金銀花提取物是生產(chǎn)多種中成藥制劑的中間原料。中華人民共和國藥典和衛(wèi)生部藥品標準中收載的金銀花提取物的生產(chǎn)工藝有3種,即：水-醇法1、石-硫法2和改良石-硫法3,它們均屬于有法定標準的工藝方法。用這3種工藝生產(chǎn)的提取物分別作為雙黃連、茵梔黃和銀黃注射液的中間原料。這3種注射劑在臨床都有十余年的使用歷史,其療效得到眾多臨床醫(yī)生和患者的肯定。關(guān)于金銀花提取物的質(zhì)量控制報道較多,多數(shù)以綠原酸含量作為控制指標,未見用糖類成分作為指標對金銀花提取物進行質(zhì)量控制研究的報道。本試驗采用RP-HPLC-ELSD法測定了3種經(jīng)典工藝生產(chǎn)的金銀花提取物中果糖、葡萄糖和蔗糖含量,本研究可為含金銀花中藥注射劑的生產(chǎn)和質(zhì)量控制提供具有實用價值的實驗數(shù)據(jù)。1儀器與試藥Agilent-1100高效液相色譜儀,四元泵,自動進樣器,柱溫箱,AlltechELSD2000ES檢測器,AgilentA10.02工作站。島津UV-2450PC型可見-紫外分光光度儀。果糖、葡萄糖和蔗糖對照品(中國藥品生物制品檢定所提供)；金銀花藥材(采自山東省平邑縣白彥鎮(zhèn))。乙腈為色譜純,水為去離子水,其它試劑均為分析純,苯酚重蒸后用水配成5%的溶液。2方法與結(jié)果2.1果糖、葡萄糖和蔗糖的含量測定2.1.1色譜條件色譜柱：Inertsil-NH2(4.6mm250mm,5m)；流動相：乙腈-水(7822)；流速：1mL/min；柱溫：30；ELSD檢測器氮氣流速2.2L/min,漂移管溫度85。2.1.2供試品溶液的制備取金銀花提取物A、B、C細粉300mg(3種提取物樣品的制備方法見文獻4),精密稱定,分別置50mL量瓶中,加70%乙醇至刻度,超聲(600W)處理10min,0.45m微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,備用。2.1.3線性關(guān)系考察分別精密稱取果糖、葡萄糖和蔗糖適量,加70%乙醇制成每1mL含果糖1.484mg、葡萄糖1.456mg和蔗糖2.648mg的混合對照品溶液。精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,置10mL量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻,制成系列混合對照品溶液。按上述色譜條件分別進樣10L,以進樣量的自然對數(shù)(lnm)為橫坐標,峰面積的自然對數(shù)(lnA)為縱坐標,計算,得果糖的回歸方程為：lnA1.3086lnm7.9464,r0.9996,線性范圍為0.7287.280g；葡萄糖的回歸方程為：lnA1.2771lnm7.9793,r0.9996,線性范圍為0.7427.420g；蔗糖的回歸方程為：lnA1.2577lnm7.9826,r0.9999,線性范圍為1.32413.420g。2.1.4系統(tǒng)適應性在上述色譜條件下測定,結(jié)果表明,理論塔板數(shù)以果糖峰計算為12745,以葡萄糖峰計算為5578,以蔗糖峰計算為13425(見圖1)。2.1.5精密度試驗取果糖、葡萄糖和蔗糖質(zhì)量濃度分別為0.2968、0.2912和0.7944mg/mL的混合對照品溶液,連續(xù)進樣5次,每次10L,以果糖、葡萄糖和蔗糖的峰面積計算進樣精密度,RSD分別為1.62%、1.59%和1.50%。2.1.6重復性試驗取提取物C,按供試品溶液制備方法制備5份供試液,依法測定,計算,得果糖平均含量為4.74%(RSD1.43%),葡萄糖平均含量為4.21%(RSD1.52%),蔗糖平均含量為14.47%(RSD1.49%)。2.1.7穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液,每隔2h進樣測定,結(jié)果5次測定的果糖、葡萄糖和蔗糖的峰面積基本不變,RSD分別為1.03%、1.12%、1.46%,表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。2.1.8加樣回收率試驗取已測定含量的提取物C細粉150mg,5份,精密稱定,分別置50mL量瓶中,精密加入果糖、葡萄糖和蔗糖質(zhì)量濃度分別為0.2968、0.2912和0.7944mg/mL的混合對照品溶液25mL,再加70%乙醇至刻度,超聲(600W)處理10min,0.45m微孔濾膜濾過,依法測定,計算回收率,結(jié)果見表1表3。表1果糖加樣回收率試驗結(jié)果(略)表2葡萄糖加樣回收率試驗結(jié)果(略)表3蔗糖加樣回收率試驗結(jié)果(略)2.1.9樣品測定取上述3種金銀花提取物,按“2.1.2”項下操作制備供試品溶液,各3份,按上述色譜條件測定果糖、葡萄糖、蔗糖的含量,結(jié)果見表4。表4樣品含量測定結(jié)果(略)2.2總糖含量測定2.2.1供試品溶液的制備取金銀花提取物細粉100mg,精密稱定,置50mL量瓶中,加水至刻度,超聲處理10min,取出,冷卻至室溫,精密吸取1mL,置25mL量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得。2.2.2檢測波長的確定取顯色后的對照品和供試品溶液,在400700nm波長范圍內(nèi)進行掃描,結(jié)果表明,對照品溶液和供試品僅在490nm處有1個吸收峰,因此,選擇490nm作為檢測波長。2.2.3線性關(guān)系考察精密稱取無水葡萄糖對照品,加水使溶解制成每1mL含無水葡萄糖0.0446mg的對照品溶液。分別精密量取對照品溶液2、4、6、8、10mL,置10mL量瓶中,加水至刻度,搖勻,制得系列對照品溶液。分別精密吸取系列對照品溶液2mL于具塞試管中,加5%苯酚試液1.0mL,混勻,迅速加5.0mL濃硫酸,密塞,搖勻,置沸水浴加熱15min,取出,迅速置冰水中冷卻,以5%的苯酚-硫酸溶液為空白,于490nm處測定吸收值。以對照品濃度(C)為橫坐標,吸收度(A)為縱坐標,計算回歸方程為：A14.589C0.1311,r0.9992(n3)。結(jié)果表明,葡萄糖在8.9244.60g/mL濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。2.2.4精密度試驗取金銀花提取物C細粉100mg,精密稱定,置50mL量瓶中,加水至刻度,超聲處理10min,取出,冷卻至室溫,精密吸取1mL,置25mL量瓶中,加水至刻度,搖勻,精密吸取2mL,5份,依法顯色,測定吸收值,結(jié)果RSD0.27%。2.2.5重復性試驗取金銀花提取物C細粉100mg,5份,精密稱定,分別置50mL量瓶中,依法處理,顯色,測定吸收值,計算,得總糖平均含量為35.90%(RSD1.32%)。2.2.6顯色穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液,測定時間-吸收值曲線,結(jié)果在30min內(nèi)吸收值基本不變,表明供試品溶液顯色后在30min內(nèi)穩(wěn)定。2.2.7加樣回收率試驗取金銀花提取物C細粉50mg,5份,精密稱定,分別置50mL量瓶中,分別精密加入無水葡萄糖對照品30mg,加水至刻度,依法處理,顯色,測定吸收值,計算回收率,結(jié)果見表5。表5總糖加樣回收率試驗結(jié)果(略)2.2.8樣品測定分別取金銀花提取物細粉100mg,精密稱定,置50mL量瓶中,依法處理,顯色,測定吸收值,計算含量,結(jié)果見表6。表6總糖樣品含量測定結(jié)果(略)3討論雙黃連、茵梔黃和銀黃注射液是目前國內(nèi)使用最廣的3種含金銀花的中藥注射劑,在臨床都有十余年的使用歷史,以其療效好、起效快、給藥方便而得到眾多臨床醫(yī)生和患者的肯定。然而,近年來頻頻發(fā)生的危及患者生命安全的中藥注射劑不良反應(其中含金銀花的中藥注射劑尤其突出),又使人們對中藥注射劑的認識蒙上了一層面紗。因此,中藥注射劑中功效成分以外的化學組分也成了此類制劑質(zhì)量控制的關(guān)注焦點。我們曾經(jīng)報道了上述3種金銀花提取物樣品中的綠原酸、3,5-二咖啡酰基奎寧酸和總綠原酸的含量4,本實驗分別用HPLC方法測定了這3種提取物中除綠原酸類成分外18%27%的化學組分,用分光光度法測定了其中除總綠原酸以外36%51%的總成分含量,使我們對含金銀花的中藥注射劑的組分有了更明確的了解。本實驗結(jié)果可為指導含金銀花中藥注射劑的生產(chǎn)以及質(zhì)量控制提供具有實用價值的研究方法和實驗數(shù)據(jù),