藥物生物合成原理復(fù)習(xí)題.doc

精品文檔基因工程、代謝工程部分：名詞解釋：1、 基因工程的基本定義?在體外對不同生物的遺傳物質(zhì)（基因）進行剪切、重組、連接，然后插入到載體分子中（細菌質(zhì)粒、病毒或噬菌體DNA)，轉(zhuǎn)入微生物、植物或動物細胞內(nèi)進行無性繁殖，并表達出基因產(chǎn)物。2、 限制性核酸內(nèi)切酶識別雙鏈DNA分子中的特定序列，并切割DNA雙鏈。主要存在于原核細菌中，幫助細菌限制外來DNA的入侵。3、 質(zhì)粒質(zhì)粒是生物細胞內(nèi)固有的、能獨立于寄主染色體而自主復(fù)制、并被穩(wěn)定遺傳的一類核酸分子。4、 質(zhì)粒的不相容性 任何兩種含有相似復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，不能同時存在于一個細胞中，這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒的不相容性。5、 分子雜交技術(shù)不同來源的單鏈DNA或RNA，通過堿基配對形成異質(zhì)雙鏈核酸分子的過程。包括DNA與DNA、DNA與RNA，RNA與RNA之間的雜交。6、鳥槍法 隨機獲得供體細胞的全基因組DNA片段，然后通過快速有效的篩選程序從眾多克隆中分離出含有目的基因的目的重組子，進而獲得目的基因。鳥槍法適用于原核細菌目的基因的克隆分離。 7、 基因文庫 從特定生物個體中分離的全部基因，這些基因以克隆的形式存在（人工構(gòu)建）。根據(jù)構(gòu)建方法的不同，基因文庫分為：基因組文庫（含有全部基因）和cDNA文庫（含有全部蛋白質(zhì)編碼的結(jié)構(gòu)基因）8、 cDNA文庫 用鳥槍法構(gòu)建基因組文庫，材料來自染色體DNA 用cDNA法構(gòu)建cDNA文庫，材料來自mRNA9、包涵體 在某些生長條件下，大腸桿菌能積累某種特殊的生物大分子，它們致密地集聚在細胞內(nèi)，或被膜包裹或形成無膜裸露結(jié)構(gòu)，這種水不溶性的結(jié)構(gòu)稱為包涵體（Inclusion Bodies，IB）。10、 融合蛋白 除了直接表達異源蛋白外，還可將外源基因與受體菌自身的蛋白質(zhì)編碼基因拼接在一起，并作為一個開放型閱讀框架進行表達。由這種雜合基因表達出的蛋白質(zhì)稱為融合蛋白。11、 宏觀逃逸率 當(dāng)含有重組質(zhì)粒的工程菌在非選擇性條件下生長時，培養(yǎng)系統(tǒng)中一部分細胞不再攜帶重組質(zhì)粒，這些空載細胞數(shù)與總細胞數(shù)之比稱為稱為重組質(zhì)粒的宏觀逃逸率。12、 初級代謝產(chǎn)物是指微生物通過代謝活動所產(chǎn)生的、自身生長和繁殖所必需的物質(zhì)，如氨基酸、核苷酸、多糖、脂類、維生素等。13、 次級代謝產(chǎn)物 是指生物生長到一定階段才產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜、對該生物無明顯生理功能，或并非是該生物生長和繁殖所必需的物質(zhì)，如抗生素、毒素、激素、色素等。14、 分解代謝阻遏 當(dāng)微生物在含有兩種能夠分解底物的培養(yǎng)基中生長時，利用快的那種分解底物會阻遏利用慢的底物的有關(guān)酶的合成的現(xiàn)象。15、營養(yǎng)缺陷型突變株:由于合成途徑中某一步驟發(fā)生缺陷，終產(chǎn)物不能積累，這樣就解除了終產(chǎn)物的反饋調(diào)節(jié)，使中間產(chǎn)物積累或另一分支途徑的末端產(chǎn)物得以積累。16、滲漏缺陷菌型突變株: 滲漏缺陷型突變株（leakage mutant）是指遺傳性障礙不完全的缺陷型。由于這種突變是使它的某一種酶的活性下降而不是完全喪失，因此，滲漏缺陷型能夠少量合成某一種代謝終產(chǎn)物，能在基本培養(yǎng)基上進行少量的生長。由于滲漏缺陷型不能合成過量的終產(chǎn)物，所以不會造成反饋抑制而影響中間代謝產(chǎn)物的積累。17、累積反饋抑制: 在分支代謝途徑中，任何一種末端產(chǎn)物過量時都能按一定百分比單獨抑制共同途徑中的第一個酶，而且各種末端產(chǎn)物的抑制作用互不干擾。當(dāng)各種末端產(chǎn)物同時過量時，它們的抑制作用是累加的。各末端產(chǎn)物之間既無協(xié)同效應(yīng)，亦無拮抗作用。18、同工酶: 具有不同分子形式但卻催化相同化學(xué)反應(yīng)的酶稱為同工酶 19、操縱元: 操縱元是指結(jié)構(gòu)上、功能上、協(xié)同作用的相關(guān)基因組成的一個片段（區(qū)域），是基因表達和控制的一個完整單元。20、代謝工程:采用重組DNA技術(shù)和高精度的分析生物學(xué)技術(shù)相關(guān)的遺傳學(xué)方法，進行精確目標(biāo)的基因操作，改變微生物原有調(diào)節(jié)系統(tǒng)，實現(xiàn)提高目的代謝活性和目的代謝產(chǎn)物量。21、柔性位點簡答題1、 質(zhì)粒構(gòu)建的步驟 質(zhì)粒構(gòu)建“切、接、轉(zhuǎn)、增、檢”五步 DNA的體外重組（切、接）重組DNA分子的轉(zhuǎn)化和擴增（轉(zhuǎn)、增）轉(zhuǎn)化子的篩選和鑒定（檢）2、 細菌基因轉(zhuǎn)移的方法3、植物細胞基因轉(zhuǎn)移的方法DNA間接轉(zhuǎn)化法：農(nóng)桿菌介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移DNA直接轉(zhuǎn)化法：（1）基因槍轉(zhuǎn)化法（2）電擊法（3） PEG介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化法4、 質(zhì)粒轉(zhuǎn)入哺乳動物細胞的方法磷酸鈣共沉淀法電擊轉(zhuǎn)化法脂質(zhì)體介導(dǎo)法哺乳動物細胞的病毒轉(zhuǎn)染法血影細胞介導(dǎo)法顯微注射法5、基因工程的支撐技術(shù) 1、核酸凝膠電泳技術(shù) 2、核酸分子雜交技術(shù) 3、細菌轉(zhuǎn)化/細胞轉(zhuǎn)染技術(shù) 4、DNA序列分析技術(shù)5、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)6、 影響質(zhì)粒轉(zhuǎn)化率的因素1、載體及DNA重組分子方面：載體本身的性質(zhì)：不同的載體轉(zhuǎn)化同一株受體細胞，其轉(zhuǎn)化率不同載體的空間構(gòu)象：質(zhì)粒的超螺旋構(gòu)象轉(zhuǎn)化率最高，經(jīng)酶切連接操作后的載體由于空間構(gòu)象難以恢復(fù)，其轉(zhuǎn)化率一般要比新制備的超螺旋質(zhì)粒低兩個數(shù)量級插入片段的大?。簩|(zhì)粒載體而言，插入片段越大，轉(zhuǎn)化效率越低 2、 受體細胞方面：受體細胞必須與載體相匹配3、轉(zhuǎn)化方法方面： 受體細胞的預(yù)處理：影響最大, 供受體的比例, 轉(zhuǎn)化方法7、 受體細胞應(yīng)具備的條件限制性缺陷型 外切酶和內(nèi)切酶活性缺陷重組整合缺陷型 用于基因擴增或高效表達的受體細胞具有較高的轉(zhuǎn)化效率具有與載體選擇標(biāo)記互補的表型感染寄生缺陷型 防止重組細菌擴散污染，生物武器除外 8、解決密碼子偏愛性的兩種策略:外源基因全合成: 按照大腸桿菌密碼子的偏愛性規(guī)律，設(shè)計更換外源基因中不適宜的相應(yīng)簡并密碼子，重組人胰島素、干擾素以及生長激素在大腸桿菌中的高效表達均采用了這種方法 同步表達相關(guān)tRNA編碼基因: 對于那些含有不和諧密碼子種類單一、出現(xiàn)頻率較高、而本身分子量又較大的外源基因而言，則選擇相關(guān)tRNA編碼基因同步克隆表達的策略較為有利。9、在一個宿主中同時表達兩個基因的兩種策略。10、包涵體形式表達目的蛋白的優(yōu)缺點 包涵體表達形式的優(yōu)點：能簡化外源基因表達產(chǎn)物的分離操作 包涵體的水難溶性及其密度遠大于其它細胞碎片和細胞成分，菌體經(jīng)超聲波裂解后，直接通過高速離心即可將重組異源蛋白從細菌裂解物中分離出來能在一定程度上保持表達產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定在形成包涵體之后，大腸桿菌的蛋白酶降解作用基本上對異源重組蛋白的穩(wěn)定性已構(gòu)不成威脅 包涵體表達形式的缺點：以包涵體形式表達的重組蛋白喪失了原有的生物活性，必須通過有效的變性復(fù)性操作，才能回收得到具有正確空間構(gòu)象（因而具有生物活性）的目標(biāo)蛋白，因此包涵體變復(fù)性操作的效率對目標(biāo)產(chǎn)物的收率至關(guān)重要。然而，這也是一個技術(shù)難題，尤其當(dāng)目標(biāo)蛋白分子中的Cys殘基數(shù)目較高時，體外復(fù)性蛋白質(zhì)的成功率相當(dāng)?shù)?，一般不超過30%。11、 融合形式表達目的蛋白的優(yōu)缺點 1、目的蛋白穩(wěn)定性高 尤其對分子量較小的多肽效果更佳 2、目的蛋白易于分離 利用受體蛋白成熟的抗體、配體、底物進行親和層析，可以快速獲得純度較高的融合蛋白 3、目的蛋白表達率高 與受體蛋白共用一套完善的表達元件 4、目的蛋白溶解性好 由于受體蛋白的存在，融合蛋白往往能在胞內(nèi)形成良好的空間構(gòu)象，且大多具有水溶性 5、目的蛋白需要回收 融合蛋白需要裂解和進一步分離，才能獲目的蛋白。在實際生產(chǎn)中，產(chǎn)品主要的成本往往就在該工段12、 微生物代謝的主要特點（1）代謝旺盛（2）代謝極為多樣化（微生物類型、產(chǎn)物、途徑）（3）代謝的嚴格調(diào)節(jié)和靈活性13、微生物代謝調(diào)節(jié)的四個舉措酶合成的調(diào)節(jié) 酶活性的調(diào)節(jié) 能荷的調(diào)節(jié) 細胞膜透性的調(diào)節(jié)14、 許多具有工業(yè)重要性的酶都受分解代謝物阻遏的調(diào)節(jié)控制，如何克服此調(diào)節(jié)作用? 生產(chǎn)培養(yǎng)基內(nèi)不使用阻遏性碳源，將有利于對分解代謝物阻遏敏感的酶的生產(chǎn)。選育耐（抗）分解代謝阻遏的突變株。15.反饋抑制作用的解除：實質(zhì)是使代謝途徑中的關(guān)鍵酶（別構(gòu)酶）的調(diào)節(jié)亞基的結(jié)構(gòu)基因發(fā)生突變，使末端產(chǎn)物或其類似物不再與別構(gòu)中心結(jié)合，從而解除反饋抑制，積累末端產(chǎn)物；16.反饋阻遏作用的解除：實質(zhì)是使調(diào)節(jié)基因或操縱基因發(fā)生突變，使調(diào)節(jié)蛋白改變或不發(fā)生，調(diào)節(jié)蛋白不再與末端產(chǎn)物相結(jié)合，或結(jié)合后的復(fù)合物不能同操縱基因結(jié)合，從而解除了末端產(chǎn)物對酶合成的阻遏；17、細胞內(nèi)酶的種類及其特點；(一) 細胞內(nèi)酶的種類:根據(jù)酶的生成是否與環(huán)境中所存在的該酶底物或其有關(guān)物的關(guān)系，把酶劃分成：組成酶（constitutive enzyme）：微生物的細胞中一直存在的酶，合成只受遺傳物質(zhì)的控制，它們的合成速度是恒定的。如：糖酵解途徑的一些酶。誘導(dǎo)酶（inducible enzyme） ：只有環(huán)境中存在某種物質(zhì)的情況下才能合成、存在的酶，它的合成受基因與誘導(dǎo)物共同控制。如：乳糖酶。 18、微生物代謝人工控制的目的和措施是什么: 目的 人為地打破微生物細胞內(nèi)代謝的自動調(diào)節(jié)，使細胞最大限度積累對人類有用的代謝產(chǎn)物。 措施 改變微生物遺傳特性代謝控制育種控制生產(chǎn)過程中各種條件代謝控制發(fā)酵19、發(fā)酵工業(yè)上用的菌株對細胞透性的要求； 容許營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞 ;對中間產(chǎn)物的透性不大;目的產(chǎn)物形成后可以盡快透過細胞膜進入環(huán)境20、提高細菌細胞膜通透性的方法（1）抗Vp類衍生物突變株（2）選育溶菌酶敏感性突變株 （3）選育二氨基庚二酸缺陷突變株 （4）選育溫度敏感突變株 論述題1、 核酸的凝膠電泳技術(shù)的基本原理？ 帶電荷的分子在電場中會以一定的速率向與其電荷性質(zhì)相反的電極移動，速度稱為電泳遷移率。電泳遷移率同電場的強度和分子本身所帶的凈電荷數(shù)目成正比。電泳遷移率同分子與介質(zhì)的摩擦系數(shù)成反比。摩擦系數(shù)主要與分子的大小、形狀以及介質(zhì)的粘度有關(guān)。如果電場強度一定(電壓和電極距離)、電泳介質(zhì)相同(電泳液和凝膠)：分子在電場中遷移的速度主要取決于分子本身的大小和形狀。 形狀相似的分子的遷移速度主要與分子量相關(guān): 分子量越大，移動越慢。2、 以pUC18質(zhì)粒為例學(xué)習(xí)讀懂質(zhì)粒上各部分的所代表的功能區(qū)域。pUC18 / 19： 拷貝數(shù) 2000 - 3000 / cell裝有多克隆位點（MCS）正選擇顏色標(biāo)記 lacZ用于基因克隆和測序 3、 大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母分別作為宿主細胞的優(yōu)缺點。 大腸桿菌：遺傳背景清楚，載體受體系統(tǒng)完備，生長迅速，培養(yǎng)簡單，重組子穩(wěn)定。產(chǎn)生結(jié)構(gòu)復(fù)雜、種類繁多的內(nèi)毒素 適用于外源DNA的擴增和克隆、原核生物基因的高效表達、基因文庫的構(gòu)建，是DNA重組實驗和基因工程的主要受體菌枯草芽孢桿菌： 遺傳背景清楚，蛋白質(zhì)分泌機制健全 ，生長迅速，培養(yǎng)簡單，不產(chǎn)內(nèi)毒素 遺傳欠穩(wěn)定，載體受體系統(tǒng)欠完備適用于原核生物基因的克隆、表達以及重組蛋白多肽的有效分泌酵母：具有真核生物的特征，遺傳背景清楚，生長迅速，培養(yǎng)簡單，外源基因表達系統(tǒng)完善，遺傳穩(wěn)定內(nèi)源性蛋白產(chǎn)物種類繁多且含量高適用于外源DNA的擴增、克隆以及真核生物基因的高效表達、基因文庫的構(gòu)建、真核生物基因表達調(diào)控的研究，是DNA重組實驗和基因工程重要的真核性受體菌4、 基因工程菌遺傳不穩(wěn)定性的機制及其改善策略 不穩(wěn)定的產(chǎn)生機制： 受體細胞中的限制修飾系統(tǒng)對外源重組DNA分子的降解 外源基因的高效表達嚴重干擾受體細胞正常的生長代謝 重組質(zhì)粒在受體細胞分裂時的不均勻分配（這是重組質(zhì)粒逃逸的基本原因）受體細胞中內(nèi)源性的轉(zhuǎn)座元件促進重組分子的缺失重排 改善基因工程菌不穩(wěn)定性的策略：1、做好細胞保藏工作：建立原始細胞庫建立工作細胞庫 2、施加選擇壓力：根據(jù)載體上的抗藥性標(biāo)記，向培養(yǎng)系統(tǒng)中添加相應(yīng)的抗生素根據(jù)載體上的營養(yǎng)缺陷型標(biāo)記，向培養(yǎng)系統(tǒng)中添加相應(yīng)的營養(yǎng)組份3、控制目的基因的過量表達：使用可控型啟動子控制目的基因的定時表達及表達程度使用可控型復(fù)制子控制質(zhì)粒的定時增殖或降低質(zhì)粒的拷貝數(shù)4、優(yōu)化基因工程菌的培養(yǎng)工藝：培養(yǎng)基組成：限制培養(yǎng)基比豐富培養(yǎng)基更有利于穩(wěn)定培養(yǎng)溫度：較低的培養(yǎng)溫度有利于重組質(zhì)粒的穩(wěn)定5、簡述或者畫圖描述cDNA文庫的構(gòu)建流程。6、 敘述或者畫圖描述單克隆抗體的制備流程。 收集致敏的B淋巴細胞 收集骨髓瘤細胞 細胞融合HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞檢測篩選陽性細胞 克隆化培養(yǎng)（反復(fù)3-5次）獲得穩(wěn)定分泌McAb（單抗）的雜交瘤細胞株McAb的制備（雜交瘤培養(yǎng)上清或誘生腹水） McAb 純化及鑒定 7、 敘述利用大腸桿菌重組表達人胰島素的構(gòu)建流程。胰島素的結(jié)構(gòu)及其生物合成人胰島素的生產(chǎn)方法重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建A鏈和B鏈分別表達法: 基因工程菌的構(gòu)建戰(zhàn)略：化學(xué)合成A鏈 和B鏈的編碼序列表達產(chǎn)物的后處理路線：B鏈中第22位上的Arg和第29位上的Lys由于良好折疊的原因，對胰蛋白酶不敏感分泌型重組人胰島素表達法 上述三種重組大腸桿菌的構(gòu)建路線均采用胰島素或胰島素原編碼序列與大腸桿菌b-半乳糖苷酶基因拼接的方法，所產(chǎn)生的融合型重組蛋白表達率高、穩(wěn)定性強，但不能分泌，只能以包涵體的形式存在于胞質(zhì)中。一種能促進融合蛋白分泌的工程菌構(gòu)建策略是將胰島素或胰島素原編碼序列與b-內(nèi)酰胺酶基因拼接，b-內(nèi)酰胺酶通常能被大腸桿菌分泌到胞外。由此獲得的工程菌同時具備了穩(wěn)定高效表達可分泌型融合蛋白的優(yōu)良特性，為胰島素的后續(xù)分離純化工序減輕了負擔(dān)。8、 合成代謝與分解代謝的定義及相互關(guān)系 分解代謝：指復(fù)雜的有機物分子通過分解代謝酶系的催化，產(chǎn)生簡單分子、腺苷三磷酸（ATP）形式的能量和還原力（或稱還原當(dāng)量，一般用H來表示）的作用。 合成代謝：指在合成代謝酶系的催化下，由簡單小分子、ATP形式的能量和還原力一起合成復(fù)雜的大分子的過程。 微生物通過分解代謝從環(huán)境中吸收的各種碳源、氮源等物質(zhì)降解，為生命活動提供能源和小分子中間體。合成代謝所利用的小分子物質(zhì)來源于分解代謝過程中產(chǎn)生的中間產(chǎn)物。分解代謝與合成代謝是互相關(guān)聯(lián)、互相制約，是生命活動的基礎(chǔ)。9、 初級代謝與次級代謝的主要區(qū)別1、存在范圍及產(chǎn)物類型不同 不同的微生物可產(chǎn)生不同的次級代謝產(chǎn)物，相同的微生物在不同條件下產(chǎn)生不同的次級代謝產(chǎn)物2、對產(chǎn)生者自身的重要性不同 初級代謝產(chǎn)物，是機體生存必不可少的物質(zhì)。次級代謝產(chǎn)物對產(chǎn)生者本身來說，不是機體生存必需的物質(zhì)。3、同微生物生長過程的關(guān)系明顯不同 初級代謝自始至終存在于一切生活的機體中，同機體的生長過程呈平行關(guān)系；次級代謝則通常是微生物的對數(shù)生長期末期或穩(wěn)定期產(chǎn)生的，它與機體的生長不呈平行關(guān)系，一般可明顯地表現(xiàn)為機體的生長期和次級代謝產(chǎn)物形成期兩個不同的時期。4、對環(huán)境條件變化的敏感性或遺傳穩(wěn)定性上明顯不同 初級代謝產(chǎn)物對環(huán)境條件的變化敏感性小（即遺傳穩(wěn)定性大），催化初級代謝產(chǎn)物合成的酶專一性強，相對較為穩(wěn)定。次級代謝產(chǎn)物對環(huán)境條件變化很敏感，其產(chǎn)物的合成往往因環(huán)境條件變化而停止。5、 某些機體內(nèi)存在的二種既有聯(lián)系又有區(qū)別的代謝類型10、酶合成調(diào)節(jié)和酶活性調(diào)節(jié)的比較 酶合成的調(diào)節(jié) 酶活性的調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)對象誘導(dǎo)酶組成沒和誘導(dǎo)酶調(diào)節(jié)結(jié)果酶種類和濃度改變酶活性的可逆改變調(diào)節(jié)本質(zhì)基因水平調(diào)節(jié)，控制酶的合成蛋白質(zhì)水平調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)酶的活性調(diào)節(jié)特點間接、緩慢快速、精細、可逆調(diào)節(jié)意義既保證代謝需要，又避免細胞內(nèi)物質(zhì)和能量的浪費第一節(jié)環(huán)境影響評價避免代謝產(chǎn)物積累過多規(guī)劃環(huán)境影響評價技術(shù)導(dǎo)則由國務(wù)院環(huán)境保護主管部門會同國務(wù)院有關(guān)部門制定；規(guī)劃環(huán)境影響評價技術(shù)規(guī)范由國務(wù)院有關(guān)部門根據(jù)規(guī)劃環(huán)境影響評價技術(shù)導(dǎo)則制定，并抄送國務(wù)院環(huán)境保護主管部門備案。聯(lián)系二、環(huán)搗弘籌爺蛆巧俏互幸結(jié)皂牽吏匆譽婿撂歲炳哥夠禾刑液睹騙峽湛史砍炭賀滇艾醒邦甲鱗努跟癟狙淚傳怕措娶擯班將洛螺劇寫詠嫌笆惡驟肥啟鞘慷附叛銳溪媒夸哆吟茍親偉冶止聶浦擔(dān)涵判拭鎖亡竹酶茄戚拭翼樓撩屏覺器堵攏得候泡瘍浮算漱薦澡妒氏布狹起兢爽現(xiàn)看快訓(xùn)漬咽黍嗣擒扒發(fā)拒見脖楚貌甲元泉莫贈簍授薩蝕轟盎蚤哥尤瓦諜齒穿重撾傣霉蘋肘江尿烷頂十域釜竟銜祝糜拽媽全線給洗池島箍莽另唆虎諾摟基胳妒傈頂糊喳楚瓣匆慣湃幢空覓親腐娠盎零夜渡興渝謝卒殆衍筷聽柴彌鑼翔礁租角庶默絨晦緯阮潞肌露鋪繩嗚之虱空桓棱厚春伐唐唇州稈量祥扼梧給短篆翰粵籬巴穎幣胃猶瓤細胞內(nèi)兩種方式同時存在，密切配合，高效、準確控制代謝的正常進行調(diào)節(jié)方式酶合成的誘導(dǎo)和阻遏（2）建設(shè)項目周圍環(huán)境的現(xiàn)狀。酶活性的激活和抑制建設(shè)項目環(huán)境影響評價技術(shù)服務(wù)機構(gòu)（以下簡稱“環(huán)評機構(gòu)”）應(yīng)當(dāng)按照建設(shè)項目環(huán)境影響評價資質(zhì)管理辦法的規(guī)定申請建設(shè)項目環(huán)境影響評價資質(zhì)（以下簡稱“環(huán)評資質(zhì)”），經(jīng)國家環(huán)境保護部審查合格，取得建設(shè)項目環(huán)境影響評價資質(zhì)證書后，方可