臨床常見標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)..ppt

,臨床常見標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn),主要內(nèi)容,1.臨床常見標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本二、痰及下呼吸道標(biāo)本三、尿液標(biāo)本四、大便標(biāo)本五、生殖道系統(tǒng)標(biāo)本六、化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本七、穿刺液標(biāo)本八、眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本九、組織標(biāo)本,一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本,（一）血培養(yǎng)檢測采血指征臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血液感染的患者1.發(fā)熱（38）或低溫（36）2.寒戰(zhàn)3.白細(xì)胞增多（10109/l，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞增多）4.粒細(xì)胞減少（成熟的多核白細(xì)胞104cfu/ml時(shí)有臨床診斷意義。（不是絕對的，受多因素影響，綜合判斷）2.尿液標(biāo)本的采集和培養(yǎng)中的問題是污染雜菌，故應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。3.尿標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，以免污染，尿液中不得加防腐劑和消毒劑。,4.除非是流行病學(xué)調(diào)查，長期留置導(dǎo)尿管患者常規(guī)尿培養(yǎng)沒有臨床意義，大量病原菌常可在這類患者中檢出，導(dǎo)尿管留置時(shí)間延長易導(dǎo)致與引起患者尿道感染不一致的微生物定植生長；5.不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本，集尿袋內(nèi)的尿液也不能用于培養(yǎng)，可能會引起污染；6.臨床常讓患者留取清潔中段尿，應(yīng)該在醫(yī)護(hù)人員監(jiān)督指導(dǎo)下讓患者正確的留取清潔中段尿；7.由于種種原因，患者常常不能正確地留取清潔中段尿，實(shí)驗(yàn)室只是針對尿液標(biāo)本培養(yǎng)的結(jié)果進(jìn)行評估，或常常由于分析前尿液標(biāo)本污染了多種細(xì)菌無法正確解釋的結(jié)果，可能延誤了臨床的正確診斷和治療。,下列因素可使尿液中細(xì)菌數(shù)量減少，判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)注意,使用抗生素治療，細(xì)菌生長受到抑制；尿液稀釋，尿比重1.003，營養(yǎng)成分減少，細(xì)菌生長遲緩；尿ph5.0或8.5，細(xì)菌生長受阻；尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短，菌落數(shù)減少；尿道口消毒液混入標(biāo)本中，影響細(xì)菌繁殖，菌落數(shù)減少；不同種類的細(xì)菌生長速度不同、營養(yǎng)要求不同，菌落計(jì)數(shù)有所不同。,接種方式,接種于血平板；置于35普通溫箱；18-24小時(shí)后觀察。采用1ul或者10ul定量接種環(huán)。,尿培養(yǎng)的劃線方式,1ul接種環(huán)：菌落數(shù)*1000/ml10ul接種環(huán)：菌落數(shù)*100/ml5ul接種環(huán)：菌落計(jì)數(shù)*200/ml,尿培養(yǎng)結(jié)果評價(jià),正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受到下尿道中正常菌群的污染而出現(xiàn)細(xì)菌。因此對不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正確評價(jià)，才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般認(rèn)為，清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)105cfu/ml可能為感染；5104cfu/ml可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行評估（表1）。,表1不同方法采集的尿標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果評價(jià),標(biāo)本來源菌落數(shù)cfu/ml結(jié)果評價(jià),清潔中段尿,5104,無意義，僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長,純培養(yǎng)有意義，報(bào)告菌落計(jì)數(shù)和菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果；混合菌生長無意義，僅做革蘭染色鏡檢，并報(bào)告鏡檢結(jié)果,(510)104,純培養(yǎng)或混合菌生長，其中某種細(xì)菌數(shù)105者有意義，需進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長無意義，報(bào)告標(biāo)本污染,105,3種以內(nèi)細(xì)菌生長都有意義，對2種主要生長菌需進(jìn)行菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長無意義，報(bào)告標(biāo)本污染,103,導(dǎo)尿,都有意義，所有細(xì)菌均需做菌種鑒定及藥敏試驗(yàn),任意數(shù)目,恥骨上膀胱穿刺,陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告,培養(yǎng)48h無菌落生長，即為陰性。接種1ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)103cfu/ml”；接種10ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)102cfu/ml”。,陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告,應(yīng)報(bào)告細(xì)菌種屬名稱、菌落計(jì)數(shù)和藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。如：大腸埃希菌生長，菌落計(jì)數(shù)105cfu/ml，藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果：,菌落計(jì)數(shù)105cfu/ml只是診斷尿路感染的一般標(biāo)準(zhǔn)。對一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言，如果僅使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋，那么若標(biāo)準(zhǔn)制定過松，將會造成抗生素濫用和不必要的資源浪費(fèi)；制定過嚴(yán)，將有可能導(dǎo)致尿路感染的漏診。所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在與臨床醫(yī)生密切合作的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的情況制定不同的解釋標(biāo)準(zhǔn)。尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影響，在一些患者即使菌落計(jì)數(shù)較少，也有明顯的臨床意義，所以對菌落計(jì)數(shù)5104cfu/ml，“規(guī)范”中認(rèn)為無意義的陽性結(jié)果，不應(yīng)隨意丟棄，必要時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)生聯(lián)系后，決定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。,四、大便培養(yǎng)標(biāo)本,最常見于感染性腹瀉：1.吸收不良性腹瀉；輪狀病毒、腺病毒、隱孢子蟲、致病性大腸埃希菌.2.分泌性腹瀉（腸毒素性腹瀉）；霍亂弧菌、產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌.3.侵襲性腹瀉（滲出性腹瀉）；沙門菌屬、耶爾森菌、溶組織內(nèi)阿米巴、侵襲性大腸埃希菌4.抗生素相關(guān)性腹瀉,（一）采集時(shí)間腹瀉患者應(yīng)在急性期，并盡可能在使用抗生素之前采集新鮮糞便；傷寒患者在發(fā)病2周以后。（二）采集方法1自然排便采集法自然排便后，挑取有膿血或黏液部位的糞便2-3g，液狀糞便取絮狀物盛于無菌的容器內(nèi)或置于保存液或增菌液中送檢。2直腸拭子采集法對不易獲得糞便或排便困難的患者及嬰幼兒，可采用直腸拭子法采集標(biāo)本，其方法是將拭子前端用甘油濕潤。然后插入肛門約45cm（幼兒約23cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦取直腸表面粘液后取出，盛入無菌試管或保存液中送檢。,（三）實(shí)驗(yàn)室檢查腸道細(xì)菌大多為革蘭陰性桿菌，且因糞便標(biāo)本中有各種正常菌群，形態(tài)上區(qū)分困難，因此一般不做直接涂片檢查。只有當(dāng)臨床懷疑腸道菌群失調(diào)或檢查霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌、疑似葡萄球菌或難辯梭菌引起的偽膜性腸炎以及真菌性腹瀉時(shí)，才做直接涂片檢查。疑似葡萄球菌引起的抗菌素相關(guān)性腸炎，可取水樣便或腸黏膜樣物涂片，革蘭染色后鏡檢，見革蘭陰性桿菌明顯減少，革蘭陽性球菌大量散在或成堆（葡萄狀）排列，可提示腸道菌群失調(diào)。,（四）注意事項(xiàng),在腹瀉發(fā)病的正確時(shí)間收集標(biāo)本，病人應(yīng)盡量在急性期（3d）內(nèi)和用藥前采集標(biāo)本，以提高檢出率。大便標(biāo)本中含有很多雜菌，糞便標(biāo)本的采集須注意防止外界臟物污染，盡量采用無菌容器。為提高陽性檢出率，要采集新鮮標(biāo)本，立即送檢。,標(biāo)本接種,一細(xì)菌性痢疾、傷寒感染（沙門、志賀）取標(biāo)本接種于ss瓊脂平板或麥康凱平板或xld平板，置于35普通溫箱，18-24小時(shí)后觀察。二偽膜性腸炎（難辨梭狀芽孢桿菌）接種于ccfa平板和厭氧血瓊脂平板，置于37普通溫箱，48小時(shí)后觀察。三霍亂感染標(biāo)本接種于堿性蛋白胨水，35培養(yǎng)6-8h后轉(zhuǎn)種于慶大霉素瓊脂平板或ss瓊脂平板，35普通溫箱，18-24小時(shí)后觀察。四其他感染真菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、空腸彎曲菌。,接種方式,四區(qū)劃線，每區(qū)均換環(huán)。,五、生殖道標(biāo)本,（一）送檢指征1.男性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)尿急、尿頻、尿痛尿道分泌物增多會陰部疼痛及陰囊疼痛性功能障礙泌尿生殖器畸形和缺損,2.女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)分泌物增多及性狀異常尿道口搔癢及膿性分泌物流暢下腹疼痛月經(jīng)失調(diào)陰道出血外陰搔癢外陰或陰道疼痛性功能障礙,（二）標(biāo)本采集生殖器官標(biāo)本包括子宮頸、陰道、前列腺；男性及女性外生殖器的分泌物及經(jīng)血等。應(yīng)根據(jù)感染的部位和可能的病原體決定用于病原學(xué)診斷的標(biāo)本種類、采集部位和采集方法等。陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌試管內(nèi)送檢。,尿道分泌物1.女性尿道：患者排尿1小時(shí)后采集，首先拭去尿道口的滲出物；再用拭子通過陰道，靠著恥骨聯(lián)合，按摩尿道，采集分泌物；如未獲得分泌物，清洗外尿道，用滅菌紗布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道24cm，旋轉(zhuǎn)拭子2秒。2.男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm，旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收。,陰道分泌物擦除過多的分泌物和排出液，用無菌棉拭子采取陰道口內(nèi)4厘米內(nèi)側(cè)壁或后穹窿處分泌物，如果需要涂片，需再用一個(gè)拭子。男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，沖洗尿道膀胱，從肛門用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用無菌容器收集。無肉眼可見膿液時(shí)，可用滅菌拭子輕輕伸入前尿道內(nèi)，旋轉(zhuǎn)拭子采集標(biāo)本。,（三）注意事項(xiàng)1.生殖器是開放性器官，標(biāo)本采集過程中應(yīng)嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)程以減少雜菌污染。2.由于陰道正常菌群的存在而使細(xì)菌的分離鑒定受到干擾，所以在采集女性生殖道標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意盡量減少或避免正常菌群的污染。3.疑有宮腔感染，如遇產(chǎn)婦需行剖宮產(chǎn)，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時(shí)取嬰兒耳拭子一同送檢。4.沙眼衣原體和病毒均在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，取材時(shí)拭子應(yīng)在病變部位（移行上皮處稍內(nèi)）停留十幾秒鐘，并采集盡可能多的上皮細(xì)胞。,5.生殖道感染厭氧菌也較多見，疑有厭氧菌感染時(shí)，標(biāo)本采集和運(yùn)送應(yīng)避免與氧氣接觸，最佳方法是床邊采樣，直接接種至厭氧裝置內(nèi)。6.淋病奈瑟菌檢查時(shí)，取材的深度一定要夠，因?yàn)榱芮蚓冒l(fā)于柱狀上皮細(xì)胞而不是復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞。不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深轉(zhuǎn)動(dòng)并停留10-30s取樣送檢。7.淋病奈瑟菌抵抗力低，對外環(huán)境變化頗為敏感，對寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后要盡快送檢，立即接種，標(biāo)本離體時(shí)間越短越好。,直接接種于巧克力培養(yǎng)基，置于5%co2溫箱內(nèi)，18-24小時(shí)后觀察。,六、化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本,組織或器官的化膿性感染，其病原菌的來源可分為兩類：內(nèi)源性：感染源是炎癥局部周圍器官中的正常菌群，由于損傷等因素進(jìn)入無菌狀態(tài)的組織內(nèi)，發(fā)生感染。外源性：感染源是存在于人體外部自然界的微生物，由于外傷和直接接觸通過人體表面進(jìn)入人體，造成感染。膿液的細(xì)菌學(xué)檢查對于確定感染的種類（結(jié)核性或非結(jié)核性等）、提供藥物敏感結(jié)果和指導(dǎo)臨床治療有重要的意義。,（一）標(biāo)本采集1開放性感染和已潰破的化膿灶標(biāo)本采集前先用滅菌生理鹽水拭去表面滲出物，盡可能用抽吸或?qū)⑹米由钊雮冢o貼傷口前沿取樣，從膿腫底部或膿腫壁取樣，效果最好。慢性感染，污染嚴(yán)重，很難分離到致病菌，可取感染部位下的組織，研磨成組織勻漿接種于適宜的培養(yǎng)基。2封閉性膿腫局部消毒后用針及注射器抽吸膿腫壁，將所有物質(zhì)置于無菌試管內(nèi)送檢，疑為厭氧菌感染時(shí)立即作床邊接種或置于厭氧轉(zhuǎn)運(yùn)裝置送檢（針頭插一橡皮塞隔絕空氣）。但取樣時(shí)，可能會帶入與感染過程無關(guān)的定植細(xì)菌。3大面積創(chuàng)傷感染：可取感染組織塊或沾有膿汁的內(nèi)層敷料送檢。,（二）注意事項(xiàng)細(xì)菌對干燥敏感或只能采集少量標(biāo)本時(shí)，用棉拭子采集標(biāo)本后立即放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，或采標(biāo)本前先將棉拭子沾少許肉湯以保持標(biāo)本濕度。對于不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4保存，培養(yǎng)淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。盡可能在用藥前采集標(biāo)本。采樣前病灶局部應(yīng)避免用抗菌藥物或消毒劑。革蘭染色對標(biāo)本進(jìn)行評估。涂片中如出現(xiàn)上皮細(xì)胞提示標(biāo)本已被污染。沒有上皮細(xì)胞而有白細(xì)胞說明標(biāo)本采集正確。有的創(chuàng)傷均可有細(xì)菌污染，但不一定發(fā)生感染，因此對分離到的細(xì)菌要根據(jù)創(chuàng)傷的情況、菌量和種數(shù)，收集標(biāo)本的處理過程、機(jī)體免疫力及抗生素的使用情況等多種因素來分析判斷。,標(biāo)本處理,直接涂片，做出初步判斷；接種于血平板，置于35普通溫箱；18-24小時(shí)后觀察。,七、穿刺液標(biāo)本,穿刺液主要包括:腦脊液膽汁胸水腹水心包液關(guān)節(jié)液鞘膜液在正常人體中，上述體液均是無菌的。有感染的情況下檢出的細(xì)菌，在排除污染后應(yīng)視為病原菌，及時(shí)給予正確的治療，使病人早日恢復(fù)健康。,送檢指征,腦脊液：癥狀指征：發(fā)熱等感染性全身癥狀、顱內(nèi)壓升高、腦膜刺激癥狀、神經(jīng)麻痹癥狀、腦脊液常規(guī)及生化變化；懷疑腦膜炎時(shí)。胸水：多伴有胸痛、發(fā)熱、胸腔積液；疑似胸膜炎、胸腔積水；腹水：有積液伴腹痛、嘔吐、肌緊張、腸鳴音弱或消失等。疑似原發(fā)或繼發(fā)性腹膜炎；膽汁：腹痛、黃疸、右上腹壓痛、肌緊張、膽囊區(qū)深吸氣時(shí)有觸痛；疑似膽石癥、膽囊炎、肝膽系統(tǒng)感染等。心包液：發(fā)冷、發(fā)熱、心悸、出汗、乏力及精神癥狀；心前區(qū)疼痛、心包摩擦音、心音明顯減弱、心電圖改變等。疑似心包炎；5關(guān)節(jié)液：關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)周圍肌肉發(fā)生保護(hù)性痙攣；疑似化膿性關(guān)節(jié)炎。,（一）腦脊液1.采集時(shí)間：懷疑為腦膜炎的病人，應(yīng)立即采集腦脊液，最好在使用抗菌藥物以前采集標(biāo)本。2.采集方法：用腰穿方法采集腦脊液35ml，分裝到3個(gè)無菌試管中，每個(gè)試管12ml。第一管用于細(xì)菌培養(yǎng)!也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶,用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。,3.標(biāo)本運(yùn)送和保存：腦膜炎奈瑟菌離體后會迅速自溶,肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌也很容易死亡,因此,標(biāo)本應(yīng)立即送檢,并注意保溫、防干燥。切不可置冰箱保存,否則會影響檢出率。腦脊液標(biāo)本送檢的理想時(shí)間為15分鐘內(nèi)，半小時(shí)送檢是可接受的，如果送檢時(shí)間超過1小時(shí)，則會影響結(jié)果。如不能及時(shí)送檢，可使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時(shí)，請勿使用血培養(yǎng)瓶）,（二）膽汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）1.采集時(shí)間懷疑感染存在，應(yīng)盡早采集標(biāo)本，一般在患者使用抗菌藥物之前或停止用藥后2-3天采集。2.采集方法無菌操作穿刺抽取標(biāo)本或外科手術(shù)采集標(biāo)本。標(biāo)本采集量應(yīng)1ml;胸腔積液、腹水可抽取10ml;心包液、關(guān)節(jié)液等可抽取25ml。標(biāo)本采集后注入無菌小瓶或無菌試管中送檢也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶，用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。為防止穿刺液的凝固，應(yīng)在無菌試管中預(yù)先加入滅菌肝素，再注入穿刺液。,標(biāo)本處理,腦脊液：1.若腦脊液標(biāo)本明顯紅色或渾濁，直接接種；若腦脊液清晰透明，應(yīng)以3000r/min離心10-15分鐘后，取沉淀物進(jìn)行接種。2.一般選擇血瓊脂平皿、巧克力平皿、麥康凱或中國藍(lán)平皿、沙保羅平皿、硫羥乙酸鹽肉湯。3.接種前將平板置于溫箱中預(yù)溫30min，保存平皿表面干燥。4.采用10ul定量環(huán)接種進(jìn)行4區(qū)劃線。接種后37、5%co2溫箱培養(yǎng)24h，若不見生長，繼續(xù)培養(yǎng)。,注意：1.腦脊液標(biāo)本不推薦接種與增菌肉湯，其營養(yǎng)條件較弱，不易苛養(yǎng)菌生長：2.腦脊液標(biāo)本不能使用血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，由于培養(yǎng)瓶中含有的聚茴香胺硫酸鈉（sps）對腦膜炎奈瑟菌有毒性。,胸腹水、膽汁、心包液、關(guān)節(jié)液等標(biāo)本的接種,標(biāo)本處理：將標(biāo)本取10ul直接接種于血瓊脂平皿、巧克力平皿、麥康凱或中國藍(lán)平皿、沙保羅平皿上，除巧克力平皿放入37、5%co2溫箱外，其余平板均放入35普通溫箱。備注：由于該方法檢出率低，目前國內(nèi)使用新的接種方法：無菌操作將標(biāo)本與肉湯按11-12比例加入到已配置的血液增菌肉湯管中，輕輕搖勻。置于35普通溫箱，24h后轉(zhuǎn)種到血瓊脂平皿上，再次培養(yǎng)24h觀察。,八、眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本,正常眼部、中耳及鼻竇內(nèi)是無菌的，而咽峽部有口腔的常在菌叢。耳、鼻、咽部的細(xì)菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有需氧菌也有厭氧菌，所以，其周圍組織器官的感染不僅考慮是需氧菌，也須檢查厭氧菌。,（一）標(biāo)本采集1.眼結(jié)膜：分別用（無菌鹽水預(yù)濕）拭子繞每一個(gè)結(jié)膜??；采集完即接種培養(yǎng)基；將拭子涂片在兩個(gè)玻片上染色。角膜刮擦：滴兩滴局部麻醉液；用無菌鏟刮擦膿腫或潰瘍，將刮擦物直接接種于培養(yǎng)基；將剩余材料涂于兩個(gè)干凈的玻片上染色。液體或抽吸物：備眼，用針頭抽吸液體。先用無菌生理鹽水沖洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用無菌棉拭子采集分泌物。,2.耳內(nèi)耳：對復(fù)雜的、反復(fù)的或慢性頑固的中耳炎做鼓膜穿刺術(shù)，接觸耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器收集液體；對破裂的鼓室，借助耳科診視器，用軟桿拭子收集液體。外耳：用濕拭子將耳道的任何碎屑或痂皮拭去；在外耳道用力旋轉(zhuǎn)拭子取樣。3鼻或鼻咽分泌物直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接觸周圍粘膜或皮膚，標(biāo)本立即送檢。4咽分泌物先用清水漱口，用壓舌板將舌向下向外壓，將咽拭子在咽后壁或懸雍垂后側(cè)涂抹數(shù)次，插入運(yùn)送培養(yǎng)基。切勿接觸口腔和舌粘膜。,（二）標(biāo)本運(yùn)送和保存標(biāo)本采集時(shí)，無菌手續(xù)以稍蘸肉湯的拭子采集病變明顯處的膿液和分泌物。采取后拭子應(yīng)置于運(yùn)送培養(yǎng)基或培養(yǎng)拭子運(yùn)送，以防干燥。立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)置于冰箱保存，超過48h不可使用。,（三）標(biāo)本的接種,一.直接涂片：取拭子制成2張涂片，1張行革蘭染色，1張行美藍(lán)或異染顆粒染色。做初步報(bào)告，便于選擇培養(yǎng)基。二.接種于培養(yǎng)基：一般細(xì)菌接種于血平皿、巧克力平皿、中國藍(lán)或麥康凱上，置于35