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羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿袈聿蚇羅膇肈莇螇肅肇葿羃罿肆薂螆裊膆蚄蕿?zāi)f膅莄螄肀膄薆薇肆膃蚈袂羂膂莈蚅袈膁蒀袁膆膀薃蚃肂芀蚅衿羈艿蒞螞襖羋蕆袇螀芇蠆蝕腿芆荿羆肅芅蒁螈羈芄薃羄袇芄蚆螇膅莃蒞蕿肁莂蒈螅羇莁薀薈袃莀莀螃衿荿蒂蚆膈荿薄袁肄莈蚇蚄羀莇莆袀袆蒆葿蚃膄蒅薁袈肀蒄蚃蟻羆蒃蒃袆羂肀薅蝿芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈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膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀螄羃羀莆螃螂芆節(jié)螂裊聿薁螁羇芄蒆螀聿肇莂蝿蝿節(jié)羋衿袁肅薇袈羄芁蒃袇膆肄葿袆裊荿蒞蒃羈膂芁蒂肀莇薀蒁螀膀蒆蒀袂莆莂蕿羄膈羋薈肇羈薆薇螆膇薂薇罿羀蒈薆肁芅莄薅螁肈芀薄袃芃蕿薃羅肆蒅螞肈節(jié)莁蟻螇肄芇蟻衿芀芃蝕肂膃薁蠆螁莈蕆蚈襖膁莃蚇羆莆艿蚆肈腿薈螅螈羂蒄螅袀膈莀 生物技術(shù)制藥習(xí)題答案修訂版第一章 緒論填空題1. 生物技術(shù)制藥的特征。2.3.現(xiàn)代生物藥物已形成四大類型:一是應(yīng)用dna重組技術(shù)制造的肽、蛋白質(zhì)類治療劑 ;二是 基因藥物 ;三是來自動物植物和微生物的 天然生物藥物 ;四是 合成與部分合成的生物藥物;4.生物技術(shù)的發(fā)展按其技術(shù)特征來看,可分為三個不同的發(fā)展階段,技術(shù)階段 ; 近代生物技術(shù)階段 ; 現(xiàn)代生物技術(shù)階段 。5.生物技術(shù)所含的主要技術(shù)范疇有 基因工程; 發(fā)酵工程 ; 蛋白質(zhì)核酸工程 和 生化工程 ;選擇題1.生物技術(shù)的核心和關(guān)鍵是( d )a 細胞工程 b 蛋白質(zhì)工程 c 酶工程 d 基因工程2. 第三代生物技術(shù)( c)的出現(xiàn),大大擴大了現(xiàn)在生物技術(shù)的研究范圍a 基因工程技術(shù) b 蛋白質(zhì)工程技術(shù) c 海洋生物技術(shù) d細胞工程技術(shù)3.下列哪個產(chǎn)品不是用生物技術(shù)生產(chǎn)的( d )a 青霉素b 淀粉酶c 乙醇d 氯化鈉4. 下列哪組描述( a )符合是生物技術(shù)制藥的特征a高技術(shù)、高投入、高風(fēng)險、高收益、長周期b高技術(shù)、高投入、低風(fēng)險、高收益、長周期c高技術(shù)、低投入、高風(fēng)險、高收益、長周期d高技術(shù)、高投入、高風(fēng)險、低收益、短周期5. 我國科學(xué)家承擔了人類基因組計劃( c )的測序工作a10% b5% c 1% d 7%名詞解釋1.生物技術(shù)制藥采用現(xiàn)代生物技術(shù)可以人為的創(chuàng)造一些條件,借助某些微生物、植物或動物來生產(chǎn)所需的醫(yī)學(xué)藥品,稱為生物技術(shù)制藥。2.生物技術(shù)藥物一般說來,采用dna重組技術(shù)或其它生物新技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸來藥物稱為生物技術(shù)藥物。3.生物藥物生物技術(shù)藥物是重組產(chǎn)品概念在醫(yī)藥領(lǐng)域的擴大應(yīng)用,并與天然藥物、微生物藥物、海洋藥物和生物制品一起歸類為生物生物藥物。簡答題1.生物技術(shù)藥物的特性是什么?生物技術(shù)藥物的特征是:(1)分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜(2)具有種屬差異特異性(3)治療針對性強、療效高(4)穩(wěn)定性差(5)免疫原性(6)基因穩(wěn)定性(7)體內(nèi)半衰期短(8)受體效應(yīng)(9)多效應(yīng)和網(wǎng)絡(luò)效應(yīng)(10)檢驗特殊性 2.簡述生物技術(shù)發(fā)展的不同階段的技術(shù)特征和代表產(chǎn)品?(1)傳統(tǒng)生物技術(shù)的技術(shù)特征是釀造技術(shù),所得產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)較為簡單,屬于微生物的初級代謝產(chǎn)物。代表產(chǎn)品如酒、醋、乙醇,乳酸,檸檬酸等。(2)近代生物技術(shù)階段的技術(shù)特征是微生物發(fā)酵技術(shù),所得產(chǎn)品的類型多,不但有菌體的初級代謝產(chǎn)物、次級代謝產(chǎn)物,還有生物轉(zhuǎn)化和酶反應(yīng)等的產(chǎn)品,生產(chǎn)技術(shù)要求高、規(guī)模巨大,技術(shù)發(fā)展速度快。代表產(chǎn)品有青霉素,鏈霉素,紅霉素等抗生素,氨基酸,工業(yè)酶制劑等。(3)現(xiàn)代生物技術(shù)階段的技術(shù)特征是dna重組技術(shù)。所得的產(chǎn)品結(jié)構(gòu)復(fù)雜,治療針對性強,療效高,不足之處是穩(wěn)定性差,分離純化工藝更復(fù)雜。代表產(chǎn)品有胰島素,干擾素和疫苗等。3.生物技術(shù)在制藥中有那些應(yīng)用?生物技術(shù)應(yīng)用于制藥工業(yè)可大量生產(chǎn)廉價的防治人類重大疾病及疑難癥的新型藥物,具體體現(xiàn)在以下幾個方面:(1)基因工程制藥,利用基因工程技術(shù)可生產(chǎn)出具有生理活性的肽類和蛋白質(zhì)類藥物,基因工程疫苗和抗體,還可建立更有效的藥物篩選模型,改良現(xiàn)有發(fā)酵菌種,改進生產(chǎn)工藝,提供更準確的診斷技術(shù)和更有效的治療技術(shù)等。隨著基因技術(shù)的發(fā)展,應(yīng)用前景會更廣闊。(2)細胞工程和酶工程制藥該技術(shù)的發(fā)展為現(xiàn)代制藥技術(shù)提供了更強大的技術(shù)手段,使人類可控制或干預(yù)生物體初次生代謝產(chǎn)物和生物轉(zhuǎn)化等過程,使動植物能更有效的滿足人類健康方面的需求。(3)發(fā)酵工程制藥發(fā)酵工程制藥的發(fā)展主要體現(xiàn)在對傳統(tǒng)工藝的改進,新藥的研制和高效菌株的篩選和改造等。第二章 基因工程制藥填空題1.基因工程藥物制造的主要步驟是: 構(gòu)建工程菌 ; 目的基因的表達 ; 產(chǎn)物的分離純化 ; 產(chǎn)品的檢驗 。2.目的基因獲得的主要方法是 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法 和合成法。3.基因表達的微生物宿主細胞分為2大類。第一類為主要有 大腸桿菌、 枯草芽孢桿菌 、 鏈霉素 ;第二類為 真核細胞,常用的主要有 酵母、 絲狀真菌 。4.基因工程菌在傳代過程中經(jīng)常出現(xiàn)質(zhì)粒不穩(wěn)定性的現(xiàn)象,質(zhì)粒不穩(wěn)定分為裂不穩(wěn)定性 和 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性 ;基因工程菌的不穩(wěn)定性至少維持 25 代以上。5.基因工程菌的培養(yǎng)方式主要有析培養(yǎng) 和 固定化培養(yǎng) ;6.高密度發(fā)酵一般是制培養(yǎng)液中工程菌的濃度在以上,理論上的最高值可達 200g dcw/l 。7.影響高密度發(fā)酵的因素有 代謝副產(chǎn)物 。8.基因工程藥物的分離純化一般不應(yīng)超過5個步驟,包括 固液分離 ; 濃縮與初步純化 ; 高度純化 和 成品加工 。9.在基因工程藥物分離純化過程中,分離細胞碎片比較困難,可用過濾 和 雙水相分配 的方法,使細胞碎片分配在一相,目標藥物分配在另一相從而達到初步分離的目的。10. ,合成的dna 5末端是 磷酸酯鍵, 3 末端是 -oh 選擇題1、凝膠過濾法是依賴(a )來分離蛋白組分。a、分子大小 b、帶電狀態(tài) c、分子質(zhì)量 d、解離狀態(tài)2、在工程菌發(fā)酵過程中,選用那種糖會對lac啟動子有阻遏作用。(b )a、甘油 b、葡萄糖 c、甘露糖 d、飴糖3. 可用于醫(yī)藥目的的蛋白質(zhì)和多肽藥物都是由相應(yīng)的( b ) 合成的a rna b 基因 c 氨基酸 d 激素4. 用反轉(zhuǎn)錄法獲得目的基因,首先必須獲得(d)a trna b cdna c rrna d mrna5.那一類細菌不屬于原核細胞( c )a 大腸桿菌 b 枯草芽孢桿菌c 酵母d 鏈霉菌6.基因工程菌的生長代謝與( d )無關(guān)a 碳源 b rna聚合酶c 核糖體 d產(chǎn)物的分子量7.基因工程菌的穩(wěn)定性至少要維持在(b )以上a 20 b 25 c 30 d 408.基因工程菌的高密度發(fā)酵過程中,目前普遍采用( a )作為發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源a 葡萄糖b 蔗糖c 甘油 d甘露醇9. 基因工程藥物多為胞d )不是化學(xué)破碎細胞的方法。a 滲透沖擊b 增溶法c 脂溶法d 酶溶法10 下列那種色譜方法是依據(jù)分子篩作用來純化基因工程藥物(c)a 離子交換色譜 b 親和色譜c 凝膠色譜 d氣相色譜名詞解釋1.基因工程技術(shù)也可稱為dna重組技術(shù),將所要重組對象的目的基因插入載體、拼接、轉(zhuǎn)入新的宿主細胞,構(gòu)建工程菌,實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合,并使目的基因在工程菌50g dcw/l 以上的發(fā)酵過程,理論上的最高值可達 200g dcw/l。簡答題1.簡述基因工程生產(chǎn)藥品的優(yōu)點(1)利用基因工程技術(shù)可大量生產(chǎn)過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽,為臨床使用建立有效的保障;(2)可以提供足夠數(shù)量的生理活性物質(zhì),以便更深入的進行研究,從而擴大這些物質(zhì)的應(yīng)用范圍;(3)可以挖掘更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì);(4)可對內(nèi)源性生理活性物質(zhì)的不足之處進行改造;(5)可獲得新型化合物,擴大藥物篩選來源。2. 根據(jù)真核基因在原核細胞中表達的特點,表達載體必須具備那些條件? 表達載體必須具備下列條件:(1)能夠獨立的復(fù)制;(2)具有靈活的克隆位點和方便的篩選標記,以利于外源基因的克隆、鑒定和篩選;(3)應(yīng)具有很強的啟動子,能為大腸桿菌的ran聚合酶所識別;(4)應(yīng)具有阻遏子(5)應(yīng)具有很強的終止子(6)所產(chǎn)生的mrna必須具有翻譯的起始信號。 3.簡述影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素:(1)外源基因的劑量(2)外源基因的表達的表達效率(3)表達產(chǎn)物的穩(wěn)定性(4)細胞的代謝負荷(5)工程菌的培養(yǎng)條件 4.為了提高基因工程菌的質(zhì)粒穩(wěn)定性,可采用那些主要方法?為了提高基因工程菌的質(zhì)粒穩(wěn)定性,可采取:(1)選擇合適的宿主菌;(2)選擇合適的載體;(3)選擇壓力;(4)分階段控制培養(yǎng);(5)控制培養(yǎng)條件;(6)固定化技術(shù)。 5.影響基因工程菌培養(yǎng)工藝的主要因素有那些?主要因素有:(1)培養(yǎng)基的影響(2)接種量的影響(3)溫度的影響(4)溶解氧的影響(5)誘導(dǎo)時機的影響(6)誘導(dǎo)表達程序的影響(7)ph的影響 6.建立基因工程藥物分離純化工藝時,應(yīng)該考慮那些因素?應(yīng)考慮下列因素:(1)含目的的產(chǎn)物的初始物料的特點;(2)物料中雜質(zhì)的種類和性質(zhì);(3)目的產(chǎn)物特性;(4)產(chǎn)品的質(zhì)量要求 7.基因工程技術(shù)生產(chǎn)的目標產(chǎn)物是多肽和蛋白質(zhì)類化合物,這些產(chǎn)品有什么特點? (1)目的產(chǎn)物在初始物料中含量低(2)含目的產(chǎn)物的初始物料組成復(fù)雜(3)目的產(chǎn)物的的穩(wěn)定性差,對酸堿熱等外界因素敏感;(4)種類繁多(5)產(chǎn)品的質(zhì)量要求 9.分離純化基因工程藥物常用的色譜方法有那些?它們的原理是什么?分離純化基因工程藥物常用的色譜方法有:離子交換色譜,疏水色譜,親和色譜和凝膠過濾色譜;離子交換色譜,以離子交換劑為固定相,依據(jù)流動相中的組分離子和交換劑上的平衡離子進行可擬交換時的結(jié)合力大小的差別而進行分離的一種色譜方法;疏水色譜,利用蛋白質(zhì)表面的疏水區(qū)域與固定相上疏水性基團相互作用力的差異對蛋白質(zhì)組分進行分離的色譜方法;親和色譜:利用固定化配體與目的蛋白質(zhì)之間非常特異的生物親和力進行吸附,這種結(jié)合既是特異的又是可逆的,改變條件可以使這種結(jié)合解除的原理分離純化蛋白質(zhì);凝膠過濾色譜,是以多孔性凝膠填料為固定相,按分子大小對溶液中各組分進行分離的液相色譜方法。 10. 影響高密度發(fā)酵的因素有那些?(1)培養(yǎng)基為滿足菌體生長和外源蛋白表達的需求,常需投入幾倍于生物量的基質(zhì),為了達到理想的效果,需要對培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)的配比進行優(yōu)化。(2)溶氧濃度溶解氧的濃度過高或過低都會影響細菌的代謝,因而對菌體生長和產(chǎn)物表達影響很大。要保持適宜的溶氧濃度,需要確定發(fā)酵罐的通氣量和攪拌速度。(3)ph在高密度發(fā)酵的過程中,ph的改變會影響細胞的表達和基因產(chǎn)物的表達,因此一定要考慮細菌的最適ph范圍。(4)溫度溫度是影響細菌生長和調(diào)控細胞代謝的重要因素。較高的溫度有利于細菌的生長,提高菌體的生物量。(5)代謝副產(chǎn)物大腸桿菌在發(fā)酵過程中都會產(chǎn)生一些有害的代謝副產(chǎn)物,這些副產(chǎn)物積累到一定量會抑制菌體的生長和蛋白的表達,可通過填加某些物質(zhì)如氨基酸可減輕某些有害物質(zhì)如乙酸的抑制作用。 第七章 發(fā)酵工程技術(shù)概論填空題1. 發(fā)酵工業(yè)的生產(chǎn)水平取決于三個要素,分別是和酵設(shè)備。2.發(fā)酵工程產(chǎn)品開發(fā)的關(guān)鍵是篩選到高效菌株,一般優(yōu)良菌種的選育方法主要有 自然選育 、 誘變育種 和 原生質(zhì)體融合 。3.微生物誘變育種導(dǎo)致遺傳物質(zhì)dna結(jié)構(gòu)上發(fā)生變化,通常用、4.誘變育種的機制是導(dǎo)致微生物dna的微細結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,主要分為 微小損傷突變 、 染色體畸變即大損傷突變 、 染色體組突變 三種類型。5.誘變育種使用的物理誘變劑主要有、6.發(fā)酵的基本過程分為、7.在制備大量微生物菌體或其代謝產(chǎn)物時,可采用不同的發(fā)酵方式。微生物的發(fā)酵方式可分為 分批發(fā)酵 、 補料分批發(fā)酵 、 連續(xù)發(fā)酵 。7.發(fā)酵產(chǎn)物的提取方法一般有法。8.用人工方法來誘發(fā)突變是加速基因突變的重要手段,突變部位一般發(fā)生在色體,因此突變后性狀能穩(wěn)定的遺傳.9.在發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中使用的碳源有 碳水化合物 .10.在發(fā)酵工業(yè)生產(chǎn)中,過去是直接假如酸或堿來控制發(fā)酵液的ph值,現(xiàn)在常用 選擇題1. 傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵工程不能生產(chǎn)下列哪個產(chǎn)品(d)a 葡萄酒 b 乙醇c 醬d 青霉素2. 發(fā)酵生產(chǎn)使用的菌種必須以休眠狀態(tài)保存,一般保存溫度范圍是(a )a 0-4 b 5-10 c 10-15 d 15-203. 發(fā)酵一般在不銹鋼制的釜式反應(yīng)罐b 5-10% c5-20% d10-30%4. 那種發(fā)酵方式可以為微生物提供較穩(wěn)定的生活環(huán)境(c )a 分批發(fā)酵 b 補料分批發(fā)酵c 連續(xù)發(fā)酵5. 發(fā)酵培養(yǎng)基中需要的氮源分為速效氮源和遲效氮源。( b )是速效氮源a 黃豆餅粉 b 玉米漿 c 花生餅粉 d 棉子餅粉6. 發(fā)酵產(chǎn)物的提取常用的四種方法是(b )a 吸附法 沉淀法 結(jié)晶法 離子交換法 b吸附法 沉淀法 溶劑萃取法 離子交換法c吸附法 沉淀法 膜分離法 離子交換法d吸附法 沉淀法 溶劑萃取法 過濾法7.鏈霉素抗生素合成基因組的典型特征是(d )a 高g-c堿基組成,含量高達90%;三聯(lián)體密碼子的第三個堿基的g,c比例極高b高a-t堿基組成,含量高達70%;三聯(lián)體密碼子的第三個堿基的g,c比例極高c高g-c堿基組成,含量高達70%;三聯(lián)體密碼子的第三個堿基的a,t比例極高d高g-c堿基組成,含量高達70%;三聯(lián)體密碼子的第三個堿基的g,c比例極高8.發(fā)酵生產(chǎn)中培養(yǎng)基的成分是(b )a 碳源氮源和水 b碳源氮源無機鹽微量元素和水c碳源硫源無機鹽和水 d碳源氮源堿土金屬元素和水9. 下列那種熱不是發(fā)酵過程中散失熱能的因素(a)a 生物熱 b 蒸發(fā)熱 c 輻射熱 d 顯熱10 微生物都有都有各自的最適ph,大多數(shù)微生物生長的ph范圍是( c )a 1-7 b 2-5 c 3-6 d 9-10 名詞解釋發(fā)酵工程又稱為微生物工程,是利用微生物制造工業(yè)原料與工業(yè)產(chǎn)品,并提供服務(wù)的技術(shù)。誘變劑能誘發(fā)基因突變并使突變率提高到超過自發(fā)突變水平的物理化學(xué)因子都稱為誘變劑。簡答題1. 發(fā)酵工程發(fā)展大體上可分為四個階段,簡述各階段的技術(shù)內(nèi)容,代表人物和主要產(chǎn)品第一階段:20世紀以前時期,人類利用傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵技術(shù)來生產(chǎn)葡萄酒、酒、醋,醬、奶酪等,生產(chǎn)規(guī)模小,主要憑經(jīng)驗控制生產(chǎn)過程。代表人物巴斯德。第二階段,1900-1940年期間,微生物培養(yǎng)技術(shù)不斷進步,有力的推動了發(fā)酵工業(yè)的快速發(fā)展,能排除培養(yǎng)體系中的有害微生物,能進行大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)發(fā)酵過程。代表產(chǎn)品是丙酮、丁醇,甘油,乳酸,檸檬酸等。第三階段,發(fā)酵工業(yè)大發(fā)展時期。 能對微生物進行深層培養(yǎng),可采用純種發(fā)酵,無菌操作技術(shù)成熟,生產(chǎn)規(guī)模巨大,生產(chǎn)過程能有效控制,相應(yīng)的采用較復(fù)雜的工藝和設(shè)備。代表產(chǎn)品如青霉素,鏈霉素,紅霉素,氨基酸等。代表人物是發(fā)現(xiàn)青霉素的英國科學(xué)家fleming.第四階段 基因工程等高新技術(shù)應(yīng)用階段?,F(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展是人們加深了對微生物代謝產(chǎn)物合成的遺傳學(xué)與調(diào)節(jié)機制的了解,為更好的應(yīng)用提供了前提條件。dan雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的建立,質(zhì)粒中遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn),dna限制酶和連接酶的應(yīng)用,為人類控制生物體生物代謝過程提供了強大的工具,使發(fā)酵技術(shù)能為人類提供需要的產(chǎn)品。代表產(chǎn)品胰島素,干擾素等, 人物如沃森、克里克等。 2. 簡述培養(yǎng)基對發(fā)酵的影響微生物的生長需要一定的營養(yǎng),不同的微生物對營養(yǎng)的要求有很大的差異,培養(yǎng)基的成分和配比合適與否,對產(chǎn)生菌的生長發(fā)育,發(fā)酵單位的增長,有相當大的影響,同時還會影響到提取工藝和產(chǎn)品質(zhì)量。微生物的生長需要較多供給有機碳架的碳源,構(gòu)成含氮物質(zhì)的氮源,還有無機鹽類,微量元素和水分等。碳源是構(gòu)成微生物細胞和各種代謝產(chǎn)物碳架的營養(yǎng)物質(zhì),同時碳源在微生物的代謝過程中被氧化、釋放出能量,并以atp的形式貯存于細胞內(nèi),供給微生物生命活動所需的能量。碳源是構(gòu)成菌體細胞的物質(zhì),同時也是細胞合成氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、酶類及含氮代謝產(chǎn)物的成分,選擇氮源需要注意氮源促進菌體生長、繁殖和合成產(chǎn)物間的關(guān)系。無機鹽和微量元素是構(gòu)成菌體原生質(zhì)的成分,可維持酶的活性,可調(diào)節(jié)細胞的滲透壓和ph,參與產(chǎn)物的合成等。水是必需的物質(zhì),它既是構(gòu)成菌體細胞的主要成分,又是營養(yǎng)物質(zhì)傳遞的介質(zhì),對微生物的生長繁殖和產(chǎn)物合成有很重要的作用。3. 簡述溫度對發(fā)酵的影響,如何控制溫度可提高目標產(chǎn)物的產(chǎn)率?在發(fā)酵過程中,菌體的生長和產(chǎn)物的合成均溫度有密切關(guān)系,一般最適生長溫度和最適生產(chǎn)溫度往往不一致。在具體控制過程中,究竟選擇哪個溫度,需要視在微生物生長階段和產(chǎn)物合成階段中哪一矛盾是主要而定,另外,溫度還會影響微生物代謝的途徑和方向。在理論上,整個發(fā)酵過程中不應(yīng)只選一個培養(yǎng)溫度,而應(yīng)該根據(jù)發(fā)酵的不同階段選擇不同的培養(yǎng)溫度。在生長階段,應(yīng)選擇最適生長溫度;在產(chǎn)物分泌階段,應(yīng)選擇最適生產(chǎn)溫度。這樣變溫發(fā)酵所得產(chǎn)物的產(chǎn)量是比較理想的。但在工業(yè)發(fā)酵過程中,由于發(fā)酵液的體積很大,升降溫度都比較的困難,所以在整個發(fā)酵過程中,往往采用一個比較適合的培養(yǎng)溫度,使得到的產(chǎn)物產(chǎn)率最高。4. 簡述溶氧對發(fā)酵的影響,如何控制溶氧濃度可提高目標產(chǎn)物的產(chǎn)率?大部分工業(yè)微生物需要在有氧環(huán)境中生長,培養(yǎng)這類微生物需要采取通氣發(fā)酵,適量的溶解氧可維持其呼吸代謝和代謝產(chǎn)物的合成。,對決大多數(shù)發(fā)酵來說,供氧不足會造成代謝異常,降低產(chǎn)物產(chǎn)量。因此,保證發(fā)酵液中溶氧和加速氣相、液相和微生物之間的物質(zhì)傳遞對于提高發(fā)酵的效率是至關(guān)重要的。發(fā)酵液的溶氧濃度,是由供氧和需氧兩方面多決定的,也就是說當發(fā)酵的供氧量大于需氧量,溶氧濃度就上升,反之就下降。因此要控

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