正交實(shí)驗(yàn)法從黃芩中提取總黃酮.doc

正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選黃芩中總黃酮的提取工藝林春蓮（江西中醫(yī)藥大學(xué)330004） 伍振峰（江西中醫(yī)藥大學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室330004）中文摘要目的:優(yōu)選黃芩中總黃酮的提取工藝并測定其含量。方法：利用酶解法選取加液量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，通過L9（33）正交實(shí)驗(yàn)篩選最優(yōu)提取工藝；采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品測定黃芩中總黃酮的含量。結(jié)果：優(yōu)選得到的工藝條件為采用14倍量水提取兩次，每次90分鐘。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝簡單、方便、提取率高，可達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。關(guān)鍵詞：正交實(shí)驗(yàn) ; 黃芩; 總黃酮 ; 提取工藝 ; 紫外分光光度法AbstractPurpose: to optimizing extraction technology and determination of the content of total flavonoids in scutellaria baicalensis georgi. Methods: by using enzymatic hydrolysis and fluid volume, extraction time, extraction times to examine factors, through L9 (33) orthogonal experiment to screen the optimal extraction process.Using ultraviolet spectrophotometry, with rutin as reference substance determination of the content of flavonoids in radix scutellariae. Results: the optimization of process conditions for the extraction of 14 times the amount of water used twice, 90 minutes at a time. Conclusion: the optimal extraction process is simple, convenient, high extraction yield and can meet the experimental equirements. Keywords:Oorthogonal test; Rradix scutellariae ; Flavonoids ; Eextraction technology ; UVspectrophotometry前言黃芩是常用的中藥,為唇形科植物黃芩(Scutellariae baicalensis)的干燥根，黃芩味苦性寒，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。用于濕溫、暑濕，胸悶嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱咳嗽，高熱煩渴，血熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動(dòng)不安1。其主要有效成分為黃酮類化合物，包括黃芩苷（baicalin)、漢黃芩苷、黃芩苷元(baicalein)等,其中以黃芩苷含量最多，具有抗菌消炎、解熱、抗腫瘤、抗流感病毒、抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用2-5。本文以總黃酮含量為考察目標(biāo)，利用酶解法，采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)選了黃芩中總黃酮的提取工藝，用紫外分光光度法測定了黃芩提取物中總黃酮的含量。正文1、 總黃酮的提取 本實(shí)驗(yàn)的所采取的提取方法為水提醇沉回流提取法，有文獻(xiàn)報(bào)道【6-8】還可采用醇提酸沉法、超濾法、微波提取法等提取黃酮類化合物，考慮到實(shí)驗(yàn)條件及操作的簡便性，最終選擇實(shí)驗(yàn)室較為常用和簡便的水提醇沉法回流提取法。1 實(shí)驗(yàn)儀器、藥品與試劑1.1實(shí)驗(yàn)儀器： 可調(diào)式電熱套MH-250型 250ml （北京科偉永興儀器有限公司）；恒溫水浴鍋HH-S6 雙列六孔（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城）；熱風(fēng)循環(huán)烘箱DZF-6020MBE（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；島津UV- 240型紫外-可見光分光光度儀（日本島津公司）1.2藥品與試劑：黃芩飲片 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所） 60%乙醇 5%亞硝酸鈉（廣東汕頭市西隴化工廠 分析純） 10%硝酸鋁（廣東臺山化工） 4%氫氧化鈉（天津市福晨化學(xué)試劑廠 分析純） 蒸餾水（實(shí)驗(yàn)室自制）2 方法和結(jié)果2.1 因素水平設(shè)計(jì)根據(jù)提取工藝要求，選取加液量、提取時(shí)間、提取次數(shù)作為三個(gè)考察因素，各取三個(gè)水平，以總黃酮為考察指標(biāo)，選用L9(33)正交實(shí)驗(yàn)表。表1 因素水平表因素加水量A/倍提取時(shí)間B/min提取次數(shù)C/次1103012126023149032.2總黃酮的含量測定2.2.1供試品溶液的制備 稱取黃芩藥材樣品5g，置250ml的圓底燒瓶中，按照水平因素表1的條件置于電熱套中進(jìn)行回流提取，濾過，提取液移至250ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，作為樣品溶液。用移液管精密量取20ml樣品溶液置蒸發(fā)皿中放于水浴鍋中蒸干，殘?jiān)?0%乙醇溶解，過濾，移至25ml容量瓶中，用60%乙醇定容至刻度。用移液管精密量取5ml溶液置25ml容量瓶中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%亞硝酸鈉1.0ml搖勻，靜置6 min再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%硝酸鋁1.0ml搖勻，靜置6min加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%氫氧化鈉10.0ml，用60%乙醇定容至25ml搖勻，即得供試品溶液。2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品20.8mg置100ml容量瓶中，加60%乙醇溶解，定容，即得。2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取2.2.2項(xiàng)下的對照品0、2、3、4、5、6、7ml置25ml容量瓶中，按2.2.1項(xiàng)下的方法操作。用可見-紫外分光光度計(jì)與510nm出測吸光度。以蘆丁對照品的濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，的回歸方程：2.2.4 含量測定 取供試品溶液，按2.2.3項(xiàng)下的方法操作，測定吸光度值，計(jì)算樣品中總黃酮的含量。2.3正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素的基礎(chǔ)上，按表1選取的三