（藥劑學(xué)專業(yè)論文）小兒金寧口服液的藥學(xué)研究.pdf

原創(chuàng)性l 聲明 本人鄭重聲明 所呈交的學(xué)位論文 是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下 獨立進(jìn)行研究工 作所取得的成果 除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外 本論文不包含任何其他個人或集體 己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果 對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體 均已在文 中以明確方式標(biāo)明 本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān) 學(xué)位論文作者 需親筆 虢 觴節(jié)易肌日 學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書 本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留 使用學(xué)位論文的規(guī)定 同意學(xué)校保留并 向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版 允許論文被查閱和借閱 本人授 權(quán)南京中醫(yī)藥大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索 可 以采用影印 縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文 保密口 在2 年解密后適用本授權(quán)書 本學(xué)位論文屬于不保密口 請在以上方框內(nèi)打 學(xué)位論文作者 需親筆 簽名 半荔霧 沙7 年占月f 日 導(dǎo)師 需親筆 簽名 桫 砷年占月 7 日 目錄 中文摘要 i a b s t r a c t 一 一 一 一一一 一 i 正文 第一章文獻(xiàn)綜述 1 第二章d j l 金寧口服液的拆方研究 1 4 一 藥材的來源及品質(zhì)評價 1 4 二 拆方樣品的制備及質(zhì)量評價 2 3 三 拆方樣品的藥效學(xué)研究 2 9 第三章 j l 金寧口服液的工藝研究 3 7 第一節(jié)提取工藝研究 3 7 一 揮發(fā)油提取工藝研究 3 7 二 提取溶劑的選擇 3 9 三 正交試驗法優(yōu)選水提工藝 4 3 第二節(jié)精制工藝研究 4 8 一 醇沉工藝選擇 4 8 二 精制工藝選擇 5 0 第三節(jié)成型工藝研究 5 7 一 口服液矯味研究 5 7 二 中試工藝研究 5 9 第四章質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 6 1 第五章初步穩(wěn)定性研究 7 5 第六章 j j l 用藥劑型綜述 8 2 結(jié)語 9 3 致謝附錄 9 4 和各 器官的功能尚未成熟 特別是嬰幼兒 肝 腎功能 中樞神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的發(fā) 育尚不健全 對許多藥物的代謝 排泄和耐受性差 用藥必須謹(jǐn)慎 有統(tǒng)計表明 國 內(nèi)市場9 0 0 的藥物都沒有兒童劑型 兒童發(fā)病率高于成人 我國患病兒童占總患病 人口的2 0 0 以上 但用于兒童常見疾病的專用藥物卻很少 不能滿足兒童保健事業(yè) 的需要 小兒金寧口服液是專門針對兒科常見病感冒中最多見證型風(fēng)熱感冒的中藥制劑 綜合考慮了小兒的生理 病理特點 研制的治療小兒風(fēng)熱感冒的良藥 由金銀花 連 翹 荊芥 薄荷等中藥組成 方中金銀花為君藥 金銀花味甘 性寒 歸肺 心 胃 經(jīng) 功能清熱解毒 疏風(fēng)解表 消癰散腫 涼血止痢 連翹為方中臣藥 連翹味苦 性微寒 歸肺 心 膽經(jīng) 功能清宣肺熱 清心安神 解毒消腫 薄荷 荊芥 貫眾 蚤休 桔梗 野菊花等為佐使藥 共具疏風(fēng)解表 清熱解毒之功 經(jīng)臨床驗證 療效 顯著 無毒副作用 痊愈顯效率在9 0 0 以上 實驗研究表明 本制劑具有抗流感病 毒 解熱 止痛 抗炎等綜合治療效應(yīng) 體現(xiàn)了中醫(yī)藥辨證治療小兒感冒的特色 本試驗研究課題包括拆方研究 制劑工藝學(xué)研究 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 初步穩(wěn)定性試 驗 1 拆方研究 根據(jù)臨床用藥經(jīng)驗方 我們結(jié)合制劑學(xué)指標(biāo)和藥效學(xué)指標(biāo)進(jìn)行篩選 最后確定上 述8 味藥的組方為最優(yōu)精簡方 2 制劑工藝學(xué)研究 在制劑學(xué)研究中 我們注重在保證原方療效的基礎(chǔ)上 選擇合適的劑型 并根據(jù) 方中藥材有效成分的理化性質(zhì) 選擇合理的制備工藝 2 1 揮發(fā)油提取工藝 由于方中多味藥材含有揮發(fā)油 并且根據(jù)文獻(xiàn)其都有明顯的藥理活性 所以我們 對揮發(fā)油的提取進(jìn)行了正交試驗 以期將揮發(fā)油盡數(shù)提取出來 確定工藝為藥材加1 0 倍量水浸泡3 小時 水蒸氣蒸餾8 小時 2 2 水提醇沉工藝 采用正交試驗法進(jìn)行優(yōu)選 以綠原酸 總黃酮含量為評價指標(biāo) 確定提取工藝條 件為 方中八味中藥加1 2 倍量水提取2 次 每次1 5 小時 合并水煎液 濃縮至相對 密度為1 1 0 放冷后調(diào)至含醇量6 0 靜置沉淀除雜質(zhì) 摘要 2 3 精制工藝 比較二次醇沉法 超濾法 活性炭吸附法對藥液的進(jìn)一步精制作用 選擇能最大 保留有效成分 去除雜質(zhì) 增加口服液澄明度和穩(wěn)定性的精制方法 確定精制工藝為 超濾 2 4 口服液的矯味 采用單因素試驗考察單糖漿加入量和水果香精加入種類 確定單糖漿加入量為3 0 香精種類為哈密瓜口味 3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 3 1 鑒別 用薄層層析法對制劑中金銀花 連翹 荊芥 薄荷 綿馬貫眾 桔梗六味中藥進(jìn) 行了藥材對比定性鑒別 結(jié)果表明該法專屬性強(qiáng) 3 2 指標(biāo)性成分的含量測定 本制劑主藥為金銀花 選擇綠原酸為質(zhì)量控制指標(biāo) 高效液相色譜條件簡單 易 于分離 陰性制劑無影響 經(jīng)過中試樣品的含量測定 初步確定本品中綠原酸含量每 支 1 0 m 1 不得少于1 5 m g 并對其進(jìn)行了方法學(xué)考察 平均回收率為1 0 3 6 5 r s d 為2 9 證明本研究中所用方法準(zhǔn)確 可靠 可用于該產(chǎn)品的含量測定 4 初步穩(wěn)定性研究 按 新藥審批辦法 的有關(guān)規(guī)定 對本品在室溫下進(jìn)行了3 個月的連續(xù)考察 結(jié) 果穩(wěn)定性良好 用加速試驗法將藥品在溫度3 7 4 0 和相對濕度7 5 5 的條件下 保存 每月考核一次 連續(xù)3 個月 結(jié)果穩(wěn)定性好 按照室溫2 5 有效期 t 的 考核標(biāo)準(zhǔn) 該藥品的有效期暫定為兩年 本文參照 藥品注冊管理辦法 試行 附件一 中藥 天然藥物分類及申報資 料要求中對第6 類新藥研制的要求 進(jìn)行了以下工作 文獻(xiàn)資料的收集與整理 片劑 工藝 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及初步穩(wěn)性等研究 并進(jìn)行研究資料的總結(jié) 關(guān)鍵詞 小兒金寧口服液 拆方 工藝 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 穩(wěn)定性研究 小兒金寧口服液的藥學(xué)研究 p h a r m a c e t i cs t u d i e so nj i n n i n go r a l l i q u i df o r c h i l d r e n a b s t r a c t j i n n i n go r a ll i q u i df o rc h i l d r e n w h i c hi sm a d af r o mf l o sl o n i c e r a e f r u c t u sr u c t u s f o r s y t h i a e h e r b as c h i z o n e p e t a e h e r b am e n t h a ea n do t h e rf o u rk i n d so fh e r b s i sa c o m p o u n dp r e p a r a t i o nf o rt r e a t i n gc h l i d r e n sc a t c h i n gc o l db yf e v e r t h em a i nr e s e a r c h c o n t e n t so nj i n n i n go r a ll i q u i df o rc h i l d r e ni n c l u d et e c h n o l o g yo ft h ep r e p a r a t i o n q u a l i t y s t a n d a r d s t h es t a b i l i t yo ft h ep h a r m a c e u t i c a l sa n dt h ee f f e c to fm e d i c i n e 1 f o r m u l ac o m p o n e n t s a n a l y s i s w ep a yap o i n tt od e c r e a s et h ec o m p o n e n t so ft h eo r i g i n a l p r e s c r i p t i o na n de n h a n c e c o m p l i a n c eo nt h ef o u n d a t i o no fg u a r a n t e e i n gt h eo r i g i n a lv a l i d s b yc o m p r e h e n s i v e c o n s i d e r a t i o no ft h ep r e p a r a t i o n a li n d i c a t o r sa n dp h a r m a c o d y n a m i c s w ed e t e r m i n e dt h e b e s tp r e s c r i p t i o ni sc o n c l u d e db yt h ee i g h tk i n d so fc h i n e s eh e r b sa b o v e 2 t e c h n o l o g yo fp r e p a r a t i o n d u r i n gt h er e s e a r c ho ft h et e c h n o l o g yo fp r e p a r a t i o n w ep a yap o i n tt oc h o o s i n ga s u i t a b l ed a s a g eo nt h ef o u n d a t i o no fg u a r a n t e e i n gt h eo r i g i n a lv a l i d sa n dc h o o s i n ga r e a s o n a b l et e c h n o l o g ya c c o r d i n gt oi t sp h y s i c sa n dc h e m i s t r yc h a r a c t e r f i r s t b e c a u s eo fi ti m p l i e st h ev o l a t i l eo i l w eh a v ear e s e a r c ho nt h ev o l a t i l eo i l e n v e l o p i n gp r o c e s s w et a k eu s eo ft h eo r t h o g o n a le x p e r i m e n t a ld e s i g nt oo b t a i nt h eb e s t p r o c e s s i n gt og e tt h eo i li s a d d i n gw a t e ri nt e nt i m e s e x t r a c t i n ge i g h th o u r s s e c o n d a c c o r d i n gt ot h ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i da n dt o t a lf l a v o n e w ut a k eu s eo ft h e o r t h o g o n a le x p e r i m e n t a ld e s i g nt oo b t a i nt h eb e s tp r o c e s s i n gi st h a t a d d i n g12t i m e s a m o u n to fw a t e r e x t r a c t i n g2t i m e sa n de v e r yt i m e w i t h1 5h o u r s p u tt h es o l u t i o nt o g h t h e r c o n c e n t r a t ei tt or e l a t i v ed e n s i t yo f1 10 a c c o m m o d a t e i o nt h ec o n c e n t r a t i o no f e t h a n o lt o6 0 s t a n d i n gt i l ld e c o m p r e s s t h i r d w ec o m p a r e dt h ep u r i f i c a t i o n a le f f e c to fu l t r a f i l t r a t i o n t w i c e a l c o h o lp r e c i p i t a t i o n a n da c t i v a t e dc a r b o na b s o r p t i o na n dw ec h o o s et h em e t h o dw h i c hc a np u r i f i c a t i o na n dh o l d a sm u c ha sa c t i v ei n g r e d i e n t s t h er e s u l ti su l t r a f i l t r a t i o ni st h eb e s tw a y f o r t h b a s e do ns i n g l ef a c t o re x p e r i m e n t w ef i n dt h a tt h eb e s tc o n t e n to fs i m p l es y r u pi s 3 0 a n dt h ek i n do ft h ee s s e n c ei st a s t eo fh a m im e l o n 3 s t u d yo fq u a l i t ys t a n d a r d 摘 y d u r i n gt h eq u a l i t yr e s e a r c hp r e c e e d i n g s w ei d e n t i f i e df l o sl o n i c e r a e f r u c t u sr u c t u s f o r s y t h i a e h e r b as c h i z o n e p e t a e h e r b am e n t h a ea n do t h e rt w ok i n d so fh e r b sb yt l c m e t h o d w h i c hi ss p e c i a la n da c c u r a t e 1 1 1 ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i dw a sd e t e r m i n e db y h p l ca f t e rt h em e t h o d l o g yw a sc o m p l e t e d 1 1 1 eh p l cs h o w e dt h a tt h ea v e r a g er e c o v e r yi s u pt os t a n d a r da n di t sp r e c i s i o n s t a b i l i t ya n dr e a p p e a r a n c ew a sg o o d 1 1 l ee x p e r i m e n t s h o w e dt h a tt h ec o n t e n to fc h l o r o g e n i ca c i ds h o u l db em o r et h a n15 m gi ne a c hb o t t l e 1 0 m 1 4 s t u d yo fp r i m a r ys t a b i l i t y f o rt h es a k eo fi n s p e c t i n gp r i m a r ys t a b i l i t yo fj i n n i n go r a ll i q u i df o rc h i l d r e n t h e r o o m t e m p e r a t u r ea n da c c e l e r a t i n gt e s tw e r ec a r r i e di n t oe x e c u t i o n f r o mw h i c ht h er e s u l t s s h o w e de v e r yi n d e xm a r k e rw a sn o r m a l i ti n d i c a t e dt h eq u a l i t yo fj i n n i n go r a ll i q u i df o r c h i l d r e nw a ss t e a d ya n dc o n t r o l l a b l e i nt h i sp a p e r c o m p l i e dw i mt h es t a n d a r do fn e wm e d i c i n er e s e a r c h i n go fn u m b e r 6 f i r s t l yt h ea u t h o rc o l l e c t sl i t e r a t u r e t h e ns t u d i e so np r e p a r a t i o nt e c h n i c s s t a n d a r do f q u a l i t y s t a b i l i z a t i o na n dt h ed i s s o l v ei n v i t r oo fp l a s t e ro fx u e t i ed i n g c h u a n a n dg i v e sa s u m m a r y k e yw o r dj i n n i n go r a ll i q u i df o rc h i l d r e n t e c h n o l o g yo fp r e p a r a t i o n q u a l i t y s t a n d a n d s p r i m a r ys t a b i l i t ye s p e r i m e n t 第一章文獻(xiàn)綜述 第一章文獻(xiàn)綜述弟一早義陬綜尬 兒童 是一個具有特殊生理特點的群體 處在生長發(fā)育的階段 機(jī)體各系統(tǒng)和各 器官的功能尚未成熟 特別是嬰幼兒 肝 腎功能 中樞神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)的發(fā) 育尚不健全 對許多藥物的代謝 排泄和耐受性差 用藥必須謹(jǐn)慎 有統(tǒng)計表明 國 內(nèi)市場9 0 o 的藥物都沒有兒童劑型 兒童發(fā)病率高于成人 我國患病兒童占總患病 人口的2 0 o 以上 但用于兒童常見疾病的專用藥物卻很少 不能滿足兒童保健事業(yè) 的需要 j j l 金寧口服液是專門針對兒科常見病感冒中最多見證型風(fēng)熱感冒的中藥制劑 綜合考慮了小兒的生理 病理特點 研制的治療 j j l 風(fēng)熱感冒的良藥 由金銀花 連 翹 荊芥 薄荷等中藥組成 方中金銀花為君藥 金銀花味甘 性寒 歸肺 心 胃 經(jīng) 功能清熱解毒 疏風(fēng)解表 消癰散腫 涼血止痢 連翹為方中臣藥 連翹味苦 性微寒 歸肺 心 膽經(jīng) 功能清宣肺熱 清心安神 解毒消腫 薄荷 荊芥 貫眾 蚤休 桔梗 野菊花等為佐使藥 共具疏風(fēng)解表 清熱解毒之功 經(jīng)臨床驗證 療效 顯著 無毒副作用 痊愈顯效率在9 0 0 以上 實驗研究表明 本制劑具有抗流感病 毒 解熱 止痛 抗炎等綜合治療效應(yīng) 體現(xiàn)了中醫(yī)藥辨證治療小兒感冒的特色 下面對組方主要藥味金銀花 連翹的化學(xué)成分 藥理作用等進(jìn)行綜述 一 金銀花 1 化學(xué)成分 近年來 國內(nèi)外對金銀花的化學(xué)成分進(jìn)行了大量的研究 結(jié)果表明 其富含揮發(fā) 油 此外還有黃酮類 有機(jī)酸類 三萜類等活性成分 1 1 揮發(fā)油成分 e s s e n t i a lo i l 揮發(fā)油是金銀花的有效成分 吳元鎏等 對山東金銀花通過氣質(zhì)聯(lián)用分離出芳樟 醇 雙花醇 王國亮等窿1 從河南栽培的金銀花干花蕾揮發(fā)油中共鑒定出2 7 種成分 多 為單萜及倍半萜類化合物 張玲等口 4 1 從山東金銀花主流品種雞爪花和大毛花干品揮 發(fā)油中分別鑒定出6 5 種和5 9 種成分 主要成分均為棕櫚酸 其他成分則多為醇 醛 酮 酸 酯類和烷烴類等 金銀花鮮花 干花成分差異較大 鮮花揮發(fā)油成分以芳樟 醇為主 含量高達(dá)1 4 以上 其他成分多為低沸點的不飽和萜烯類成分 而干花揮發(fā) 油成分以棕櫚酸為主 一般占2 6 以上 芳樟醇含量僅在0 3 9 以下 1 2 黃酮類化合物 f l a v o n o i d s 小兒金寧口服液的藥掌研究 中沖太七郎首先從金銀花中分得木犀草素 后又分得忍冬苷 高玉敏等疇1 首次從 金銀花中分離出4 個黃酮類化合物 分別鑒定為木犀草素 7 0 a d 葡萄糖甙 木犀草 素 7 0 p d 半乳糖甙 槲皮素 3 01 3d 葡萄糖甙及金絲桃甙 黃麗瑛等 1 從金銀花氯 仿萃取物中又分得5 一羥基一37 4 7 一三甲氧基黃酮和c o r y m b o s i n 最近李永梅等h 3 對 細(xì)氈毛忍冬花蕾進(jìn)行研究 分離得到了木犀草素和槲皮素 1 3 有機(jī)酸類 綠原酸類化合物是金銀花的重要有效成分 包括綠原酸和異綠原酸盯一1 1 4 三萜類 婁紅祥等田1 從金銀花水溶性部分中分離得到3 種具有保肝活性的三萜皂苷 茅青 等n 們從灰氈毛忍冬正丁醇萃取物中分得灰氈毛忍冬皂苷甲 灰氈毛忍冬皂苷乙和川續(xù) 斷皂苷乙 最近陳昌祥等n 婦從金銀花花蕾中分離得到了6 個化合物 其中有一新化合 物 命名為新常春皂苷f 1 5 其他成分 忍冬花蕾中還含有肌醇 1 3 一谷甾醇口1 無機(jī)元素有 f e m n c u z n t i s r m o b a n i c r p b v c o l i c a 等 一般認(rèn)為 金銀花的抗菌有效成分為綠原酸類化合物 并以綠原酸的含量作為金 銀花的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 但綠原酸并非金銀花中唯一的抑菌成分n2 l 揮發(fā)油又名精油 是金 銀花中的另一類主要有效成分 具有一定的藥理活性和濃烈的芳香氣味 目前 以金 銀花揮發(fā)油為主要成分的制劑有金銀花注射液 金銀花露和清咽糖漿等n3 1 萜類化合 物是金銀花揮發(fā)油中的主要有效成分 近代藥理實驗證明 金銀花揮發(fā)油中的雙花醇有較強(qiáng)的體抑菌作用 芳樟醇 香 葉醇 a 一松油醇亦有抗菌抗病毒作用n4 樟醇可平喘鎮(zhèn)咳 治療小兒肺炎及扁桃體炎 虛盤 1 5 號手 o 2 提取工藝 關(guān)于黃酮類化合物的提取 丁立軍等n 們采用水提法 醇提法 超聲波法探討了從 金銀花中提取黃酮類化合物的最佳工藝條件 實驗結(jié)果表明 超聲波法的提取效果最 好 即在6 0 倍于樣重的4 0 乙醇中浸泡2 4 小時后 再經(jīng)超聲波萃取4 5 分鐘條件下 金銀花中總黃酮類化合物浸出率最高 金銀花乙醇提取液中綠原酸的含量高于水提取液 但浸出物得率低于后者 由金 銀花高效液相色譜圖可以看出 金銀花水 乙醇提取液中組分相同 但各組分的含量 不同 醇提取液中除綠原酸色譜峰大于水提取液 其余色譜峰均小于后者 而且抑菌 試驗結(jié)果亦顯示出 水提取液的抑菌效果優(yōu)于乙醇提取液 這就證實了金銀花中除綠 原酸外其他組分亦具有抑菌活性 因此優(yōu)選會銀花的提取工藝時 測定綠原酸含量并 2 第一章文獻(xiàn)綜述 結(jié)合測定浸出物得率是合理的 侯冬巖等報道用蒸餾一萃取法提取金銀花中揮發(fā)性物質(zhì) 測得金銀花揮發(fā)油的含 量為2 5 2 用g c m s 法從金銀花揮發(fā)油中分離并確定出5 0 種化學(xué)成分 用峰面積歸 一化法通過化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 得出各化學(xué)成分在揮發(fā)油中的相對百分含量 金銀花中含有木犀草素 異綠原酸 綠原酸等多種黃酮類化合物 黃酮類化合物 主要指以2 一苯基色原酮為基核的一類化合物 以游離的甙原或以與糖結(jié)合的甙類等 形式存在于很多植物中 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明 黃酮類化合物具有降低心肌耗氧量 使 冠脈和腦血管的血液流量增加 抗心律 軟化血管 降血糖和血脂等作用 同時它還 是一種天然的抗氧化劑 具有清除人體中超氧離子自由基 抗衰老 增加機(jī)體免疫力 的生理活性作用 本文采用加熱回流法和超聲波法從金銀花中提取黃酮類化合物 加 熱回流法 取岫巖金銀花粉碎后 4 0 目 于6 0 干燥6 h 精密稱取2 1 2 3 6 9 用4 0 m 1 7 0 乙醇浸泡過夜 加熱回流3 次 每次4 h 抽濾 合并濾液 并用少量7 0 乙醇洗滌容 器 洗液并入濾液中 在水浴上減壓蒸餾 除去醇液 提取液用石油醚脫脂3 次 濃 縮得浸膏0 1 3 1 5 9 用適量9 5 乙醇溶解 過濾至l o o m l 容量瓶中 洗滌 合并濾液 與洗液 用9 5 乙醇定容至刻度 搖勻 作為貯備液 超聲波法 取岫巖金銀花粉碎 后 4 0 目 于6 0 干燥6 h 精密稱取1 0 o o g 放入錐形瓶中 加入9 5 乙醇5 0 m l 在 冰水浴中用超聲波振蕩器振蕩2 0 m i n 將提取液過濾至l o o m l 容量瓶中 殘渣再重復(fù) 振蕩提取2 次 將3 次的濾液合并 在水浴上減壓蒸餾 得浸膏0 8 5 5 0 9 然后用9 5 乙醇溶解 并用9 5 乙醇溶液定容至刻度 搖勻 放置以備用 在黃酮類化合物的定 量分析中 采用光譜分析方法可在特定的堿性條件下加入顯色劑使之呈現(xiàn)特征顏色 進(jìn)行測定時 加入亞硝酸鈉 硝酸鋁 氫氧化鈉作為顯色劑 可排除其它物質(zhì)的干擾 從而提高測定準(zhǔn)確度 高效液相色譜法測定金銀花中綠原酸的含量 色譜條件和色譜圖 色譜柱 b o n d a p a k c l 8 4 6 m m 3 0 0 m m 1 0i lm 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所提供 流動相 甲醇一乙腈一0 o l m o l l 磷酸二氫鈉溶液 用冰醋酸調(diào)p h 為3 0 1 0 1 3 7 7 檢測波 長 3 2 6 n m 流速 i m l m i n 衰減 1 0 2 4 靈敏度 0 1 a u f s 柱溫 室溫 流速 0 2 5 c m m i n 3 藥理作用 金銀花及其同屬植物藥理作用研究表明 金銀花具有抗病原微生物 解熱 抗炎 保肝 止血 抗氧化 免疫調(diào)節(jié)等作用 3 1 抗病原微生物作用 實驗研究結(jié)果表明 金銀花對多種致病菌均有一定的抑制作用 包括金黃色葡萄 球菌 溶血性鏈球菌 大腸桿菌 痢疾桿菌 霍亂弧菌 傷寒桿菌 副傷寒桿菌 對 3 小兒 g j 1 口服液的藥學(xué)研究 肺炎球菌 腦膜炎雙球菌 綠膿桿菌 結(jié)核桿菌亦有效 水浸劑比煎劑作用強(qiáng) 金銀 花對致齲病的變形鏈球菌 放線粘桿菌和引起牙周病的產(chǎn)黑色素類桿菌 牙齦類桿菌 及伴放線嗜血菌亦顯示了較強(qiáng)的抗菌活性 金銀花于體外有一定的抗鉤體作用 對皮 膚真菌有一定抑制作用 金銀花水煎劑 1 2 0 在人胚腎原代單層上皮細(xì)胞組織培養(yǎng) 上 對流感病毒 孤兒病毒 皰疹病毒增多有抑制作用 金銀花對革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi) 毒素有較強(qiáng)的拮抗作用 對抗艾滋病病毒 h i v 亦顯示中等活性 3 2 解熱 抗炎作用 實驗研究結(jié)果表明 金銀花水煎液 口服液和注射液對角叉菜膠 三聯(lián)菌苗致熱 有不同程度的退熱作用 對蛋清 角叉菜膠 二甲苯所致足水腫亦有不同程度的抑制 作用 3 3 保肝作用 動物實驗研究結(jié)果表明 金銀花中的三萜皂苷對小鼠肝損傷有明顯的保護(hù)作用 黃褐毛忍冬總皂苷能顯著抑制乙酰氨基酚及d 一半乳糖胺所致肝中毒小鼠血清a l t 的 升高及降低肝臟甘油三酯含量 并明顯減輕肝臟病理損傷的嚴(yán)重程度 使肝臟點狀壞 死數(shù)總和及壞死改變出現(xiàn)率明顯降低 并且對醋氨酚與鎘所致小鼠急性肝損傷也有明 顯的保護(hù)作用 動物實驗研究結(jié)果表明 金銀花所含多種綠原酸類化合物具有顯著的 利膽作用 可增進(jìn)大鼠膽汁分泌 3 4 止血作用 實驗研究結(jié)果表明 會銀花炭水煎液 混懸液具有顯著的止血作用 而且混懸液 的作用強(qiáng)于水煎液 金銀花炭中鞣質(zhì)的含量僅為生品的1 2 但其止血作用卻明顯優(yōu) 于生品 從而提示鞣質(zhì)并非金銀花炭止血作用的唯一物質(zhì)基礎(chǔ) 3 5 降血脂作用 動物實驗研究結(jié)果表明 金銀花能顯著降低多種模型小鼠血清膽固醇 t c 及動脈 粥樣硬化指數(shù) a 1 提高高密度脂蛋白一膽固醇 h d l c 含量 保護(hù)胰腺b 細(xì)胞及弱降 糖作用 3 6 抗生育作用 動物實驗研究結(jié)果表明 金銀花乙醇提取后的煎劑注射給藥 對小鼠 狗 猴等 多種動物具有抗生育作用 3 7 對免疫系統(tǒng)的作用 動物實驗研究結(jié)果表明 金銀花具有促進(jìn)白細(xì)胞 促進(jìn)炎性細(xì)胞吞噬功能 降低 豚鼠t 細(xì)胞a 一醋酸萘酯酶 a n a e 百分率 降低中性粒細(xì)胞 p m n 體外分泌功能 恢復(fù) 巨噬細(xì)胞和調(diào)理淋巴細(xì)胞功能 顯著增強(qiáng)i l 一2 的產(chǎn)生 具有調(diào)二市機(jī)體免疫功能的作 用 4 第一章文獻(xiàn)綜述 3 8 抗氧化作用 利用h 2 0 2 c t m a b 魯米諾發(fā)光體系研究證明 金銀花水提物在體外對h 2 0 具有直接 的清除作用 且呈線性量效關(guān)系 說明其具有抗氧化反應(yīng)的作用 3 9 中樞興奮等作用 動物實驗研究結(jié)果表明 金銀花中所含綠原酸可引起大鼠 小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)興 奮 口服大劑量綠原酸能增加胃腸蠕動 促進(jìn)胃液及膽汁分泌 此外綠原酸還能輕微 增加腎上腺素及去甲腎上腺素對貓與大鼠的升壓作用 3 1o 毒副作用 實驗研究結(jié)果表明 金銀花中綠原酸具有致敏原作用 可引起變態(tài)反應(yīng) 但口服 無此反應(yīng) 因綠原酸可被小腸分泌物轉(zhuǎn)化成無致敏活性的物質(zhì) 實驗也證明金銀花有 輕微溶血作用 二 連翹 連翹為木犀科連翹屬落葉灌木連翹的果實 性平 味甘 苦 具有清熱解毒 消 腫散結(jié)的功效 現(xiàn)代藥理表明 連翹具有抗菌 抗病毒 保肝抗炎解熱功效n7 i 故現(xiàn) 代醫(yī)學(xué)常用于治療急性呼吸道感染 皮膚化膿性感染 急性腎炎等病癥 連翹中含有 多種化學(xué)成分 如三萜類n8 木脂素類 9 其中三萜類中的熊果酸和齊墩果酸為抗肝 損傷的有效成分啪3 1 化學(xué)成分 1 1 苯乙醇苷類 1 9 8 1 年 e n d ok a t s u y a 等人從連翹的葉中分得連翹酯苷 f o r s y t h o s i d ea 婦2 j 1 9 8 2 年 n i s h i b es a n s e i 等人從連翹果實中分得f o r s y t h i a s i d e 乜2 比較了這2 種成 分的結(jié)構(gòu)式和光譜數(shù)據(jù) 發(fā)現(xiàn)二者為同一物質(zhì) 1 9 8 2 年 n i s h i b es a n s e i 等人從連翹果實中分離得到1 種抗菌活性成分s u s p e n s a s i d e 口朝 同年 e n d ok a t s u y a 等從連翹果實中分離出f o r s y t h o s i d ec 和f o r s y t h o s i d ed 乜4 j 從三者的光譜數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)式來看 s u s p e n s a s i d e 和f o r s y t h o s i d ec 為同 一物質(zhì) 從連翹的果實中還分離出一種酚性化合物 為棕黃色粉末 其水溶液在紫外線下 呈碧綠色熒光 實驗式c j h 0 7 定名為連翹酚 f o r s y t h 0 1 洶1 1 2 目脂體及其苷類 1 9 7 7 年 西部三省等報道了對連翹果實中目脂體苷成分的研究結(jié)果 證明連翹果 實含連翹苷1 6 m g g 瞳7 另1 9 9 7 年 劉東雷等報道 自連翹的果實中分離得到3 種目 脂素單糖苷 根據(jù)理化數(shù)據(jù)和光譜手段鑒定為 松脂素一b d 一葡萄糖苷 5 小兒金寧口服液的藥掌研究 p i n o r e s i n o l b d g l u c o s i d e 1 松脂素單甲基醚一b d 葡萄糖苷 p i n o r e s i n o lm o n om e t h y le t h e r b d g l u c o s i d e 2 連翹苷 p h i l l y r i n 3 其中 2 為本種植物首次分離嘲 1 3 五環(huán)三萜類 西部三省等研究表明 連翹含有下列3 種五環(huán)三萜化合物 白樺酯酸 b e t u l i n i c a c i d 齊墩果酸 o l e a n o l i ca c i d 和熊果酸 u r s o l i ca c i d 啪瑚1 劉j 下光等在研究連翹抗急性肝炎有效部位時 曾分離到兩個三萜 齊墩果酸和熊 果酸口 另李紅兵等用薄層比色法測得連翹中齊墩果酸含量為2 2 8 羽 1 9 9 1 年 胡 旺云等還首次從連翹得二氯甲烷可溶部位分得乙?；苅s o b a u e r e n y la c e t a t e 和 2 0 s 一d a m m a r 2 4 0 e m e 3b 2 0 d i o l 一3 一a c e t a t e 3 3 1 1 4 揮發(fā)油 揮發(fā)油存在于連翹的種子連翹心中 含量在4 以上 平均可達(dá)3 8 在自然界 含揮發(fā)油如此高的植物并不多見 劉國聲等對連翹種子中揮發(fā)油成分進(jìn)行氣相色譜一 質(zhì)譜一計算機(jī)聯(lián)用分析 又用減壓分餾 柱層析等方法進(jìn)行了揮發(fā)油中主成分的提取 分離 還測定了幾種主成分在揮發(fā)油中的百分含量 a 一蒎烯1 5 7 9 卜0 一蒎烯6 0 2 傘花烴3 5 芳樟醇6 o 口4 石素賢等自連翹果實中蒸出揮發(fā)油 收油率0 2 用毛細(xì)管氣相色譜法分離出 2 3 個峰 并用氣相色譜一質(zhì)譜法從中共鑒定了1 9 個成分 其主要成分是8 一蒎烯 7 6 2 7 q 一蒎烯 1 5 1 1 水芹烯 1 5 5 對聚傘花烯 1 2 0 芳樟醇 1 0 8 也蟹 3 5 寸0 衛(wèi)世安等對連翹種子和果皮中的揮發(fā)油進(jìn)行了研究 共鑒定出1 9 個成分 含量 在5 以上的主要成分是b 一蒎烯 q 一蒎烯和松油烯一4 一醇 果皮和種子中的揮發(fā)油含 量分別為0 3 2 0 3 7 m l g 和3 3 4 0 m l g 二者的成分及其相對含量基本一 致 圳 徐植靈等從連翹果實中提取了揮發(fā)油 用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法分析其揮發(fā)油的 化學(xué)成分 鑒定出b 一蒎烯 香檜烯 q 一蒎烯等5 6 個化合物 并用氣相色譜測定了 揮發(fā)油中各成分的相對含量 其鑒定率達(dá)9 3 3 7 訂1 2 提取分離 郝旭亮等采用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) g c m s 進(jìn)行分析 比較水蒸汽蒸餾法 s d 和超臨界c o 萃取法 s f e c 0 2 所提連翹揮發(fā)油的化學(xué)成分及其含量 兩種方法所得揮 發(fā)油主要成分基本一致 均為b 一蒎烯 c t 一蒎烯和檜萜 4 一 卜異丙基 一苯甲醇和2 一 4 一 異丙基 一苯甲醇兩成分為s f e c o 方法所得 其余成分兩種方法均可提出 含量略有 差異 并首次從連翹中得到檜萜 反一松香芹醇 香桃木醇等成分 結(jié)果發(fā)現(xiàn)s f e c o 6 第一章文獻(xiàn)綜述 法提取效率高 提取成分較完全 為提取連翹揮發(fā)油的理想方法啪1 王鵬等采用正交試驗法對超臨界c 0 萃取連翹揮發(fā)油的條件進(jìn)行了研究 結(jié)果顯 示最佳萃取條件為萃取壓力3 0 m p a 萃取溫度3 5 解析壓力6 7m p a 解析溫度5 0 粉碎度o 5 5 咖 按對結(jié)果的影響大小依次排列為萃取溫度 粉碎度 萃取壓力 解析壓力 解析溫度 用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定了最佳萃取條件所得連翹揮發(fā) 油的化學(xué)成分 從中鑒定出2 1 種成分 并測定了其相對含量 主要成分為q 一蒎烯 b 一蒎烯 萜品醇一4 q 一萜品醇 苯甲醇等呻3 張忠義等對連翹的親脂性化學(xué)成分進(jìn)行了研究 采用超臨界c o 萃取技術(shù)從連翹 中提取親脂性成分 并用g c m s 計算機(jī)聯(lián)用技術(shù)分離鑒定其中的化學(xué)組成 計算其相 對含量 萃取物得率6 4 8 該萃取物由醋酸旱哪醇酯等2 1 個成分組成h 石鉞等對銀翹散抗流感病毒作用的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究 運用色譜技術(shù)進(jìn)行分離 波譜等方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)從銀翹散抗流感病毒有效部位群 e f y 中分離得到1 1 種成分 鑒定為牛蒡子苷 i 連翹苷 i i 連翹酯苷 i i i 甘草苷 甘草素 v 染料木素 芒柄花素 大豆素 6 一甲氧基大豆素 3 37 4 三甲氧 基鞣花酸 x 和綠原酸 其中染料木素 大豆素 6 一甲氧基大豆素和3 3 4 一 三甲氧基鞣花酸為首次從銀翹散群藥中獲得晗4 3 藥理作用 3 1 抗菌作用 連翹屬植物中的咖啡酰糖苷類成分連翹酯苷 s u s p e n s i d e b h y d r o x y a x t e o s i d e f o r s y t h o s i d eb 均有很強(qiáng)的抗菌活性 3 其乙醇提取物抗菌譜 廣 對多種革蘭氏陽性菌 陰性菌均有抑制作用 其煎劑的最低抑菌濃度 m i c 分別 為 志賀氏痢疾桿菌 史氏痢疾桿菌 鼠疫桿菌 人型結(jié)核桿菌1 6 4 0 金黃色葡萄 球菌 傷寒桿菌 霍亂弧菌1 3 2 0 肺炎雙球菌 副傷寒桿菌l 1 6 0 溶血性鏈球 菌 福氏痢疾桿菌 大腸埃希氏菌 變形桿菌 白喉桿菌1 8 0 連翹酚為其抗菌 的主要成分 對金黃色葡萄球菌及志賀氏痢疾桿菌的m i c 分別為1 5 1 2 0 及l(fā) 1 0 2 4 其抗菌作用穩(wěn)定而徹底 該油還有明顯抑制金黃色葡萄球菌血漿凝固醇對血漿的凝固 作用 可使感染家兔血液中金黃色葡萄球菌的數(shù)量明顯減少 金黃色葡萄球菌在含有 該油的培養(yǎng)基中連續(xù)2 0 代傳代培養(yǎng) 未見耐藥性形成 們1 此外 對齲病主要致病菌 具有體外抑菌作用h4 比較連翹 金鐘花 朝鮮連翹各果實水浸膏的抗菌作用 以連 翹為最強(qiáng)h 引 3 2 抗病毒作用 連翹屬植物提取物有抗柯薩奇b 5 病毒及埃柯病毒的作用n 引 柯薩奇b 組病毒是 引起心肌炎的病因之一 比較連翹 寸冬 雙花 山豆根4 種中藥水煎劑抗柯薩奇b 7 小兒金寧口服液的藥掌研究 組病毒的活性 以連翹為最佳 連翹在先加藥后加病毒組 感染病毒同時加藥組 感 染病毒后加藥組中 均有一定的抗病毒作用 引 雞胚體外試驗證明連翹對亞洲甲型流 感病毒 鼻病毒1 7 型等也有抑制作用 3 3 抗炎作用 大鼠巴豆油性肉芽囊實驗證明 連翹醇提取物的水溶液腹腔注射有非常明顯的抗 滲出作用及降低炎性部位血管壁脆性作用 而對炎性屏障的形成無抑制作用 用3 2 p 標(biāo)記紅細(xì)胞實驗也觀察到其滲入已注射連翹提取物水溶液的大鼠巴豆油性肉芽囊內(nèi) 的數(shù)量明顯減少 表明連翹尚能促進(jìn)炎性屏障的形成 復(fù)方連翹注射液具有明顯的抗 炎作用 能降低大鼠和小鼠毛細(xì)血管的通透性 減少炎性滲出 對蛋清所致足爪水腫 有抑制作用 并能增強(qiáng)小鼠炎性滲出細(xì)胞的吞噬能力 從而增強(qiáng)機(jī)體的抗防御機(jī)能h 8 1 并對煙霧刺激所致地鼠呼吸道炎癥具有保護(hù)作用h9 1 3 4 對心血管系統(tǒng)的影響 連翹果殼所含齊墩果酸有輕微的強(qiáng)心作用 1 0 0 連翹注射液0 2 5 9 k g 靜注可使 麻醉犬的血壓顯著下降 從1 2 0 0 0 衄h g 降至4 5 5 0 f i l mh g 0 5 9 k g 耳緣靜注也可 使麻醉兔的血壓急速從1 0 0 m mh g 降至4 0 4 2 柵h g 在3 0 s 內(nèi)即降至最低點 一般在 3 4 m i n 恢復(fù)到原來水平 其所含的蘆丁能增強(qiáng)毛細(xì)血管的致密度 對毛細(xì)血管破裂 出血 皮下溢血有止血作用 復(fù)方連翹注射液腹腔注射或靜注有降壓作用 而靜滴無 此作用 清膽注射液 以連翹為主要組方 對內(nèi)毒素性休克有一定的升高和穩(wěn)定血壓作 用 平均升高血壓可達(dá)4 4 咖h g 繼續(xù)給藥及補(bǔ)液情況下可使血壓繼續(xù)升高 升壓時 伴有脈壓差增大 對血壓的作用可能是由于本品有擴(kuò)張血管和收縮血管雙重作用 前 者改善微循環(huán)的血液灌注 后者保持血管張力 以維持一定血壓 3 4 抗內(nèi)毒素作用 近年來隨著抗生素的廣泛應(yīng)用 革蘭氏陽性菌感染性疾病已逐漸減少 而革蘭氏 陰性菌感染性疾病則顯著增多 革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的一種脂多糖內(nèi)毒素有復(fù)雜的 生物活性 可直接或間接的對機(jī)體產(chǎn)生損傷作用 且是引起休克的主要原因 目前臨 床應(yīng)用的抗生素 在使細(xì)菌細(xì)胞被摧毀的同時也釋放出大量的內(nèi)毒素 加重內(nèi)毒素血 癥的程度 有人通過實驗對幾種常用的中草藥進(jìn)行體外抗內(nèi)毒素效力比較 結(jié)果表明 相同濃度 1 0 0 的雙花 公英 連翹 地丁 敗醬草藥液中加入等量的內(nèi)毒素 1 0 0 0 0 p g 經(jīng)相互作用后 其殘余內(nèi)毒素量分別為5 4 0 1 0 8 0 7 5 0 8 0 0 和1 1 5 0 p g 減毒倍數(shù)分 別為1 8 5 9 3 1 3 3 5 6 和8 7 以連翹 雙花作用為最強(qiáng) 且這種作用是對內(nèi)毒 素的直接摧毀而不是對其活性的暫抑制瞄0 1 3 5 抑制彈性蛋白酶活力的作用 彈性蛋白酶是一種蛋白水解酶 能分解肺泡壁的彈力纖維 人體內(nèi)的彈性蛋白酶 主要來源于中性粒細(xì)胞及肺泡巨噬細(xì)胞 慢性阻塞性肺疾病 c o p d 患者體內(nèi)彈性蛋白 第一章文獻(xiàn)綜述 酶抑制劑先天性缺乏或活力下降 因而檢測慢性阻塞性肺疾病患者體內(nèi)彈性蛋白酶活 力以尋找彈性蛋白酶抑制劑藥物已引起臨床及實驗工作者的關(guān)注 有人以瓊脂擴(kuò)散測 定法比較了連翹 丹參 當(dāng)歸 川穹嗪等抑制彈力蛋白酶活力強(qiáng)弱 結(jié)果表明這4 種 中藥對彈性蛋白酶活力均有顯著抑制作用 其中以連翹為最優(yōu) 當(dāng)連翹為 7 5 m g 2 5 9 m 1 時即能完全抑制該酶的活力 而等量的月 參 當(dāng)歸 川穹嗪雖對其有 顯著抑制作用 但在瓊脂板上仍出現(xiàn)了該酶的溶解環(huán) 所以進(jìn)一步研究連翹的這種作 用并分析其有效成分 可望發(fā)掘出抑制彈性蛋白酶的新藥隋 3 6 抑制c a m p 磷酸二酯酶活力的作用 磷酸二酯酶能水解c a m p 細(xì)胞內(nèi)c a m p 的濃度隨生理現(xiàn)象和病理狀態(tài)變化而變化 因而被視為重要的生理活性物質(zhì)之一 體外實驗表明連翹屬植物中的苯乙醇苷類及木 質(zhì)素類均有抑制c a m p 磷酸二酯酶活力的作用 對其構(gòu)效關(guān)系的研究表明 木質(zhì)素同 族元素中兩對位酚羥基對其活性有重要影響 若兩對位酚羥基被甲基化或酰糖基取 代 其活性將大大降低 3 7 解熱作用 連翹煎劑4 9 生藥 k g 灌胃 能使靜注枯草桿菌浸液所致的家兔發(fā)熱作用顯著下 降 1 h 后恢復(fù)正常 隨后還可降致正常體溫以下 復(fù)方連翹注射液也有明顯的解熱作 用 能減弱傷寒菌苗所致家兔的發(fā)熱 也能降低正常家兔的體溫 3 8 保肝作用 連翹1 1 注射液給大鼠皮下注射能明顯降低大鼠皮下注射四氯化碳引起的血清谷 丙轉(zhuǎn)氨酶活性增高 對照組為 3 3 7 0 0 6 3 5 0 u 給藥組為 1 4 6 5 0 1 1 1 0 u 同 時肝臟壞死和變性明顯減輕 肝細(xì)胞內(nèi)積蓄的肝糖元及核糖核酸含量大部分恢復(fù)或接 近正常 表明連翹具有抗肝損傷作用 從連翹中得到的連翹苷b 部分 齊墩果酸和熊 果酸是連翹抗肝損傷的有效成分 均能降低實驗性肝損傷動物的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶水 平 3 9 鎮(zhèn)吐作用 連翹煎劑灌胃能減少家鴿翼靜脈注射洋地黃酊或犬注射阿樸嗎啡引起的嘔吐次 數(shù) 延長洋地黃所致嘔吐的潛伏期 其鎮(zhèn)吐效果與注射氯丙嗪2 h 后相仿 鎮(zhèn)吐作用 可能是由于連翹能抑制延腦催吐化學(xué)感受區(qū)之故 3 1o 利尿作用 1 0 0 連翹注射液0 2 5 9 k g 靜注對麻醉犬有顯著而肯定的利尿作用 給藥后o 5 和 1 h 的利尿作用分別為對照組的2 2 和1 6 6 倍 連翹所含的齊墩果酸有輕微的強(qiáng)心利 尿作用 3 11 鎮(zhèn)痛作用 9 3 12 連翹對于活性氧具有抑制作用嗽1 重用連翹還可以用于治療過敏性