高中生物 專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用精品學(xué)案 新人教版選修1.doc

專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第5課時(shí)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)目標(biāo)導(dǎo)航1.了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，掌握無(wú)菌操作技術(shù)的有關(guān)內(nèi)容。2.了解消毒和滅菌常用的方法及二者的區(qū)別。3.學(xué)會(huì)以大腸桿菌為材料進(jìn)行微生物培養(yǎng)與分離純化的方法。一、培養(yǎng)基與無(wú)菌技術(shù)1培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對(duì)_的不同需求，配制出供其_的_。(2)成分：一般含有_、_、_、_，此外還要滿足微生物對(duì)_(即生長(zhǎng)因子)、_以及氧氣的需求。拓展深化營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來(lái)源碳源能提供所需_的物質(zhì)構(gòu)成生物體的_和一些_，有些是異養(yǎng)生物的_無(wú)機(jī)化合物：co2、nahco3等；有機(jī)化合物：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等氮源能提供所需_的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無(wú)機(jī)化合物：n2、nh3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(生長(zhǎng)因子)生長(zhǎng)必不可少的_酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等水在生物體內(nèi)含量很高，在低等生物體內(nèi)含量更高不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定無(wú)機(jī)鹽為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素細(xì)胞內(nèi)的組成成分，生理調(diào)節(jié)物質(zhì)，某些化能自養(yǎng)菌的能源，酶的激活劑(3)培養(yǎng)基的種類劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)_培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂_半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類、鑒定_培養(yǎng)基微生物_、_、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種化學(xué)成分_培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)_培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成)分類、鑒定用途_培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以_不需要的微生物的生長(zhǎng)，_所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、_出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素或鏈霉素；培養(yǎng)固氮菌可用無(wú)氮培養(yǎng)基，如阿須貝培養(yǎng)基)_培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品_不同種類的微生物，如可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)注意病毒目前不能利用人工培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)，需接種在動(dòng)、植物組織細(xì)胞中才能繁殖。常用于培養(yǎng)病毒的是活雞胚。2無(wú)菌技術(shù)(1)概念：防止一切外來(lái)雜菌的侵入，并保持滅菌物品及無(wú)菌區(qū)域不再被污染的方法，稱為無(wú)菌技術(shù)。注意在微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中，無(wú)菌技術(shù)的核心是_，_。(2)無(wú)菌技術(shù)的具體內(nèi)容對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的_、操作者的_進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的_、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行_。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在_進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已_處理的材料用具與周圍的物品相接觸。(3)消毒和滅菌的概念消毒：消毒是指使用_的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的_(不包括芽孢和孢子)。滅菌：滅菌是指使用_的理化因素殺死物體內(nèi)外_，包括_。消毒與滅菌的區(qū)別：兩者最大的區(qū)別是_。拓展深化某些細(xì)菌在其生長(zhǎng)發(fā)育后期，可在細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形的抗逆性休眠體，稱為芽孢。每個(gè)細(xì)菌細(xì)胞僅形成一個(gè)芽孢，故它無(wú)繁殖功能。芽孢有極強(qiáng)的抗熱、抗輻射、抗化學(xué)藥物和抗靜水壓的能力。芽孢的休眠能力十分驚人，可保持幾年到幾十年的生活力。孢子是微生物產(chǎn)生的一種有繁殖或休眠作用的細(xì)胞。一般是單細(xì)胞，個(gè)體微小，通常是適應(yīng)于從不利環(huán)境條件中存活下來(lái)，并在條件改變時(shí)產(chǎn)生新的營(yíng)養(yǎng)體，能直接發(fā)育成新個(gè)體。(4)消毒與滅菌的常用方法方法條件作用對(duì)象消毒_100，煮沸56 min殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢_(dá)7075煮30 min或80煮15 min不耐高溫的液體_70%的酒精對(duì)雙手消毒50%的石炭酸、來(lái)蘇水對(duì)空氣消毒一定濃度的乳酸、食醋通過(guò)熏蒸對(duì)空氣進(jìn)行消毒紫外線法紫外線照射30 min物體表面或空氣中的微生物滅菌_在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒對(duì)接種環(huán)、接種針或其他金屬工具滅菌，也可以對(duì)試管口、瓶口滅菌_在干熱滅菌箱內(nèi)，160170條件下，加熱12 h耐高溫且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金屬用具等_在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121，100 kpa，滅菌1530 min_30 w照射30 min小型接種室、接種箱等二、實(shí)驗(yàn)操作(一)配制培養(yǎng)基1配制原則(1)_(根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等)，如培養(yǎng)基可由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成；生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)，而分類鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學(xué)成分的物質(zhì)。(2)_，注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)_，各種微生物適宜生長(zhǎng)的ph范圍不同，細(xì)菌6.57.5、放線菌7.58.5、真菌5.06.0。注意不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)需求不同，因此，首先根據(jù)不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求配制針對(duì)性強(qiáng)的培養(yǎng)基。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)低不能滿足微生物營(yíng)養(yǎng)需要，過(guò)高對(duì)微生物的生長(zhǎng)有抑制作用，另外，培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度比直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比(c/n)的影響較大。例如，在谷氨酸生產(chǎn)中，當(dāng)培養(yǎng)基中的碳源與氮源的比為41時(shí)，菌體大量繁殖，而產(chǎn)生的谷氨酸少；當(dāng)碳源與氮源的比為31時(shí)，菌體繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。2配制方法(以制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基為例)(1)培養(yǎng)異養(yǎng)菌的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏5.0 g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10.0 g氮源和維生素nacl 5.0 g無(wú)機(jī)鹽h2o定容至1 000 ml氫元素、氧元素(2)實(shí)驗(yàn)流程提醒合格的培養(yǎng)基必須滅菌效果好。培養(yǎng)基配制好后，要放在恒溫箱中保溫12 d，若無(wú)菌落生長(zhǎng)則說(shuō)明制備的培養(yǎng)基是合格的。(二)純化大腸桿菌純化大腸桿菌就是為了獲得大腸桿菌的純種菌落，這需在培養(yǎng)時(shí)，盡量使菌落中的菌體來(lái)自于一個(gè)大腸桿菌的分裂，即這個(gè)菌落的細(xì)菌群體由一個(gè)大腸桿菌繁殖而來(lái)，這就需接種時(shí)盡量接種單個(gè)的大腸桿菌。1微生物接種的方法微生物接種的方法最常用的是_和_兩種。(1)_通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。將_放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的_。將試管口通過(guò)酒精燈的_。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，_一環(huán)菌液。將試管口通過(guò)酒精燈的火焰，并迅速塞上棉塞。_將培養(yǎng)皿皿蓋打開一條縫隙，_將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入_，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將_的劃線與_相連。將_，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(2)_則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。系列稀釋操作a取盛有9 ml水的6支試管滅菌，并按101106的順序編號(hào)。b用_吸取1 ml培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。c從101倍稀釋的試管中吸取1 ml稀釋液，注入102倍稀釋的試管內(nèi)吹吸均勻，獲得102倍液。依此類推。涂布平板操作a將_浸在盛有酒精的燒杯中。b取不超過(guò)0.1 ml的_，滴加到培養(yǎng)基表面。c將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810 s。d用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。2注意事項(xiàng)(1)平板劃線法操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進(jìn)行_，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒_。從第二次以后的劃線操作總是從_開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。(2)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜，且各個(gè)細(xì)節(jié)均需保證“_”，應(yīng)特別注意：酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。吸管頭不要接觸任何其他物體。吸管要在酒精燈火焰周圍使用。3微生物分離純化培養(yǎng)的結(jié)果作出分析與評(píng)價(jià)(1)培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對(duì)照，若有菌落形成，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底。(2)在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。(3)培養(yǎng)12 h和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是時(shí)間越長(zhǎng)，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大，而菌落的位置不動(dòng)，只是菌落數(shù)增多。(4)頻繁使用的菌種利用臨時(shí)保藏法保存，長(zhǎng)期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4冰箱中，第36個(gè)月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點(diǎn)是保存時(shí)間較短，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異；后者將菌種與無(wú)菌甘油等量混合后保存在20的冷凍箱中。4菌種的保存為了保持菌種的純凈，需對(duì)菌種進(jìn)行保藏。對(duì)于頻繁使用的菌種，我們可以采用_法；對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用_法。將菌種放在低溫環(huán)境中保藏的目的是_，但時(shí)間長(zhǎng)了菌種還是要老化的，因此對(duì)臨時(shí)保存的菌種_個(gè)月后需重新接種。知識(shí)點(diǎn)一培養(yǎng)基與無(wú)菌技術(shù)1不同的微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以co2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營(yíng)養(yǎng)的描述中，不正確的是()a氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素b碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)c無(wú)機(jī)鹽是該微生物不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)d水是該微生物的營(yíng)養(yǎng)要素之一2下列說(shuō)法正確的是()a培養(yǎng)基是為微生物的生長(zhǎng)繁殖提供營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì)b培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基c除水以外的無(wú)機(jī)物只能提供無(wú)機(jī)鹽d無(wú)機(jī)氮源不可能提供能量知識(shí)點(diǎn)二大腸桿菌的純化培養(yǎng)3有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是()a第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物b每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上的菌種c在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于菌液d劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者4下列為某同學(xué)在培養(yǎng)金黃色葡萄球菌實(shí)驗(yàn)中的部分操作步驟，其中正確的是()a培養(yǎng)基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接補(bǔ)充蒸餾水至100 mlb培養(yǎng)基配制完畢可直接使用c加壓至100 kpa之前，要徹底排出鍋內(nèi)的冷空氣d將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，滅菌后立即伸入菌液試管內(nèi)挑取少量菌種一、選擇題1關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，敘述錯(cuò)誤的是()a操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌b將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯c待培養(yǎng)基冷卻至50左右時(shí)進(jìn)行倒平板d待平板冷卻凝固約510 min后，將平板倒過(guò)來(lái)放置2金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒，下述實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的做法錯(cuò)誤的是()a對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理b帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后才能倒掉c帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)加熱后才能倒掉d接種后雙手必須經(jīng)肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭3防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應(yīng)用微生物的前提。下列敘述錯(cuò)誤的是()a實(shí)驗(yàn)室里可以用紫外線或化學(xué)藥物進(jìn)行消毒b接種環(huán)、接種針等金屬用具，直接在酒精燈火焰的內(nèi)焰部位灼燒滅菌c在實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被微生物感染d使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境4下列敘述錯(cuò)誤的是()a右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞，為避免污染需放在酒精燈火焰附近b倒平板整個(gè)過(guò)程應(yīng)在火焰旁進(jìn)行c打開培養(yǎng)皿蓋，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋d為避免水滴滴入培養(yǎng)基，平板應(yīng)倒過(guò)來(lái)放置5有關(guān)稀釋涂布平板法的說(shuō)法中，錯(cuò)誤的是()a用移液管把菌液從一支試管轉(zhuǎn)移到下一支試管后，要用手指輕壓移液管的橡皮頭，吹吸三次，目的是使菌液與水充分混勻b移液管需經(jīng)過(guò)滅菌c試管口與移液管應(yīng)在離火焰12 cm處d涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)涂布器，使菌液涂布均勻6以下關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作順序正確的是()a計(jì)算稱量倒平板溶化滅菌b計(jì)算稱量溶化倒平板滅菌c計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板d計(jì)算稱量滅菌溶化倒平板7為了保持菌種的純凈，需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是()a對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法b臨時(shí)保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養(yǎng)基上c臨時(shí)保藏的菌種容易被污染或產(chǎn)生變異d對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用低溫4保藏的方法8有關(guān)平板劃線操作的敘述，正確的是()a使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過(guò)程中不再滅菌b打開含菌種的試管需通過(guò)火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞c把皿蓋打開，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可d最后將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)二、簡(jiǎn)答題9某學(xué)校打算開辟一塊食用菌栽培基地，以豐富學(xué)生的勞動(dòng)技術(shù)課內(nèi)容。首先對(duì)食用菌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清掃和消毒處理，準(zhǔn)備食用菌栽培所需的各種原料和用具，然后從菌種站購(gòu)來(lái)各種食用菌菌種。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)對(duì)買回來(lái)的菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，首先制備試管培養(yǎng)基，寫出制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基所需的原料：_、_、_、_、_。其中提供氮源的是_；提供碳源的主要物質(zhì)是_。(2)微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)各種成分所需量不同，故配制培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的_。在燒杯中加入瓊脂后要不停地_，防止_。(3)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干個(gè)試管一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入_中滅菌，壓力_kpa，溫度_，時(shí)間_。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到0時(shí)，將試管取出。如果棉塞上沾有培養(yǎng)基，此試管_。(4)使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)注意，先向鍋內(nèi)倒入_，把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排出后將鍋密閉。(5)從一支試管向另一支試管接種時(shí)注意，接種環(huán)要在酒精燈_(“內(nèi)”或“外”)焰滅菌，并且待接種環(huán)_后蘸取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近，將接種的試管放入_冰箱中保藏。10下表是用于從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方。請(qǐng)回答：試劑用量牛肉膏5.0 g蛋白胨10.0 gnacl5.0 g瓊脂20.0 g水1 000 ml(1)培養(yǎng)基的類型很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。上述培養(yǎng)基配方中能充當(dāng)碳源的成分是_和_。培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)ph并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行_處理。(2)分離純化微生物最常使用的接種方法是_和_兩種。在接種過(guò)程中，接種針或涂布器的滅菌方法是_。(3)假設(shè)某同學(xué)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上細(xì)菌數(shù)目過(guò)多地連成一片，可能的原因是什么？_。第5課時(shí)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)知識(shí)清單一、1.(1)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)(2)水無(wú)機(jī)鹽碳源氮源特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)ph拓展深化碳元素細(xì)胞物質(zhì)代謝產(chǎn)物能源物質(zhì)氮元素微量有機(jī)物(3)液體固體工業(yè)生產(chǎn)分離鑒定天然合成選擇抑制促進(jìn)分離鑒別鑒別2(1)防止雜菌污染保證培養(yǎng)的純度(2)空間衣著和手器皿滅菌酒精燈火焰附近滅菌(3)較溫和部分微生物強(qiáng)烈所有的微生物芽孢和孢子芽孢和孢子是否存活(4)煮沸法巴氏消毒法化學(xué)藥劑法灼燒滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌紫外線滅菌二、(一)1.(1)目的要明確(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)(3)ph要適宜2.(2)計(jì)算稱量溶化調(diào)節(jié)ph分裝滅菌倒平板(二)1.平板劃線法稀釋涂布平板法(1)平板劃線法接種環(huán)棉塞火焰沾取左手右手平板內(nèi)最后一區(qū)第一區(qū)平板倒置(2)稀釋涂布平板法移液管涂布器菌液2(1)火焰灼燒滅菌接種環(huán)上一次劃線末端(2)無(wú)菌4臨時(shí)保藏甘油管藏降低微生物的新陳代謝速率36對(duì)點(diǎn)訓(xùn)練1b對(duì)于co2來(lái)說(shuō)，它為無(wú)機(jī)物，只能做碳源而不能作為能源物質(zhì)。規(guī)律鏈接微生物代謝類型與營(yíng)養(yǎng)的關(guān)系：營(yíng)養(yǎng)型微生物碳源氮源生長(zhǎng)因子舉例自養(yǎng)型微生物co2、nahco3nh3、銨鹽、硝酸鹽等一般不需要硝化細(xì)菌異養(yǎng)型微生物糖類、脂肪酸等銨鹽、硝酸鹽、蛋白質(zhì)等有些種類需要乳酸菌2.a根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)，可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，在液體培養(yǎng)基中加入不同量的凝固劑如瓊脂可形成半固體或固體培養(yǎng)基；除水以外的無(wú)機(jī)物如nh4hco3，既可以是碳源，也可以是氮源，不僅僅提供無(wú)機(jī)鹽；無(wú)機(jī)氮源有時(shí)也能提供能量，如nh3可以為硝化細(xì)菌提供能量。3c在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種來(lái)源于第一次劃線的末端。規(guī)律鏈接(1)無(wú)菌技術(shù)是微生物培養(yǎng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。掌握無(wú)菌技術(shù)操作的方法及所適用的條件。時(shí)刻建立“有菌”觀念，注意操作中的合理滅菌，以杜絕或防止雜菌污染。(2)平板劃線法和稀釋涂布平板法都要求最終形成標(biāo)準(zhǔn)菌落。因此，劃線或稀釋要充分，如果培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落相互重疊，則說(shuō)明劃線或稀釋不充分，應(yīng)該重新操作。4c培養(yǎng)基的配制應(yīng)該先加水，后加熱溶化，否則培養(yǎng)基會(huì)被燒焦；培養(yǎng)基配制完畢要經(jīng)過(guò)滅菌后才能使用；在高壓蒸汽滅菌以前，如果高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的冷空氣沒(méi)有排盡，當(dāng)壓力上升到100 kpa時(shí)，鍋內(nèi)的溫度就不會(huì)上升到應(yīng)有的高度，導(dǎo)致滅菌不徹底；接種時(shí)，接種環(huán)放到酒精燈火焰上灼燒滅菌是應(yīng)該的，但不能立即伸入菌種試管內(nèi)，否則會(huì)將菌種燙死。達(dá)標(biāo)測(cè)試1a制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙。待培養(yǎng)基冷卻至50，用手觸摸錐形瓶剛剛不燙手，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)時(shí)，進(jìn)行倒平板。平板冷卻510 min后還需倒置。2c金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，所以在操作時(shí)一定要做到安全防范，接種后雙手用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到殺菌的作用；對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒也可以殺滅細(xì)菌，防止污染環(huán)境；高壓蒸汽滅菌也可殺死培養(yǎng)基中的金黃色葡萄球菌；如果只對(duì)帶菌培養(yǎng)基進(jìn)行加熱，殺不盡其中的致病菌，因?yàn)榇司哪透邷啬芰軓?qiáng)，會(huì)污染環(huán)境。3b對(duì)接種環(huán)等金屬用具進(jìn)行灼燒滅菌，應(yīng)放在酒精燈火焰的充分燃燒層即外焰處。4c5.d6.c7d對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可采用甘油管藏法，即在3 ml甘油瓶中加入1 ml甘油后滅菌，將1 ml培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在20的冷凍箱中保存。8d平板劃線操作時(shí)要時(shí)刻注意兩個(gè)問(wèn)題：一是防止雜菌污染；二是要盡可能地將菌種分離。9(1)牛肉膏蛋白胨水無(wú)機(jī)鹽瓊脂蛋白胨牛肉膏(2)比例攪拌瓊脂糊底引起燒杯破裂(3)高壓蒸汽滅菌鍋1001211530 min廢棄(4)適量水(5)外冷卻410(1)牛肉膏蛋白胨滅菌(2)平板劃線法稀釋涂布平板法蘸取酒精；引燃滅菌(3)菌液濃度過(guò)高；培養(yǎng)過(guò)程中被雜菌污染；利用接種針劃線時(shí)，劃下一個(gè)區(qū)域前沒(méi)有對(duì)接種針進(jìn)行滅菌處理解析牛肉膏和蛋白胨都是從天然物質(zhì)中提取出來(lái)的，都含有豐富的有機(jī)物，可以為微生物提供碳源和氮源。平板劃線法和稀釋涂布平板法都能使菌體分散開，但如果操作不當(dāng)，會(huì)使分離效果不理想。第6課時(shí)土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)目標(biāo)導(dǎo)航1.研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。2.進(jìn)行微生物數(shù)量的測(cè)定。一、研究思路1篩選菌株(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理人為提供有利于_生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、ph等)，同時(shí)_或_其他微生物生長(zhǎng)。(2)選擇培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許_種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)_或_其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。(3)分離分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源的是_，提供氮源的是_，瓊脂的作用是凝固劑。該培養(yǎng)基對(duì)微生物具有選擇作用。其選擇機(jī)制是_才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈凅w內(nèi)能合成_，將尿素分解的反應(yīng)式是_。taq細(xì)菌能忍受93左右的高溫，是在美國(guó)黃石國(guó)家公園的一個(gè)熱泉中發(fā)現(xiàn)的，這說(shuō)明，在尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)_。2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)稀釋涂布平板法(也叫活菌計(jì)數(shù)法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的_，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的_，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。操作第一，設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇_稀釋度的菌液，分別取0.1 ml接種到已制備好的平板上，然后用無(wú)菌涂布器將菌液涂布整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)并計(jì)算菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度涂布到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，培養(yǎng)并計(jì)算出_。第二，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在_的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)m，其中c代表_，v代表_(ml)，m代表_。(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法原理：此法利用特定的_或_，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特定的面積1 mm2和高0.1 mm的計(jì)數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個(gè)(或16個(gè))中格，每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成16個(gè)(或25個(gè))小格，計(jì)數(shù)室由_個(gè)小格組成。操作：將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì)數(shù)45個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。計(jì)數(shù)公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)菌數(shù)40010 000稀釋倍數(shù)。(3)設(shè)置重復(fù)和對(duì)照設(shè)置重復(fù)：培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)設(shè)置重復(fù)組，同一稀釋度下應(yīng)涂布_個(gè)平板，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。設(shè)置對(duì)照：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)設(shè)置對(duì)照，主要目的是_對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。如_對(duì)照組，觀察培養(yǎng)物中是否有雜菌污染；設(shè)置_培養(yǎng)基，觀察選擇培養(yǎng)基是否具有_作用。二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟1土壤取樣：從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中，用無(wú)菌小鐵鏟鏟去表層土3 cm左右，迅速取土壤并裝入_密封或事先準(zhǔn)備好的_中。2制備培養(yǎng)基：制備_培養(yǎng)基作為對(duì)照組，尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基作為_，用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否具有_。放寬稀釋范圍，如稀釋倍數(shù)為103107范圍內(nèi)的要分別涂布，而每個(gè)稀釋度下需要_個(gè)選擇培養(yǎng)基、_個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此需要15個(gè)選擇培養(yǎng)基和5個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。兩種培養(yǎng)基應(yīng)各有一個(gè)作為_對(duì)照，此外還需準(zhǔn)備8個(gè)滅菌的試管和1個(gè)滅菌的移液管。3樣品的稀釋與涂布平板：參考下面的實(shí)驗(yàn)流程示意圖，將10 g土樣加入盛有90 ml無(wú)菌生理鹽水的錐形瓶中(錐形瓶體積為250 ml)，充分搖勻，吸取上清液1 ml，轉(zhuǎn)移至盛有_ ml生理鹽水的無(wú)菌大試管依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107103稀釋度的順序分別吸取_ml進(jìn)行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。說(shuō)明：圖中的1、2、3平板是_，4為_作對(duì)照，判斷選擇培養(yǎng)基是否具篩選作用，還有兩個(gè)空白對(duì)照，即不涂布稀釋后菌液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，驗(yàn)證培養(yǎng)基中是否_。4將涂布好的培養(yǎng)皿放在30溫度下培養(yǎng)，及時(shí)觀察和記錄。5挑選選擇培養(yǎng)基上不同形態(tài)的菌落接入含_培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生顏色反應(yīng)。6細(xì)菌的計(jì)數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在_的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出_，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。同時(shí)仔細(xì)觀察所分離到的菌落，并記錄菌落特征。7統(tǒng)計(jì)表格表一平板上的菌落數(shù)記錄表稀釋倍數(shù)10310410510610712341234123412341234123表二菌落特征記錄表 菌落種類形狀大小隆起程度顏色123注：一般來(lái)說(shuō)，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間)，_表現(xiàn)出_的菌落特征。三、操作提示1取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都要_。2應(yīng)在_旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入_中，塞好棉塞。3在稀釋土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在_旁操作。4實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)_做好標(biāo)記。注明_等。5為了提高效率，在操作時(shí)更加有條不紊，應(yīng)當(dāng)_。四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)內(nèi)容結(jié)論分析有無(wú)雜菌污染的判斷對(duì)照的培養(yǎng)皿中_菌落生長(zhǎng)未被雜菌污染培養(yǎng)物中菌落數(shù)_被雜菌污染菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高培養(yǎng)物中混入_選擇培養(yǎng)基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目_選擇培養(yǎng)基的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具篩選作用，已篩選出一些菌落樣品的稀釋操作得到2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在_的平板操作成功，能進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)重復(fù)組的結(jié)果若選取同一種土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)_；如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中出現(xiàn)操作失誤，需要找出產(chǎn)生差異的原因五、課題延伸在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的_將尿素分解成了_。氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，_升高。因此，我們可以通過(guò)檢測(cè)培養(yǎng)基_來(lái)判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入_指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果ph升高，指示劑將_，這樣，我們就可以準(zhǔn)確地鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。知識(shí)點(diǎn)一研究思路1下表為本課題使用的培養(yǎng)基，分析培養(yǎng)基配方，回答下面的問(wèn)題。kh2po41.4 gna2hpo42.1 gmgso47h2o0.2 g葡萄糖10.0 g尿素1.0 g瓊脂15.0 g用蒸餾水定容到1 000 ml(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是_。(2)按物理性質(zhì)劃分該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基，理由是培養(yǎng)基中含有_；該類培養(yǎng)基常用于微生物的_等。(3)由于_，所以該培養(yǎng)基只能用于能夠合成_的微生物的培養(yǎng)。用此培養(yǎng)基培養(yǎng)土壤浸出液能夠從土壤中篩選出_的細(xì)菌。(4)在微生物學(xué)中，將_的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。2廣東省是我國(guó)甘蔗生產(chǎn)區(qū)之一。甘蔗是一種高光效的c4植物，單位面積產(chǎn)量很高，種植面積日益擴(kuò)大，目前已成為南方地區(qū)燃料酒精生產(chǎn)的重要原料。利用甘蔗生產(chǎn)燃料酒精的一般工藝流程為：甘蔗榨汁(蔗糖)酵母發(fā)酵蒸餾成品(燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發(fā)酵菌種，對(duì)野生酵母菌進(jìn)行誘變后通過(guò)篩選可以得到具有這些特性的突變菌，誘變及篩選過(guò)程如下：步驟1：野生菌液體培養(yǎng)一段時(shí)間后接受紫外線照射誘變處理。步驟2：制備選擇培養(yǎng)基。在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，注意_和_，加瓊脂后滅菌，制成固體平板。步驟3：將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。步驟4：根據(jù)_，篩選出突變菌。(2)上述步驟2、3和4的依據(jù)分別是_。知識(shí)點(diǎn)二實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)3用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是()a涂布了1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230b涂布了2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238c涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163d涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250，取平均值2334在本實(shí)驗(yàn)操作中對(duì)使用的平板和試管要進(jìn)行標(biāo)記，以下說(shuō)法正確的是()a對(duì)培養(yǎng)皿僅需注明培養(yǎng)基的種類即可b一般在使用之后進(jìn)行標(biāo)記c由于試管用的較多，只需對(duì)試管進(jìn)行標(biāo)記即可d標(biāo)記的目的主要是為了防止實(shí)驗(yàn)中平板、試管等的混淆一、選擇題1在缺乏氮源的培養(yǎng)基上，大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。利用上述選擇培養(yǎng)基依次能從混雜的微生物群體中分離出()a乳酸菌、金黃色葡萄球菌、放線菌b固氮細(xì)菌、大腸桿菌、放線菌c固氮細(xì)菌、霉菌、放線菌d固氮細(xì)菌、金黃色葡萄球菌、放線菌2請(qǐng)選出下列正確的操作步驟()土壤取樣稱取10 g土壤，取出加入盛有90 ml無(wú)菌水的錐形瓶中吸取0.1 ml土壤溶液進(jìn)行平板涂布依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度abcd3在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑的目的是()a篩選出能分解尿素的細(xì)菌b對(duì)分離的菌種作進(jìn)一步鑒定c作細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)成分d如指示劑變藍(lán)就能準(zhǔn)確地認(rèn)定該菌能分解尿素4下面對(duì)“從土壤中分離分解尿素的細(xì)菌過(guò)程中滅菌”的理解，不正確的是()a防止雜菌污染b消滅全部微生物c稀釋土壤溶液的過(guò)程中必須在火焰旁操作d滅菌必須在接種前進(jìn)行5下列不屬于菌種記數(shù)方法的是()a平板劃線法 b稀釋涂布平板法c顯微鏡檢法 d濾膜法6下列有關(guān)配制培養(yǎng)基的敘述中，正確的是()a制作固體培養(yǎng)基必須加入瓊脂b加入青霉素可得到乳酸菌c培養(yǎng)自生固氮菌不需要氮源d發(fā)酵工程一般用固體培養(yǎng)基7用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。在某稀釋濃度下某同學(xué)做了若干個(gè)平板并統(tǒng)計(jì)每個(gè)平板的菌落數(shù)，最接近樣品中菌體數(shù)真實(shí)值的是()a菌落數(shù)最多的平板b菌落數(shù)量最少的平板c菌落數(shù)量適中的平板d取若干個(gè)平板菌落數(shù)量的平均值8土壤中分解尿素的微生物所需氮源為()a硝酸 b氨 c尿素 d蛋白胨二、簡(jiǎn)答題9在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中，常在飼料中加入一定量的尿素去飼養(yǎng)牛等牲畜。因其有特殊的器官瘤胃，在瘤胃中生活著多種微生物，其中許多微生物以尿素作唯一氮源。某一同學(xué)設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)，對(duì)能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)。.取樣：到屠宰場(chǎng)，在剛宰殺的牛的瘤胃中取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中密封。.制備培養(yǎng)基：制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目。由于初次實(shí)驗(yàn)，選擇了一個(gè)較寬的稀釋范圍，并且每個(gè)稀釋度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基，1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。.微生物的培養(yǎng)與觀察：按稀釋度的順序分別吸取0.1 ml進(jìn)行平板涂布操作。將涂布好的培養(yǎng)皿放在30下培養(yǎng)，并且需要無(wú)氧條件。比較兩種培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄。挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅指示劑的培養(yǎng)基中，觀察是否產(chǎn)生顏色反應(yīng)。.細(xì)菌的計(jì)數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取平板計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的目的是什么？_。(2)為什么每個(gè)稀釋度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基？_。(3)上述培養(yǎng)時(shí)，為什么需要無(wú)氧條件？_。(4)應(yīng)用含酚紅指示劑的培養(yǎng)基的目的是什么？結(jié)果會(huì)呈現(xiàn)出什么樣的顏色反應(yīng)？原理是什么？_。(5)計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選什么樣的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)？怎樣計(jì)算出樣品中的細(xì)菌數(shù)目？_。10有人送來(lái)一支芽孢桿菌菌種，其中一部分芽孢桿菌有抗青霉素的能力，另一部分沒(méi)有抗性。請(qǐng)你把對(duì)青霉素有抗性的芽孢桿菌分離出來(lái)。(1)現(xiàn)有條件：無(wú)菌牛肉膏培養(yǎng)基兩個(gè)、無(wú)菌接種臺(tái)、接種工具齊備、醫(yī)用青霉素兩支。(2)實(shí)驗(yàn)過(guò)程取兩個(gè)培養(yǎng)基，分別標(biāo)號(hào)為a、b，向a、b兩個(gè)培養(yǎng)基中分別加入_，加入過(guò)程一定要進(jìn)行_操作。向a培養(yǎng)基中接種_。接種后，將a培養(yǎng)基放入恒溫箱培養(yǎng)兩天。從_中挑取生長(zhǎng)良好的芽孢桿菌，接種到b培養(yǎng)基中。接種后，將b培養(yǎng)基放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)兩天，即可獲得較多抗青霉素芽孢桿菌。第兩個(gè)步驟的目的是_。第6課時(shí)土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)知識(shí)清單一、1.(1)目的菌株抑制阻止(2)特定抑制阻止(3)葡萄糖尿素只有能夠以尿素作為氮源的微生物脲酶co(nh2)2h2oco22nh3它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找2(1)一個(gè)活菌菌落數(shù)三個(gè)菌落平均數(shù)30300某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積稀釋倍數(shù)(2)細(xì)菌計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板400(3)至少3排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素空白完全篩選二、1.(1)無(wú)菌信封燒杯(2)牛肉膏蛋白胨實(shí)驗(yàn)組選擇作用31空白(3)90.1選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基含有雜菌(5)酚紅指示劑(6)30300平均值(7)同種微生物穩(wěn)定三、1.滅菌2.火焰錐形瓶3.火焰4.培養(yǎng)皿培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物5.事先規(guī)劃時(shí)間四、無(wú)偏高其他氮源大于30300接近五、脲酶氨phph的變化酚紅變紅對(duì)點(diǎn)訓(xùn)練1(1)葡萄糖和尿素(2)固體瓊脂純化、分離、計(jì)數(shù)(3)培養(yǎng)基中只有尿素一種氮源脲酶分解尿素(4)允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，并能抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)解析根據(jù)培養(yǎng)基的成分，可以推斷培養(yǎng)基的類型以及適于培養(yǎng)的微生物的代謝類型。含有瓊脂、明膠等凝固劑的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基；不含凝固劑的為液體培養(yǎng)基。不含碳源的培養(yǎng)基適于自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)，不含氮源的培養(yǎng)基適于固氮微生物的培養(yǎng)等。固體培養(yǎng)基常用于菌種的純化、分離、記數(shù)等；液體培養(yǎng)基常用于菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)和工業(yè)生產(chǎn)。規(guī)律鏈接(1)培養(yǎng)基主要給培養(yǎng)物提供主要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)ph、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及氧氣等的要求，所以根據(jù)培養(yǎng)基成分可以推斷培養(yǎng)基的類型以及適于培養(yǎng)的微生物代謝類型。(2)選擇培養(yǎng)基是指允許特定微生物生長(zhǎng)并抑制其他雜菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，所以配制選擇培養(yǎng)基時(shí)要明確要篩選的微生物的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)和代謝特點(diǎn)。2(1)添加高濃度蔗糖(葡萄糖)調(diào)低ph是否能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)(2)提供高糖和酸性的篩選環(huán)境；獲得單菌落；能生長(zhǎng)的菌落具有耐高糖和耐酸的特性解析(1)要篩選耐高糖和耐酸的菌種，培養(yǎng)基中必須加入高濃度蔗糖和調(diào)低ph，能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的即為所需菌種。(2)步驟2是給其提供高糖或酸性的篩選環(huán)境；步驟3是為了獲得單菌落；步驟4是根據(jù)能生長(zhǎng)的菌株具有耐高糖和耐酸的特性篩選出突變菌。3d在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，所以a、b兩項(xiàng)不正確。c項(xiàng)雖涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地用3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值求平均值。規(guī)律鏈接設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)要遵守單一變量原則和對(duì)照原則，