廣東省臺山市高中生物 專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 2.2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)課件 新人教版選修1.ppt

課題背景 尿素 co nh2 2 重要的農(nóng)業(yè)氮肥 只有被土壤中細(xì)菌分解為nh3才能被植物吸收利用 co nh2 2 h2oco2 2nh3 課題2土壤分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù) 一 研究思路 一 篩選菌種 1實(shí)例 尋找耐高溫的dna聚合酶 啟示 pcr技術(shù) 要求使用耐高溫 930c 的dna聚合酶 尋找目的菌種時要根據(jù)它對 到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找 生存環(huán)境的要求 耐高溫的酶 耐高溫生物體 耐高溫環(huán)境 熱泉 火山口 尋找 尋找 taq細(xì)菌 篩選原因 因?yàn)闊崛母邷貤l件淘汰了絕大多數(shù)微生物 使耐熱的taq細(xì)菌保留下來 2實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理 人為提供有利于目的菌株生長的條件 包括營養(yǎng) 溫度 ph等 同時抑制或阻止其他微生物生長 思考 1 該培養(yǎng)基的配方中 為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì) 碳源 葡萄糖 尿素 氮源 尿素 2 從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類 從功能上屬于哪類培養(yǎng)基 固體培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌 為什么 原則上能 只有產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌能利用尿素作為氮源而生存 3選擇培養(yǎng)基 在微生物學(xué)中 將允許 同時 生長的培養(yǎng)基 特定種類的微生物生長 抑制或阻止其他種類微生物 結(jié)果 培養(yǎng)一定時間后 該菌數(shù)量上升 再通過稀釋涂布平板等方法對它進(jìn)行純化培養(yǎng)分離 如何對細(xì)菌進(jìn)行計數(shù) 1顯微鏡直接計數(shù) 利用血球計數(shù)板 血細(xì)胞計數(shù)板 在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量 2稀釋涂布平板法 間接計數(shù) 101 102 103 104 105 106 二 統(tǒng)計菌落數(shù)目 方法運(yùn)用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù) 原理1個菌落 1個活菌 選擇菌落數(shù)在30 300的平板上計數(shù) 需培養(yǎng)計算出三個或三個以上的平板菌落 求平均數(shù) 統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低 注意事項(xiàng) 看課本p22 并討論你認(rèn)為這兩位同學(xué)的作法正確嗎 如果有問題 錯在哪 第一位同學(xué) 沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn) 至少涂布3個平板 第二位同學(xué) a組結(jié)果誤差過大 不應(yīng)用于計算平均值 計算公式 某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234 那么每克樣品中的菌落數(shù)是 涂布平板時所用稀釋液的體積為0 1ml a 2 34 108b 2 34 109c 234d 23 4 b 每克樣品中的菌株數(shù) c v m 三 設(shè)置對照實(shí)驗(yàn) 閱讀p22 23頁 三 設(shè)置對照 一段討論教材中提出的問題 設(shè)置對照的目的 排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響 提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度 1 a同學(xué)出現(xiàn)此結(jié)果的可能原因 土樣不同 培養(yǎng)基污染 或混入了其他的含氮物質(zhì) 2 設(shè)置對照實(shí)驗(yàn) 幫助a同學(xué)排除上述兩個可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素 這個實(shí)例可以看出 實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力 對照的設(shè)置是必不可少 方案一 由其他同學(xué)用與a同學(xué)相同土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 方案二 將a同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng) 作為空白對照 以證明培養(yǎng)基是否受到污染 結(jié)果預(yù)測 如果結(jié)果與a同學(xué)一致 則證明 如果結(jié)果不同 則證明a同學(xué)存在 a無誤 培養(yǎng)基的配制有問題 實(shí)驗(yàn)流程 樣品稀釋涂布平板 微生物的培養(yǎng)與觀察 菌落計數(shù) 二 實(shí)驗(yàn)設(shè)計 土壤取樣 制備培養(yǎng)基 一 土壤取樣 從肥沃 酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣 先鏟去表層土3cm左右 再取樣 將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中 微生物的天然培養(yǎng)基 數(shù)量最大 種類最多 大約70 90 是細(xì)菌 二 制備培養(yǎng)基 制備選擇培養(yǎng)基 尿素為唯一氮源 制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基相同的菌液 在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目 因此 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照 用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用 對照作用 思考 為什么還要制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 三 樣品稀釋涂布平板 稀釋倍數(shù)為101 106 每個稀釋度均用3個選擇培養(yǎng)基和1個蛋白胨培養(yǎng)基 四 微生物的培養(yǎng)與觀察 在菌落計數(shù)時 每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目 選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果 以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目 培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度 細(xì)菌 30 37 培養(yǎng)1 2d放線菌 25 28 培養(yǎng)5 7d霉菌 25 28 的溫度下培養(yǎng)3 4d 不同種類的細(xì)菌形成的菌落 在大小 形狀 光澤度 顏色 硬度 透明度等方面具有一度的特征 菌落特征可作為菌種鑒定的重要依據(jù) 菌落 菌落 一 無菌操作1 取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌 2 應(yīng)在火焰旁稱取土壤 在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中 塞好棉塞 3 在稀釋土壤溶液的過程中 每一步都要在火焰旁操作 二 做好標(biāo)記注明培養(yǎng)基種類 培養(yǎng)日期 平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等 三 制定計劃 三 操作提示 四 結(jié)果分析與評價 1 培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落 對照的培養(yǎng)皿無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染 牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目多余選擇培養(yǎng)基的菌落數(shù)目 說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落 四 結(jié)果分析與評價 2 獲得某一稀釋度下 菌落數(shù)30 300的平板 在這以稀釋度下是否至少有兩個平板的菌落數(shù)相接近 相接近 說明操作成功 五 課題延伸 1 在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑 培養(yǎng)某種細(xì)菌后 如果ph升高 指示劑將變紅 說明該細(xì)菌能夠分解尿素 2 測定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法是將一定體積的水用細(xì)菌過濾器過濾后 將濾膜放到伊紅 美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng) 大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色 通過記算得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量 本課題知識小結(jié) 鞏固練習(xí) 1 使用選擇培養(yǎng)基的目的是 a 培養(yǎng)細(xì)菌b 培養(yǎng)真菌c 使需要的微生物大量繁殖d 表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別2 能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是 a co2和n2b 葡萄糖和nh3c co2和尿素d 葡萄糖和尿素 c d 3 下列說法不正確的是 a 科學(xué)家從70 80度熱泉中分離到耐高溫的taqdna聚合酶 b 統(tǒng)計某一稀釋度的5個平板的菌落數(shù)依次為m1 m2 m3 m4 m5 以m3作為該樣品菌落數(shù)的估計值 c 設(shè)置對照實(shí)