KJ 201904 水發(fā)產(chǎn)品中甲醛的快速檢測

附件4水發(fā)產(chǎn)品中甲醛的快速檢測（KJ201904）1 范圍本方法規(guī)定了水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液中甲醛的快速檢測方法。本方法適用于銀魚、魷魚、牛肚、竹筍等水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液中甲醛的快速測定。AHMT法（比色卡法）2 原理試樣中的甲醛經(jīng)提取后，在堿性條件下與4-氨基-3-聯(lián)氨-5-巰基-1，2，4-三氮雜茂（AHMT）發(fā)生縮合，再被高碘酸鉀氧化成6-巰基-S-三氮雜茂4，3-b-S-四氮雜苯的紫紅色絡合物，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與甲醛含量成正相關，通過色階卡進行目視比色，對試樣中甲醛進行定性判定。3 試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。3.1 試劑3.1.1 氫氧化鉀（KOH）。3.1.2 鹽酸（HCl）。3.1.3 亞鐵氰化鉀（K4Fe(CN)63H2O）。3.1.4 乙酸鋅（C4H6O4Zn2H2O）。3.1.5 冰乙酸（C2H4O2）。3.1.6 乙二胺四乙酸二鈉（C10H14N2O8Na22H2O）。3.1.7 高碘酸鉀（KIO4）。3.1.8 4-氨基-3-聯(lián)氨-5-巰基-1，2，4-三氮雜茂 （C2H6N6S ，AHMT）。3.1.9 氫氧化鉀溶液（5mol/L）：稱取280.5g氫氧化鉀（3.1.1），用水溶解并定容至1000mL，混勻。3.1.10 氫氧化鉀溶液（0.2mol/L）：稱取11.22g氫氧化鉀（3.1.1），用水溶解并定容至1000mL，混勻。3.1.11 鹽酸溶液（0.5mol/L）：量取41mL鹽酸（3.1.2），用水稀釋并定容至1000mL，混勻。3.1.12 亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）：稱取10.6 g亞鐵氰化鉀（3.1.3），用水溶解并定容至100 mL，混勻。3.1.13 乙酸鋅溶液（220g/L）：稱取22 g乙酸鋅（3.1.4），加入3mL冰乙酸（3.1.5）溶解，用水稀釋并定容至100mL，混勻。3.1.14 乙二胺四乙酸二鈉溶液（100 g/L）：稱取10g乙二胺四乙酸二鈉（3.1.6），用5 mol/L氫氧化鉀溶液（3.1.9）溶解，并定容至100 mL，混勻。3.1.15 AHMT溶液（5 g/L）：稱取0.5 g 4-氨基-3-聯(lián)氨-5-巰基-1，2，4-三氮雜茂（3.1.8），用0.5 mol/L鹽酸溶液（3.1.11）溶解，并定容至100 mL，混勻后置于棕色瓶中，有效期6個月。3.1.16 高碘酸鉀溶液（15 g/L）：稱取1.5g高碘酸鉀（3.1.7），用0.2 mol/L氫氧化鉀溶液（3.1.10）溶解，并定容至100 mL，混勻。3.2 參考物質(zhì)甲醛參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見表1。表1 甲醛參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子量甲醛Formaldehyde50-00-0HCHO30.033.3 標準溶液的配制3.3.1 甲醛標準儲備液（100g/mL）：安瓿瓶封裝，冷藏、避光、干燥條件下保存。使用前恢復至室溫，搖勻備用。安瓿瓶打開后應一次性使用完畢。3.3.2 甲醛標準工作液（10g/mL）：吸取甲醛標準儲備液（100g/mL）（3.3.1）1.0mL，置于10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，臨用前配制。3.4 材料3.4.1 甲醛快速檢測試劑盒（AHMT法-比色卡法）：適用基質(zhì)為水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液，需在陰涼、干燥、避光條件下保存。3.4.2 濾紙：中速定性濾紙。4 儀器和設備4.1 移液器：200L，1mL，5mL。4.2 渦旋混合器。4.3 電子天平或手持式天平：感量為0.01g。4.4 離心機：轉速4000r/min。4.5 環(huán)境條件：溫度1535，濕度80%。5 分析步驟5.1 試樣制備取適量有代表性試樣的可食部分或浸泡液，固體試樣剪碎混勻，液體試樣需充分混勻。5.2 試樣的提取準確稱取試樣1 g（精確至0.01 g）或吸取試樣1.0mL，置于15 mL離心管中，加水定容至10 mL，渦旋提取1 min，靜置5 min，取上清液作為提取液（如上清液渾濁，加入1mL亞鐵氰化鉀溶液（3.1.12）和1mL乙酸鋅溶液（3.1.13），渦旋混勻，4000 r/min離心5 min或濾紙過濾，取上清液或濾液作為提取液）。5.3 測定步驟準確移取提取液2 mL于5 mL離心管中，加入0.4 mL乙二胺四乙酸二鈉溶液（3.1.14）和0.4 mL AHMT溶液（3.1.15），渦旋混勻后靜置10 min，再加入0.1 mL高碘酸鉀溶液（3.1.16），渦旋混勻后靜置5 min，立即與標準色階卡目視比色，10min內(nèi)判讀結果。進行平行試驗，兩次測定結果應一致，即顯色結果無肉眼可辨識差異。5.4 質(zhì)控試驗每批試樣應同時進行空白試驗和加標質(zhì)控試驗。用色階卡和質(zhì)控試驗同時對檢測結果進行控制。5.4.1 空白試驗稱取空白試樣1 g（精確至0.01 g）或吸取空白試樣1.0 mL，按照5.2和5.3步驟與試樣同法操作。5.4.2 加標質(zhì)控試驗準確稱取空白試樣1 g（精確至0.01 g）或吸取空白試樣1.0 mL，置于15 mL離心管中，加入0.5 mL甲醛標準工作液（10 g/mL）（3.3.2），使試樣中甲醛含量為5mg/kg，按照5.2和5.3步驟與試樣同法操作。6 結果判定要求觀察檢測管中樣液顏色，與標準色階卡比較判讀試樣中甲醛的含量。顏色淺于檢出限（5 mg/kg）則為陰性試樣；顏色接近或深于5 mg/kg則為陽性試樣。色階卡見圖1。甲醛標準比色卡（mg/kg或mg/L） 0 5 10 20 50 100 200圖1 甲醛標準色階卡質(zhì)控試驗要求：空白試驗測定結果應為陰性，質(zhì)控試驗測定結果應與比色卡第二點（5mg/kg或mg/L）顏色一致。7 結論由于色階卡目視判讀存在一定誤差，為盡量避免出現(xiàn)假陰性結果，讀數(shù)時遵循就高不就低的原則。當測定結果為陽性時，應對結果進行確證。8 性能指標8.1 檢測限5mg/kg或mg/L。8.2 靈敏度靈敏度應95%。8.3 特異性特異性應85%。8.4 假陰性率假陰性率應5%。8.5 假陽性率假陽性率應15%。注：性能指標計算方法見附錄A。AHMT法（分光光度法）9 原理試樣中的甲醛經(jīng)提取后，在堿性條件下與4-氨基-3-聯(lián)氨-5-巰基-1，2，4-三氮雜茂 （AHMT）發(fā)生縮合，再被高碘酸鉀氧化成6-巰基-S-三氮雜茂4，3-b-S-四氮雜苯的紫紅色絡合物，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與甲醛含量成正相關，用分光光度計在550nm處測定吸光度值，與標準系列比較定量，得到試樣中甲醛的含量。10 試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。10.1 試劑同3.1。10.2 參考物質(zhì)同3.2。10.3 標準溶液的配制同3.3。10.4 材料10.4.1 甲醛快速檢測試劑盒（AHMT法-分光光度法）：適用基質(zhì)為水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液，需在陰涼、干燥、避光條件下保存。10.4.2 濾紙：中速定性濾紙。11 儀器和設備11.1 移液器：200 L，1 mL，5 mL。11.2 渦旋混合器。11.3 電子天平或手持式天平：感量為0.01 g。11.4 離心機：轉速4000 r/min。11.5 分光光度計或相應商品化測定儀。11.6 環(huán)境條件：溫度1535，濕度80%。12 分析步驟12.1 試樣制備同5.1。12.2 試樣的提取同5.2。12.3 測定步驟準確移取提取液（12.2）2 mL置于5 mL離心管中，另準確吸取10 g/mL的甲醛標準工作液（3.3.2）0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL（相當于0 g、1 g、2 g、4 g、6 g、8 g、10 g甲醛）分別置于5mL帶刻度的具塞刻度試管中，加水定容至2 mL，渦旋混勻。于標準管和試樣管中分別加入0.4 mL乙二胺四乙酸二鈉溶液（3.1.14）和0.4 mL AHMT溶液（3.1.15），渦旋混勻靜置10 min，再加入0.1mL高碘酸鉀溶液（3.1.16），靜置5 min后用1cm 比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點，于波長550 nm 處測定吸光度，繪制標準曲線比較。同時做試劑空白。12.4 質(zhì)控試驗每批試樣應同時進行空白試驗和加標質(zhì)控試驗。12.4.1 空白試驗稱取空白試樣1 g（精確至0.01 g）或吸取空白試樣1.0mL，按照12.2和12.3步驟與試樣同法操作。12.4.2 加標質(zhì)控試驗準確稱取空白試樣1 g（精確至0.01 g）或吸取空白試樣1.0 mL，置于15 mL離心管中，加入0.5 mL甲醛標準工作液（10 g/mL）（3.3.2），使試樣中甲醛含量為5 mg/kg，按照12.2和12.3步驟與試樣同法操作。13 分析結果的表述13.1 結果計算試樣中甲醛的含量按式（1）計算：（1）式中：X試樣中甲醛的含量，單位為毫克每千克或毫克每升（mg/kg或mg/L）；由標準曲線得到的試樣提取液中甲醛的含量，單位為微克（g）；0由標準曲線得到的空白提取液中甲醛的含量，單位為微克（g）；V試樣定容體積，單位為毫升（mL）；V1測定用試樣體積，單位為毫升（mL）；m試樣的取樣量，單位為克或毫升（g或mL）；1000單位換算系數(shù)。計算結果保留兩位有效數(shù)字。13.2 結果判定當測定結果5 mg/kg或mg/L時，判定為陽性，陽性結果的試樣需要重復檢驗2次以上。13.3 質(zhì)量控制要求空白試驗測定結果應為陰性，加標質(zhì)控試驗測定結果回收率應60%。14 結論當測定結果為陽性時，應對結果進行確證。15 性能指標15.1 檢測限5mg/kg或mg/L。15.2 靈敏度靈敏度應95%。15.3 特異性特異性應85%。15.4 假陰性率假陰性率應5%。15.5 假陽性率假陽性率應15%。注：性能指標計算方法見附錄A。乙酰丙酮法（分光光度法）16 原理試樣中的甲醛經(jīng)提取后，在沸水浴條件下與乙酰丙酮發(fā)生反應，生成黃色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與甲醛含量成正相關，用分光光度計在413 nm處測定吸光度值，與標準系列比較定量，得到試樣中甲醛的含量。17 試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。17.1 試劑17.1.1 無水乙酸鈉（CH3COONa）。17.1.2 乙酰丙酮（C5H8O2）。17.1.3 乙酰丙酮溶液：稱取25.0 g無水乙酸鈉（17.1.1）溶于適量水中，移入100 mL容量瓶中，加0.40 mL乙酰丙酮（17.1.2）和3.0 mL冰乙酸（3.1.5），加水定容至刻度，混勻，移至棕色試劑瓶中，28保存，有效期1個月。17.2 參考物質(zhì)同3.2。17.3 標準溶液配制同3.3。17.4 材料17.4.1 甲醛快速檢測試劑盒（乙酰丙酮法-分光光度法）：適用基質(zhì)為水發(fā)產(chǎn)品及其浸泡液，需在陰涼、干燥、避光條件下保存。17.4.2 濾紙：中速定性濾紙。18 儀器和設備18.1 移液器：200 L，1 mL，5 mL。18.2 渦旋混合器。18.3 電子天平或手持式天平：感量為0.01 g。18.4 離心機：轉速4000r/min。18.5 水浴鍋。18.6 分光光度計或相應商品化測定儀。18.7 環(huán)境條件：溫度1535，濕度80%。19 分析步驟19.1 試樣制備同5.1。19.2 試樣的提取同5.2。19.3 測定步驟準確移取提取液（19.2）2 mL置于5 mL離心管中，另準確吸取10 g/mL的甲醛標準工作液（3.3.2）0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL（相當于0 g、1 g、2 g、4 g、6 g、8 g、10 g甲醛）分別置于5 mL帶刻度的具塞刻度試管中，加水定容至2 mL，渦旋混勻。于標準管和試樣管中分別加入0.2 mL 乙酰丙酮溶液（17.1.3）渦旋混勻后沸水浴5 min，取出冷卻至室溫后用1 cm 比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點，于波長413 nm 處測定吸光度，繪制標準曲線比較。同時做試劑空白。19.4 質(zhì)控試驗每批試樣應同時進行空白試驗和加標質(zhì)控試驗。19.4.1 空白試驗稱取空白試樣1 g（精確至0.01 g）或吸取空白試樣1.0 mL，按照19.2和19.3步驟與試樣同法操作。19.4.2 加標質(zhì)控試驗準確稱取空白試樣1 g（精確至0.01 g）或吸取空白試樣1.0 mL，置于15 mL離心管中，加入0.5 mL甲醛標準工作液（10 g/mL）（3.3.2），使試樣中甲醛含量為5 mg/kg，按照19.2和19.3步驟與試樣同法操作。20 分析結果的表述20.1 結果計算同13.1。20.2 結果判定同13.2。20.3 質(zhì)量控制要求同13.3。21 結論當測定結果為陽性時，應對結果進行確證。22 性能指標22.1 檢測限5mg/kg或mg/L。22.2 靈敏度靈敏度應95%。22.3 特異性特異性應85%。22.4 假陰性率假陰性率應5%。22.5 假陽性率假陽性率應15%。注：性能指標計算方法見附錄A。23 其他本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不作限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，須對其進行考察，應滿足本方法規(guī)定的各項性能指標。本方法參比標準為SC/T 3025-2006水產(chǎn)品中甲醛的測定 液相色譜法或其他現(xiàn)行有效的甲醛檢測標準。附錄A快速檢測方法性能指標計算表表A.1 性能指標計算表試樣情況a檢測結果