最終版-實(shí)驗(yàn)四十四 熒光法測(cè)定硫酸奎尼丁.doc

實(shí)驗(yàn)四十四 熒光法測(cè)定硫酸奎尼丁一、目的要求1. 掌握用校正曲線法進(jìn)行熒光定量分析。2. 熟悉熒光分光光度計(jì)的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理硫酸奎尼丁屬生物堿類抗心律失常藥，分子結(jié)構(gòu)如圖所示。由于其分子結(jié)構(gòu)中具有喹啉環(huán)結(jié)構(gòu)（奎尼丁為奎寧的右旋體），故能產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，可用直接熒光法測(cè)定其熒光強(qiáng)度，由校正曲線法或回歸方程求出試樣中奎尼丁的含量。三、主要儀器與試劑儀器 島津RF-1501型熒光分光光度計(jì)，移液管（1ml，5ml），刻度吸量管（5ml），量瓶（50ml）試劑 H2SO4溶液（0.05mol/L），硫酸奎尼?。ㄔ纤帲?，硫酸奎尼丁對(duì)照品四、操作步驟1.硫酸奎尼丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 精密稱取硫酸奎尼丁對(duì)照品約50mg，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取5ml，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得硫酸奎尼丁標(biāo)準(zhǔn)貯備液。2.標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備 精密稱取硫酸奎尼丁標(biāo)準(zhǔn)貯備液1、2、3、4及5ml，分別置50ml量瓶中，用硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，制得對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。3.試樣溶液的制備 精密稱取硫酸奎尼丁試樣約10mg，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取1ml，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得待測(cè)樣品溶液。4.測(cè)定（1）開機(jī)：先開主機(jī)電源，再開氙燈（Xe lamp）。（2）確定最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)。（3）校正曲線測(cè)定：將空白硫酸溶液放入吸收池，點(diǎn)擊自動(dòng)調(diào)零按鈕“Autozero”，儀器自動(dòng)進(jìn)行空白校正（自動(dòng)扣除空白）。輸入濃度值，按順序放入標(biāo)準(zhǔn)溶液，點(diǎn)擊“Start”進(jìn)行測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液測(cè)定完畢后，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，儀器窗口將顯示標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程（FI=K*C+B）和相關(guān)系數(shù)(r)。（5）試樣測(cè)定：按彈出對(duì)話框的提示進(jìn)行。試樣測(cè)定的數(shù)據(jù)（熒光強(qiáng)度和濃度）將顯示在數(shù)據(jù)表格里。根據(jù)濃度計(jì)算試樣中硫酸奎尼丁的百分含量。5.關(guān)機(jī)：先關(guān)氙燈，待儀器降至室溫后，再關(guān)總機(jī)電源。五、注意事項(xiàng)1. 在溶液的配制過程中要注意容量?jī)x器的規(guī)范操作和使用。2. 測(cè)量順序?yàn)榈蜐舛鹊礁邼舛?，以減少測(cè)量誤差。3. 進(jìn)行校正曲線測(cè)定和試樣測(cè)定時(shí)，應(yīng)保證儀器參數(shù)設(shè)置一致。六、思考題1. 測(cè)定試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，為什么要同時(shí)測(cè)定硫酸的空白溶液？2. 如何選擇激發(fā)光波長(zhǎng)（ex）和發(fā)射光波長(zhǎng)（em）？采用不同的ex或?qū)m測(cè)定結(jié)果有何影響？1. 答：消除硫酸溶液中熒光物質(zhì)對(duì)于測(cè)定的影響。2. 答：（1） 固定發(fā)射波長(zhǎng)，測(cè)定激發(fā)光譜；再固定激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)