卵巢上皮性腫瘤中AQP-1的表達(dá)及臨床意義.doc

卵巢上皮性腫瘤中AQP-1的表達(dá)及臨床意義【摘要】目的研究卵巢癌中水通道蛋白1（AQP1）的表達(dá)及臨床意義。方法卵巢上皮性癌組38例；卵巢交界性上皮性腫瘤組12例；卵巢良性上皮性腫瘤組9例；正常卵巢組織7例為對照(正常組)。免疫組織化學(xué)(SP)進(jìn)行染色。將AQP1的表達(dá)與卵巢上皮性腫瘤的關(guān)系作出研究。結(jié)果1）在細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)及血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)陽性。卵巢上皮性癌中78.95%及卵巢交界性腫瘤中66.67%，顯著高于卵巢良性腫瘤33.33%和正常卵巢組織28.57%的表達(dá)率，差異有顯著性（P0.05）；2）卵巢癌有腹水者其AQP1表達(dá)率水平明顯高于無腹水量者，差異有顯著性(P100ml）31例?；颊吒顾繛殚_腹后立即吸取，且所有患者術(shù)前未進(jìn)行任何治療，無并發(fā)癥。患者年齡3479歲，平均年齡56歲。上述標(biāo)本，連續(xù)切片4μm厚，HE染色，病理證實(shí)。1.2 方法 免疫組化 免疫組織化學(xué)(SP)法進(jìn)行染色。以PBS替代一抗作為陰性對照，以已知AQP1強(qiáng)烈表達(dá)的乳腺癌標(biāo)本做陽性對照。1.2.1 具體方法 1）載玻片準(zhǔn)備；2）切片脫蠟；3）抗原修復(fù)；4）阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性；5）滴加一抗，兔抗人AQP1多克隆抗體；6）加生物素標(biāo)記的第二抗體；7）滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素溶液；8）DAB溶液顯色510分鐘；9）中性樹脂膠封片；10）蘇木精復(fù)染。1.2.2 陽性結(jié)果判定 在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者作為AQP1陽性細(xì)胞，無著色為陰性細(xì)胞。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析1.3.1 AQP1結(jié)果的判定 以陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行評估。隨機(jī)取4個(gè)視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞,計(jì)數(shù)400個(gè)腫瘤細(xì)胞中染色陽性細(xì)胞數(shù),陽性細(xì)胞數(shù)10%為表達(dá)陽性；10%為表達(dá)陰性。表達(dá)強(qiáng)度以陽性細(xì)胞的百分率來劃分:無陽性著色或陽性細(xì)胞10%細(xì)胞為陰性(-),60%為強(qiáng)陽性(+)。1.3.2 腫瘤微血管密度（MVD）計(jì)數(shù) 微血管密度的判定：染成棕色的單個(gè)血管內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞簇，大于8個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞形成的管腔不記數(shù)。尋找5個(gè)微血管高密度區(qū)，然后在200400倍鏡下記數(shù)計(jì)算微血管密度，以5個(gè)區(qū)域的均值為該腫瘤的MVD值，微血管數(shù)取最高值。 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用fisher確切概率法，χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)對相應(yīng)資料進(jìn)行分析,取a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。2 結(jié)果2.1 AQP1在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá) AQP1在卵巢上皮癌中表達(dá)陽性率為78.95%，交界性上皮腫瘤中為66.67%，良性腫瘤為33.33%,正常卵巢為28.57%。卵巢上皮性癌及交界性腫瘤表達(dá)率，顯著高于良性腫瘤和正常組織，差異有顯著性（P0.05）。2.2 AQP1在不同臨床病理特征卵巢癌中的表達(dá) 有腹水者明顯高于無腹水量者，差異有顯著性(P0.05)。2.3 AQP1與腫瘤微血管密度（MVD）的關(guān)系 CD34標(biāo)記顯示：AQP1強(qiáng)陽性表達(dá)的組織MVD明顯大于弱陽性表達(dá)的組織(P0.01)及陰性組織(P0.05)，中陽性明顯低于強(qiáng)陽性(P0.01)；有腹水的明顯多于無腹水的(P0.05)；證明MVD值與AQP1表達(dá)上調(diào)有關(guān)。3 討論3.1 水在人體的重要作用 水是活細(xì)胞的主要組成部分。水占人體總重量的70%，其中55%在細(xì)胞內(nèi)，45%在細(xì)胞外，細(xì)胞內(nèi)外一切生命活動(dòng)，細(xì)胞的生化反應(yīng)都是在水的微環(huán)境中進(jìn)行的，并幾乎都有水的參與。水是細(xì)胞和細(xì)胞間隙的主要成份，細(xì)胞內(nèi)外一切生命活動(dòng)都是在水的微環(huán)境中進(jìn)行。因此，水對于人體和細(xì)胞的重要性不言而喻，水分子跨膜運(yùn)輸?shù)膶?shí)現(xiàn)，是生命科學(xué)中的一個(gè)重要課題。水通道蛋白（aquaporins,AQPs）是對水專一的具有高度選擇性的糖蛋白,普遍存在于動(dòng)植物及微生物中。大量研究證實(shí),惡性腫瘤發(fā)生和生長過程中,其生命活動(dòng)旺盛,新陳代謝異常活躍,對水的需求也將增加,細(xì)胞內(nèi)外滲透壓的變化頻率加快,水通道對腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織的生存非常重要。3.2 AQP1在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)的關(guān)系 有初步的證據(jù)說明AQP具有致癌特性，認(rèn)為AQP全長cDNA的異位表達(dá)引起許多表現(xiàn)型的改變, 而引起腫瘤的發(fā)生2。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：AQP1在正常卵巢組織中無表達(dá)或在細(xì)胞漿中表達(dá)很微弱，在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)及血管內(nèi)皮細(xì)胞中。卵巢交界性上皮性腫瘤和上皮性卵巢癌的表達(dá)率，明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤與正常卵巢組織的表達(dá)率，差異有顯著性（P0.05）。上皮性卵巢癌高于交界性腫瘤，但差異無顯著性。而良性腫瘤與正常卵巢組織比較，差異無顯著性。AQP1的高表達(dá)與腫瘤的良惡有關(guān)，AQP1上調(diào)機(jī)制現(xiàn)不明確，但它的上調(diào)為腫瘤提供了高效的水，離子交換的基礎(chǔ)。以往研究發(fā)現(xiàn)：AQP1存在于多處微血管的內(nèi)皮，AQP1表達(dá)缺乏的人可以出現(xiàn)尿縮障礙、肺內(nèi)毛細(xì)血管和肺間質(zhì)之間的液體交換障礙3，小鼠臟層胸膜微血管的內(nèi)皮及間皮細(xì)胞上有AQP1豐富表達(dá)，在鼠胸膜腔內(nèi)滲透壓增高時(shí)對水的轉(zhuǎn)運(yùn)起主要作用5-6。本研究還發(fā)現(xiàn)，卵巢癌有腹水者其AQP1表達(dá)率水平明顯高于無腹水量者，差異有顯著性(P0.05)。提示AQP 1高表達(dá)與卵巢癌腹水的形成有關(guān)。Mobasheri等也證明人腺癌AQP 1表達(dá)增加與腫瘤局部水腫的構(gòu)成和清除有關(guān)7。推測由于卵巢癌組織微血管內(nèi)皮細(xì)胞AQP 1蛋白表達(dá)上調(diào)，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞對水的通透性增加，水分外滲從而產(chǎn)生腹水。3.3 AQP1表達(dá)與MVD值關(guān)系的意義 腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于血管的生成,血管生成是一個(gè)包括內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移及細(xì)胞外基質(zhì)降解的復(fù)雜過程3。新血管的生成為腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)交換和增殖提供基礎(chǔ)；但腫瘤新生血管在結(jié)構(gòu)上管壁薄、分化差,內(nèi)皮細(xì)胞幼稚基底膜發(fā)育不良、呈片段狀,在分布與構(gòu)筑上呈無序狀態(tài);在功能上不具備完整的微循環(huán)功能和收縮功能,不受神經(jīng)體液調(diào)節(jié)4-5。Saadoun等2首次證明AQP在血管生成和細(xì)胞遷移中發(fā)揮重要作用。為滿足快速增殖、分裂和侵襲轉(zhuǎn)移的需要,癌細(xì)胞比正常細(xì)胞更需要水分子的快速跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),多數(shù)腫瘤有很高的組織間隙液體壓力和很高的微血管滲透性。AQP是廣泛存在于原核和真核生物細(xì)胞膜上特異性通道,在多種器官的生理功能和病理中發(fā)揮重要的作用1。AQP基因敲除鼠腫瘤血管生成障礙、腫瘤生長抑制。本結(jié)果顯示MVD在AQP1表達(dá)陰性、弱陽性、中陽性、強(qiáng)陽性，四者之間均有顯著性差異(P0.01)，血管密度可以反映組織內(nèi)血管生成的狀態(tài)。本研究提示組織內(nèi)微血管密度及分布有助于病理診斷時(shí)良惡性腫瘤的界定,可能成為彩色多普勒血流成像技術(shù)鑒別卵巢良惡性腫瘤的基礎(chǔ),有助于早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤。4 結(jié)論41 AQP1高表達(dá)率與腹水有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)可能為卵巢癌的病理機(jī)制和卵巢癌腹水的發(fā)生到增多可能提供了新的理論依據(jù)。4.2 MVD值與AQP1的表達(dá)率正相關(guān)，證明了AQP1同時(shí)在腫瘤組織血管生成中可能起到作用。4.3 推測應(yīng)用AQP抑制劑可以抑制腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移，為卵巢癌的臨床治療可能提供了新的靶點(diǎn)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1Law SY,Fok M,Lam KY,et al.Small cell carcinoma of theesophagusJ.Cancer,1994,73(12):2894-28992Moon C,Soria JC,Jang SJ,et al.Involvement of aquaporins in colorectalcarcinogenesisJ.Oncogene,2003,22(43):6699-67033Horai T,Kobayashi A,Tateishi R,et al.A cytologic study fsmall-cellcarcinoma of the esophagusJ. Cancer,1978, 41(5):1890-18964Preston GM,Carroll TP,Guggino WB,andagre P.1992.Appea-ranceof water channels in Xenopus oocytes expressing red cell CHIP28 proteinJ.Science.256:385-3875Yang B. The human aquaporin gene family (review)J. J Current Genomics,2000,1(1):91-1026Bodis B,Nagy G,Nemeth P,et al.Active water