藥物生殖毒性研究PPT參考課件.ppt

藥物生殖毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則 山東大學(xué)新藥評(píng)價(jià)中心2006 10 1 概述 動(dòng)物生殖毒性研究 Reproductiontoxicitystudy 是藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容 它與急性毒性 長(zhǎng)期毒性 遺傳毒性等毒理學(xué)研究有著密切的聯(lián)系 是藥物申請(qǐng)進(jìn)入臨床研究及上市的重要環(huán)節(jié) 擬用于人體的藥物 應(yīng)根據(jù)受試物擬用適應(yīng)癥和作用特點(diǎn)等因素考慮進(jìn)行動(dòng)物的生殖毒性試驗(yàn) 2 研究目的 通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)反映受試物對(duì)哺乳動(dòng)物生殖功能和發(fā)育過(guò)程的影響 預(yù)測(cè)其可能產(chǎn)生的對(duì)生殖細(xì)胞 受孕 妊娠 分娩 哺乳等親代生殖機(jī)能的不良影響 以及對(duì)子代胚胎 胎兒發(fā)育 出生后發(fā)育的不良影響 生殖毒性研究在限定臨床研究受試者范圍 降低臨床研究受試者和藥品上市后使用人群的用藥風(fēng)險(xiǎn)方面發(fā)揮重要作用 醫(yī)生或患者在利弊權(quán)衡時(shí)很大程度上要取決于動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果 3 基本原則 一 實(shí)驗(yàn)管理藥物的生殖毒性試驗(yàn)屬于安全性評(píng)價(jià)研究 根據(jù) 中華人民共和國(guó)藥品管理法 的規(guī)定 必須執(zhí)行 藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范 二 具體問(wèn)題具體分析生殖毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì) 應(yīng)該在對(duì)受試物認(rèn)知的基礎(chǔ)上 遵循 具體問(wèn)題具體分析 的原則 應(yīng)根據(jù)受試物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 理化性質(zhì) 已有的藥理毒理研究信息 適應(yīng)癥和適用人群特點(diǎn) 臨床用藥方案選擇合理的試驗(yàn)方法 設(shè)計(jì)適宜的試驗(yàn)方案 并綜合上述信息對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行全面的分析評(píng)價(jià) 三 隨機(jī) 對(duì)照 重復(fù)生殖毒性試驗(yàn)應(yīng)符合一般動(dòng)物試驗(yàn)的基本原則 即隨機(jī) 對(duì)照和重復(fù) 4 基本內(nèi)容 一 總體考慮 二 試驗(yàn)方案 三 毒代動(dòng)力學(xué) 5 一 總體考慮 1 受試物1 1中藥及天然藥物生殖毒性試驗(yàn)的受試物應(yīng)能充分代表臨床研究受試物或上市藥品 因此受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定 符合臨床研究質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品 一般用中試樣品 并注明受試物的名稱(chēng) 來(lái)源 批號(hào) 含量 或規(guī)格 保存條件及配制方法等 如不采用中試樣品 應(yīng)有充分的理由 如果由于給藥容量或給藥方法限制 可采用原料藥進(jìn)行試驗(yàn) 試驗(yàn)中所用溶媒和 或輔料應(yīng)標(biāo)明批號(hào) 規(guī)格及生產(chǎn)廠(chǎng)家 1 2化學(xué)藥物生殖毒性試驗(yàn)的受試物應(yīng)采用制備工藝穩(wěn)定 符合臨床研究用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品 并注明受試物的名稱(chēng) 來(lái)源 批號(hào) 含量 或規(guī)格 保存條件及配制方法等 并附有研制單位的自檢報(bào)告 所用輔料 溶媒等應(yīng)標(biāo)明批號(hào) 規(guī)格和生產(chǎn)廠(chǎng)家 并符合試驗(yàn)要求 6 2 受試物藥代動(dòng)力學(xué)研究在開(kāi)始生殖毒性試驗(yàn)前 掌握一些受試物藥代動(dòng)力學(xué)方面的信息 這些信息可能來(lái)源于非妊娠或非哺乳期動(dòng)物 可提示是否應(yīng)進(jìn)行動(dòng)物種屬選擇 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 給藥方案的調(diào)整等 在進(jìn)行結(jié)果評(píng)價(jià)時(shí) 可能有必要進(jìn)一步研究妊娠或哺乳動(dòng)物的藥代動(dòng)力學(xué)情況 注釋1 7 3 試驗(yàn)系統(tǒng)3 1試驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)采用哺乳動(dòng)物進(jìn)行生殖毒性試驗(yàn) 在選擇生殖毒性試驗(yàn)用動(dòng)物種屬和品系時(shí) 應(yīng)考慮動(dòng)物的背景資料 實(shí)用性 與人的相關(guān)性等 應(yīng)從受試物 采用的試驗(yàn)方案和闡明試驗(yàn)結(jié)果的角度考慮所選擇動(dòng)物種屬 品系 的優(yōu)缺點(diǎn) 注釋2 通常應(yīng)采用與其他毒理學(xué)試驗(yàn)相同的種屬和品系 這樣與其他毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果具有可比性 并可能避免進(jìn)行過(guò)多的預(yù)試驗(yàn) 大鼠實(shí)用性好 與其他試驗(yàn)結(jié)果的可比性高并已積累了大量的背景資料 因此可作為生殖毒性試驗(yàn)的首選嚙齒類(lèi)動(dòng)物 在胚胎 胎仔發(fā)育毒性研究中 一般還需要采用第二種哺乳動(dòng)物 其中家兔已積累了豐富的背景資料 且容易獲得和實(shí)用 因此家兔為優(yōu)先選用的非嚙齒類(lèi)動(dòng)物 家兔不適合時(shí) 可根據(jù)具體情況 選擇另一種可替代的非嚙齒類(lèi)動(dòng)物或第二種嚙齒類(lèi)動(dòng)物 通常選用年輕 性成熟的成年動(dòng)物 雌性動(dòng)物未經(jīng)產(chǎn) 個(gè)體動(dòng)物初始體重不應(yīng)超過(guò)或低于平均體重 20 動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家有關(guān)規(guī)定的等級(jí)要求 來(lái)源 品系 遺傳背景清楚 并具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證 8 3 2其他試驗(yàn)系統(tǒng)其他試驗(yàn)系統(tǒng)指哺乳和非哺乳動(dòng)物的細(xì)胞 組織 器官 體外或體內(nèi)培養(yǎng)體 若將這些系統(tǒng)與同系物優(yōu)選或后續(xù)研究中闡明作用機(jī)理的整體動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)合起來(lái)考慮 能夠提供有價(jià)值的信息 而且也可間接地減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量 但它們?nèi)狈Πl(fā)育過(guò)程的復(fù)雜性以及母體與生長(zhǎng)機(jī)體 胚胎 間動(dòng)態(tài)的相互變化 這些系統(tǒng)不能明確排除某一作用 也不能對(duì)其危險(xiǎn)性 暴露情況進(jìn)行推測(cè) 簡(jiǎn)而言之 這些試驗(yàn)系統(tǒng)尚不能替代目前生殖毒性試驗(yàn)常用的整體動(dòng)物 注釋3 9 4 給藥 4 1劑量選擇4 2給藥途徑4 3給藥頻率4 4對(duì)照組 10 4 1劑量選擇 4 1 1中藥及天然藥物可根據(jù)已有的研究資料 藥理 急性毒性和長(zhǎng)期毒性 藥代動(dòng)力學(xué)研究 或預(yù)試驗(yàn)以及受試物的理化性質(zhì)和給藥途徑來(lái)進(jìn)行劑量設(shè)計(jì) 為觀察量效關(guān)系 至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組 必要時(shí)可增加劑量組 高劑量應(yīng)出現(xiàn)一些輕微的母體毒性反應(yīng)癥狀 或?yàn)樽畲蠼o藥量 最大耐受量 低劑量應(yīng)為生殖毒性方面的 未觀察到不良反應(yīng)的劑量水平 NOAEL 4 1 2化學(xué)藥物可根據(jù)已有的研究資料 藥理 急性毒性和長(zhǎng)期毒性 藥代動(dòng)力學(xué)研究 或預(yù)試驗(yàn)以及受試物的理化性質(zhì)和給藥途徑來(lái)選擇高劑量 高劑量范圍內(nèi)應(yīng)該出現(xiàn)一些輕微的母體毒性反應(yīng) 在大多數(shù)情況下 1g kg 天為最大給藥限量 低劑量應(yīng)為生殖毒性方面的 未觀察到不良反應(yīng)的劑量水平 NOAEL 高劑量與低劑量間根據(jù)具體情況可設(shè)計(jì)1 2個(gè)劑量 以觀察可能的劑量反應(yīng)關(guān)系 注釋4 11 4 2給藥途徑 一般情況下 給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑一致 如果擬用途徑有多種 若研究提示不同給藥途徑的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn) 包括分布 類(lèi)似 可采用其中一種給藥途徑 但如果藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果顯示 某種給藥途徑下機(jī)體中的暴露量 如AUC 更高 此時(shí) 選用暴露量更小或?qū)嶋H操作相當(dāng)困難的給藥途徑 如吸入給藥 的意義可能較小 此外 腹腔注射時(shí)可能會(huì)對(duì)子宮或胎仔直接產(chǎn)生作用 故采用妊娠動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí) 一般不用該途徑 注釋5 12 4 3給藥頻率 通常每天給藥1次 但應(yīng)參考藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) 預(yù)期臨床給藥情況增加或減少給藥次數(shù) 13 4 4對(duì)照組 應(yīng)設(shè)賦形劑對(duì)照組 其給藥途徑 頻率應(yīng)與受試物組相同 當(dāng)賦形劑可能產(chǎn)生作用或影響受試物的作用時(shí) 應(yīng)另設(shè)空白對(duì)照組 此外 根據(jù)具體情況考慮是否設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組 如新的動(dòng)物系統(tǒng) 較長(zhǎng)時(shí)間未進(jìn)行過(guò)試驗(yàn) 新的試驗(yàn)設(shè)施等 14 二 試驗(yàn)方案 1 試驗(yàn)方案選擇的一般考慮在選擇合理的試驗(yàn)方案時(shí) 應(yīng)借鑒受試物已有的或同類(lèi)藥物的藥理 毒理和藥代動(dòng)力學(xué)資料 特別是在生殖毒性方面的信息 建議優(yōu)先考慮采用較為成熟的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案 對(duì)大多數(shù)藥物而言 三段試驗(yàn)方案 常用的試驗(yàn)方案 通常比較合適 能夠識(shí)別有可能發(fā)生損害的生殖發(fā)育階段 但根據(jù)具體藥物情況的不同 也可選擇其他能充分反映受試物生殖毒性的試驗(yàn)方案 注釋6 如單一試驗(yàn)設(shè)計(jì)或兩段試驗(yàn)設(shè)計(jì)等 無(wú)論采用哪種試驗(yàn)方案 各段試驗(yàn)之間 給藥處理 不應(yīng)留有間隔 并允許對(duì)生殖過(guò)程的各階段進(jìn)行直接或間接的評(píng)價(jià) 應(yīng)說(shuō)明試驗(yàn)方案的合理性 當(dāng)觀察到某一作用時(shí) 應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行進(jìn)一步的后續(xù)試驗(yàn) 以明確其毒性的性質(zhì) 范圍和原因等 包括判斷其劑量 反應(yīng)關(guān)系 以有助于其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 并有助于區(qū)分給藥所致影響與偶發(fā)情況 注釋7 聯(lián)合進(jìn)行所選的多項(xiàng)生殖毒性試驗(yàn)時(shí) 應(yīng)注意在動(dòng)物成年期和從受孕到幼仔性成熟的發(fā)育各階段給藥 為測(cè)定出給藥所致的速發(fā)和遲發(fā)效應(yīng) 其觀察應(yīng)持續(xù)一個(gè)完整的生命周期 即從某一代受孕到其下一代受孕間的時(shí)間周期 為方便試驗(yàn) 可將生命周期的這一完整過(guò)程分成以下幾個(gè)階段 注釋8 A 從交配前到受孕 成年雄性和雌性生殖功能 配子的發(fā)育和成熟 交配行為 受精 B 從受孕到著床 成年雌性生殖功能 著床前發(fā)育 著床 C 從著床到硬腭閉合 成年雌性生殖功能 胚胎發(fā)育 主要器官形成 D 從硬腭閉合到妊娠終止 成年雌性生殖功能 胎仔發(fā)育和生長(zhǎng) 器官發(fā)育和生長(zhǎng) E 從出生到離乳 成年雌性生殖功能 幼仔對(duì)宮外生活的適應(yīng)性 離乳前發(fā)育和生長(zhǎng) F 從離乳到性成熟 離乳后發(fā)育和生長(zhǎng) 獨(dú)立生活的適應(yīng)能力 達(dá)到性成熟的情況 15 2 常用的試驗(yàn)方案 常用的試驗(yàn)方案相當(dāng)于對(duì)下述各階段影響的聯(lián)合研究 I段 A B 生育力和早期胚胎發(fā)育II段 C D 胚胎 胎仔發(fā)育III段 C F 圍產(chǎn)期發(fā)育 包括母體功能 16 2 1生育力與早期胚胎發(fā)育毒性試驗(yàn) I段 試驗(yàn)?zāi)康陌ㄉ鲜錾^(guò)程的A段和B段 對(duì)雌雄動(dòng)物由交配前到交配期直至胚胎著床給藥 以評(píng)價(jià)受試物對(duì)動(dòng)物生殖的毒性或干擾作用 本段試驗(yàn)的評(píng)價(jià)內(nèi)容包括配子成熟度 交配行為 生育力 胚胎著床前階段和著床 對(duì)于雌性動(dòng)物 應(yīng)對(duì)動(dòng)情周期 受精卵輸卵管轉(zhuǎn)運(yùn) tubaltransport 著床及胚胎著床前發(fā)育的影響進(jìn)行檢查 對(duì)于雄性動(dòng)物 應(yīng)觀察生殖器官組織學(xué)檢查方法可能檢測(cè)不出的功能性影響 如性欲 附睪精子成熟度等 17 動(dòng)物選擇 至少采用一種動(dòng)物 推薦用大鼠 每組每性別動(dòng)物數(shù)應(yīng)滿(mǎn)足數(shù)據(jù)分析的需要 通常大鼠不少于20只 性別 組 注釋9 18 給藥期 一般情況下 交配前給藥期可定為雄性4 10周 雌性2周 雄性動(dòng)物給藥期應(yīng)持續(xù)整個(gè)交配期直至處死 雌性動(dòng)物至少應(yīng)持續(xù)至胚胎著床 妊娠第6 7天 應(yīng)對(duì)交配前給藥期長(zhǎng)短選擇進(jìn)行說(shuō)明并提供依據(jù) 注釋10 19 動(dòng)物處理 建議雌雄動(dòng)物1 1交配 一般情況下 雌性動(dòng)物在妊娠第13 15天處死 雄性動(dòng)物在交配成功后處死 注釋11 20 觀察指標(biāo) 試驗(yàn)期間 體征和死亡情況 至少1次 天 體重和體重變化 至少2次 周 注釋12 攝食量 至少1次 周 交配期除外 交配期間至少每日進(jìn)行陰道涂片檢查 以檢查是否對(duì)交配或交配前時(shí)間有影響 在其它毒性研究中已證明有意義的指標(biāo) 21 終末檢查 剖檢所有親代動(dòng)物 保存肉眼觀察出現(xiàn)異常的器官 必要時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查 同時(shí)保留足夠的對(duì)照組動(dòng)物的相應(yīng)器官以便比較 保存所有動(dòng)物的睪丸 附睪或卵巢 子宮 必要時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查 根據(jù)具體情況進(jìn)行評(píng)價(jià) 計(jì)數(shù)附睪中的精子數(shù)并進(jìn)行精子活力檢查 計(jì)數(shù)黃體數(shù) 活胎 死胎 吸收胎并計(jì)算著床數(shù) 注釋12 22 2 2胚胎 胎仔發(fā)育毒性試驗(yàn) II段 試驗(yàn)?zāi)康陌ㄉ鲜錾^(guò)程的C段至D段 妊娠動(dòng)物自胚胎著床至硬腭閉合階段給藥 評(píng)價(jià)藥物對(duì)妊娠動(dòng)物 胚胎及胎仔發(fā)育的影響 該段試驗(yàn)的評(píng)價(jià)內(nèi)容包括妊娠動(dòng)物較非妊娠雌性動(dòng)物增強(qiáng)的毒性 胚胎胎仔死亡 生長(zhǎng)改變和結(jié)構(gòu)變化 23 動(dòng)物選擇 試驗(yàn)通常采用兩種動(dòng)物 一種為嚙齒類(lèi)動(dòng)物 推薦用大鼠 另一種為非嚙齒類(lèi)動(dòng)物 推薦用家兔 應(yīng)說(shuō)明動(dòng)物選擇的合理性 注釋13 每組妊娠動(dòng)物數(shù)應(yīng)滿(mǎn)足數(shù)據(jù)分析的需要 通常大鼠不少于20只 組 家兔不少于12只 組 注釋9 24 給藥期 由胚胎著床到硬腭閉合 即到C段末 給藥 通常 大鼠為妊娠第6 15天給藥 家兔為妊娠第6 18天給藥 25 動(dòng)物處理 在大約分娩前1天處死并檢查雌性動(dòng)物 正常情況下 大鼠約為妊娠第20天 家兔約為妊娠第28 29天 檢查所有胎仔的存活和畸形情況 當(dāng)所用技術(shù)方法要求分別檢查軟組織和骨骼改變時(shí) 最好是每窩分配50 的胎仔進(jìn)行骨骼檢查 不管使用何種方法 至少應(yīng)對(duì)50 的大鼠胎仔進(jìn)行內(nèi)臟檢查 對(duì)于家兔 檢測(cè)軟組織改變 采用新鮮顯微解剖技術(shù)較適合 此時(shí) 100 的家兔胎仔需進(jìn)行軟組織和骨骼檢查 在評(píng)價(jià)胎仔的內(nèi)臟和骨骼異常情況時(shí) 若高劑量組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異 一般不需要對(duì)中 低劑量組動(dòng)物進(jìn)行檢查 但建議保存固定的標(biāo)本以備檢查 26 觀察指標(biāo) 試驗(yàn)期間 體征和死亡情況 至少1次 天 體重和體重變化 至少2次 周 注釋12 攝食量 至少1次 周 其他毒理試驗(yàn)中已證明有意義的指標(biāo) 27 終末檢查 剖檢所有成年動(dòng)物 保存肉眼觀察出現(xiàn)異常的器官 必要時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查 同時(shí)保留足夠的對(duì)照組動(dòng)物相應(yīng)器官以便比較 計(jì)數(shù)黃體數(shù) 活胎 死胎 吸收胎并計(jì)算著床數(shù) 注釋12 胎仔體重 胎仔頂臀長(zhǎng) 胎仔異常 包括外觀 內(nèi)臟 骨骼 對(duì)胎盤(pán)進(jìn)行肉眼觀察 28 2 3圍產(chǎn)期毒性試驗(yàn) III段 試驗(yàn)?zāi)康陌ㄉ鲜錾^(guò)程中的C段至F段 以檢測(cè)從胚胎著床到幼仔離乳這段時(shí)期給藥對(duì)妊娠 哺乳的雌性動(dòng)物以及胚胎和子代發(fā)育的不良影響 由于對(duì)此階段所造成的影響可能延遲 試驗(yàn)應(yīng)持續(xù)觀察至子代性成熟階段 該段試驗(yàn)的評(píng)價(jià)內(nèi)容包括妊娠動(dòng)物較非妊娠雌性動(dòng)物增強(qiáng)的毒性 出生前和出生后子代死亡情況 生長(zhǎng)發(fā)育的改變以及子代的功能缺陷 包括F1代的行為 性成熟和生殖功能 29 動(dòng)物選擇 至少采用一種動(dòng)物 推薦用大鼠 每組動(dòng)物數(shù)應(yīng)滿(mǎn)足數(shù)據(jù)分析的需要 通常 大鼠不少于20只 組 注釋9 30 給藥期 雌性動(dòng)物給藥期應(yīng)從胚胎硬腭閉合至哺乳結(jié)束 即上述生育周期中的C至E段 通常 大鼠為妊娠第15天至離乳 出生后第21天 該段試驗(yàn)并不完全包括由離乳期至青春期階段給藥 也不研究育齡期縮短的可能性 為了檢測(cè)可能用于嬰幼兒和兒童期藥物的不良影響 應(yīng)考慮具體情況 選特定年齡段子代直接給藥 以進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)研究 31 動(dòng)物處理 雌性動(dòng)物分娩并飼養(yǎng)其子代至離乳 每窩選擇1只雌性和1只雄性的子代 飼養(yǎng)至成年 然后進(jìn)行交配以檢測(cè)其生殖能力 32 觀察指標(biāo) 試驗(yàn)期間 母體動(dòng)物 體征和死亡情況 至少1次 天 體重及體重變化 分娩前至少2次 周 注釋12 攝食量 分娩前至少1次 周 其他毒理研究中已證明有意義的指標(biāo) 妊娠期 分娩 33 終末檢查 用于母體 可行時(shí)也用于子代 剖檢所有成年動(dòng)物 保存肉眼觀察出現(xiàn)異常的器官 必要時(shí)進(jìn)行組織學(xué)檢查 同時(shí)保留足夠的對(duì)照組動(dòng)物相應(yīng)器官以便比較 著床 注釋12 畸形 出生時(shí)存活的子代 出生時(shí)死亡的子代 子代出生時(shí)體重 離乳前后的存活率和生長(zhǎng) 體重 性成熟程度和生育力 應(yīng)說(shuō)明是否進(jìn)行了窩仔動(dòng)物剔除 體格發(fā)育 注釋14 感覺(jué)功能和反射 注釋14 行為 注釋14 34 3 其他試驗(yàn)方案 可根據(jù)受試物 擬用適應(yīng)癥及臨床用藥等特點(diǎn) 綜合考慮其他試驗(yàn)方案 以全面 合理地反映受試物的生殖毒性特點(diǎn) 注釋6 以下為可采用的其他試驗(yàn)方案的兩個(gè)例子 35 3 1單一 全程 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 嚙齒類(lèi)動(dòng)物 如果將生育力和圍產(chǎn)期試驗(yàn)的給藥期連貫在一起全程給藥 使二者合為一個(gè)單一的試驗(yàn) 就可對(duì)生殖過(guò)程從A到F各段的情況進(jìn)行評(píng)價(jià) 假如該單一試驗(yàn)中包括了對(duì)胎仔的檢查 且在足夠高的給藥劑量下得出了明確的陰性結(jié)果 可不再進(jìn)行進(jìn)一步的嚙齒類(lèi)動(dòng)物生殖毒性試驗(yàn) 胎仔結(jié)構(gòu)異常檢查也可在附加的一項(xiàng) 或多項(xiàng) 胚胎 胎仔發(fā)育試驗(yàn)中進(jìn)行 而成為兩段試驗(yàn) 此外 還應(yīng)進(jìn)行第二種動(dòng)物胚胎 胎仔發(fā)育影響試驗(yàn) 推薦采用家兔 3 2兩段試驗(yàn)設(shè)計(jì) 嚙齒類(lèi)動(dòng)物 如果其中包括對(duì)胎仔的檢查 最簡(jiǎn)單的兩段試驗(yàn)設(shè)計(jì)為生育力試驗(yàn)和圍產(chǎn)期試驗(yàn) 目前研究認(rèn)為 如果受試物在動(dòng)物中的暴露量達(dá)到人體暴露量以上的足夠范圍時(shí) 圍產(chǎn)期試驗(yàn)中并未發(fā)現(xiàn)其對(duì)產(chǎn)前發(fā)育有影響 那么在大多數(shù)情況下 附加胎仔檢查并不能明顯改變其危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)的結(jié)果 生育力試驗(yàn)中雌性動(dòng)物給藥期可持續(xù)到胚胎硬腭閉合 并參照胚胎 胎仔發(fā)育試驗(yàn)中的方法對(duì)胎仔進(jìn)行檢查 這種與圍產(chǎn)期試驗(yàn)聯(lián)合考慮的兩段試驗(yàn)設(shè)計(jì) 可進(jìn)行 常用的試驗(yàn)方案 中要求的所有檢查 此外 還應(yīng)進(jìn)行第二種動(dòng)物胚胎 胎仔發(fā)育影響試驗(yàn) 推薦采用家兔 36 四 結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 動(dòng)物生殖毒性試驗(yàn)的最終目的在于預(yù)測(cè)人體可能出現(xiàn)的生殖 發(fā)育相關(guān)的毒性反應(yīng) 試驗(yàn)結(jié)果的分析和評(píng)價(jià)是試驗(yàn)的必要組成部分 應(yīng)對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行科學(xué)和全面的分析和評(píng)價(jià) 37 一 統(tǒng)計(jì)分析 選用合適的統(tǒng)計(jì)方法 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析 應(yīng)說(shuō)明所選用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的合理性 顯著性 檢驗(yàn)可幫助解釋試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果解釋本身必須以生物學(xué)的合理性為依據(jù) 僅僅因?yàn)闆](méi)有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 而認(rèn)為與對(duì)照組結(jié)果的差別并非生物學(xué)因素所致的推論可能是錯(cuò)誤的 從某種程度上講 認(rèn)為有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 的差別一定與生物性因素有關(guān)也可能是錯(cuò)誤的 特別是對(duì)那些呈偏態(tài)分布的低發(fā)生率的異常表現(xiàn) 例如 胚胎死亡 畸胎 相關(guān)各變量的可信區(qū)間可提示可能的作用大小 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)程序時(shí) 應(yīng)考慮組間比較所采用的指標(biāo)單位 通常用窩而不是胎仔個(gè)體為單位 若親代兩種性別動(dòng)物均給藥處理 則用交配對(duì) 也即兩代試驗(yàn)研究中親代的配對(duì) 為單位 38 二 數(shù)據(jù)報(bào)告 建議將試驗(yàn)數(shù)據(jù)制成表格 以說(shuō)明每只動(dòng)物的試驗(yàn)結(jié)果 組總體數(shù)據(jù)的表達(dá)形式從生物角度看是合理的 即避免不真實(shí)的精確度 并反映變量的分布情況 各試驗(yàn)數(shù)據(jù) 如體重 攝食量 每窩的相應(yīng)數(shù)據(jù) 制成的附錄或表格應(yīng)盡可能簡(jiǎn)明 用絕對(duì)值而不是計(jì)算值來(lái)表示各數(shù)據(jù) 應(yīng)避免不必要的重復(fù) 對(duì)低發(fā)生率的觀察結(jié)果 如體征 尸解發(fā)現(xiàn) 畸形等 制表時(shí) 建議將陽(yáng)性的幾個(gè)試驗(yàn)數(shù)據(jù)一同列表 尤其是針對(duì)結(jié)構(gòu)改變 胎仔畸形 的數(shù)據(jù) 應(yīng)該在表格中清楚地標(biāo)明出現(xiàn)異常胎仔的窩號(hào)和各窩受影響的胎仔 號(hào) 并寫(xiě)明受影響各胎仔被觀察到的全部改變 如果必要 可根據(jù)異常改變的類(lèi)型從原始表中總結(jié)出其他派生的表格 39 三 結(jié)果分析 通常情況下 應(yīng)對(duì)受試物在動(dòng)物中表現(xiàn)出來(lái)的生殖和發(fā)育兩方面的毒性進(jìn)行分析評(píng)價(jià) 如果出現(xiàn)陽(yáng)性的生殖毒性或發(fā)育毒性結(jié)果 應(yīng)評(píng)估人體中出現(xiàn)生殖毒性和發(fā)育毒性風(fēng)險(xiǎn)的可能性 這些陽(yáng)性的毒性結(jié)果可能是在生殖毒性或一般毒性試驗(yàn)中出現(xiàn)的 也可能是在人體研究中出現(xiàn) 以下為常規(guī)需要分析評(píng)價(jià)的毒性 1 生殖毒性2 發(fā)育毒性3 其他 40 1 生殖毒性 生殖毒性為可能影響F0代生殖能力的結(jié)構(gòu)和功能性改變 包括對(duì)生育力 分娩和哺乳的毒性影響 生育力與給藥相關(guān)的雄性生殖毒性可表現(xiàn)為生殖器官的退變或壞死 精子計(jì)數(shù)減少 精子活力或形態(tài)學(xué)改變 交配行為異常 不能交配 內(nèi)分泌功能改變或總體生育力降低 與給藥相關(guān)的雌性生殖毒性可表現(xiàn)為生殖器官損傷 配子成熟和釋放相關(guān)的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)改變 交配行為異常 不能交配或總體生育力降低 分娩對(duì)動(dòng)物產(chǎn)程和分娩的影響可表現(xiàn)為分娩起始和持續(xù)時(shí)間的改變 分娩持續(xù)時(shí)間通常報(bào)告為平均每胎耗時(shí) 或總分娩時(shí)間 哺乳哺乳期給藥后 可能對(duì)幼仔產(chǎn)生暴露 也可能改變母鼠的哺乳過(guò)程 乳汁質(zhì)量和數(shù)量 或改變母鼠的哺乳行為 41 2 發(fā)育毒性 發(fā)育毒性為對(duì)F1代的毒性影響 包括死亡 畸形 結(jié)構(gòu)異常 生長(zhǎng)異常和功能性毒性 死亡由于發(fā)育毒性導(dǎo)致的死亡可能發(fā)生于自妊娠早期到離乳后的任何時(shí)間 胚胎 胎仔死亡 僅是發(fā)育毒性所致死亡的一種 中 陽(yáng)性結(jié)果可能表現(xiàn)為著床前或著床后丟失 早期或晚期吸收 流產(chǎn) 死產(chǎn) 新生仔死亡或離乳后死亡 畸形即通常所指的結(jié)構(gòu)異常 表現(xiàn)為子代骨骼或軟組織畸形或變異 生長(zhǎng)異常通常表現(xiàn)為生長(zhǎng)遲滯 有時(shí)生長(zhǎng)過(guò)快或早熟也被認(rèn)為是生長(zhǎng)異常 評(píng)估生長(zhǎng)速率的最常用指標(biāo)為體重 同時(shí)也可測(cè)定頂臀長(zhǎng) 肛門(mén)與生殖器間距離等 功能性毒性包括任何正常生理或生化功能的持續(xù)改變 但通常僅測(cè)定神經(jīng)行為和生殖功能 常規(guī)測(cè)定指標(biāo)包括自主活動(dòng) 學(xué)習(xí)記憶 反射 性成熟時(shí)間 交配行為和生育力 42 3 其他 很多情況下 親代和子代所表現(xiàn)出來(lái)的生殖毒性可能是母體毒性所繼發(fā)的 應(yīng)結(jié)合相關(guān)毒性研究結(jié)果 如長(zhǎng)期毒性研究等 判斷表現(xiàn)出來(lái)的生殖毒性是否為母體毒性繼發(fā)結(jié)果 43 四 綜合評(píng)價(jià) 生殖毒性試驗(yàn)是藥物安全性評(píng)價(jià)與藥物整體開(kāi)發(fā)進(jìn)程的一個(gè)有機(jī)組成部分 生殖毒性試驗(yàn)不能與藥效學(xué) 藥代動(dòng)力學(xué)和其他毒理學(xué)研究割裂 試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)該力求與其他藥理毒理試驗(yàn)結(jié)果互為印證 說(shuō)明和補(bǔ)充 在對(duì)生殖毒性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí) 應(yīng)結(jié)合以下信息進(jìn)行綜合分析 1 受試物的藥學(xué)特點(diǎn) 2 藥效學(xué) 藥代動(dòng)力學(xué)和其他毒理學(xué)研究的結(jié)果 特別是長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)和遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果 3 臨床研究受試者人群特征以及已取得的臨床研究的結(jié)果 中藥 天然藥物還應(yīng)結(jié)合處方組成特點(diǎn) 方中藥味毒性情況 臨床應(yīng)用背景情況等進(jìn)行綜合分析 試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)最終應(yīng)落實(shí)到臨床研究受試者范圍限定 風(fēng)險(xiǎn)效益評(píng)估以及必要防治措施的制定和應(yīng)用上 44 五 生殖毒性研究的階段性 1 化學(xué)藥物2 中藥及天然藥物 45 1 化學(xué)藥物 根據(jù)受試物 擬用適應(yīng)癥特點(diǎn) 特別是臨床研究受試人群的特點(diǎn) 可分階段提供生殖毒性研究資料支持不同階段的臨床研究 通常情況下 應(yīng)在I期臨床研究開(kāi)始前提供完整的I段和II段生殖毒性試驗(yàn)資料 III段生殖毒性試驗(yàn)資料可在上市申請(qǐng)時(shí)提供 但是 在一些特殊情況下 可能會(huì)需要提前提供相關(guān)生殖毒性研究資料 例如用于育齡人群并可能對(duì)生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響的新藥 如避孕藥 性激素 治療性功能障礙 促精子生成藥以及致突變?cè)囼?yàn)陽(yáng)性或有細(xì)胞毒作用等的新藥 而在另外一些情況下可能會(huì)適當(dāng)延遲提交相關(guān)生殖毒性研究資料的時(shí)間 例如用于晚期惡性腫瘤或艾滋病的藥物等 上述特殊情況下需要進(jìn)行的生殖毒性試驗(yàn)內(nèi)容也需要根據(jù)具體情況來(lái)確定 注釋15 46 2 中藥及天然藥物 新的有效成分及其制劑 新的中藥材及其制劑 可參考化學(xué)藥物要求分階段提供生殖毒性研究資料支持不同階段的臨床研究 對(duì)于其他需進(jìn)行生殖毒性試驗(yàn)研究的中藥 天然藥物 如用于育齡人群并可能對(duì)生殖系統(tǒng)產(chǎn)生影響的新藥 如避孕藥 性激素 治療性功能障礙 促精子生成藥 保胎藥以及致突變?cè)囼?yàn)陽(yáng)性或有細(xì)胞毒作用等的藥物 應(yīng)根據(jù)具體情況提供相應(yīng)的生殖毒性試驗(yàn)研究資料 這時(shí)需根據(jù)具體情況來(lái)確定所需要進(jìn)行的生殖毒性試驗(yàn)內(nèi)容及進(jìn)行的時(shí)間 在一些情況下可能會(huì)適當(dāng)延遲提交相關(guān)生殖毒性研究資料的時(shí)間 例如用于晚期惡性腫瘤或艾滋病的治療藥物等 47 注釋1 妊娠動(dòng)物的藥代動(dòng)力學(xué) 由于妊娠和哺乳期動(dòng)物存在生理方面的迅速變化 其藥代動(dòng)力學(xué)研究可能出現(xiàn)改變 最好采用分段 分二段或三段 的研究方法 在制定試驗(yàn)研究計(jì)劃的過(guò)程中 藥代動(dòng)力學(xué)資料 常來(lái)源于未妊娠動(dòng)物 可為判斷動(dòng)物種屬的總體適用性提供信息 也可有助于研究方案的確立和劑量的設(shè)定 在試驗(yàn)過(guò)程中 藥代動(dòng)力學(xué)研究可以為設(shè)定準(zhǔn)確的給藥劑量提供保證 也可提示其與預(yù)期結(jié)果的明顯偏差 48 注釋2 動(dòng)物選擇 應(yīng)注意選用與人類(lèi)相關(guān)的動(dòng)物 如果已有的藥代動(dòng)力學(xué) 藥理毒理研究信息能顯示某種屬與人類(lèi)相關(guān) 則可僅采用此一種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn) 如果某一種屬動(dòng)物未表現(xiàn)出 與第一種動(dòng)物相同的 與人類(lèi)的相似性 則將其選作第二種動(dòng)物的價(jià)值很小 所有的動(dòng)物種屬都有其優(yōu)點(diǎn) 例如 大鼠 其次是小鼠 都可用作進(jìn)行生殖毒性研究通用的較佳動(dòng)物種屬 家兔作為非嚙齒類(lèi)動(dòng)物用于胚胎毒性研究 也可用于生育力研究 家兔和犬的精液樣品可不借助痛苦性的技術(shù) 電射精 而獲得 可用于精液分析研究 多數(shù)其他動(dòng)物種屬不是合適的 通用的生殖毒性研究用動(dòng)物 而可能僅僅適合用于進(jìn)行某些特定的試驗(yàn)研究 所有動(dòng)物種屬都有其不足之處 例如 大鼠 對(duì)性激素敏感 不適合用于多巴胺受體激動(dòng)劑的研究 因其早期妊娠的發(fā)生和維持所依賴(lài)的激素主要是催乳素 妊娠后期對(duì)非甾體抗炎藥高度敏感 小鼠 代謝率高 易驚 群體畸形現(xiàn)象 所有種屬動(dòng)物均會(huì)出現(xiàn) 特別明顯 胎仔小 家兔 常缺乏藥代動(dòng)力學(xué)和毒理資料 對(duì)一些抗生素和消化道功能紊亂敏感 臨床表現(xiàn)的解釋較困難 豚鼠 常缺乏藥代動(dòng)力學(xué)和毒理資料 對(duì)一些抗生素和消化道功能紊亂敏感 胎仔發(fā)育期長(zhǎng) 歷史背景資料不足 家養(yǎng)豬和 或小型豬 群體畸形的背景情況多變 所需的受試物量大 需要較大飼養(yǎng)空間 歷史背景資料不足 白鼬 如果不采用特殊的管理系統(tǒng) 只能季節(jié)性繁殖 其成功與否主要取決于人和動(dòng)物的相互影響 歷史背景資料不足 倉(cāng)鼠 靜脈給藥雖非不可能 但相當(dāng)困難 會(huì)將受試物存于頰部小囊中而影響實(shí)際給藥量 攻擊性非常強(qiáng) 對(duì)腸道功能紊亂敏感 對(duì)許多受試物有過(guò)度敏感的致畸反應(yīng) 胎仔小 犬 季節(jié)性繁殖 多近親繁殖 歷史背景資料不足 非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物 與其他種屬動(dòng)物一樣 其藥代動(dòng)力學(xué)情況與人不同 歷史背景資料不足 常常因?yàn)槠渲粩?shù)太少而難以進(jìn)行危險(xiǎn)性測(cè)定 更適合用于進(jìn)行明確生殖毒性物質(zhì) 該毒性已比較肯定 特性的試驗(yàn)研究 而不是檢測(cè)其危險(xiǎn)性 49 注釋3 整體動(dòng)物以外其他試驗(yàn)系統(tǒng) 已經(jīng)建立了一些其他試驗(yàn)系統(tǒng) 并在預(yù)試驗(yàn)研究 預(yù)篩選 或 優(yōu)先選擇 和后續(xù)試驗(yàn)研究中采用 為對(duì)同系的一組受試物進(jìn)行預(yù)試驗(yàn) 研究清楚其中至少一種受試物對(duì)整體動(dòng)物的可能作用相當(dāng)重要 可推斷其作用 據(jù)此 可選擇一些受試物進(jìn)行更進(jìn)一步的試驗(yàn) 從后續(xù)研究或進(jìn)一步明確受試物的作用特征上考慮 其他試驗(yàn)系統(tǒng)可能有助于詳細(xì)研究某些可觀察到的發(fā)育過(guò)程 例如 揭示具體毒性機(jī)理 明確 藥物 濃度 反應(yīng)關(guān)系 選擇 敏感 生長(zhǎng)發(fā)育 階段 或檢測(cè)已知代謝產(chǎn)物的作用 22 50 注釋4 給藥劑量選擇 劑量選擇是生殖毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵問(wèn)題之一 可根據(jù)已有的研究資料來(lái)選擇高劑量 如果已有資料信息不足 應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn) 給藥大約2 4周的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)研究的給藥周期 與各段生殖毒性研究設(shè)計(jì)的很接近 若選擇與重復(fù)給藥毒性研究相似的劑量 可參考全身毒性表現(xiàn) 以解釋生育力方面出現(xiàn)的影響 生殖研究中存在許多可變因素 劑量 效應(yīng)關(guān)系趨勢(shì)的存在與否 可成為判斷作用由藥物所致可能性大小的一個(gè)關(guān)鍵性依據(jù) 若試圖通過(guò)一項(xiàng)研究來(lái)對(duì)出現(xiàn)的作用進(jìn)行劑量 反應(yīng)關(guān)系分析 建議至少設(shè)三個(gè)劑量組和適當(dāng)?shù)膶?duì)照組 如還不能肯定其量效關(guān)系 應(yīng)增設(shè)第四劑量組 以免劑量間距過(guò)大 如此設(shè)計(jì) 應(yīng)該可以確定生殖毒性方面 未觀察到不良反應(yīng)的劑量水平 否則 就意味著應(yīng)該對(duì)該受試藥進(jìn)行更深入的研究 在劑量選擇時(shí)參考藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果是重要的 若劑量的增加并不導(dǎo)致血漿和組織中濃度的升高 劑量增加的意義就很小 劑量間距的大小取決于藥代動(dòng)力學(xué)和其他毒性研究結(jié)果 由于劑量 反應(yīng)關(guān)系曲線(xiàn)可能是陡直的 故不建議設(shè)計(jì)寬的劑量間距 應(yīng)優(yōu)先考慮盡量小的劑量間距 51 注釋5 給藥途徑選擇 通常 給藥途徑與臨床擬用途徑一致 但如果藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果顯示 某種給藥途徑下機(jī)體中的暴露量 如AUC 更高 此時(shí) 選用暴露量更小或?qū)嶋H操作相當(dāng)困難的給藥途徑 如吸入給藥 的意義可能較小 經(jīng)口給藥 通常使用灌胃給藥法 摻食法 飼料 飲水 給藥時(shí) 由于動(dòng)物的攝取忌避 往往達(dá)不到預(yù)期劑量或不能準(zhǔn)確給藥 因此一般不采用 注射給藥 應(yīng)注意受試物的性狀及其局部安全性 靜脈注射時(shí) 采用穩(wěn)定的注射速度和防止藥液的泄漏是重要的 腹腔注射時(shí)可能會(huì)對(duì)子宮或胎仔直接產(chǎn)生作用 故采用妊娠動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí) 一般不用該途徑 有時(shí)也可采用皮下或肌肉注射給藥方法 對(duì)于臨床上局部應(yīng)用 皮膚 眼 耳等 的受試物 可采用其他的給藥途徑來(lái)替代 皮膚給藥時(shí) 必須避免動(dòng)物舔食或與籠子摩擦 而在剃毛時(shí)如果發(fā)生皮膚損傷會(huì)造成吸收的差異 作為皮膚給藥的替代途徑 往往采用相類(lèi)似的皮下注射 當(dāng)選擇的給藥途徑與臨床擬用途徑不同時(shí) 應(yīng)說(shuō)明依據(jù) 52 注釋6 試驗(yàn)方案選擇 較為成熟的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案是指那些與現(xiàn)有藥品指導(dǎo)原則中的 最常用的選擇 沒(méi)有太大不同的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案 對(duì)多巴胺受體激動(dòng)劑或減少循環(huán)中催乳素水平的受試物 雌性大鼠為較差的模型動(dòng)物 而家兔可能是用于上述受試物所有生殖毒性研究的更好的動(dòng)物種屬 但目前似乎尚未進(jìn)行這種嘗試 若有證據(jù)顯示家兔的代謝方式比大鼠與人更接近 則家兔也可用于其他類(lèi)型受試物的生殖毒性研究 此外 對(duì)于化學(xué)藥物來(lái)說(shuō) 如果給藥劑量達(dá)2g kg而不致死 且重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)劑量達(dá)1g kg時(shí)未出現(xiàn)毒性 可僅進(jìn)行單項(xiàng)包括兩代的生殖毒性試驗(yàn) 包括兩受試物組 0 5g kg和1 0g kg 與一個(gè)對(duì)照組 但應(yīng)關(guān)注種屬動(dòng)物選擇的合理性以及受試物有效性 53 注釋7 首批試驗(yàn)與后續(xù)試驗(yàn) 在不同程度上 所有的首批試驗(yàn)從本質(zhì)上講 均具有難以判斷的性質(zhì) 即對(duì)某一指標(biāo)影響的產(chǎn)生 可能有多種不同原因 例如 出生時(shí)每窩幼仔數(shù)的減少可能是因?yàn)榕怕崖?黃體數(shù) 的減少 著床前死亡率的提高 或因?yàn)橹埠笏劳雎驶虺錾罅⒓此劳雎实脑黾铀?而上述死亡可能是其早期胎體畸形的后果 由于隨后的繼發(fā)性改變等原因 該畸形不能夠再觀察到 尤其是那些在對(duì)照組中已表現(xiàn)出的低發(fā)生率的反應(yīng) 給藥所致影響與偶然出現(xiàn)的情況間的區(qū)別 就要根據(jù)其與其他類(lèi)型影響的關(guān)系來(lái)判斷 因此 若發(fā)現(xiàn)對(duì)某一指標(biāo)的影響 應(yīng)考慮進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)以探索其可能的聯(lián)系 就是要明確其毒性的性質(zhì) 范圍和原因 也包括判斷其劑量 反應(yīng)關(guān)系以便有助于其危險(xiǎn)性評(píng)價(jià) 這不同于首批試驗(yàn)的情況 此時(shí)劑量 反應(yīng)關(guān)系的存在與否 有助于區(qū)別給藥所致影響與偶然情況的不同 54 注釋8 計(jì)時(shí)方法 本指導(dǎo)原則中 妊娠的計(jì)時(shí)方法為以觀察到陰道涂片精子陽(yáng)性和 或陰栓的日期計(jì)為妊娠第0天 即使是前一個(gè)晚上才進(jìn)行交配 如果已觀察到了上述陽(yáng)性結(jié)果 就可以認(rèn)為大鼠 小鼠和家兔的著床發(fā)生在妊娠的第6 7天 硬腭的閉合在第15 18天 其他計(jì)時(shí)方法同樣也可被接受 但必須在報(bào)告中作明確規(guī)定 另外 研究者必須在不同的研究中保持計(jì)時(shí)方法的一致性 以確保給藥過(guò)程中不出現(xiàn)空隙 建議在相關(guān)研究的給藥期之間 應(yīng)設(shè)計(jì)至少一天的重疊期 交配時(shí)間的準(zhǔn)確性應(yīng)予詳細(xì)說(shuō)明 因?yàn)樗鼤?huì)影響胎仔和幼仔相關(guān)參數(shù)的變異性 同樣 對(duì)所飼養(yǎng)的幼仔動(dòng)物而言 若沒(méi)有特別說(shuō)明 其出生的那天即計(jì)為產(chǎn)后或哺乳的第0天 而特別是出現(xiàn)分娩延遲或滯產(chǎn)時(shí) 參考交配日期來(lái)計(jì)時(shí)可能是有幫助的 55 注釋9 動(dòng)物數(shù) 每組動(dòng)物數(shù)的確定往往根據(jù)經(jīng)驗(yàn) 推測(cè)總體上控制較好的試驗(yàn)設(shè)計(jì)所需的最大研究規(guī)模來(lái)確定其所需動(dòng)物數(shù)目 對(duì)動(dòng)物數(shù)要求的總體原則是滿(mǎn)足數(shù)據(jù)分析的需要 考慮到國(guó)內(nèi)的現(xiàn)實(shí)情況 參考ICH會(huì)議紀(jì)要中對(duì)三方原動(dòng)物數(shù)要求的闡述 本指導(dǎo)原則中仍然保留了對(duì)動(dòng)物數(shù)的最低要求 56 注釋10 給藥時(shí)間 生育力試驗(yàn) 尤其減少雄性動(dòng)物交配前給藥期 應(yīng)根據(jù)前期試驗(yàn)所積累的資料以及對(duì)精子發(fā)生過(guò)程基礎(chǔ)研究的再評(píng)價(jià)而設(shè)計(jì) 對(duì)精子發(fā)生的研究以往尤其要求較長(zhǎng)的交配前給藥期 但選擇性影響雄性生殖功能的受試物是罕見(jiàn)的 通過(guò)與雌性動(dòng)物交配來(lái)觀察受試物對(duì)精子發(fā)生影響這一方法是不靈敏的 而充分的雄性動(dòng)物生殖器官病理學(xué)和組織病理學(xué)檢查 如通過(guò)Bouin s固定 石蠟包埋 睪丸2 4um橫切片 附睪縱切片 PAS和蘇木素染色 則是檢查對(duì)精子發(fā)生的影響的一種更為敏感和快捷的方法 影響精子發(fā)生的受試物一般作用于分裂后期 尚無(wú)僅通過(guò)雄性動(dòng)物給藥9 10周并與雌性交配 來(lái)發(fā)現(xiàn)雄性生殖方面毒性的有說(shuō)服力的例子 試驗(yàn) 生育力試驗(yàn)可對(duì)重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中組織學(xué)檢查不能觀察到的受試物對(duì)雄性生育力的功能性影響 以及對(duì)雌雄動(dòng)物交配行為的影響進(jìn)行評(píng)價(jià) 重復(fù)給藥試驗(yàn)可提供受試物對(duì)精子發(fā)生產(chǎn)生潛在影響的信息 因而使生育力試驗(yàn)更集中在對(duì)導(dǎo)致毒性的其它更直接原因的研究上 評(píng)價(jià)對(duì)精子產(chǎn)生影響時(shí) 應(yīng)參考重復(fù)給藥至少1個(gè)月毒性試驗(yàn)的結(jié)果 如果在至少1個(gè)月的重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用 那么在交配前雄性動(dòng)物給藥周期可縮短至4周 已有研究顯示大鼠精子發(fā)生 包括精子成熟 整個(gè)過(guò)程需63天 若已有的資料提示生育力的研究范圍需擴(kuò)大或需明確其作用性質(zhì) 則應(yīng)合理設(shè)計(jì)試驗(yàn)以對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的研究 57 注釋11 動(dòng)物處理 雌雄比例 雌雄動(dòng)物最好以1 1比例進(jìn)行交配 因?yàn)椴还苁菫榱巳〉酶叩氖茉新蔬€是為了避免試驗(yàn)結(jié)果的錯(cuò)誤分析和闡述 這都是最安全的方法 交配時(shí)期和方法 大部分實(shí)驗(yàn)室均采用2 3周的交配期 在一些實(shí)驗(yàn)室 一旦陰道涂片陽(yáng)性或查到陰栓即將雌性動(dòng)物移走 而另一些實(shí)驗(yàn)室則繼續(xù)使雌雄動(dòng)物同籠 大部分大鼠在同籠的最初5天內(nèi)即可交配 在第1個(gè)動(dòng)情期內(nèi) 但某些雌鼠可能出現(xiàn)假孕 在此情況下 可將雌雄大鼠同籠約20天 使雌性動(dòng)物重新開(kāi)始動(dòng)情期以受孕