詳細(xì)微生物培養(yǎng)基適用性檢查總結(jié)題庫.doc

培養(yǎng)基適用性檢查 計數(shù)實驗的培養(yǎng)基適用性 該部分內(nèi)容均為新增 規(guī)定了該內(nèi)容的應(yīng)用范圍 采用標(biāo)準(zhǔn)菌種計數(shù)，回收率以及形態(tài)比較的判定方法 標(biāo)準(zhǔn)菌種為：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉；規(guī)定了稀釋后的工作菌液的保存條件和保存期限 引入了對照培養(yǎng)基的概念 判定的依據(jù)：回收率大于70，且形態(tài)一致 控制菌檢查的培養(yǎng)基適用性 該部分內(nèi)容均為新增 規(guī)定了該部分內(nèi)容的應(yīng)用范圍以及檢查的項目 采用標(biāo)準(zhǔn)菌種比較的判定方法 根據(jù)培養(yǎng)基的用途不同，分為增菌培養(yǎng)基的促生長能力、固體培養(yǎng)基的促生長能力、培養(yǎng)基的抑制能力、固體培養(yǎng)基的指示能力、液體培養(yǎng)基的指示能力等5種檢查方法 在檢查中引入了涂布接種的概念1. 概述培養(yǎng)基質(zhì)量是影響微生物檢驗結(jié)果的重要環(huán)節(jié)。計數(shù)測定用培養(yǎng)基的促生長能力是微生物限度檢查結(jié)果判斷的重要影響因素，控制菌檢查用培養(yǎng)基也可能由于其促生長能力、指示能力、抑制能力的差異，從而對菌落顏色、形態(tài)等指標(biāo)存在較大差異，影響結(jié)果判斷的客觀性。培養(yǎng)基適用性檢查是通過檢驗用培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基的比較，以陽性菌的生長狀態(tài)或特征來評價拍段檢驗用培養(yǎng)基是否符合檢驗要求。微生物限度檢查用培養(yǎng)基主要分為細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)測定用培養(yǎng)基和控制菌檢查用培養(yǎng)基兩部分。2010版中國藥典微生物限度檢查法中收載了“適用性檢查”對培養(yǎng)基質(zhì)量進(jìn)行控制。2、培養(yǎng)基適用性檢查實驗的一般要求2.1培養(yǎng)基適用性檢查適用范圍2010版中國藥典規(guī)定微生物限度檢查中成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。培養(yǎng)基使用性檢查試驗可用于確定實驗室所用培養(yǎng)基(包括購置的不同批號的成品培養(yǎng)基、不同批號的脫水培養(yǎng)基干粉、按處方自行配制培養(yǎng)基不同批次的原材料等)、制備程序（包括水質(zhì)控制、配制方法、滅菌程序等）、保存條件（溫度、濕度、時間及盛裝培養(yǎng)基的容器條件等）等是否滿足微生物限度檢查用要求。即上述影響培養(yǎng)基質(zhì)量的各關(guān)鍵控制點應(yīng)通過培養(yǎng)基使用性檢查試驗確定，如果任一控制點發(fā)生變化應(yīng)重新進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。但是影響培養(yǎng)基質(zhì)量的關(guān)鍵控制點的變化應(yīng)掌握在微生物實驗室質(zhì)量控制的一般原則內(nèi)（見2.2），超過一般原則的培養(yǎng)及是否還能滿足微生物限度檢查用，無法通過培養(yǎng)基適用性檢查確定。當(dāng)檢查結(jié)果出現(xiàn)異常，或?qū)嶒炇屹|(zhì)量控制需要，也可通過培養(yǎng)基適用性檢查提供一定依據(jù)。總之，培養(yǎng)基適用性檢查是在正常條件下關(guān)于培養(yǎng)基質(zhì)量的實驗室控制措施，并不一定在每次具體的微生物限度檢查樣品檢測試驗活動中都必須同時進(jìn)行培養(yǎng)基使用性檢查試驗，但每次微生物檢查所用培養(yǎng)基均應(yīng)經(jīng)過適用性檢查。2.2微生物限度檢查用培養(yǎng)基質(zhì)量控制的一般原則2.2.1不同處方培養(yǎng)基的替代使用不能通過培養(yǎng)基使用性檢查試驗簡單確定。2.2.2.培養(yǎng)基適用性檢查不能取代供應(yīng)商或其他法定標(biāo)準(zhǔn)對培養(yǎng)基的有效期、保存條件、制備方法等的更嚴(yán)格等的規(guī)定。2.2.3.如果沒有特殊規(guī)定，培養(yǎng)基配制采用蒸餾水或純化水均可，但應(yīng)采用一定措施加以檢測控制，如蒸餾水應(yīng)核實PH是否為57；采用離子交換法制備的純化水，電阻值應(yīng)不小于2M等。2.2.4盡量臨用現(xiàn)配。培養(yǎng)基滅菌后在能取出的前提下，盡快取出，切忌在高壓鍋內(nèi)過夜存留；固體培養(yǎng)基滅菌或融化后，融化狀態(tài)放置不得超過8h；一般預(yù)制培養(yǎng)基可置潔凈環(huán)境225保存，但不應(yīng)超過20天；固體瓊脂培養(yǎng)基熔化再使用應(yīng)不超過一次。2.2.5干粉培養(yǎng)基或培養(yǎng)基原料變質(zhì)不應(yīng)再用；預(yù)制培養(yǎng)基儲存過程中發(fā)現(xiàn)渾濁、變色、長菌、嚴(yán)重脫水等變化不應(yīng)再用。2.3對照培養(yǎng)基對照培養(yǎng)基應(yīng)通過嚴(yán)格的質(zhì)量研究和控制，具備性能穩(wěn)定、質(zhì)量優(yōu)異的特點。對照培養(yǎng)基作為一種標(biāo)準(zhǔn)試劑，應(yīng)具備可靠的來源和保障。2.4培養(yǎng)基適用性檢查指標(biāo)及常用方法2.4.1檢測指標(biāo)：促生長能力、指示能力、抑制能力。2.4.2常用方法：直接接種法、澆碟法、表面接種法（涂布法）。2.4.3液體培養(yǎng)基通常采用直接接種法測定上述3種指標(biāo)，接種時應(yīng)注意接種量不得超過培養(yǎng)基體積的10%。固體培養(yǎng)基采用澆碟法和表面接種法測定上述指標(biāo)。采用澆碟法考察固體培養(yǎng)基時，為了保證取樣的平行性，平行測定兩皿求平均數(shù)；采用表面接種法考察固體培養(yǎng)基時，表面接種菌液不多于0.2ml/皿，盡量控制在0.1 ml/皿，保證取樣的平行性，平行測定兩皿觀察結(jié)果。3.計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查微生物限度檢查中計數(shù)用培養(yǎng)基3種，營養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉營養(yǎng)瓊脂和酵母浸出粉葡萄糖瓊脂。3.1計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查試驗菌株。大腸埃希菌CMCC(B)44102金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉菌CMCC(F)98003菌株培養(yǎng)基菌液制備同微生物限度檢查方法驗證。3.2實驗操作3.2.1培養(yǎng)基制備 按規(guī)定程序新鮮配置營養(yǎng)瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基）、玫瑰紅鈉營養(yǎng)瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基）以及酵母浸出粉葡萄糖瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基），滅菌后備用。3.2.2營養(yǎng)瓊培養(yǎng)基 取7個無菌平皿，分別接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照營養(yǎng)瓊培養(yǎng)基，混勻，凝固后于3035倒置培養(yǎng)48h,計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。3.2.3玫瑰紅鈉營養(yǎng)瓊脂 取5個無菌平皿，分別接種白色念球菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照玫瑰紅鈉營養(yǎng)瓊脂，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)72h,計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。3.2.4酵母浸出粉葡萄糖瓊脂 取3個無菌平皿，分別接種白色念球菌2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照酵母浸出粉葡萄糖瓊脂，混勻，凝固后倒置培養(yǎng)72h,計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。3.3結(jié)果判斷若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，則判斷該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。4.控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查控制菌檢查用成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配置的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。檢查項目包括培養(yǎng)基的促生長能力、指示和抑制特性能力。4.1計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查試驗菌株。大腸埃希菌CMCC(B)44102金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003銅綠假單胞菌CMCC(B)10104乙型副傷寒沙門菌CMCC(B)50094白色念珠菌CMCC(F)98001枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501菌株培養(yǎng)基菌液制備同微生物限度檢查方法驗證。4.2各種培養(yǎng)基需要測試的能力及判斷指標(biāo)液體培養(yǎng)基促生長能力檢查：取不大于100cfu的試驗菌株分別接種于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（3035）及最短培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基多為澄清液體培養(yǎng)基，與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。固體培養(yǎng)基促生長能力檢查：取試驗菌液0.1ml（含菌數(shù)50100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（3035）及最短培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基上生長的菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)一致。液體培養(yǎng)基指示能力檢查：取不大于100cfu的試驗菌株分別接種于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（3035）及最短培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。與對照培養(yǎng)基管比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長情況/指示劑反應(yīng)等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。固體培養(yǎng)基指示能力檢查：取試驗菌液0.1ml（含菌數(shù)50100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（3035）及最短培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)基上試驗菌的菌落形態(tài)特征、菌落顏色及指示劑反應(yīng)情況應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。培養(yǎng)基抑制能力檢查：取不大于100cfu的試驗菌株分別接種于液體被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基，取試驗菌0.1ml液（不大于100cfu）分別涂布于固體被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)基溫度（3035）及最長培養(yǎng)基時間下培養(yǎng)。試驗菌應(yīng)不得生長。4.3 控制菌檢查用培養(yǎng)基能力測試列表（表7）控制菌檢查涉及的21種培養(yǎng)基，特點各異。表格中概述培養(yǎng)基的具體項目，具體操作程序在其后說明。表格7 控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查項目、菌株及判斷指標(biāo)培養(yǎng)基測試菌株測試特征測試指標(biāo)膽鹽乳糖培養(yǎng)基BL大腸埃希菌促生長能力渾濁銅綠假單胞菌渾濁金黃色葡萄球菌抑制能力未見渾濁MUG培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長能力渾濁大腸埃希菌指示能力366nm有熒光曙紅亞甲藍(lán)瓊脂或麥康凱瓊脂大腸埃希菌促生長能力回收率乙型副傷寒沙門菌回收率大腸埃希菌指示能力顏色形態(tài)同對照乙型副傷寒沙門菌顏色形態(tài)同對照乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長能力渾濁產(chǎn)氣金黃色葡萄球菌抑制能力未見渾濁乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基大腸埃希菌促生長能力渾濁大腸埃希菌指示能力產(chǎn)氣營養(yǎng)肉湯乙型副傷寒沙門菌促生長能力渾濁金黃色葡萄球菌促生長能力渾濁四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基乙型副傷寒沙門菌促生長能力上清渾濁金黃色葡萄球菌抑制能力上清未見渾濁膽鹽硫乳瓊脂或沙門志賀屬瓊脂乙型副傷寒沙門菌指示能力回收率乙型副傷寒沙門菌促生長能力顏色形態(tài)同對照溴化十六烷基三甲銨瓊脂銅綠假單胞菌促生長能力回收率大腸埃希菌抑制能力不得生長綠膿菌素測定用培養(yǎng)基銅綠假單胞菌促生長能力回收率銅綠假單胞菌指示能力顏色形態(tài)同對照亞弚酸鹽肉湯培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌促生長能力渾濁大腸埃希菌抑制能力未見渾濁卵黃氯化鈉瓊脂或甘露醇氯化鈉瓊脂金黃色葡萄球菌促生長能力回收率金黃色葡萄球菌指示能力顏色形態(tài)同對照大腸埃希菌抑制能力不得生長梭菌增菌培養(yǎng)基生孢梭菌促生長能力渾濁哥倫比亞瓊脂生孢梭菌促生長能力回收率沙氏葡萄糖肉湯白色念球菌促生長能力渾濁沙氏葡萄糖瓊脂白色念球菌促生長能力回收率白色念球菌指示能力顏色形態(tài)同對照念球菌顯色培養(yǎng)基白色念球菌促生長能力回收率白色念球菌指示能力顏色形態(tài)同對照大腸埃希菌抑制能力不得生長1%聚山梨酯80玉米瓊脂培養(yǎng)物白色念球菌促生長能力回收率白色念球菌指示能力顏色形態(tài)同對照4.4各控制菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查實驗操作控制菌檢查用培養(yǎng)基較多，特點各不相同。為了避免培養(yǎng)基配制過程出現(xiàn)遺漏，此處特別提示以下幾個需要特殊注意到培養(yǎng)基：不可高壓滅菌只能加熱煮沸的培養(yǎng)基3種：DHL瓊脂、SS瓊脂和念球菌顯色培養(yǎng)基；需要添加試劑的培養(yǎng)基3種：TTB培養(yǎng)基、亞弚酸鹽肉湯培養(yǎng)基和哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基。以下敘述各培養(yǎng)基適用性檢查的具體操作過程：4.4.1膽鹽乳糖培養(yǎng)基新鮮配制100ml/瓶的對照膽鹽乳糖培養(yǎng)基4瓶，121滅菌15min，備用。分別接種大腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及金黃色葡萄球菌各1瓶，接種菌液量1ml(不大于100cfu)，另一瓶不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁；培養(yǎng)48h，空白培養(yǎng)瓶和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁；4.4.2MUG培養(yǎng)基 新鮮配制50ml/支的對照MUG培養(yǎng)基4瓶，121滅菌15min,備用。取3支，接種大腸埃希菌2支，接種菌液0.2ml(不大于100cfu)，另一支不接種菌作為空白對照，培養(yǎng)5h，在366nm紫外光燈下觀察結(jié)果；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。空白培養(yǎng)管應(yīng)不得渾濁，且366nm處觀察無熒光；與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁，366nm處應(yīng)呈熒光。若熒光不明顯，則可延長至24h觀察。4.4.3 曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB） 新鮮配制對照EMB瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15min,冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個無菌EMB瓊脂平板，分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)24h，空白平板應(yīng)無菌落生長。4.4.4 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基 新鮮配制對照麥康凱瓊脂培養(yǎng)基121滅菌15min,冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個無菌麥康凱瓊脂平板，分別涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)24h，空白平板應(yīng)無菌落生長。4.4.5乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基新鮮配制10ml/支的對照乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基，121滅菌15min，備用。取5支，分別接種大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌，各2支，接種菌液量1ml(不大于100cfu)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變色、渾濁，且有導(dǎo)管中應(yīng)有明顯的產(chǎn)氣現(xiàn)象；培養(yǎng)24h，空白培養(yǎng)管和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管應(yīng)不得變色、不得渾濁。4.4.6乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基新鮮配制10ml/支的對照乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，121滅菌15min，備用。取3支，接種大腸埃希菌2支，接種菌液量1ml(不大于100cfu)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變色、渾濁，且有導(dǎo)管中應(yīng)有明顯的產(chǎn)氣現(xiàn)象；培養(yǎng)24h，空白培養(yǎng)管應(yīng)不得變色、不得渾濁。4.4.7 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基新鮮配制100ml/瓶的對照營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3瓶，121滅菌15min，備用。分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌各1瓶，接種菌液量1ml(不大于100cfu)，另一瓶不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁；培養(yǎng)48h，空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。4.4.8 四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（TTB）新鮮配制10ml/支的對照四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基基礎(chǔ)，121滅菌15min，備用。臨用前，無菌操作加入0.2ml碘試液和0.1ml亮綠試液。取5支，分別接種乙型副傷寒沙門菌和金黃色葡萄球菌各2支，接種菌液1ml(不大于100cfu)，另一支不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基上清渾濁；培養(yǎng)24h，空白培養(yǎng)管和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管應(yīng)不得渾濁。由于TTB中的碳酸鈣對渾濁現(xiàn)象觀察有影響，因此若渾濁現(xiàn)象不明顯，則將各培養(yǎng)物接種至膽鹽硫乳瓊脂（DHL）或沙門、志賀屬瓊脂（SS）平板上劃線觀察TTB培養(yǎng)物生長情況，空白對照和接種金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)管劃線后應(yīng)無菌落生長，對照和被檢TTB培養(yǎng)基劃線接種至瓊脂平板后應(yīng)有菌落生長、且顏色形態(tài)一致。4.4.9 膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基（DHL）新鮮配制對照DHL瓊脂培養(yǎng)基，加熱充分溶解，冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個無菌DHL瓊脂平板，涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)48h，空白平板應(yīng)無菌落生長。4.4.10 沙門、志賀屬瓊脂培養(yǎng)基（SS）新鮮配制對照SS 瓊脂培養(yǎng)基，加熱充分溶解，冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個無菌SS 瓊脂平板，涂布接種乙型副傷寒沙門菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)48h，空白平板應(yīng)無菌落生長。4.4.11溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)新鮮配制對照溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15min,冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取7個無菌瓊脂平板，分別涂布接種銅綠假單胞菌和大腸埃希菌各3皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)18h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)24h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。4.4.12 綠膿菌素測定用培養(yǎng)基（PDP）新鮮配制對照綠膿菌素測定用培養(yǎng)基基礎(chǔ)，每升培養(yǎng)基中加入10ml甘油，121滅菌15min,冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個無菌綠膿菌素測定用瓊脂平板，涂布接種銅綠假單胞菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)24h；被檢培養(yǎng)基同法操作。空白平板應(yīng)無菌落生長，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。4.4.13亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基新鮮配制100ml/瓶的對照營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3瓶，121滅菌15min，備用。臨用前，加入新鮮配制的無菌1%亞碲酸鹽0.2ml。分別接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各1瓶，接種菌液1ml(不大于100cfu)，另一瓶不接種菌株作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變黑、變渾濁；培養(yǎng)48h，空白培養(yǎng)瓶和接種大腸埃希菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。4.4.14 卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基新鮮配制對照卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)，121滅菌15min,冷卻至60，參照2010版中國藥典比例無菌操作加入10%氯化鈉卵黃液，充分振搖后傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個無菌瓊脂平板，分別涂布接金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)72h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。4.4.15 甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基新鮮配制對照甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15min,冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個無菌瓊脂平板，分別涂布接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌各2皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)24h，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)72h，空白平板和接種大腸埃希菌的平板應(yīng)無菌落生長。4.4.16 梭菌增菌培養(yǎng)基新鮮配制100ml/瓶的對照梭菌增菌培養(yǎng)基2瓶，121滅菌15min，備用。接種生孢梭菌1瓶，接種菌液1ml(不大于100cfu)，另一瓶不接種菌株作為空白對照，置規(guī)定溫度的厭氧條件培養(yǎng)48h；被檢培養(yǎng)基同法操作。空白培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁；與對照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗菌應(yīng)生長良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁。4.4.17 哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基新鮮配制對照哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基，121滅菌15min,冷卻至60傾注平皿，35培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取3個哥倫比亞瓊脂平板，涂布接種生孢梭菌2皿，接種菌液0.1ml（含菌50100cfu），另一平板不接種菌作為空白對照，涂布均勻后置規(guī)定溫度的厭氧條件下倒置培養(yǎng)；被檢培養(yǎng)基同法操作。培養(yǎng)48h，空白平板無菌落生長；被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，適宜多數(shù)需氧菌的生長，為了消除其它雜菌生長對檢查結(jié)果的影響，可在每升滅菌后培養(yǎng)基中按無菌操作添加含有相當(dāng)于20mg慶大霉素的硫