河北地區(qū)高中生物備課資料 微生物的實驗室培養(yǎng) 新人教版選修1.ppt

專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題一微生物的實驗室培養(yǎng) 1 何為培養(yǎng)基 不同的培養(yǎng)基有不同的配方 但是其基本成分都相同 都包括哪些營養(yǎng)成分 有何作用 請舉例說明 2 無菌技術(shù)包括哪些方面 消毒和滅菌的區(qū)別 常用的消毒方法有哪些 常用的滅菌方法有哪些 自主學(xué)習(xí) 培養(yǎng)基和無菌技術(shù) 一 培養(yǎng)基 人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求 配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì) 固體培養(yǎng)基 用于微生物的分離 計數(shù) 鑒定液體培養(yǎng)基 常用于工業(yè)生產(chǎn) 微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì) 不管哪種培養(yǎng)基 一般都含有水 碳源 和氮源 無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì) 另外還需要滿足微生物生長對ph 特殊營養(yǎng)物質(zhì) 例如生長因子即細(xì)菌生長必需 而自身不能合成的化合物 如維生素 某些氨基酸 嘌呤 嘧啶 以及氧氣 二氧化碳 滲透壓等的要求 消毒 使用較溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物 不包括芽孢和孢子 滅菌 使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)所有的微生物 包括芽孢和孢子 二 無菌技術(shù) 常用的消毒方法 1 煮沸消毒法 100 煮沸5 6min2 巴氏消毒法 70 75 下煮30min或80 下煮15min3 用75 酒精 新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒4 氯氣消毒水源5 紫外線消毒 二 無菌技術(shù) 1 灼燒滅菌2 干熱滅菌 160 170 下加熱1 2h 3 高壓蒸氣滅菌 100kpa 121 下維持15 30min 常用的滅菌方法 二 無菌技術(shù) 一 制備培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 1 計算2 稱量3 溶化4 滅菌5 倒平板 三 實驗操作 倒平板技術(shù) 1 培養(yǎng)基滅菌后 需要冷卻到50 左右時 才能用來倒平板 你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度 問題探討 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶 感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時 就可以進(jìn)行倒平板了 2 為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰 通過灼燒滅菌 防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基 3 平板冷凝后 為什么要將平板倒置 4 在倒平板的過程中 如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位 這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎 為什么 平板冷凝后 皿蓋上會凝結(jié)水珠 凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高 將平板倒置 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā) 又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基 造成污染 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生 因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物 二 純化大腸桿菌 平板劃線法稀釋涂布平板法 常用的微生物接種方法 微生物的接種技術(shù) 平板劃線法 微生物的接種技術(shù) 稀釋涂布平板法 問題探討 1 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán) 在劃線操作結(jié)束時 仍然需要灼燒接種環(huán)嗎 為什么 第一步灼燒是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 每次劃線前灼燒是為了殺死上次劃線結(jié)束后 接種環(huán)上殘留的菌種 使下一次劃線時 接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端 從而通過劃線次數(shù)的增加 使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少 以便得到菌落 劃線結(jié)束后灼燒能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種 避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 2 在灼燒接種環(huán)之后 為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線 以免接種環(huán)溫度太高 殺死菌種 3 在作第二次以及其后的劃線操作時 為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線 劃線后 線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少 每次從上一次劃線的末端開始 能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少 最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落 問題探討 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行 結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求 想一想 第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證 無菌 例如 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適 吸管頭不要接觸任何其他物體 吸管要在酒精燈火焰周圍等等 1 臨時保藏 接種到固體斜面培養(yǎng)基 菌落長成后置于4 冰箱保存 2 長期保存 甘油冷凍管藏法 菌種的保存 四 課題成果評價 一 培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 2d后無菌落生長 說明培養(yǎng)基的制備是成功的 否則需要重新制備 二 接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色 形狀 大小基本一致 并符合大腸桿菌菌落的特點 則說明接種操作是符合要求的 如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落 則說明接種過程中 無菌操作還未達(dá)到要求 需要分析原因 再次練習(xí) 三 是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同 及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點 并能觀察到其他一些細(xì)微的變化 這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)