人凝血因子Ⅷ效價(jià)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程.doc

人凝血因子效價(jià)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 目的嚴(yán)格規(guī)范操作者的檢測(cè)方法，使操作者能夠快速有效和安全準(zhǔn)確地完成檢驗(yàn)操作，特制定本操作規(guī)程。2 適用范圍本操作規(guī)程適用于冷沉淀、人凝血因子洗脫原液、原液、半成品、凍干及成品等含有人凝血因子的供試品效價(jià)檢測(cè)。3 制定依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典（2015年版）三部，附錄3521人凝血因子效價(jià)測(cè)定法（一期法）。4 職責(zé)4.1 檢驗(yàn)人員按本SOP對(duì)供試品進(jìn)行檢驗(yàn)和計(jì)算。4.2 復(fù)核人對(duì)檢驗(yàn)中的計(jì)算進(jìn)行復(fù)核。4.3 確認(rèn)人按本SOP對(duì)檢驗(yàn)過程及結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)確認(rèn)和判定。5 儀器及器具5.1 儀器5.1.1 凝血儀5.1.2 電子天平5.1.3 電子分析天平5.1.4 漩渦混勻器5.2 器具5.2.1 微量移液器5.2.2 吸頭5.2.3 移液管5.2.4 洗耳球5.2.5 試管5.2.6 試管架5.2.7 砂輪5.2.8 凝血儀耗材（比色盤、供試品杯等）6 試劑及試液6.1 試劑6.1.1 人凝血因子VIII國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品6.1.2 人凝血因子VIII比較品6.2 試液6.2.1 人凝血因子缺乏血漿6.2.2 稀釋液（咪唑稀釋液/因子稀釋液/樣本稀釋液）6.2.3 激活的部分促凝血酶原激酶時(shí)間試劑 6.2.4 氯化鈣溶液7 操作步驟7.1 供試品溶液、比較品溶液及標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備7.1.1 供試品及比較品溶液的制備7.1.1.1 供試品及比較品的預(yù)稀釋用人凝血因子缺乏血漿將供試品預(yù)稀釋成約1IU/ml（凍干制品先按標(biāo)示量加入水溶解；冷沉淀先取12g，加水溶解約為20倍。具體稀釋過程如下：供試品區(qū)分冷沉淀人凝血因子洗脫原液、原液人凝血因子 半成品、成品、凍干及比較品供試品12g100l100l人凝血因子缺乏血漿1938g純化水300l100l稀釋倍數(shù)2042取上步稀釋液-50l50l人凝血因子缺乏血漿-450l450l總預(yù)稀釋倍數(shù)2040207.1.1.2 供試品預(yù)稀釋液的工作稀釋（供試品溶液）將上述含人凝血因子約1IU/ml的供試品預(yù)稀釋液用稀釋液稀釋6倍、8倍、10倍。具體稀釋過程如下：先取500l已預(yù)稀釋成含人凝血因子約1IU/ml的供試品預(yù)稀釋液，加500l稀釋液，稀釋成含人凝血因子約0.5IU/ml，混勻，再分別從中取200l移到3支試管中，分別加400l，600l和800l稀釋液。供試品稀釋可根據(jù)本身效價(jià)高低及儀器環(huán)境等變化作適當(dāng)適當(dāng)調(diào)整。如下表稀釋：供試品溶液1供試品溶液2供試品溶液3供試品預(yù)稀釋液500l500l500l稀釋液500l500l500l稀釋倍數(shù)222取上步稀釋液200l200l200l稀釋液400l600l800l總稀釋倍數(shù)3040507.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備7.1.2.1 預(yù)稀釋：將標(biāo)準(zhǔn)品按標(biāo)示量加入水溶解，取100l復(fù)溶品，加人凝血因子缺乏血漿適量預(yù)稀釋成約1IU/ml。7.1.2.2 工作稀釋：將上述1IU/ml的標(biāo)準(zhǔn)品用稀釋液稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍。稀釋倍數(shù)2481632600l1IU/ml標(biāo)準(zhǔn)品600l2標(biāo)準(zhǔn)品600l4標(biāo)準(zhǔn)品600l8標(biāo)準(zhǔn)品600l16標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液600l600l600l600l600l人凝血因子效價(jià)0.5IU/ml0.25IU/ml0.125IU/ml0.0625IU/ml0.03125IU/ml7.2 檢驗(yàn)操作7.2.1 凝血儀準(zhǔn)備：7.2.1.1 先打開凝血儀電源，在反應(yīng)盤上放入比色盤，預(yù)熱使反應(yīng)倉(cāng)溫度達(dá)到37。7.2.1.2 分別將激活的部分促凝血酶原激酶時(shí)間試劑和氯化鈣溶液加入凝血儀的相應(yīng)區(qū)域。7.2.2 上機(jī)測(cè)試凝固時(shí)間7.2.2.1 將供試品杯加到供試品盤上，并按要求在相應(yīng)的供試品杯中加入供試液（標(biāo)準(zhǔn)品、比較品和供試品稀釋液）和相應(yīng)試劑。具體加入位置如下：Dil杯加入稀釋液；18號(hào)杯加入人凝血因子缺乏血漿；114號(hào)杯加入待測(cè)液；7.2.2.2 按儀器操作規(guī)程啟動(dòng)人凝血因子效價(jià)測(cè)定程序；7.2.2.3 測(cè)定結(jié)束后，記錄返回的凝固時(shí)間7.2.3 測(cè)定時(shí)要求每個(gè)稀釋度平行測(cè)定2管，兩管之差不得超過均值10%，否則重測(cè)。7.3 結(jié)果處理7.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：將標(biāo)準(zhǔn)品5個(gè)不同稀釋度所含人凝血因子效價(jià)（IU/ml），分別取對(duì)數(shù)值；再將其各相應(yīng)濃度所測(cè)得的凝固時(shí)間（秒，s），也分別取對(duì)數(shù)值。然后按統(tǒng)計(jì)學(xué)方法作直線回歸方程（用excel計(jì)算）：logy = blogx+a其中：x為人凝血因子效價(jià)，IU/ml；y為測(cè)得相應(yīng)凝固時(shí)間，秒（s）。7.3.2 供試品及比較品效價(jià)計(jì)算：將3個(gè)不同濃度的供試品所得到凝固時(shí)間（秒）分別代入方程式計(jì)算x值；然后將所得x值分別乘以相應(yīng)的供試品稀釋倍數(shù)，即得到3個(gè)相應(yīng)的效價(jià)（IU/ml）；計(jì)算這3個(gè)效價(jià)值的平均值作為供試品中人凝血因子效價(jià)。7.4 注意事項(xiàng)7.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線直線回歸相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.98。7.4.2 每個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)品或供試品平行測(cè)定2管，2管之差不得超過均值10%，否則重測(cè)。7.4.3 直接接觸標(biāo)準(zhǔn)品、供試品和血漿的器皿應(yīng)為塑料制品或硅化玻璃制品。7.4.4 應(yīng)急預(yù)案7.4.4.1 儀器與電腦無法連接（儀器無法將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)傳到電腦上不易于對(duì)實(shí)驗(yàn)的考察及結(jié)果分析，試驗(yàn)過程中數(shù)據(jù)未能在電腦上讀?。?。檢查線接口，重新連接儀器電腦。7.4.4.2 如遇到供試品還未上機(jī)檢驗(yàn)停電，則待來電后，檢驗(yàn)照常進(jìn)行。如遇上機(jī)過程中斷電在不影響檢驗(yàn)結(jié)果的情況下繼續(xù)檢驗(yàn)直到結(jié)束，否則重新檢驗(yàn)。7.4.4.3 電源無法關(guān)閉，可能是電路短路，會(huì)導(dǎo)致機(jī)器死機(jī)。7.4.4.4 長(zhǎng)期頻繁的開關(guān)會(huì)導(dǎo)