緩沖液配制.doc

乙醇醋酸銨緩沖液(pH3.7) ：取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L氫氧化銨溶液調(diào)節(jié)pH值至3.7，用水稀釋至1000ml，即得。三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.0) ：取三羥甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,攪拌溶解，并稀釋至1000ml,用6mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.0,即得。三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.1) ：取氯化鈣0.294g,加0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.1，加水稀釋至100ml，即得。三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH9.0)： 取三羥甲基氨基甲烷6.06g,加鹽酸賴氨酸3.65g、氯化鈉5.8g、乙二胺四醋酸二鈉0.37g，再加水溶解使成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至9.0，即得。烏洛托品緩沖液： 取烏洛托品75g，加水溶解后，加濃氨溶液4.2ml，再用水稀釋至250ml,即得。巴比妥緩沖液(pH7.4)：取巴比妥鈉4.42g,加水使溶解并稀釋至400ml，用2mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.4，濾過，即得。巴比妥緩沖液(pH8.6)：取巴比妥5.52g與巴比妥鈉30.9g,加水使溶解成2000ml，即得。巴比妥氯化鈉緩沖液(pH7.8)： 取巴比妥鈉5.05g,加氯化鈉3.7g及水適量使溶解,另取明膠0.5g加水適量，加熱溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.8，再用水稀釋至500ml，即得。甲酸鈉緩沖液(pH3.3) ：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氫氧化鈉溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀釋至200ml,調(diào)節(jié)pH值至3.253.30,即得。鄰苯二甲酸鹽緩沖液(pH5.6)： 取鄰苯二甲酸氫鉀10g，加水900ml,攪拌使溶解，用氫氧化鈉試液(必要時(shí)用稀鹽酸)調(diào)節(jié)pH值至5.6,加水稀釋至1000ml，混勻，即得。枸櫞酸鹽緩沖液： 取枸櫞酸4.2g,加1mol/L的20乙醇制氫氧化鈉溶液40ml使溶解,再用20乙醇稀釋至100ml，即得。枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.2)： 取2.1枸櫞酸水溶液，用50氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.2，即得。枸櫞酸磷酸氫二鈉緩沖液(pH4.0)：甲液取枸櫞酸21g或無水枸櫞酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱內(nèi)保存。乙液取磷酸氫二鈉71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml與乙液38.55ml混合，搖勻，即得。氨氯化銨緩沖液(pH8.0) ：取氯化銨1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(130)調(diào)節(jié)pH值至8.0，即得。氨氯化銨緩沖液(pH10.0)： 取氯化銨5.4g，加水20ml溶解后，加濃氯溶液35ml，再加水稀釋至100ml，即得。硼砂氯化鈣緩沖液(pH8.0)： 取硼砂0.572g與氯化鈣2.94g，加水約800ml溶解后,用1mol/L鹽酸溶液約2.5ml調(diào)節(jié)pH值至8.0，加水稀釋至1000ml，即得。硼砂碳酸鈉緩沖液(pH10.811.2)： 取無水碳酸鈉5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。臨用前取碳酸鈉溶液973ml 與硼砂溶液27ml，混勻，即得。硼酸氯化鉀緩沖液(pH9.0)： 取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化鉀溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L氫氧化鈉溶液210ml，即得。醋酸鹽緩沖液(pH3.5)： 取醋酸銨25g，加水25ml溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH值至3.5(電位法指示),用水稀釋至100ml,即得。醋酸鋰鹽緩沖液(pH3.0)： 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氫氧化鋰調(diào)節(jié)pH值至3.0，再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液(pH3.6) ：取醋酸鈉5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀釋至250ml,即得。醋酸醋酸鈉緩沖液(pH3.7)：取無水醋酸鈉20g,加水300ml溶解后，加溴酚藍(lán)指示液1ml及冰醋酸6080ml，至溶液從藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兙G色，再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液(pH3.8)：取2mol/L醋酸鈉溶液13ml與2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含銅1mg的硫酸銅溶液0.5ml,再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液(pH4.5)： 取醋酸鈉18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀釋至1000ml,即得。醋酸醋酸鈉緩沖液(pH4.6)： 取醋酸鈉5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至4.6，再加水稀釋至100ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液(pH6.0)： 取醋酸鈉54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀釋至500ml，即得。醋酸醋酸鉀緩沖液(pH4.3) ：取醋酸鉀14g，加冰醋酸20.5ml，再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸醋酸銨緩沖液(pH4.5)： 取醋酸銨7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml與適量的水使成100ml，即得。醋酸醋酸銨緩沖液(pH6.0)： 取醋酸銨100g，加水300ml使溶解，加冰醋酸7ml,搖勻，即得。磷酸三乙胺緩沖液： 取磷酸約4ml與三乙胺約7ml，加50甲醇稀釋至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.2，即得。磷酸鹽緩沖液： 取磷酸二氫鈉38.0g，與磷酸氫二鈉5.04g,加水使成1000ml,即得。磷酸鹽緩沖液(pH2.0)： 甲液取磷酸16.6ml，加水至1000ml，搖勻。乙液取磷酸氫二鈉71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液72.5ml與乙液27.5ml混合，搖勻，即得。磷酸鹽緩沖液(pH2.5)： 取磷酸二氫鉀100g，加水800ml，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至2.5,用水稀釋至1000ml。磷酸鹽緩沖液(pH5.0)： 取0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液一定量,用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至5.0，即得。磷酸鹽緩沖液(pH5.8)： 取磷酸二氫鉀8.34g與磷酸氫二鉀0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。磷酸鹽緩沖液(pH6.5)： 取磷酸二氫鉀0.68g,加0.1mol/L氫氧化鈉溶液15.2ml，用水稀釋至100ml，即得。磷酸鹽緩沖液(pH6.6)： 取磷酸二氫鈉1.74g、磷酸氫二鈉2.7g與氯化鈉1.7g，加水使溶解成400ml，即得。磷酸鹽緩沖液(含胰酶)(pH6.8)： 取磷酸二氫鉀6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8；另取胰酶10g，加水適量使溶解，將兩液混合后,加水稀釋至1000ml，即得。磷酸鹽緩沖液(pH6.8)： 取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液250ml，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液118ml，用水稀釋至1000ml，搖勻，即得。磷酸鹽緩沖液(pH7.0)： 取磷酸二氫鉀0.68g，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液29.1ml，用水稀釋至100ml，即得。磷酸鹽緩沖液(pH7.2)： 取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液50ml與0.2mol/L氫氧化鈉溶液35ml，加新沸過的冷水稀釋至200ml，搖勻，即得。磷酸鹽緩沖液(pH7.3) ：取磷酸氫二鈉1.9734g與磷酸二氫鉀0.2245g,加水使溶解成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.3，即得。磷酸鹽緩沖液(pH7.4)： 取磷酸二氫鉀1.36g， 加0.1mol/L氫氧化鈉溶液79ml，用水稀釋至200ml，即得。 磷酸鹽緩沖液(pH7.6)： 取磷酸二氫鉀27.22g，加水使溶解成1000ml，取50ml，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液42.4ml，再加水稀釋至200ml，即得。磷酸鹽緩沖液(pH7.8)： 甲液取磷酸氫二鈉35.9g，加水溶解，并稀釋至500ml。乙液取磷酸二氫鈉2.76g，加水溶解，并稀釋至100ml。取上述甲液91.5ml與乙液8.5ml混合，搖勻，即得。磷酸鹽緩沖液(pH7.88.0)： 取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使溶解成1000ml，即得。30丙烯酰胺儲(chǔ)存液：稱Acr30g，Bis0.8g，加水至100ml，過濾后置棕色瓶內(nèi)。1%TEMED：取TEMED1ml，加水至100ml，置棕色瓶內(nèi)4貯存。10%過硫酸銨（AP）：稱AP10g，加水100ml，置棕色瓶內(nèi)4貯存。0.2mol/L pH7.2磷酸鹽緩沖液：稱 Na2HPO412H2O51.58g及NaH2PO42H2O8.74g，溶于水中并定容1L。分離膠緩沖液(15MTris-Cl緩沖液pH8.8)：Tris 18.17g，加水dH20約80ml用1M HCl調(diào)pH至8.8，定容至100ml濃縮膠緩沖液(1MTris-C1緩沖液pH68):Tris12.1g，加水約80ml用1MHCl調(diào)pH至6.8，定容至100ml染料飽和酒精溶液的配制配制染色液常先將染料配成可長期保存的飽和酒精溶液，用時(shí)再予以稀釋配制。配制飽和酒精溶液，應(yīng)先用少量95酒精先在研缽中徐徐研磨，使染料充分溶解，再按其溶解度加于95酒精之中，貯存于棕色瓶中即可。附表1幾種常用染料在95%酒精中的溶解度(26)染料名稱 溶100mL95酒精中的重量(g)美 藍(lán) 1.48 結(jié)晶紫 13.87 龍膽紫 10.00堿性復(fù)紅 3.20沙黃 3.412常用染色液的配制（）堿性美藍(lán)(亦稱駱氏美藍(lán))染色液：取美藍(lán)飽和酒精溶液30ml，加入0.01氫氧化鉀水溶液l00mL，混合即成。此染色液在密閉條件下可保存多年。若將其在瓶中貯至半滿，松塞棉塞，每日拔塞搖振數(shù)分鐘，并不時(shí)加水補(bǔ)充失去的水分，約1年后可獲得多色性，成為多色美藍(lán)染色液。（）草酸銨結(jié)晶紫(亦稱赫克結(jié)晶紫)染色液：取結(jié)晶紫飽和酒精溶液2mL，加蒸餾水18mL稀釋10倍，再加入1草酸銨水溶液80mL，混合過濾即成。（）革蘭氏碘溶液：將碘化鉀2g置乳缽中，加蒸餾水約5mL。再加入碘片1g，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解后，注入瓶中，被加蒸餾水至全量為300mL即成。此液可保存半年以上，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或褪色后即不能再用。（）沙黃水溶液：沙黃也稱番紅花紅。將沙黃飽和酒精溶液以蒸餾水稀釋10倍即成。此液保存期以不超過4個(gè)月為宜。（）石炭酸復(fù)紅染色液：取3%復(fù)紅酒精溶液10mL，加入5石炭酸水溶液90mL混和過濾即成。（）稀釋石炭酸復(fù)紅染色液：將石炭酸復(fù)紅染色液以蒸餾水稀釋10倍即成。（）3鹽酸酒精(亦稱含酸酒精)：加濃鹽酸3mL于95%酒精97mL中即成。（）瑞士染色色液：取瑞氏染料0.1g置乳缽中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解。將溶液傾入有色中性玻瓶中，并數(shù)次以甲醇洗滌乳缽，亦傾入瓶內(nèi)，最后使全量為60mL即可。將此瓶置暗處過夜，次日濾過即成。此染色液須置于暗處，其保存期約為數(shù)月。（）姬姆薩染色液取姬姆薩氏染料0.6g加于甘油50mL中，置5560水浴中1.52h后，加入甲醇50mL，靜置1日以上，濾過即成姬姆薩染色液原液。臨染色前，于每毫升蒸餾水中加人上述原液1滴，即成姬姆薩染色液。應(yīng)當(dāng)注意，所用蒸餾水必須為中性或微堿性，若蒸餾水偏酸，可于每l0mL左右蒸餾水加入1碳酸鉀溶液l滴，使其變成微堿性。特殊染色法1莢膜染色法（）美藍(lán)染色法：帶負(fù)電荷的菌體與帶正電荷的堿性染料結(jié)合成藍(lán)色，而莢膜因不易著色而染成淡紅色。抹片自然干燥，甲醇固定，以久儲(chǔ)的多色性美藍(lán)液作簡單染色，莢膜呈淡紅色，菌體呈藍(lán)色。注：多色性美藍(lán)即堿性美藍(lán)，亦稱駱氏美藍(lán)。（）瑞氏染色法或姬姆薩染色法：抹片自然干燥，甲醇固定，以瑞氏染色液或姬姆薩染色液染色，莢膜呈淡紫色，菌體呈藍(lán)色。（）節(jié)氏(Jasmin)莢膜染色法：取9mL含有0.5石炭酸的生理鹽水，加入lmL無菌血清(各種動(dòng)物的血清均可)混合后成為涂片稀釋液。取此液一接種環(huán)置于載玻片上，又以接種環(huán)取細(xì)菌少許，均勻混懸其中，涂成薄層，任其自然干燥，在火焰上微微加熱固定，然后置甲醇中處理，并立即取出，在火焰上燒去甲醇。以革蘭氏染色液中的草酸銨結(jié)晶紫染色液染色0.5min，干燥后鏡檢。背景淡紫色，菌體深紫色，莢膜無色。2鞭毛染色法（）萊氏(Leifson)鞭毛莢膜染色法鞭毛寬一般約0.010.05微米，在普通光學(xué)顯微鏡下看不見，用特殊染色法在染料中加入明礬與鞣酸作媒染劑，讓染料沉著于鞭毛上，使鞭毛增粗容易觀察，染色時(shí)間愈長，鞭毛愈粗。染色液：鉀明礬或明礬的飽和水溶液20mL、20鞣酸水溶液10mL、蒸餾水l0mL、95酒精15mL、堿性復(fù)紅飽和酒精溶液3mL，依次序?qū)⒏饕夯旌希糜诰o塞玻瓶中，其保存期為1個(gè)星期。染色劑：含染料90的美藍(lán)0.1g、硼砂(Borax) 1.0g、蒸餾水100mL染色法：滴染色液于自然干燥的抹片上，在溫暖處染色l0min，若不作莢膜染色，即可水洗，自然干燥后鏡檢。鞭毛呈紅色；若作莢膜染色，可再滴加復(fù)染劑于抹片上，再染色5l0min，水洗，任其干燥后鏡檢。莢膜呈紅色，菌體呈藍(lán)色。（）劉榮標(biāo)氏鞭毛染色法染色液：溶液一：5石炭酸溶液l0mL、鞣酸粉末2g、飽和鉀明礬水溶液l0mL溶液二：飽和結(jié)晶紫或龍膽紫酒精溶液。用時(shí)取溶液一10份和溶液二l份，此混合液能在冰箱中保存7個(gè)月以上。染色法：取幼齡培養(yǎng)物制成抹片，干燥及固定后以溶液一和溶液二的混合液在室溫中染色23min，水洗，干燥后鏡檢。菌體和鞭毛均呈紫色。（）卡-吉二氏(Casares-Cill)鞭毛染色法媒染劑：鞣酸10g、氯化鉛(AICl36H20) 18g、氯化鋅(ZnCl2) l0g、鹽酸玫瑰色素(Rosanilline hydrochloride)或堿性復(fù)紅1.5g、60酒精 40mL。先盛60酒精10mL于乳缽中，再以上列次序?qū)⒏魑镏萌槔徶醒心ヒ约铀倨淙芙?，然后徐徐加入剩余的酒精。此溶液可在室溫中保存?shù)年。此法染假單胞菌更好。染色法：制片自然干燥后，將上述媒染劑作1：4稀釋，濾紙過濾后滴于片上染2min。水洗后加石炭酸復(fù)紅染5min，水洗，自然干燥，鏡檢。菌體與鞭毛均呈紅色。3芽孢染色法（）復(fù)紅美藍(lán)染色法：細(xì)菌的芽孢外面有較厚的芽孢膜，能防止一般染料的滲入，如