朊病毒分子生物學(xué)發(fā)展及其本質(zhì)特征.ppt

朊病毒分子生物學(xué)發(fā)展及其本質(zhì)特征 05級(jí)生物技術(shù)專業(yè)一班車宏軒 一 朊病毒 virino 的發(fā)現(xiàn)人和哺乳動(dòng)物的亞急性海綿樣腦病的致病本質(zhì) 一直是神經(jīng)生物學(xué)和分子病毒學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn) 研究發(fā)現(xiàn)瘋牛病 BSE 羊癢病 SC 及人的紋狀體脊髓變性病 CJD 腦軟化病 GSS 庫(kù)魯病 kuru 致死性家族失眠癥 FFI 等均屬于這種蛋白粒子病類 可導(dǎo)致神經(jīng)元進(jìn)行性退化變性 膠質(zhì)細(xì)胞增生及細(xì)胞內(nèi)朊病毒的自身累積等 英國(guó)自1985年發(fā)現(xiàn)瘋牛病到1996年 已確診有16142頭牛患病 數(shù)以萬(wàn)計(jì)的牛被撲殺 焚燒 處理 使英國(guó)蒙受巨大的經(jīng)濟(jì)損失 同時(shí)歐洲其它國(guó)家如丹麥 法國(guó) 愛(ài)爾蘭共和國(guó)等也有瘋牛病發(fā)生 特別是英國(guó)連續(xù)出現(xiàn)12個(gè)青年患新型克雅氏病 newvariantcreutzfeldt JakobDiseasenvCJD 人們懷疑該病是食用患瘋牛病的牛肉引起的 在歐洲引起了極大的恐慌 瘋牛病已成為歐洲嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和政治問(wèn)題 患瘋牛病的牛腦切片 瘋牛病肆虐 病羊神經(jīng)組織的海綿狀損傷 病人大腦組織切片 左 海綿狀病變及周圍的沉淀斑 右 淀粉樣蛋白沉淀 病人大腦組織切片 左 海綿狀病變及周圍的沉淀斑 右 淀粉樣蛋白沉淀 人和動(dòng)物朊病毒病的共同特點(diǎn) 1 潛伏期長(zhǎng) 2 病理學(xué)特點(diǎn) 1 神經(jīng)原 神經(jīng)軸索 星狀細(xì)胞 樹(shù)枝細(xì)胞呈進(jìn)行性空泡化 2 神經(jīng)膠質(zhì)增生 3 細(xì)胞外淀粉樣變性蛋白沉積 形成光鏡下可見(jiàn)的病理學(xué)特征 羊搔癢病相關(guān)纖絲 CJD表現(xiàn)為淀粉樣蛋白斑 人的朊病毒病 1 傳染型朊病毒病 如庫(kù)魯病 該病主要局限在巴布亞新幾內(nèi)亞的Fore族人群中發(fā)生 2 遺傳型朊病毒病 家族性CJD FFI和GSS 屬于生殖細(xì)胞突變形成的 3 散發(fā)型朊病毒病 包括大多數(shù)CJD和部分GSS 可能與體細(xì)胞突變或朊病毒蛋白 prionprotein PrP 的自發(fā)性構(gòu)型改變有關(guān) 而牛朊病毒傳染人造成的CJD也屬于這一類 確定致病因子的過(guò)程 為了探究這種致病原的性質(zhì) 研究人員檢測(cè)了羊搔癢病病腦勻漿對(duì)動(dòng)物的致病能力 發(fā)現(xiàn)感染因子可以通過(guò)濾器 有點(diǎn)象病毒 但與病毒不同 用福爾馬林處理不能使之完全失活 1966年 英國(guó)放射生物學(xué)家Alper發(fā)現(xiàn) 這種物質(zhì)對(duì)254nm的紫外線照射不敏感 而對(duì)237nm的紫外線敏感 1972年 由于Prusiner的一位病人死于克雅氏病 促使他開(kāi)始研究這類疾病 經(jīng)過(guò)10年努力 Prusiner與其同事終于在1982年從倉(cāng)鼠腦中濃縮了羊搔癢病病原成分 是一種直徑25nm長(zhǎng)約100 200nm其濃縮成分的活性可被蛋白酶K 二乙酰焦碳酸 尿素 酚和SDS等失活的蛋白質(zhì) 但不能被核酸酶E或紫外線照射破壞 所以Prusiner稱之為Prion 意為蛋白性感染顆粒 Proteinaceousinfectiousparticle 這個(gè)成份中只含一種蛋白質(zhì) 稱為朊病毒蛋白 prionprotein PrP 并命名為朊病毒 Virino 二 朊病毒致病機(jī)理簡(jiǎn)介 朊病毒蛋白及其構(gòu)型轉(zhuǎn)變 PrPc PrPsc PrPsc在N端切割可以產(chǎn)生PrP27 30 這種分子是一種蛋白酶抗性蛋白 能夠聚集成為棒狀淀粉樣蛋白 二級(jí)結(jié)構(gòu)出現(xiàn) 轉(zhuǎn)換 PrPc 螺旋含量達(dá)到42 片層僅占3 PrPsc 螺旋含量降到30 片層達(dá)到45 PrP27 30 螺旋含量則僅為21 而 片層達(dá)到54 片層含量的增加可能是聚合成淀粉樣原纖維的最直接原因 PrP基因與朊病毒蛋白的合成 PrP基因及其編碼產(chǎn)物 朊病毒蛋白形成過(guò)程 朊病毒的復(fù)制 朊病毒的復(fù)制模式 A 傳染型和散發(fā)型的朊病毒復(fù)制模式 B 遺傳型的朊病毒復(fù)制模式 PrPSc的增殖 Prion的結(jié)構(gòu)模型 左PrPc 右PrPSc 朊病毒的核磁共振圖譜 分子生物學(xué)的中心法則 DNA RNA Protein 三 瘋牛病研究與分子生物學(xué)的發(fā)展 朊病毒的來(lái)源 關(guān)于朊病毒來(lái)源問(wèn)題許多學(xué)者提出不同的說(shuō)法朊病毒一直存在于世界 只不過(guò)是人類才發(fā)現(xiàn)它而已朊病毒是因?yàn)樵?29位編碼纈氨酸或甲硫氨酸位置發(fā)生突變朊病毒來(lái)源于宇宙 是因?yàn)榕Ｕ`食了沾有朊病毒的草而使其傳播 圖中H1 H4附近有13個(gè)突變 對(duì)于朊病毒的個(gè)人理解 朊病毒是一種化學(xué)性質(zhì)特異的酶 朊病毒與酶化學(xué)性質(zhì)對(duì)比 朊病毒酶化學(xué)本質(zhì)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)分子量27000 30000分子量13700 1000000朊病毒可被尿素 苯酚等使酶失活的試劑失活朊病毒不易被蛋白酶催化分解 朊病毒作用對(duì)象與酶存在范圍對(duì)比 目前發(fā)現(xiàn)的朊病毒疾病發(fā)現(xiàn)瘋牛病 BSE 羊癢病 SC 及人的紋狀體脊髓變性病 CJD 腦軟化病 GSS 庫(kù)魯病 kuru 致死性家族失眠癥 FFI 最近在貓的體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)朊病毒導(dǎo)致的疾病我們不難發(fā)現(xiàn)朊病毒的宿主全部是哺乳類動(dòng)物 而且是體溫恒定在37攝氏度左右的哺乳類動(dòng)物 這使我們不由聯(lián)想到許多酶的最適溫度與其十分相似 對(duì)于朊病毒致病機(jī)理的重新認(rèn)識(shí) 對(duì)于朊病毒致病機(jī)理的總結(jié) 朊病毒致病機(jī)理就是結(jié)構(gòu)異化的酶作用機(jī)理相同 只不過(guò)它是將腦結(jié)構(gòu)蛋白異化成與自身結(jié)構(gòu)相同的蛋白質(zhì) 從而實(shí)現(xiàn)自身復(fù)制以及將宿主致病的目的 朊病毒的特殊化學(xué)性質(zhì) 與朊病毒所不同的是 酶在高溫情況下會(huì)發(fā)生失活的現(xiàn)象 此過(guò)程是不可逆的 而朊病毒在高溫的情況下只會(huì)出現(xiàn)活性下降的現(xiàn)象