檢驗科微生物實驗室作業(yè)指導(dǎo)書和相關(guān)制度.doc

檢驗科微生物實驗室SOP文件細(xì)菌室工作守則1.每日工作前用紫外線照射實驗室半小時以上。2.入室前應(yīng)穿工作服，并做好實驗前的各項準(zhǔn)備工作。3.實驗室內(nèi)應(yīng)保持肅靜，不準(zhǔn)吸煙、吃東西及用手觸摸面部。盡量減少室內(nèi)活動，以免引起風(fēng)動，無關(guān)人員禁入。4.非必要物品禁止帶入實驗室，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠(yuǎn)離操作臺。5.做好標(biāo)本的登記、編號及試驗記錄。未發(fā)出報告前，請勿丟棄標(biāo)本。6.標(biāo)本處理及各項試驗應(yīng)在操作間進(jìn)行，接種環(huán)用完后應(yīng)立即火焰滅菌，沾菌吸管、玻片等用后應(yīng)浸泡在消毒液內(nèi)。7.實驗時手部污染，應(yīng)立即用過氧乙酸消毒或浸于3%來蘇兒溶液中5-10分，再用肥皂洗手并沖洗干凈；如誤入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并用1:1000高錳酸鉀溶液或3%雙氧水漱口，根據(jù)實際情況服用有關(guān)藥物。8.實驗過程中，如污染了實驗臺或地面，應(yīng)用3%來蘇兒覆蓋其上半小時，然后清洗；如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。9.若出現(xiàn)著火情況，應(yīng)沉著處理，切勿慌張，立即關(guān)閉電閘，積極滅火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必須遠(yuǎn)離火源，妥善保存。10.工作結(jié)束時檢查電器、酒精燈等是否關(guān)閉，觀察記錄培養(yǎng)箱、冰箱溫度及工作情況，用浸有消毒液的抹布將操作臺擦拭干凈，并將試劑、用具等放回原處，清理臺面，未污染的廢棄物扔進(jìn)污物桶，有菌廢棄物應(yīng)送高壓滅菌后處理。11.離室前工作人員應(yīng)將雙手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗凈。12.愛護(hù)儀器設(shè)備，經(jīng)常清潔，注意防塵和防潮。細(xì)菌室消毒隔離措施1.每天工作前用消毒液消毒工作臺，上班前、下班后開紫外燈（最少半小時）進(jìn)行空氣消毒。2.非必要品禁止帶入實驗室，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠(yuǎn)離操作臺。3.使用后的載玻片、蓋片、平皿、試管等用消毒液浸泡，經(jīng)煮沸后清洗或丟棄。4.試驗后的血液標(biāo)本用消毒液浸泡后煮沸消毒，所有用于試驗的反應(yīng)板、吸頭等用消毒液浸泡（至少24小時以上）后清洗或丟棄。5.所有微生物培養(yǎng)物（細(xì)菌、支原體、真菌等培養(yǎng)物），不管標(biāo)本陽性或陰性均用消毒液浸泡后，經(jīng)煮沸消毒，才能清洗或丟棄。6.取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均應(yīng)徹底消毒。7.用于浸泡各種器械如刮菌刀、持物鉗、鑷子等的消毒液要定期更換。8.不慎發(fā)生臨床標(biāo)本或培養(yǎng)物污染工作臺，不要立即用水沖洗，應(yīng)先用紙巾、布等敷料加上消毒液（如5%石炭酸、3%來蘇兒等）消毒30分鐘以上，然后再清洗。如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。9.實驗時手部污染，應(yīng)立即用肥皂洗手并沖洗干凈，再外用消毒藥水，如誤入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并用1:1000高錳酸鉀溶液或3%雙氧水漱口，必要時根據(jù)實際情況服用有關(guān)藥物。檢驗科微生物實驗室安全與防護(hù)在工作區(qū)內(nèi)禁止飲食，吸煙和存放食物及使用化妝品。實驗室里應(yīng)保持整潔，不存放與工作無關(guān)的雜物。工作臺每天至少用消毒劑清潔一次，在溢滲傳染物后要立即消毒、清洗；進(jìn)入無菌室必須穿工作服，戴口罩、帽子。在各種操作進(jìn)程中均應(yīng)盡量避免或減少氣溶膠產(chǎn)生。實驗工作區(qū)禁止無關(guān)人員出入，尤其要嚴(yán)禁兒童進(jìn)入。工作人員在處理傳染性物質(zhì)或動物之后，以及在離開實驗室時要洗手。凡發(fā)生溢漏事故或接觸傳染性物質(zhì)后，均應(yīng)立即報告實驗室監(jiān)督員或?qū)嶒炇抑魅?，并做好書面記錄及采取相?yīng)措施。結(jié)核桿菌的培養(yǎng)及標(biāo)本涂片務(wù)必在生物安全柜里操作。9.有涉及感染性材料的操作應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，如結(jié)核桿菌培養(yǎng)、感染性組織等。10.工作人員在進(jìn)入實驗室工作區(qū)前，應(yīng)在專用的更衣室（或緩沖間）穿著背開式工作服或其它防護(hù)服。工作完畢后必須脫下工作服，不得穿工作服離開實驗室。可再次使用的工作服必須先消毒后清洗。11.工作時必須戴手套（兩副為宜）。一次性手套必須先消毒后丟棄。12.在實驗室中必須配備有效的消毒劑、眼部清洗劑或生理鹽水，且易于取用。可配備應(yīng)急藥品。細(xì)菌室內(nèi)質(zhì)控制度每位工作人員必須加強質(zhì)控意識，以質(zhì)量控制工作為核心，認(rèn)真做好各項質(zhì)控試驗和記錄。加強質(zhì)量控制和專業(yè)理論知識的學(xué)習(xí)，規(guī)范操作，正確分析處理結(jié)果。一旦發(fā)現(xiàn)失控，及時采取相應(yīng)措施，糾正失控結(jié)果。每批自配或購置的培養(yǎng)基、生化鑒定等試劑必須用標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853、ATCC25923、ATCC25922質(zhì)控。合格方可使用，并作好記錄。每周進(jìn)行藥敏試驗質(zhì)量控制。對每批微量藥敏板、培養(yǎng)基、藥敏紙片必須用ATCC27853、ATCC25923、ATCC25922菌株進(jìn)行質(zhì)控，并做好記錄，出現(xiàn)問題及時分析，采用相應(yīng)措施。每天觀察培養(yǎng)箱、CO2培養(yǎng)箱、冰箱的溫度，并做好記錄。無菌間每周監(jiān)測一次，三氧機、紫外線消毒滅菌情況，并做好記錄。每三個月用ATCC27853、ATCC25923、ATCC25922菌株對全自動微生物分析儀進(jìn)行鑒定和藥敏質(zhì)量控制。認(rèn)真討論、分析每次參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評結(jié)果?？偨Y(jié)經(jīng)驗教訓(xùn)。臨床微生物及實驗室的醫(yī)院感染管理檢驗科醫(yī)院感染管理應(yīng)達(dá)到以下要求:工作人員必須穿工作服,戴工作帽,必要時穿隔離衣，膠鞋，戴口罩,手套。使用合格的一次性檢驗用品,用后進(jìn)行無害化處理。嚴(yán)格執(zhí)行無菌技術(shù)操作規(guī)程,靜脈采血必須一人一針一管一巾一帶;微量采血應(yīng)做到一人一針一管一片;對每位病人操作前洗手或手消毒。無菌物品如棉簽,棉球,紗布等及其容器應(yīng)在有效期內(nèi)使用,開啟后使用時間不得超過24小時.使用后的廢棄物品,應(yīng)及時進(jìn)行無害化處理,不得隨意丟棄。各種器具應(yīng)及時消毒,清洗;各種廢棄標(biāo)本應(yīng)分類處理(焚燒,入污水池,消毒或滅菌)。報告單應(yīng)消毒后發(fā)放。檢驗人員結(jié)束操作后應(yīng)及時洗手,毛巾專用,每天消毒。保持室內(nèi)清潔衛(wèi)生.每天對空氣,各種物表及地面進(jìn)行常規(guī)消毒.在進(jìn)行各種檢驗時,應(yīng)避免污染;在進(jìn)行特殊傳染病檢驗后,應(yīng)及時進(jìn)行消毒,遇有場地,工作服或體表污染時應(yīng)及時處理,防止擴散,并視污染情況向上級報告。菌種、毒種按傳染病防治法進(jìn)行管理。實驗室的醫(yī)院感染管理參照檢驗科的管理要求.實驗動物應(yīng)嚴(yán)格管理,防止逃逸或造成人與實驗室動物的交叉感染;實驗后的動物必須焚化進(jìn)行無害化處理。細(xì)菌鑒定和藥敏試驗操作按全國臨床檢驗操作規(guī)程。負(fù)責(zé)鑒定及簽發(fā)報告的主管技術(shù)人員應(yīng)通曉診斷細(xì)菌學(xué)的全面知識。從事細(xì)菌專業(yè)技術(shù)人員，應(yīng)了解醫(yī)院監(jiān)測知識，掌握其檢測方法，定期統(tǒng)計分析醫(yī)院感染細(xì)菌分布，耐藥變遷，并將其結(jié)果反饋臨床。細(xì)菌室工作人員均應(yīng)具備細(xì)菌傳染、消毒、滅菌知識。細(xì)菌專業(yè)人員不斷更新知識，了解細(xì)菌學(xué)檢驗新進(jìn)展。定期或隨時與臨床聯(lián)系，主動參與病例討論了解病情及治療情況，達(dá)到細(xì)菌檢驗與臨床的密切聯(lián)系。每天發(fā)出的微生物報告應(yīng)認(rèn)真復(fù)審，分析報告、評價報告。工作人員加強有菌觀念，無菌操作。當(dāng)工作環(huán)境被細(xì)菌污染，必須立即消毒處理，報告主管人員，采取必要措施。10工作人員被細(xì)菌培養(yǎng)物污染應(yīng)消毒處理，必要時給予藥物治療，并向主管負(fù)責(zé)人報告，采取特殊措施。無菌間規(guī)章制度每一個工作人員必須樹立無菌觀念，嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。在無菌室內(nèi)必須戴帽子、口罩，進(jìn)行無菌操作。每天早上8：008：30用紫外線消毒或在凌晨4-6點用多功能機消毒2小時，每月檢查一次紫外燈的無菌效果。無菌室內(nèi)各種廢棄物品必須煮沸消毒。實驗完畢后，用含氯制劑1000mg/L消毒桌面、地面。菌（毒種）管理辦法1. 菌種保管應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，保存于冰箱中，房門專人加鎖，確保菌種安全。保管人員變動時，必須嚴(yán)格交接手續(xù)。2、菌種應(yīng)有嚴(yán)格的登記，包括形態(tài)，分離日期，鑒定日期，簽發(fā)者，主要鑒定性能（包括形態(tài)、染色、抗原結(jié)構(gòu)、動物致病力等），并注明使用、轉(zhuǎn)移、銷毀情況及原因。3、各種菌種應(yīng)按規(guī)定時間接種，一般在接種三次后作一次全面的鑒定，注意菌種有無污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時，應(yīng)及時更換。4、菌種保存范圍及向外單位轉(zhuǎn)移，應(yīng)按國家衛(wèi)生部規(guī)定執(zhí)行。5、所有存在菌種應(yīng)具備清單。細(xì)菌室儀器維護(hù)保養(yǎng)及質(zhì)控措施我室主要儀器為BacT/Alert120、BACTEC9050血培養(yǎng)儀和Vitek-32、BD鳳凰全自動細(xì)菌鑒定和藥敏分析儀，為了使儀器能夠高質(zhì)量的運行，使儀器報告的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，特制定以下儀器維護(hù)、保養(yǎng)和質(zhì)控措施。一、BacT/Alert120、BACTEC9050血培養(yǎng)儀的維護(hù)、保養(yǎng)和質(zhì)控措施1.每天上班開始工作前和下班離開前要檢查儀器的工作狀態(tài)是否正常，儀器培養(yǎng)箱溫度的報告里外是否一致。2.每天用中性的清潔液將儀器表面擦拭干凈3.每天先做質(zhì)控。4.一個月至少做一次全程定標(biāo)。5.儀器檢測數(shù)據(jù)每周星期六做備份。6.儀器每一個月做一次徹底的清潔保養(yǎng)，包括清潔外殼、瓶孔、濾網(wǎng)等7.儀器每年請工程師做一次檢定工作。二、Vitek-32、BD鳳凰全自動細(xì)菌鑒定和藥敏分析儀的維護(hù)、保養(yǎng)和質(zhì)控措施1.每天上班開始工作前和下班離開前要檢查儀器的工作狀態(tài)是否正常。2.每天用中性的清潔液將儀器表面擦拭干凈3.購買的新批號的試劑都必須先做質(zhì)控，質(zhì)控合格后才能用于臨床檢測。4.儀器檢測數(shù)據(jù)每周星期六做備份。5.儀器每一個月做一次徹底的清潔保養(yǎng)，包括清潔外殼、卡片架、濾網(wǎng)等6.儀器每年請工程師做一次檢定工作。標(biāo)準(zhǔn)菌株保存及使用概述：標(biāo)準(zhǔn)菌株是細(xì)菌室室內(nèi)質(zhì)控工作必不可少的、重要的生物資源，我室的標(biāo)準(zhǔn)菌株主要來自省臨檢中心的發(fā)放和從衛(wèi)生部臨檢中心以及國家菌種保存中心購買所得，為了讓標(biāo)準(zhǔn)菌株能夠得到合理的應(yīng)用，特制定以下規(guī)定。1.對每批購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株要做好登記，包括菌種的菌名、編號、購買時間、保存地點、記錄人等2.每次使用標(biāo)準(zhǔn)品都應(yīng)作好使用記錄，包括標(biāo)準(zhǔn)品的名稱、編號、使用時間等。3.購買的標(biāo)準(zhǔn)品初次使用時，應(yīng)大量增殖，然后分裝在含10-15%甘油的胰蛋白胨肉湯中，-20以下保存。4.新的標(biāo)準(zhǔn)菌株復(fù)蘇最多不得超過三次，如超過三次將不在視為標(biāo)準(zhǔn)菌株使用。5.標(biāo)準(zhǔn)菌株保存管一經(jīng)溶化使用后，不得再次凍存。細(xì)菌室內(nèi)務(wù)管理規(guī)定1.細(xì)菌室崗位分工與職責(zé)管理規(guī)定1.1概述鑒于細(xì)菌室工作瑣碎煩雜且千頭萬緒，為了使細(xì)菌室的工作能夠保質(zhì)保量地順利完成，特將細(xì)菌室暫定為兩個崗位，以明確工作范圍、增強責(zé)任心、便于日常工作的完成。當(dāng)然由于細(xì)菌室不同崗位工作量的隨機性較大，故我室要求大家發(fā)揚既分工，又協(xié)作的精神，共同完成細(xì)菌室工作。1.2崗位職責(zé)各崗位工作人員要求嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行操作，高質(zhì)量的完成本崗位工作，如遇到問題須提出經(jīng)討論解決。1.3崗位分工崗位：完成細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本（號菌培養(yǎng)除外）的結(jié)果觀察處理及報告發(fā)放。崗位：完成儀器的維護(hù)、保養(yǎng)和質(zhì)控工作等。2.細(xì)菌室記錄內(nèi)容明細(xì)2.1環(huán)境條件室內(nèi)溫度、濕度，每天一次，上午記錄。2.2恒溫設(shè)備2.3孵箱、普通冰箱，每天一次，上午記錄。2.3分析儀器常規(guī)每日保養(yǎng)一次，發(fā)現(xiàn)問題隨時詳細(xì)記錄；質(zhì)控按要求測試完畢后，及時手工記錄，2.4標(biāo)本與結(jié)果不合格標(biāo)本記錄、危急值報告記錄、結(jié)果記錄。2.5崗位記錄（附表：細(xì)菌室崗位記錄表）2.6其它記錄，如交班記錄等。3.細(xì)菌室室內(nèi)環(huán)境條件控制范圍溫度1828，濕度2080。檢驗科作業(yè)指導(dǎo)書細(xì)菌室內(nèi)務(wù)管理規(guī)定文件編號：LABSOPJX011第2頁，共2頁版本：1生效日期：2005-11-01標(biāo)本采集及保存要求1總則：用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本在收集時應(yīng)注意嚴(yán)格無菌操作和及時送檢，檢測后標(biāo)本應(yīng)妥善保存。2.臨床標(biāo)本的采集2.1下呼吸道分泌物（痰液）令患者早上起床后用清水瀨口，不要刷牙，立即從下部呼吸道咳出第一口痰，吐在無菌塑料痰盒中，及時送檢。2.2尿液（中段尿）護(hù)理人員協(xié)助采取中段尿約3ml入無菌試管中，及時送檢。2.3糞便：取有粘液、膿血部分的糞便置玻璃大便專用管中，如為稀水便，可直接收集于玻璃管中，及時送檢。2.4眼、耳、鼻、喉拭子：將棉拭子沾取少許無菌生理鹽水（如沾取的太多，可在無菌生理鹽水瓶壁上擠去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒懸于無菌試管內(nèi),及時送檢。2.5膿液：用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取一些，然后將棉拭置于無菌試管中，及時送檢。2.6血液：2.6.1凡懷疑菌血癥和敗血病的患者，采血培養(yǎng)時，應(yīng)盡量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，應(yīng)盡量選擇抗菌素在體內(nèi)濃度最低時采血，應(yīng)在病人第二次使用抗菌素之前采集血培養(yǎng)標(biāo)本。當(dāng)然在病人發(fā)熱或寒顫時采集也可。2.6.2成人每次采血510ml，小兒采血23ml；2.6.3嚴(yán)格消毒病人采血部位和血培養(yǎng)瓶口，抽一定量血液后，無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，輕輕搖勻，2.6.4從抽血到接種入瓶，動作要快，防止血液凝固，同時要及時送檢。2.7穿刺液：胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔液、鞘膜積液：嚴(yán)格無菌抽取后，注入含肝素抗凝的無菌試管中，輕輕顛倒試管10余次，使肝素與穿刺液混勻達(dá)到抗凝的目的，或直接無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)及時送檢。2.8膽汁：由?？漆t(yī)生以無菌方法取引流液10ml注入無菌試管。2.9腦脊液：以無菌方法取腦脊液3-5ml，置無菌試管內(nèi)，常溫保存送檢，如只做培養(yǎng)可直接無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，及時送檢。2.10生殖器官標(biāo)本：陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌試管內(nèi)送檢。如疑為淋病奈瑟菌感染，做培養(yǎng)檢查時，采集的標(biāo)本應(yīng)床旁接種并及時放入孵箱培養(yǎng)。2.11燒傷標(biāo)本：以無菌棉拭子直接采取多個部位創(chuàng)面的膿汁分泌物放入無菌試管中.2.12支原體（解脲、人型）培養(yǎng)+藥敏的標(biāo)本采集2.12.1.支原體對干、熱抵抗力差，標(biāo)本采集后應(yīng)盡快接種支原體運送培養(yǎng)基送檢。2.12.2男性：用細(xì)的無菌棉拭子沾取無菌鹽水少許深入尿道口內(nèi)2.5-3cm。3.臨床標(biāo)本的保存細(xì)菌室標(biāo)本原則上要求及時送檢、及時處理，不得保存。細(xì)菌室室內(nèi)質(zhì)控失控處理程序一、BacT/Alert120血培養(yǎng)儀室內(nèi)質(zhì)控處理程序1當(dāng)BacT/Alert120血培養(yǎng)儀質(zhì)控失敗時，2儀器會提示你對該瓶孔進(jìn)行定標(biāo)，3通常定標(biāo)4都能通過，5只要定標(biāo)6過了，7儀器就能正常工作。8如儀器定標(biāo)9不10能通過，11就要請廠家工程師對儀器進(jìn)行檢測，12并對儀器的有關(guān)參數(shù)進(jìn)行調(diào)整，13直到儀器合格后才能進(jìn)行日常工作并填寫失控報告Vitek-32細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀室內(nèi)質(zhì)控處理程序14每批新購買的試劑必須進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，15當(dāng)質(zhì)控結(jié)果不16能符合要求時，17應(yīng)通知組長協(xié)助處理，18進(jìn)行失控原因分析。19失控原因分析與處理2.1失控的原因分析2.1.1自身原因2.1.1.1質(zhì)控菌株、卡片、無菌鹽水等出現(xiàn)質(zhì)量問題。2.1.1.2質(zhì)控菌株不符合所檢測卡片的要求。2.1.1.3上卡操作中出現(xiàn)問題，如菌液濃度不準(zhǔn)等2.1.1.4儀器工作是否正常。2.1.1.5室溫是否符合分析要求。2.2失控的處理2.2.1操作不規(guī)范時應(yīng)嚴(yán)格按作業(yè)指導(dǎo)書重新檢測一次。仍失控進(jìn)行下一步。2.2.2檢查質(zhì)控菌株及卡片是否在有效期內(nèi)，質(zhì)量如何？無菌鹽水是否被污染以及標(biāo)準(zhǔn)菌株是否符合卡片的要求等。在保證質(zhì)控菌株、卡片、無菌鹽水等符合要求的情況下仍失控則進(jìn)行下一步。2.2.3做可能影響檢測的儀器相應(yīng)部分保養(yǎng)，仍失控進(jìn)行下一步。2.2.4請儀器工程師分析。寫失控報告。直到質(zhì)控在控后重新檢測。標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)1.支原體培養(yǎng)、鑒定、計數(shù)、藥敏操作：若送檢標(biāo)本不是運送培養(yǎng)基送檢則為不合格標(biāo)本。2.找抗酸桿菌：穿刺液標(biāo)本如發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重凝固則拒收。3.腦脊液培養(yǎng)：如標(biāo)本為非無菌管采集則拒收。4.中段尿培養(yǎng)：如標(biāo)本為非無菌管采集則拒收。5.下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)：挑取痰標(biāo)本直接涂片鏡檢，WBC10/LP，上皮細(xì)胞25/LP不適合做細(xì)菌培養(yǎng)。6.膿液及創(chuàng)傷分泌物培養(yǎng)：如標(biāo)本為非無菌管采集則拒收。7.穿刺液培養(yǎng)：如標(biāo)本為非無菌管采集則拒收。8.生殖道分泌物培養(yǎng)：如為淋球菌培養(yǎng)沒有直接接種到淋球菌培養(yǎng)基上則拒收。9.各類培養(yǎng)標(biāo)本原則上都要求無菌采集并及時送檢、及時接種、及時培養(yǎng)，不能保存。除非特殊情況可置于冰箱保存，對分離怕冷的細(xì)菌時，應(yīng)注意標(biāo)本的保暖。 溫度失控處理措施1.每天上班記錄培養(yǎng)箱、冰箱的溫度于溫度記錄本上，如發(fā)現(xiàn)普通培養(yǎng)箱的溫度超過37（不包括37）或低于34（不包括34）；真菌培養(yǎng)箱溫度超過31（不包括31）或低于25（不包括25）；冷藏冰箱的溫度超過8（不包括8）或低于2（不包括2）；冷凍冰箱的溫度超過-10（不包括-10）或低于-30（不包括-30），應(yīng)立即追溯其失控的時間和原因。1.1如失控的原因可以馬上糾正（如冰箱斷電、冰箱門未關(guān)好、溫控調(diào)節(jié)器未正確控制、冰箱嚴(yán)重結(jié)霜、溫度計損壞等），則由本室人員馬上糾正并填寫失控報告。1.2如冰箱、培養(yǎng)箱本身出現(xiàn)機械故障，本室人員應(yīng)馬上通知維修部或維修商，同時根據(jù)排除故障時間的長短是否會對其中的物品質(zhì)量造成影響而采取相應(yīng)的措施（如把里面的物品轉(zhuǎn)移到能滿足需要條件的環(huán)境中），并填寫失控報告單。2.培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)物應(yīng)全部拿到工作臺，檢查培養(yǎng)物的生長情況。2.1.如果培養(yǎng)基的菌落生長良好，則按常規(guī)程序進(jìn)行檢驗。2.2如果培養(yǎng)基的菌落生長受抑制，則取標(biāo)本重新接種，如標(biāo)本確實無法再次接種，則應(yīng)與臨床醫(yī)生聯(lián)系、解釋并請醫(yī)生重新采集標(biāo)本送檢。2.3如有細(xì)菌生長，則應(yīng)補做藥敏試驗，并填寫遲發(fā)報告單記錄表，并寫明原因。3.故障處理過程中應(yīng)及時貼上紅色標(biāo)識，并在溫度記錄本上用紅筆記錄失控的溫度度數(shù)，故障處理后應(yīng)利用培養(yǎng)箱、冰箱的溫度調(diào)節(jié)器，把溫度調(diào)回到規(guī)定范圍的中值，并把專業(yè)人員的檢查的結(jié)果記錄在儀器檔案袋中。另外還需填寫內(nèi)部質(zhì)量控制失控報告單，當(dāng)溫度再次是失控時，再次記錄溫度的讀數(shù)，并且上報負(fù)責(zé)人。超凈工作臺1.目的規(guī)范凈化工作臺操作與維護(hù)工作，確保儀器正常運作。2.適用范圍：本實驗方法適用于微生物檢驗中凈化工作臺操作與維護(hù)管理。3.檢驗人員職責(zé)：負(fù)責(zé)此儀器操作和維護(hù)管理4.操作及維護(hù)規(guī)程4.1操作規(guī)程4.1.1使用工作臺時，應(yīng)提前50分鐘開機，同時開啟紫外殺菌燈，處理操作區(qū)內(nèi)表面積累的微生物，30分鐘后關(guān)閉殺菌燈（此時日光燈即開啟），啟動風(fēng)機。4.1.2對新安裝的或長期未使用的工作臺，使用前必需對工作臺和周圍環(huán)鏡先用超靜真空吸塵器或用不產(chǎn)生纖維的工具進(jìn)行清潔工作，再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌法進(jìn)行滅菌處理。4.1.3操作區(qū)內(nèi)不允許存放不必要的物品，保持工作區(qū)的潔凈氣流流型不受干擾。4.1.4操作區(qū)內(nèi)盡量避免作用明顯擾亂氣流流型的動作。4.1.5操作區(qū)的使用溫度不可以超過60。4.2維護(hù)規(guī)程及維護(hù)方法4.2.1根據(jù)環(huán)境的潔凈程度，可定期（一般23個月）將粗濾布（滌綸無紡布）拆下清洗或給予更換。4.2.2定期（一般為一周）對環(huán)境周圍進(jìn)行滅菌工作，同時經(jīng)常用紗布沾酒精或丙酮等有機溶劑將紫外線殺菌燈表面擦干凈，保持表面清潔，否則會影響殺菌效果。4.2.3當(dāng)加大風(fēng)機電壓已不能使風(fēng)速達(dá)到0.32m/s時必須更換高效空氣過濾器。4.2.4更換過濾器時，可打開頂蓋，更換時應(yīng)注意過濾器上的箭頭標(biāo)志，箭頭指向即為層流氣流向。4.2.5更換高效過濾器后，應(yīng)用Y09-4型塵埃粒子計數(shù)器四周邊框密封是否良好，調(diào)節(jié)風(fēng)機電壓，使操作區(qū)平均風(fēng)速保持在0.32-0.48m/s范圍內(nèi)，再用Y09-4型塵埃粒子計數(shù)器檢查潔凈度。標(biāo)本的接種和移種法接種標(biāo)本是細(xì)菌實驗室的一項基本操作技能，目的是使細(xì)菌能得到充分的生長和能分離出單個菌落獲得純培養(yǎng)而供分析鑒定之用，所以作此項技術(shù)的操作應(yīng)按以下方式進(jìn)行：1.左手的操作要點：左手負(fù)責(zé)持平板、試管、燒瓶等物品，操作中，左手應(yīng)盡量減少擺動，否則，不利于保持物品的無菌狀態(tài)。1.1左手持物品時，最好固定在一個空間方位上，以避免因移動使空氣中的細(xì)菌進(jìn)入器皿，造成隨機性污染。1.2所持的器皿其開口盡量避免向上，持平皿時，可以讓平板的表面與地面盡量垂直，試管與器皿燒瓶也可傾斜。當(dāng)從標(biāo)本器皿或平板上挑取接種物或菌落后應(yīng)立即塞上試管塞或扣上平皿，隨即接種標(biāo)本。2.右手的操作要點：握有接種工具的右手，將接種環(huán)或針沿伸到標(biāo)本之前應(yīng)作好接種環(huán)或針，鑷子等工具的火焰消毒工作，待冷卻后才沿伸到標(biāo)本容器中挑取接種物，在挑取標(biāo)本后，其接種工具應(yīng)盡量避免接觸試管壁及試管口等。隨后將接種物在培養(yǎng)基上分離劃線。3.移種或接種的基本步驟：3.1右手持接種工具，在火焰上燒灼3次滅菌。3.2左手持起標(biāo)本容器或原代培養(yǎng)物的平皿或試管等。3.3用接種工具挑取適量標(biāo)本或細(xì)菌，挑取標(biāo)本時，應(yīng)注意選擇真實反映感染情況的部分，如糞便挑取粘液膿血部分。純化細(xì)菌應(yīng)從原代培養(yǎng)物上挑取單個菌落。從液體培養(yǎng)基中取菌，只需將接種環(huán)在培養(yǎng)液中蘸取一環(huán)即可。3.4接種時可根據(jù)要求采用不同的接種方法。3.5接種后，應(yīng)在火焰上反復(fù)燒灼接種工具并作一定的編號記錄，所用工具應(yīng)放回原處。常用分離培養(yǎng)基1.常用分離培養(yǎng)基種類：血平板、巧克力平板、麥康凱平板、SS平板、克氏雙糖鐵（KIA）、M-H培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂平板、沙保氏培養(yǎng)基、4號培養(yǎng)基、念珠菌藥敏平板。2.平板培養(yǎng)基均由鄭州博賽、杭州天和藥業(yè)公司生產(chǎn)。3.生產(chǎn)批號：4.用途：4.1血平板適用各類細(xì)菌生長，為一般細(xì)菌標(biāo)本接種常用培養(yǎng)基。4.2巧克力平板適用于某些血平板生長不良或需嗜血因子細(xì)菌的培養(yǎng)。4.3麥康凱平板作初步是否發(fā)酵乳糖鑒定之用，主要用于糞便標(biāo)本分離培養(yǎng)及作非發(fā)酵菌生長試驗用。4.4SS平板主要用于糞便標(biāo)本分離培養(yǎng)及非發(fā)酵菌生長試驗之用。4.5克氏雙糖鐵（KIA）主要用于觀察細(xì)菌是否發(fā)酵葡萄糖、乳糖產(chǎn)氣產(chǎn)酸，是否產(chǎn)生H2S及觀察動力。4.6M-H培養(yǎng)基主要用于藥敏試驗。4.7營養(yǎng)瓊脂平板用于菌種保存、純分離及作空氣培養(yǎng)。4.8沙保氏培養(yǎng)基用于真菌培養(yǎng)。5質(zhì)控：每次用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行生長試驗和抑菌試驗質(zhì)控。質(zhì)控合格后，方可使用，并認(rèn)真做好記錄。6注意事項：6.1對每批培養(yǎng)基必須檢查：平皿的裂紋、充碟不均、培養(yǎng)基裂紋、溶血（血平板）、冷凍、過多的氣泡或斑點、污染等。6.2缺陷性報告：如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基有缺陷，實驗室應(yīng)做好記錄并通知制造商，制造商應(yīng)有適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)措施，并記錄在案。細(xì)菌室標(biāo)本操作流程1.標(biāo)本的接受1.1標(biāo)本接受的時間：原則上全天任何時間均可。1.2標(biāo)本的接受：接受標(biāo)本者要認(rèn)真核對標(biāo)本的數(shù)量、標(biāo)本與檢驗單要求是否相符以及標(biāo)本的質(zhì)量等。1.3把接受的標(biāo)本編號。2.臨床標(biāo)本的接種2.1檢驗?zāi)康臑榧?xì)菌培養(yǎng)+藥敏試驗的各臨床標(biāo)本的培養(yǎng)基選擇2.1.1標(biāo)本類型培養(yǎng)基血血培養(yǎng)瓶中段尿血平板、麥康凱平板、L菌平板腦脊液血培養(yǎng)瓶、血平板、巧克力平板穿刺液血培養(yǎng)瓶、血平板、麥康凱平板、巧克力平板膽汁肉湯、血平板、巧克力平板、麥康凱平板呼吸道標(biāo)本血平板、麥康凱平板、巧克力平板糞便標(biāo)本SS平板、MAC平板和血平板病灶分泌物血平板、巧克力平板、麥康凱平板2.1.2生殖器標(biāo)本根據(jù)臨床醫(yī)生所寫的檢驗項目接種相應(yīng)的平板及操作：淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板；念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基；支原體培養(yǎng)則按支原體培養(yǎng)的操作規(guī)程操作；作普通細(xì)菌培養(yǎng),則接種血平板和巧克力平板；衣原體抗原檢測的按衣原體抗原檢測的操作規(guī)程進(jìn)行檢驗2.2接種的方法：中段尿標(biāo)本無菌取10ul，在血平板的中間做垂直劃線，然后分離劃線。其他標(biāo)本做分區(qū)劃線。2.3檢驗?zāi)康臑檎铱顾釛U菌的按找抗酸桿菌的操作規(guī)程進(jìn)行檢驗。3.所接種的平板必須寫上標(biāo)本的編號和接種的日期，然后根據(jù)要求進(jìn)行培養(yǎng)。4.標(biāo)本的培養(yǎng)條件、溫度、時間平板培養(yǎng)條件、溫度、CO2濃度、時間血平板CO2孵箱、35-37、18-24小時巧克力平板CO2孵箱、35-37、18-24小時淋球菌平板CO2孵箱、35-37、18-24小時沙保羅平板CO2孵箱、28-31、24-36小時其他的平板CO2孵箱、35-37、18-24小時5.根據(jù)生長在平板上的細(xì)菌菌落形態(tài)、菌落涂片、染色、鏡檢等來綜合判斷細(xì)菌形態(tài)和染色性質(zhì)，按各屬鑒定的作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行各菌屬的常規(guī)鑒定及藥敏試驗。6.結(jié)果的報告確認(rèn)細(xì)菌鑒定及藥敏試驗結(jié)果后，進(jìn)行檢驗驗單結(jié)果報告的存盤、打印。7.對各類細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本除特殊要求外，我室細(xì)菌標(biāo)本在接種后每天按要求進(jìn)行無害化處理。二氧化碳培養(yǎng)法目的是用于分離和培養(yǎng)需CO2氣體生長的細(xì)菌或只有在CO2環(huán)境中細(xì)菌生長形態(tài)典型的細(xì)菌。一般臨床細(xì)菌實驗室須配備一個CO2培養(yǎng)裝置，其一為專用的CO2培養(yǎng)箱，其二為燭缸CO2環(huán)境。一般實驗室兩者必須具備其一。我室采用CO2孵箱。做法如下：調(diào)節(jié)CO2孵箱正面的溫度調(diào)節(jié)鈕，使其溫度在35+1范圍。調(diào)節(jié)CO2孵箱正面的CO2濃度調(diào)節(jié)鈕，使其CO2濃度在5-10%范圍。將種有標(biāo)本的平板放入CO2孵箱培養(yǎng)。關(guān)好孵箱門，避免由于門未關(guān)好造成的溫度、CO2濃度低于允許范圍。分離及純化法1.分離是指從原材料或多種細(xì)菌的混合培養(yǎng)物中將各種細(xì)菌彼此獨立地分離開，以得到純的單一菌株，技術(shù)步驟如下：作純培養(yǎng)分離時，一般只用一只完整的瓊脂平板。涂劃多采用分區(qū)劃線法，在一只平板中可劃35個區(qū)。劃法有兩種：-1.1從臨床標(biāo)本分離細(xì)菌所含菌數(shù)相對較少時，可用接種環(huán)取標(biāo)本涂布在平板一角邊緣，然后從此區(qū)開始劃線至1/3平板，為第一區(qū)，再在2、3區(qū)依次劃線每劃完一個區(qū)域均將接種環(huán)滅菌一次，冷卻后再劃下一區(qū)域，每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線12次，使菌量逐漸減少以獲得單個菌落。1.2快速劃線分離法：采用快速劃線使一接種環(huán)標(biāo)本能分離出單個菌落，這與標(biāo)本的菌量及操作者的技能有很大關(guān)系。2.純化是指欲獲得大量純培養(yǎng)物的方法，所用平板大小可根據(jù)需要的菌量而定。方法是將一單個菌落或?qū)⑾嗤木渥鞔罅棵芗縿澯谄桨迳隙@得大量純的培養(yǎng)物。顯微鏡檢查法顯微鏡檢查是細(xì)菌鑒定工作中的一重要手段，有助于細(xì)菌的初步鑒別，同時對下一步鑒定工作起著重要的指導(dǎo)作用。有時通過形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，如痰中的抗酸桿菌和泌尿生殖道分泌物中的淋病奈瑟菌等。顯微鏡檢查有不染色標(biāo)本檢查法和染色標(biāo)本檢查法兩種。1.不染色標(biāo)本的檢查：不染色標(biāo)本主要用于檢查細(xì)菌的動力及運動狀況。1.1壓滴法：用接種環(huán)取細(xì)菌懸液2環(huán)，置于清潔載玻片中央，覆上蓋玻片，于高倍鏡下觀察。制片時菌液要適量，不可有氣泡，不可外溢。1.2懸滴法：取潔凈的凹窩載玻片及蓋玻片各1塊，將凹孔四周的平面上涂上一層凡士林，取一環(huán)菌液置蓋玻片中央，將凹窩載玻片的凹面向下，對準(zhǔn)于蓋玻片的液滴上，然后迅速翻轉(zhuǎn)玻片，用小鑷子輕壓蓋玻片使之與凹孔邊緣粘緊。鏡下觀察時先低倍后高倍，不可壓碎蓋玻片。有動力的細(xì)菌可見細(xì)菌從一處移到另一處，無動力的細(xì)菌呈布朗運動而無位置的改變。螺旋體由于菌體纖細(xì)、透明，需用暗視野顯微鏡觀察其形態(tài)、活動。2.染色標(biāo)本檢查法：通過對標(biāo)本的制片及染色，能觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列、染色特性以及莢膜、芽胞、異染顆粒等結(jié)構(gòu)，有助于細(xì)菌的初步鑒定。2.1快速革蘭染色法2.1.1操作見試劑說明書2.1.2結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。2.1.3注意事項：染色關(guān)健在于涂片和脫色，涂片不宜過厚，固定不宜過熱，脫色不宜過度，菌齡為1824小時為佳。2.2抗酸染色法2.2.1操作見試劑說明書2.2.2結(jié)果：抗酸桿菌呈紅色。2.2.3注意事項：每一張玻片只能涂一份標(biāo)本且不能在染色缸中染色，以免造成不同標(biāo)本間的交互污染從而導(dǎo)致陰陽性結(jié)果混淆，脫色時間寧長勿短，至無紅色液體流下為止。2.3阿爾培異染顆粒染色法：2.3.1初染：涂片上滴加第一液染劑（甲苯胺藍(lán)和孔雀綠的乙醇溶液），染3-5分鐘，水洗。2.3.2復(fù)染：第二液染劑（碘化鉀溶液）染1分鐘，水洗。自然干燥后鏡檢。2.3.3結(jié)果：菌體呈綠色，異染顆粒呈藍(lán)黑色。2.3.4注意事項：玻片要清潔，染料需新鮮配制，無沉淀物。注意與標(biāo)本中的其他雜質(zhì)相區(qū)別。3.壓片鏡檢，主要觀察細(xì)菌在組織中的分布。4.墨汁負(fù)染鏡檢：背景著色而菌體不著色的染色法，用以觀察新型隱球菌的寬厚莢膜等。5.鞭毛染色鏡檢，觀察細(xì)菌有否鞭毛、鞭毛的位置、鞭毛的數(shù)量，在非發(fā)酵菌的鑒定中是一項重要的指標(biāo)。6.暗視野鏡檢：觀察一些較微小且有一定結(jié)構(gòu)的微生物，如鉤端螺旋體的鉤狀及螺旋的形態(tài)等。7.制動試驗的直接鏡檢，在標(biāo)本加入抗血清，觀察動力是否被抑制，如霍亂弧菌的制動試驗等。8.熒光鏡檢，用標(biāo)有熒光素的物質(zhì)與檢材中的微生物特異結(jié)合產(chǎn)生熒光的特點而對微生物作出鑒定。穿刺液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗1.標(biāo)本采集1.1穿刺液包括胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等。1.2一般由臨床醫(yī)師以無菌操作穿刺術(shù)抽取。胸腹水抽取510毫升，心包液、關(guān)節(jié)液等可抽取25m1，將所取得之樣本注入含有抗凝劑的無菌管內(nèi)充分混勻后送檢。1.3標(biāo)本采集最好能在停藥2天后進(jìn)行，如不能停藥，則應(yīng)在下次用藥前采集，如疑為淋病性關(guān)節(jié)炎患者，其標(biāo)本應(yīng)在采集后立即送檢或床邊直接接種，切不可放冰箱保存。2.檢驗步驟2.1涂片檢查標(biāo)本3000r/min離心l5分鐘后，取沉淀物制片。2.2涂片鏡檢的細(xì)菌常為一般致病菌、革蘭氏陰性雙球菌和抗酸桿菌等，涂片檢查應(yīng)根據(jù)項目要求進(jìn)行相應(yīng)的染色鏡檢。2.3培養(yǎng)：作一般細(xì)菌培養(yǎng)可把采集的標(biāo)本接種于血平板、麥康凱、巧克力平板，同時也可將標(biāo)本注入血培養(yǎng)瓶放入血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。2.4作厭氧培養(yǎng)可采用直接床邊接種標(biāo)本或采集樣本后，將培養(yǎng)物直接注入?yún)捬踉鼍囵B(yǎng)基。3.操作流程穿刺液厭氧涂片革蘭氏染色需氧注入血培養(yǎng)瓶厭氧平板血平板放入血培養(yǎng)儀厭氧肉湯初步報告麥康凱陽性報警巧克力分離培養(yǎng)菌落觀察涂片染色Vitek-32鑒定、藥敏/BD鳳凰鑒定、藥敏確定報告4.報告結(jié)果4.1涂片報告發(fā)現(xiàn)形似某某細(xì)菌，淋球菌應(yīng)報是否在細(xì)胞內(nèi)外發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌；抗酸染色應(yīng)報是否發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。4.2用于培養(yǎng)的穿刺液正常情況下應(yīng)無菌，如培養(yǎng)出細(xì)菌應(yīng)報細(xì)菌種名及藥敏試驗結(jié)果，血培養(yǎng)儀培養(yǎng)6天仍未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌則報無菌生長。膽汁標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗?zāi)懼囵B(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌腸球菌大腸埃希菌消化鏈球菌肺炎克雷伯氏菌葡萄球菌變形桿菌產(chǎn)氣腸桿菌銅綠假單胞菌傷寒及其它沙門菌擬桿菌糞產(chǎn)鹼桿菌2.標(biāo)本收集膽汁標(biāo)本的采集方法有三種，即十二指腸引流法，膽囊穿刺法及手術(shù)直接采取法。2.1十二指腸引流法：在無菌操作下用導(dǎo)管作十二指腸引流膽汁，分為A、B、C三部分。A液來自膽管，為橙黃或金黃；B液來自膽囊，為棕黃綠色；C液來自肝膽道，為檸檬色。一般認(rèn)為B液做細(xì)菌培養(yǎng)意義較大。2.2膽囊穿刺法：進(jìn)行膽囊造影時同時采取膽汁。本法所采取的膽汁不易被污染，適宜做細(xì)菌培養(yǎng)。2.3手術(shù)采取法：在進(jìn)行膽部外科手術(shù)時直接采取膽汁送檢。3.檢驗步驟3.1將送檢標(biāo)本3000r/min離心30分鐘，傾去上清液取沉淀物涂片及培養(yǎng)。3.2膽汁一般不作涂片檢驗，如需要應(yīng)用相應(yīng)的染色方法檢查并仔細(xì)觀察，因為膽汁沉淀后有較多的內(nèi)容物復(fù)蓋而不利于觀察細(xì)菌。3.3培養(yǎng)提倡直接將膽汁注入血培養(yǎng)瓶進(jìn)行增菌培養(yǎng)。培養(yǎng)標(biāo)本也可直接種血平板、麥康凱平板和巧克力平板。4.操作流程膽汁需氧血培養(yǎng)瓶增菌涂片染色血平板、巧克力平板血平板、巧克力平板初步報告麥康凱菌落觀察涂片染色Vitek-32鑒定、藥敏/BD鳳凰鑒定、藥敏確定報告5.報告結(jié)果5.1沙門氏菌感染在膽汁中檢出率較高，但必須以血清凝集試驗為依據(jù)報告血清型。5.2膽汁應(yīng)是無菌的，如培養(yǎng)出細(xì)菌即為致病菌應(yīng)報細(xì)菌的種屬及藥敏試驗結(jié)果。糞便標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗1.糞便標(biāo)本中常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌傷寒及其它沙門菌結(jié)核分支桿菌志賀菌屬難辨梭菌致病大腸埃希菌白色念珠菌（ETEC、EPEC、EIEC、EHEC）弧菌屬菌種氣單胞、鄰單胞菌種小腸結(jié)腸炎耶爾森菌彎曲菌2.標(biāo)本采集2.1自然排便采集法自然排便后，挑取膿血、粘膜部分的糞便23g，液體糞便取絮狀物置于大便培養(yǎng)管或增菌液中送檢。2.2直腸肛管法用大便培養(yǎng)用的肛管直接插入肛門成人45cm，幼兒23cm，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)數(shù)次，目的是使直腸表面粘液能通過肛管孔進(jìn)入肛管內(nèi)。然后拔出放入大便培養(yǎng)管中送檢。3.檢驗步驟3.1涂片檢查糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多而一般不作直接涂片找致病菌，只有懷疑霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時，才作直接涂片檢查。3.2各項的涂片檢驗均按染色方法進(jìn)行，但大便檢查霍亂弧菌有其處理程序：3.2.1染色檢查：將米泔樣的標(biāo)本涂2張片用乙醇固定后染色，目的觀察弧菌有無呈魚群狀排列。3.2.2懸滴檢查取患者糞便制成懸滴涂片，霍亂弧菌和EItor弧菌均呈現(xiàn)極活潑的穿梭狀運動。3.2.3制動檢驗運動活潑的弧菌涂片加人霍亂弧菌診斷血清后，在顯微鏡下觀察，若原運動活潑的現(xiàn)象停止，為制動試驗陽性。3.3大便標(biāo)本的培養(yǎng)目的是培養(yǎng)致病菌或追蹤病人有否菌群失調(diào)現(xiàn)象，無特殊要求作一般致病菌培養(yǎng)的標(biāo)本接種麥康凱、SS平板各一個。3.4菌群失調(diào)的細(xì)菌學(xué)檢驗：選用多種培養(yǎng)基包括SS、麥康凱、血平板、高鹽甘露醇鹽瓊脂平板、Campy-BA血瓊脂平板和沙氏瓊脂等，目的是使更多的菌群得到生長，以利于檢查腸道的細(xì)菌情況。3.5霍亂弧菌的培養(yǎng)，直接取患者米泔樣糞便0.5ml，接種于堿性蛋白胨水增菌液和4號平板，35培養(yǎng)68h，再轉(zhuǎn)種一只4號平板。35培養(yǎng)1824h后形成較大、菌落中間為灰黑色、有光澤、隆起、濕潤的菌落，如潑水狀。挑取可疑菌落510個與霍亂多價“O”診斷血清作玻片凝集試驗，如為陽性，則立即報告，并將可疑菌送成都市疾病控制中心確認(rèn)。3.6作結(jié)核菌培養(yǎng)應(yīng)先處理(參照雜菌處理方法篇章介紹)后種入改良羅氏培養(yǎng)基中或magot培養(yǎng)基。3.7厭氧性難辨梭菌的培養(yǎng)參照厭氧培養(yǎng)。3.8真菌培養(yǎng)：真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見的真菌腹瀉多由白色假絲酵母菌引起。將標(biāo)本接種于沙氏平板及血平板上，置27和35培養(yǎng)1824h，根據(jù)形態(tài)染色、菌落特征或采用VITEK-32YBC或APIAux半自動條鑒定，并做ATBFungus藥敏試驗。4.操作流程糞便或肛拭子增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)涂片檢查沙門氏菌、志賀氏菌351824h霍亂弧菌SS、麥康凱平板革蘭氏染色觀察動力沙氏斜面、血平板等菌落觀察涂片檢查血清學(xué)鑒定Vitek-32鑒定、藥敏/BD鳳凰鑒定、藥敏確定報告5.報告結(jié)果：查出腸道致病菌，報告其菌名和藥敏結(jié)果。如為致病性大腸埃希菌必須以血清學(xué)診斷試驗為鑒定依據(jù)，報告應(yīng)包括ETEC、EPEC、EIEC、EHEC。6.糞便中培養(yǎng)出霍亂弧菌、沙門氏菌、志賀氏菌、致病性大腸桿菌時應(yīng)作為危急值報告，并填寫幾危急值報告單。血液及骨髓標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗血液及骨髓標(biāo)本中常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌肺炎鏈球菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌傷寒及其它沙門菌表皮葡萄球菌變形桿菌溶血性鏈球菌產(chǎn)氣腸桿菌糞腸球菌肺炎克雷伯氏菌銅綠假單胞菌糞產(chǎn)鹼桿菌沙雷氏菌流感嗜血桿菌布魯氏菌2.標(biāo)本采集2.1采血時間：在病人發(fā)熱初期1-2天內(nèi)或發(fā)熱高峰時采集血液標(biāo)本。采血時間原則上應(yīng)選擇在抗菌藥物應(yīng)用前,對已用藥而又不能中止用藥的病人，應(yīng)在下次用藥前采集。2.2標(biāo)本采集方法及標(biāo)本量成人每次采血10ml，嬰幼兒每次采血1-5ml。嚴(yán)格無菌采集的血液標(biāo)本應(yīng)立即加入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，迅速輕搖，使之充分混合，以防血液凝固。對于疑為細(xì)菌性骨髓炎病人，應(yīng)在嚴(yán)格消毒后抽取骨髓1ml然后注入小兒瓶中進(jìn)行增菌培養(yǎng)。3.操作流程血液無菌注入血培養(yǎng)瓶6天無菌生長增菌培養(yǎng)血平板陽性報警巧克力平板無菌生長發(fā)陰性報告涂片染色血平板初步報告巧克力平板（5%CO2條件）35-37，18-24小時菌落觀察、涂片染色及相關(guān)酶試驗Vitek-32鑒定、藥敏/BD鳳凰鑒定、藥敏確定報告檢驗科作業(yè)指導(dǎo)書血液及骨髓標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗文件編號：LABOPXJ026第2頁，共2頁版本：1生效日期：2005-11-014.報告結(jié)果4.1在血液中檢出沙門氏菌，必須以血清凝集試驗為依據(jù)報告血清型。4.2血液正常情況下應(yīng)是無菌的，如培養(yǎng)出細(xì)菌即為致病菌，應(yīng)報細(xì)菌的種屬及藥敏試驗結(jié)果。4.3血培養(yǎng)陽性均作為危急值報告，并填寫危急值報告單。編寫：審核：批準(zhǔn)：批準(zhǔn)日期：2005年11月01日腦脊液的細(xì)菌學(xué)檢驗?zāi)X脊液培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟菌A、B群鏈球菌卡他布蘭漢菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌結(jié)核分支桿菌腸桿菌科菌種產(chǎn)單核李斯特菌腦膜敗血性黃桿菌新型隱球菌假單胞菌白色念珠菌2.標(biāo)本收集：2.1標(biāo)本必須由臨床醫(yī)師以無菌操作收集腦脊液35ml，盛于無菌管中送檢。腦脊液中某些細(xì)菌（腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等）易死亡，故收集標(biāo)本后應(yīng)立即送檢。切不可低溫（冰箱）保存。3.檢驗步驟：3.1一般細(xì)菌涂片檢查除結(jié)核性腦膜炎外，由其它細(xì)菌引起的化膿性腦膜炎，腦脊液明顯混濁，可直接涂片，革蘭染色鏡檢。無色透明的腦脊液，應(yīng)離心后涂片、染色、鏡檢，根據(jù)染色及形態(tài)特征可初步提示細(xì)菌的種類。結(jié)核分枝桿菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物（3000r/min,30min）作抗酸染色。新型隱球菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負(fù)染色。3.2分離培養(yǎng)用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分別接種于血平板、巧克力平板，巧克力平板應(yīng)置于CO2環(huán)境中35培養(yǎng)1824小時。腦脊液也可直接注入血培養(yǎng)瓶放入BacT/Alert120或BACTEC9050中進(jìn)行監(jiān)測。4.檢驗流程：腦脊液3000r/min1015min3000r/min1015min肉眼觀察BacT/Alert監(jiān)測培養(yǎng)檢查涂片檢查陽性報警血平板巧克力平板（510%CO2）5天無菌生長報陰性觀察菌落墨汁染色革蘭氏染色抗酸染色涂片檢查血清學(xué)試驗Vitek-32鑒定、藥敏/BD鳳凰鑒定、藥敏確定報告5.報告結(jié)果：檢出細(xì)菌，應(yīng)報告菌名和藥敏結(jié)果，血培養(yǎng)儀培養(yǎng)6天仍無生長者則報告陰性。6陽性培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)作危急值報告，并填寫危急值報告單。尿液的細(xì)菌學(xué)檢驗1.尿液培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌淋病奈瑟菌腸球菌大腸埃希菌A群鏈球菌變形桿菌腐生葡萄球菌肺炎克雷伯菌表皮葡萄球菌產(chǎn)氣腸桿菌結(jié)核分支桿菌沙門菌種銅綠假單胞菌沙雷菌2.標(biāo)本收集：2.1尿液標(biāo)本的采集可采用多種方法：有中段尿采集法、膀胱穿刺法、腎盂尿采集法，而常規(guī)是取中段尿作細(xì)菌培養(yǎng)。2.2取中段尿作培養(yǎng)時先要進(jìn)行前尿道的清洗消毒，以免前尿道寄生菌群污染標(biāo)本。2.3如采用其他方法收集標(biāo)本，必須由臨床醫(yī)生根據(jù)臨床診斷需要而執(zhí)行收集術(shù)，并在檢驗單上寫明。3.檢驗步驟:3.1涂片檢查3.1.1一般細(xì)菌及淋病奈瑟菌涂片：以無菌操作吸取尿液10ml，3000r/min離心15min，去上清液，取沉淀涂片，革蘭氏染色鏡檢，作初步報告。如查見革蘭氏陰性雙球菌，呈腎形位于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外，報告“找到革蘭陰性雙球菌，存在于細(xì)胞內(nèi)外，形似淋病奈瑟菌”。如未查見上述細(xì)菌可報告“未發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌”。3.1.2念珠菌涂片：取尿液沉淀物放于清潔玻片上，覆以蓋玻片，制成涂片，用高倍鏡檢查。革蘭染色后，如發(fā)現(xiàn)發(fā)亮的芽生孢子和假菌絲，就可報告“霉菌孢子及菌絲”。3.1.3結(jié)核分枝桿菌：取尿液10ml，4000r/min離心沉淀30min，取沉淀物涂片，抗酸染色，鏡檢。如找到紅色桿菌，可報告“發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌”。3.2一般細(xì)菌培養(yǎng)（細(xì)菌計數(shù)）：用定量接種環(huán)取尿液10l接種血平板，35培養(yǎng)1824小時，觀察有無細(xì)菌生長，并計數(shù)菌落數(shù)，乘以1000，求出每毫升尿液的菌落數(shù)。根據(jù)菌落特征、涂片染色結(jié)果，選擇相應(yīng)的鑒定卡及藥敏卡上Vitek-32/BD鳳凰全自動細(xì)菌鑒定和藥敏分析儀,進(jìn)行鑒定和藥敏試驗，如培養(yǎng)48小時無菌生長，即報告“無菌生長”。3.3特殊菌培養(yǎng)：3.3.1淋病奈瑟菌培養(yǎng)：選用專用巧克力瓊脂平板，接種后放入二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)。3.3.2結(jié)核菌培養(yǎng)：取沉淀物接種羅氏培養(yǎng)基，35培養(yǎng)34星期，觀察有無可疑菌落生長。4.結(jié)果報告：4.1尿液細(xì)菌培養(yǎng)檢查必須報告細(xì)菌的種屬、菌落計數(shù)（cfu/ml）及藥敏結(jié)果。4.2革蘭氏陰性菌落計數(shù)大于105cfu/ml，革蘭氏陽性菌計數(shù)大于104cfu/ml，真菌大于103cfu/ml有診斷意義。4.3一般常規(guī)結(jié)核培養(yǎng)要8周方能報告。陽性結(jié)果可提前報告。但不做菌落計數(shù)只報告“抗酸桿菌生長”的報告，如做了進(jìn)一步的分型和鑒定，才能報告有型結(jié)核桿