「M蛋白的檢測(cè)與鑒定【參考資料】」.doc

M蛋白的檢測(cè)與鑒定一、M蛋白的基礎(chǔ)知識(shí)M蛋白是漿細(xì)胞或B 淋巴細(xì)胞單克隆大量增殖時(shí)所產(chǎn)生的一種異常免疫球蛋白，其氨基酸組成及排列順序十分均一，空間構(gòu)象、電泳特征也完全相同，本質(zhì)為免疫球蛋白或其片段（輕鏈、重鏈等）。由于它產(chǎn)生于單一克?。╩onoclone），又常出現(xiàn)于多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma）、巨球蛋白血癥（macroglobulinemia）、惡性淋巴瘤（malignantlym phoma） 病人的血或尿中，故稱M 蛋白。這些M 蛋白大多無(wú)抗體活性，所以又稱為副蛋白（paraprotein）。M 蛋白血癥可分為惡性與意義不明的兩大類。惡性M 蛋白血癥多見(jiàn)于多發(fā)性骨髓瘤（包括輕鏈?。⒕耷虻鞍籽Y、重鏈病、7SIg M ?。⊿olomen Konkel 病）、半分子病及不完全骨髓瘤蛋白?。– 端基因缺陷） 等。意義不明的M 蛋白血癥（monoclonal gammopathyof undetermined significance ，M G US） 又分為兩種，一種是與其他惡性腫瘤（如惡性淋巴瘤） 伴發(fā)者，另一種即所謂良性M 蛋白血癥。M 蛋白的檢測(cè)方法主要有瓊脂或瓊脂糖電泳、免疫電泳、免疫固定電泳、選擇免疫電泳等。二、M蛋白的鑒定1多發(fā)性骨髓瘤與巨球蛋白血癥時(shí)的M 蛋白檢測(cè)和鑒定（1）血清總蛋白定量。90 的患者血清總蛋白含量升高（70 的患者100gL），約10的患者正?；蛏踔疗停ㄈ巛p鏈病時(shí)）。（2）血清蛋白醋纖膜或瓊脂糖電泳。M 蛋白在電泳時(shí)出現(xiàn)典型的單株峰（亦稱M區(qū)帶），特點(diǎn)是區(qū)帶窄而濃，掃描時(shí)呈現(xiàn)尖高峰，在區(qū)高比寬2，在區(qū)1。此M區(qū)帶可因Ig的不同而出現(xiàn)在在2的任何區(qū)域。M蛋白增殖的另一特點(diǎn)是其他各區(qū)帶明顯減少，顯示圖像較簡(jiǎn)單。有時(shí)有的患者血中M蛋白并不高，這是由突變細(xì)胞的Ig分泌能力決定的。這種病人的血清在電泳時(shí)M峰可不明顯，易被其他蛋白掩蓋，需采用稀釋血清成應(yīng)用其他敏感方法如免疫固定電泳來(lái)檢測(cè)。（3）血清Ig定量。一般M蛋白所屬Ig含量均顯著增高，其他類Ig則正?；蝻@著減低。（4）免疫電泳。 正常人血清免疫電泳結(jié)果：可分辨出20 多種蛋白成分。在陽(yáng)極端有船形很濃的沉淀線為白蛋白。通常Ig組分靠陰極端，最靠近加樣孔者為Ig M，依次為IgA、IgG，三者成平滑的連續(xù)沉淀線。 多發(fā)骨髓瘤：多發(fā)性骨髓瘤分IgG、IgA、Ig M、IgI）和IgE5 種，IgG 和IgA 又分亞類，所有Ig的輕鏈又分兩個(gè)型。因此，免疫電泳時(shí)變形沉淀線的位置隨各分子的電泳區(qū)帶不同而異，從慢2區(qū)皆可出現(xiàn)。IgG 1 多出現(xiàn)在慢區(qū)，IgG 4 在2區(qū)。M 蛋白與相應(yīng)的抗重鏈血清、抗輕鏈血清形成遷移范圍十分局限的濃密的沉淀弧。由于此種病人血清中Ig 含量甚高，免疫擴(kuò)散時(shí)可出現(xiàn)抗原絕對(duì)過(guò)剩而不出現(xiàn)沉淀線，此時(shí)需稀釋血清重做，往往可獲得滿意結(jié)果。 巨球蛋白血癥：由于IgM 分子大量增殖所致。在免疫電泳時(shí)，常常出現(xiàn)以下特征：一是沉淀線明顯變形。正常情況下，IgM形成短小沉淀線，不易看到變形。當(dāng)IgM大量出現(xiàn)時(shí)，則會(huì)使整個(gè)IgM沉淀線變形。二是抗原孔周圍和電泳縱軸出現(xiàn)團(tuán)塊狀沉淀。三是電泳時(shí)IgM組分無(wú)遷移，這多是Ig M分子聚合，電泳不移動(dòng)所致。（5）尿本周蛋白檢測(cè)。 定性檢測(cè)： 用熱沉淀法和磺基水楊酸法。 免疫電泳法：用待檢尿濃縮后進(jìn)行免疫電泳，大多數(shù)多發(fā)性骨髓瘤病人和輕鏈病患者，僅出現(xiàn)一條致密的弓形彎曲的沉淀線。本法6080的骨髓瘤病人和幾乎全部輕鏈病病人可檢出尿本周蛋白。 輕鏈白蛋白戊二醛交聯(lián)免疫電泳法：多發(fā)性骨髓瘤、華氏巨球蛋白血癥及輕鏈病可呈陽(yáng)性，正常人陰性。本法尿本周蛋白檢出率為100，假陽(yáng)性4，尿中含有200gml 時(shí)即可出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。2重鏈病時(shí)M 蛋白檢測(cè)與鑒定與多發(fā)性骨髓瘤相同，免疫電泳時(shí)由于重鏈分子較Ig 分子小，故遷移率快，電泳位置較靠陽(yáng)極側(cè)（）。但重鏈病一般需選擇免疫電泳證實(shí)。37SIg M 病時(shí)M 蛋白的檢測(cè)與鑒定一般Ig M 為五聚體，沉降系數(shù)為19S ，而7S IgM患者的IgM為單體，沉降系數(shù)為7S 。證明7S IgM 有兩種方法：一種是在測(cè)定Ig M 總量后，將被測(cè)血清12 ml 過(guò)Sepharose 6B柱，再根據(jù)洗脫峰圖用面積儀測(cè)出7S Ig M占總IgM的百分比，與Ig M總量換算即得7S IgM的絕對(duì)值。另一方法即為植物血凝素（PHA）選擇電泳。此法原理是五聚體Ig M可與PHA 結(jié)合形成沉淀，而單體IgM不與PHA結(jié)合。在瓊脂膠中加入PHA，后進(jìn)行電泳，五聚體IgM 被P H A 所阻留，而7S Ig M 繼續(xù)向陽(yáng)極泳動(dòng)，并可與隨后加至抗體槽中的Ig M 抗血清反應(yīng)，形成單一沉淀弧。4半分子病時(shí)M 蛋白檢測(cè)與鑒定所謂半分子?。╤alfmolecule）是指此種M 蛋白由一條重鍵和一條輕鏈組成，分子量是正常Ig 分子的12 或12（因半分子病肽鏈往往有部分缺失）。至今報(bào)告過(guò)IgG 和IgA 的半分子病。除上述檢測(cè)方法外，尚須對(duì)“半分子”進(jìn)行特殊鑒定。方法有： 免疫電泳法鑒定半分子M 蛋白的遷移率。電泳時(shí)發(fā)現(xiàn)具有IgG 或IgA 的電泳特征而遷移率明顯快于二者時(shí)（泳向正極可達(dá)2 區(qū)），應(yīng)注意有無(wú)本病的可能。 十二烷基硫酸鈉（SDS）聚丙烯酰胺凝膠電泳，推算M 蛋白的分子量。 超速離心分析， 測(cè)定M 蛋白的沉淀系數(shù)。 Fc抗原決定簇的確定。用相應(yīng)抗重鏈血清對(duì)比患者與正常人相應(yīng)Ig 的區(qū)別。5測(cè)定免疫球蛋白輕鏈型篩選M 蛋白正常人有五類免疫球蛋白，其輕鏈有兩種型，即型或型。對(duì)于每個(gè)Ig分子而言，其輕鏈只有一種，不是就是。但對(duì)一個(gè)體的Ig 分子而言，則有和兩種鏈型，且其比例基本上是固定的，即約為21 。任何原因引起的Ig 分子多克隆增殖，如慢性肝病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、某些惡性腫瘤時(shí)，其值不變。而M 蛋白發(fā)生時(shí)，是單克隆細(xì)胞的惡性增殖，所以在Ig 量明顯增高的同時(shí)，其比值必然發(fā)生改變， 即一種輕鏈型的Ig 分子增多。利用適當(dāng)?shù)姆椒?，分別定量測(cè)定血清中、型Ig 分子的量，即可特異而簡(jiǎn)便地診斷M 蛋白病。測(cè)定方法有兩種，一是用濁度測(cè)定技術(shù)分別測(cè)定含或的Ig 的量，一種是用單相免疫擴(kuò)散法測(cè)定型、型Ig 的含量及比值。單擴(kuò)法是在瓊脂凝膠板上打孔，排列呈梅花型，中心孔注入抗、抗混合抗體，周圍孔放正常人及患者待測(cè)血清，然后進(jìn)行擴(kuò)散。正常血清與抗血清之間可見(jiàn)對(duì)稱雙線。若患者的輕鏈Ig 升高，其沉淀線向內(nèi)移，而線有不同程度向外移，雙環(huán)間距增寬。若輕鏈Ig 含量增高，則表現(xiàn)為環(huán)距減小、融合或跨環(huán)現(xiàn)象。此外，該法對(duì)IgG、IgA、IgD 類型的輕鏈診斷準(zhǔn)確率較高，而對(duì)Ig M型診斷不夠理想，其原因是Ig M分子大，擴(kuò)散遷移率小，同時(shí)五聚體立體結(jié)構(gòu)也影響了抗輕