中藥指紋圖譜.doc

（一） 中藥指紋圖譜的定義、特點(diǎn)和分類(lèi) 中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。 中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評(píng)價(jià)中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實(shí)性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性?！罢w性”和“模糊性”為其顯著特點(diǎn)。 目前，中藥指紋圖譜技術(shù)已涉及眾多方法，包括薄層掃描（TLCS）、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）等色譜法以及紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、質(zhì)譜法（MS）、核磁共振法（NMR）和X射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認(rèn)的三種常規(guī)分析手段。由于HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測(cè)靈敏度高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)；中藥成分絕大多數(shù)可在高效液相色譜儀上進(jìn)行分析檢測(cè)，且積累較豐富的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。因此高效液相色譜法已成為中藥指紋圖譜技術(shù)的首選方法。隨著HPLC MS和GCMS等聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用，中藥指紋圖譜技術(shù)更趨完善。 （二）中藥指紋圖譜建立的意義 中藥及其制劑均為多組分復(fù)雜體系，因此評(píng)價(jià)其質(zhì)量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的，能提供豐富鑒別信息的檢測(cè)方法，但現(xiàn)行的顯微鑒別、理化鑒別和含量測(cè)定等方法都不足以解決這一問(wèn)題，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學(xué)成分的種類(lèi)與數(shù)量，進(jìn)而對(duì)藥品質(zhì)量進(jìn)行整體描述和評(píng)價(jià)。這也正好符合中醫(yī)藥整體學(xué)說(shuō)。在此基礎(chǔ)上，如果進(jìn)一步開(kāi)展譜效學(xué)研究，可使中藥質(zhì)量與其藥效真正結(jié)合起來(lái)，有助于闡明中藥作用機(jī)理?？傊兴幹讣y圖譜的研究和建立，對(duì)于提高中藥質(zhì)量，促進(jìn)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。 （三）中藥指紋圖譜研究概況 以指紋圖譜作為中藥（天然藥物）提取物及其制劑的質(zhì)量控制方法，已成為目前國(guó)際共識(shí)，各種符合中藥（天然藥物）特色的指紋圖譜控制技術(shù)體系正在研究和建立。美國(guó)食品藥品管理局（FDA）允許草藥保健品申報(bào)資料中提供色譜指紋圖譜；世界衛(wèi)生組織（WHO）在1996年草藥評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則中也規(guī)定，如果草藥的活性成分不明確，可以提供色譜指紋圖譜以證明產(chǎn)品質(zhì)量的一致；歐共體在草藥質(zhì)量指南中亦稱(chēng)，單靠測(cè)定某種有效成分考查質(zhì)量的穩(wěn)定性是不夠的，因?yàn)椴菟幖捌渲苿┦且哉w為活性物質(zhì)。色譜指紋圖譜尤其是薄層色譜的鮮明的指紋圖譜是很有用的。國(guó)外指紋圖譜的應(yīng)用，目的在于解決成分復(fù)雜，有效成分不明確的植物藥質(zhì)量檢測(cè)和產(chǎn)品批次間質(zhì)量差異的問(wèn)題。其中德國(guó)研制的銀杏葉提取物制劑是一個(gè)突出的例子。他們應(yīng)用指紋圖譜制定了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，該圖譜體現(xiàn)了制劑所含的33個(gè)化學(xué)成分（主要為黃酮類(lèi)和內(nèi)酯類(lèi)）和各自的含量。經(jīng)化學(xué)成分和藥效相關(guān)性研究，發(fā)現(xiàn)約24%銀杏黃酮和約6%銀杏內(nèi)酯組成的提取物具有最佳療效。此外，采用“混批勾兌”法，可使最終產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，指紋圖譜重現(xiàn)性良好，含量浮動(dòng)范圍為5%左右。 20世紀(jì)70年代我國(guó)已有學(xué)者嘗試使用TLCS對(duì)中成藥進(jìn)行分析，因主客觀條件的限制，技術(shù)和時(shí)機(jī)的不成熟，沒(méi)有得到公認(rèn)；20世紀(jì)90年代中國(guó)藥典增設(shè)了中藥化學(xué)對(duì)照品和對(duì)照藥材，為中藥指紋圖譜的研究奠定了基礎(chǔ)。隨著色譜技術(shù)的迅速發(fā)展和檢測(cè)能力的顯著增強(qiáng)，為指紋圖譜的研究和應(yīng)用提供了良好的技術(shù)保證。目前我國(guó)已對(duì)中藥注射劑做出了必須用指紋圖譜進(jìn)行檢測(cè)的規(guī)定，同時(shí)提出了具體的技術(shù)要求；在中藥材規(guī)范化生產(chǎn)實(shí)施過(guò)程中指紋圖譜亦有較廣泛的應(yīng)用。 但是作為一項(xiàng)新技術(shù)，中藥指紋圖譜在實(shí)際應(yīng)用中還面臨許多問(wèn)題，只有進(jìn)一步加強(qiáng)中藥材種植加工和中成藥生產(chǎn)貯存的規(guī)范化；中藥化學(xué)成分和中藥藥理研究的系統(tǒng)化和標(biāo)準(zhǔn)化；以及技術(shù)上多學(xué)科的滲透，才能保證中藥質(zhì)量的穩(wěn)定，進(jìn)而保證中藥指紋圖譜的建立1、 中藥指紋圖譜的定義和特性 中藥指紋圖譜系指中藥原料藥材、飲片、半成品、成品等經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其特性的共有峰的圖譜。 中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的化學(xué)(不包括生物學(xué))鑒定手段。借以鑒別真?zhèn)巍⒃u(píng)價(jià)原料藥材、半成品和成品質(zhì)量均一性和穩(wěn)定性。其基本特性是整體性和模糊性。(謝培山先生) 它不同于常規(guī)意義的指紋分析含義，并不具有個(gè)體特異性，而更多強(qiáng)調(diào)的是作為主要以植物來(lái)源中藥的共有特征性。 *關(guān)于整體性和模糊性 從宏觀和整體性能看，中藥指紋圖譜可準(zhǔn)確、量化地對(duì)中藥進(jìn)行真?zhèn)舞b別和質(zhì)量評(píng)價(jià)。 從微觀和細(xì)節(jié)上看，由于藥材有產(chǎn)地、采集時(shí)間和加工方法等因素的限制，很難給出一個(gè)對(duì)所有中藥都適用的共有峰和非共有峰的比例，更不能如西藥來(lái)要求一一對(duì)應(yīng)，所以中藥指紋圖譜又是模糊的。2、 中藥指紋圖譜的分類(lèi) 這里主要指化學(xué)指紋圖譜，不包括DNA(脫氧核糖核酸)指紋圖譜。按所采用的實(shí)驗(yàn)方法來(lái)分為兩類(lèi)： 光(波)譜指紋圖譜； 色譜指紋圖譜 *與常規(guī)指紋分析的區(qū)別 常規(guī)指紋分析采用生物學(xué)的方法，其依據(jù)是源于先天的遺傳，如人類(lèi)的指紋分析(拱形、環(huán)形和螺紋形)用于犯罪學(xué)和法醫(yī)學(xué)，有絕對(duì)的個(gè)體特異性，據(jù)此可對(duì)任何犯罪嫌疑人指證和控罪。 化學(xué)指紋圖譜的分析依據(jù)是該物種后天的代謝產(chǎn)物，且大部分是次生的，對(duì)后天的生長(zhǎng)環(huán)境依賴(lài)性很強(qiáng)，專(zhuān)屬性比常規(guī)指紋分析差得多。 3、 國(guó)外相關(guān)研究 美國(guó)FDA允許草藥保健品申報(bào)資料。 WHO在1996年草藥評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則中已經(jīng)規(guī)定：Plant preparations及Finish products的章節(jié)提及草藥活性成分不明，提供其色譜指紋圖譜。 歐共體草藥質(zhì)量的指南中，單靠測(cè)定某有效成分考察質(zhì)量的穩(wěn)定性是不夠的，因?yàn)椴菟幖捌渲苿┦且哉w當(dāng)作活性物質(zhì)。提供色譜指紋圖譜尤其是顯色的TLC很有用，如山楂和金絲桃。 德國(guó)銀杏提取物制劑企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：固定品種、部位、產(chǎn)地、采收季節(jié)和加工方法，標(biāo)化提取物用原料或不同批次提取物進(jìn)行勾兌，提供的黃酮醇苷的色譜指紋圖譜重現(xiàn)性良好，含量測(cè)定相當(dāng)穩(wěn)定。4、 國(guó)內(nèi)動(dòng)態(tài) SDA于2000年下發(fā)中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術(shù)要求，要求對(duì)中藥注射劑推行指紋圖譜的質(zhì)控辦法 。 2002年3月，在上海國(guó)家藥典委員會(huì)召集會(huì)議： 落實(shí)中藥注射液指紋圖譜研究的老品種74種，要求今年五月十日前，各研究單位與生產(chǎn)企業(yè)簽訂合同。老品種放寬，新品種從嚴(yán)。 新的藥品管理法將對(duì)中藥飲片、中藥材實(shí)行批準(zhǔn)文號(hào)管理。對(duì)作為注射劑原料用的藥材和飲片首先進(jìn)行注冊(cè)。 中藥注射劑實(shí)行指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)管理 。 中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范將頒布實(shí)施。 5、 中藥指紋圖譜的獲得 樣品采集：固定品種、藥用部位、產(chǎn)地、采收期和加工方法的10批以上藥材，以及足夠數(shù)量的及處方組成和用量固定、生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的中間體或成品 。 方法研究：光(波)譜和色譜學(xué)方法。 標(biāo)準(zhǔn)圖譜(共有圖譜模式)確定：用相似性軟件計(jì)算得到 。 信息獲取和處理：用微機(jī)的強(qiáng)大功能對(duì)未知樣品進(jìn)行相似性評(píng)價(jià)。 相關(guān)性的考察：對(duì)中間體和成品之間成分相關(guān)性進(jìn)行比較要求嚴(yán)格 主要有光(波)譜、色譜技術(shù)。 應(yīng)選用儀器設(shè)備易得，且