血站核酸檢測(cè)工作導(dǎo)則(2016版).doc

.血站核酸檢測(cè)工作導(dǎo)則一、 核酸檢測(cè)技術(shù)用于血液篩查概述1. 篩查項(xiàng)目目前用于血液篩查的核酸檢測(cè)項(xiàng)目包括：人類(lèi)免疫缺陷病毒核糖核酸（Human Immunodeficiency Virus Ribonucleic Acid, HIV RNA）、丙型肝炎病毒核糖核酸（Hepatitis C Virus Ribonucleic Acid,HCV RNA）和乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（Hepatitis B Virus Deoxyribonucleic acid,HBV DNA）。2. 檢測(cè)方式核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）篩查可通過(guò)兩種方式進(jìn)行：?jiǎn)稳朔輽z測(cè)（IDT）和混合樣本檢測(cè)（Pooled Testing）。混合樣本檢測(cè)方法是先將獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行不多于8人份混合，然后進(jìn)行核酸分離純化和擴(kuò)增檢測(cè)。對(duì)于反應(yīng)性的混合樣本再進(jìn)行拆分檢測(cè)，若拆分出反應(yīng)性樣本（可為一個(gè)或多個(gè)），則呈反應(yīng)性反應(yīng)的血液進(jìn)入隔離程序；呈陰性反應(yīng)的血液可進(jìn)入合格放行程序；如全部樣本檢測(cè)結(jié)果均為陰性，則全部血液均可進(jìn)入合格放行程序。混合樣本檢測(cè)模式宜在進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)后，將血清學(xué)檢測(cè)陰性的樣本進(jìn)行混合樣本檢測(cè)。單人份檢測(cè)模式，是對(duì)單個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)的模式，其中對(duì)單個(gè)樣本同時(shí)三個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)而無(wú)法區(qū)分反應(yīng)性項(xiàng)目的檢測(cè)稱(chēng)為聯(lián)合檢測(cè)。對(duì)于反應(yīng)性的樣本可進(jìn)行鑒別試驗(yàn)以確定結(jié)果。對(duì)于聯(lián)檢陽(yáng)性樣本不需等待鑒別結(jié)果，可以直接進(jìn)入血液的隔離程序。3. 應(yīng)用原則實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)策略應(yīng)該以有效保證陽(yáng)性樣本的檢出為目的。與血清學(xué)抗原抗體檢測(cè)相結(jié)合才能真正起到提高血液安全性的作用，核酸檢測(cè)對(duì)于早期感染的檢測(cè)效果與當(dāng)?shù)氐牧餍胁W(xué)狀況和獻(xiàn)血人群是相關(guān)的，因此在選擇檢測(cè)體系與檢測(cè)模式時(shí)應(yīng)從檢測(cè)通量、檢測(cè)系統(tǒng)性能、檢測(cè)成本、獻(xiàn)血人群流行狀況、業(yè)務(wù)工作流程等幾個(gè)方面進(jìn)行綜合分析，選擇適合的檢測(cè)模式。二、 檢測(cè)技術(shù)人員要求1.人員的配備與資質(zhì)應(yīng)有與核酸檢測(cè)業(yè)務(wù)相適應(yīng)的崗位設(shè)置和人員配備，滿足從血液樣本采集、接收到實(shí)驗(yàn)室報(bào)告發(fā)出的整個(gè)核酸檢測(cè)過(guò)程及其支持保障等需求。血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員資質(zhì)應(yīng)至少滿足血站質(zhì)量管理規(guī)范和血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范關(guān)于人員的要求，并經(jīng)過(guò)省級(jí)以上衛(wèi)生計(jì)生行政部門(mén)組織或認(rèn)可的核酸檢測(cè)相關(guān)的理論和技術(shù)培訓(xùn)考核合格。2. 崗位設(shè)置與職責(zé)實(shí)驗(yàn)室崗位的設(shè)置應(yīng)根據(jù)核酸檢測(cè)的技術(shù)要求及血站的檢測(cè)策略來(lái)決定，應(yīng)有足夠的人力資源以滿足工作的需求及履行質(zhì)量體系相關(guān)的職責(zé)。應(yīng)具有明確的崗位說(shuō)明，以明確各個(gè)崗位的職責(zé)和需要達(dá)到的標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)室管理層應(yīng)對(duì)各個(gè)崗位的操作人員實(shí)施授權(quán)。3. 人員培訓(xùn)及能力評(píng)估1）培訓(xùn)：符合資質(zhì)的核酸檢測(cè)技術(shù)人員還要接受實(shí)驗(yàn)室生物安全以及廠家的上崗前儀器設(shè)備操作、維護(hù)及校準(zhǔn)等的培訓(xùn)。技術(shù)培訓(xùn)內(nèi)容應(yīng)覆蓋工作人員所涉及的所有工作范疇，培訓(xùn)的評(píng)估結(jié)果是確定人員是否適合其崗位的依據(jù)。2）能力評(píng)估：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立操作人員能力評(píng)估機(jī)制。每年至少實(shí)施一次人員的能力評(píng)估，以評(píng)估其血液核酸檢測(cè)工作的勝任程度。參照評(píng)估結(jié)果制定人員持續(xù)培訓(xùn)計(jì)劃。操作人員的操作誤差分析、檢測(cè)過(guò)程變更可作為培訓(xùn)需求納入培訓(xùn)活動(dòng)，需記錄人員的能力評(píng)估過(guò)程。三、 實(shí)驗(yàn)室建筑、環(huán)境與設(shè)施1. 基本原則根據(jù)核酸檢測(cè)的特點(diǎn)，以防止實(shí)驗(yàn)室交叉污染為目的，實(shí)施實(shí)驗(yàn)區(qū)域劃分和空氣流向、環(huán)境溫濕度的控制。生物安全等防護(hù)設(shè)施、噪音控制等應(yīng)以保證檢測(cè)樣本的安全和操作人員的健康為原則。2. 分區(qū)及功能要求1）分區(qū)原則：核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)設(shè)置4個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)域: 試劑耗材儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、樣本制備區(qū)（核酸純化）和擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)，4個(gè)區(qū)域空間上完全相互獨(dú)立，處于分隔狀態(tài)。區(qū)域之間不能直接相通，需有緩沖區(qū)。a)試劑耗材儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：該區(qū)必須獨(dú)立設(shè)置。用于試劑的制備、分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備以及離心管、吸頭等耗材的貯存和準(zhǔn)備。貯存試劑和用于樣本制備的耗材等材料應(yīng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品及質(zhì)控品不能保存在該區(qū)，應(yīng)保存在樣本處理區(qū)。b)樣本處理區(qū)：核酸純化前樣本的保存、樣本的開(kāi)蓋和混合；如果采用樣本混合和核酸純化為一體的設(shè)備，該區(qū)可以和樣本制備區(qū)合并。c)樣本制備（核酸純化）區(qū)：進(jìn)行核酸（RNA、DNA）提取和純化、貯存及核酸模板加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。d)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)（擴(kuò)增后區(qū)域）：cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測(cè)。2）適當(dāng)合并原則：采用樣本匯集及核酸純化一體的設(shè)備，可以將樣本處理區(qū)b）、樣本制備區(qū)c）進(jìn)行合并。核酸純化及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的全自動(dòng)分析儀，可將樣本制備區(qū)c)、擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)d)合并。不需做混樣檢測(cè)，且核酸純化檢測(cè)為一體的的檢測(cè)系統(tǒng)可將b）、c)、d)3個(gè)區(qū)域合并。3)樣本接收區(qū)域 樣本接收區(qū)域應(yīng)與核酸實(shí)驗(yàn)室樣本處理區(qū)域分開(kāi)，以免過(guò)多人員進(jìn)入樣本處理區(qū)域造成污染。3. 通風(fēng)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的空氣流向可按照從試劑耗材儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)樣本處理區(qū)樣本制備區(qū)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)的方向，以空氣壓力遞減的方式，實(shí)施空氣流向控制。防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。擴(kuò)增前和擴(kuò)增后區(qū)域應(yīng)具有獨(dú)立通風(fēng)系統(tǒng)。建議擴(kuò)增后區(qū)域保持負(fù)壓狀態(tài)。其它區(qū)域保持正壓或常壓狀態(tài)。4.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度濕度的控制根據(jù)設(shè)備的運(yùn)行要求確定溫度濕度的允許及波動(dòng)范圍，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有保證相應(yīng)環(huán)境溫度和濕度的設(shè)施，以滿足試驗(yàn)過(guò)程和檢測(cè)系統(tǒng)的要求，同時(shí)應(yīng)監(jiān)控并記錄實(shí)驗(yàn)室溫度和濕度。5.電源實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備UPS電源，以保證核酸檢測(cè)工作正常進(jìn)行。6. 限制進(jìn)入核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有限制進(jìn)入的要求，非授權(quán)人員不得進(jìn)入核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。7. 清潔、消毒及環(huán)境監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有清潔、消毒設(shè)施，在試驗(yàn)開(kāi)始前和結(jié)束后對(duì)實(shí)驗(yàn)室地面、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和空氣實(shí)施清潔和消毒。廢棄物需放置在指定位置或容器?？刹捎孟驹O(shè)備（紫外燈、臭氧消毒裝置）實(shí)施空氣或相關(guān)位置的消毒。工作人員在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室清潔消毒時(shí)，應(yīng)遵從從清潔區(qū)域向污染區(qū)域?qū)嵤┫镜脑瓌t。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。每月至少實(shí)施暴露表面（包括設(shè)備表面、工作臺(tái)面表面等）有無(wú)核酸擴(kuò)增產(chǎn)物污染的監(jiān)測(cè)。具體見(jiàn)假陽(yáng)性結(jié)果分析部分。8. 安全設(shè)施實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備數(shù)量充足、布局合理的照明、消防器具、可用的逃生通道和應(yīng)急處理設(shè)施，如緊急噴淋和洗眼裝置。為操作者提供良好的操作環(huán)境，將發(fā)生傷害及職業(yè)暴露的風(fēng)險(xiǎn)降至最低。四、檢測(cè)系統(tǒng)的確認(rèn)、運(yùn)行與維護(hù)1.基本要求血站開(kāi)展核酸檢測(cè)時(shí)，除應(yīng)配備滿足檢測(cè)工作需要的核酸檢測(cè)系統(tǒng)、信息系統(tǒng)（包括硬件和軟件）等關(guān)鍵設(shè)備，還應(yīng)配備離心機(jī)、冷藏冷凍設(shè)備滿足樣本采集、處理和保存的工作要求。集中化檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備配備與信息系統(tǒng)應(yīng)能滿足其工作需要。實(shí)驗(yàn)室需保存關(guān)鍵設(shè)備管理相關(guān)記錄。核酸檢測(cè)系統(tǒng)包括核酸混樣（混樣檢測(cè)模式）設(shè)備、純化設(shè)備、核酸擴(kuò)增檢測(cè)設(shè)備、配套的信息系統(tǒng)及配套的試劑和耗材。2.檢測(cè)系統(tǒng)的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室必須實(shí)施核酸檢測(cè)系統(tǒng)的確認(rèn)活動(dòng)。確認(rèn)活動(dòng)包括檢測(cè)系統(tǒng)購(gòu)置前的設(shè)計(jì)確認(rèn)，使用前的安裝確認(rèn)、運(yùn)行確認(rèn)和性能確認(rèn)，檢測(cè)系統(tǒng)使用后的性能監(jiān)控及再確認(rèn)。除應(yīng)提供廠商的安裝確認(rèn)報(bào)告之外，實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)對(duì)每個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行分析靈敏度驗(yàn)證。3.檢測(cè)系統(tǒng)的使用和維護(hù)實(shí)驗(yàn)室需依據(jù)設(shè)備廠家說(shuō)明書(shū)或操作手冊(cè)，建立有可操作性的設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。操作規(guī)程需定期評(píng)審，以適應(yīng)檢測(cè)過(guò)程的變化。實(shí)驗(yàn)室需建立設(shè)備維護(hù)計(jì)劃和維護(hù)程序，明確設(shè)備維護(hù)分級(jí)、周期及職責(zé)，采用監(jiān)控指標(biāo)監(jiān)控設(shè)備的維護(hù)效果，使設(shè)備始終處于在控狀態(tài)。設(shè)備的維護(hù)內(nèi)容應(yīng)包括日維護(hù)、周維護(hù)、月維護(hù)和視需要進(jìn)行的維護(hù)。同時(shí)應(yīng)建立檢測(cè)系統(tǒng)回顧性評(píng)價(jià)指標(biāo)，包括初篩陽(yáng)性率（混檢或聯(lián)檢陽(yáng)性率）、鑒別陽(yáng)性率、拆分陽(yáng)性率等。4. 設(shè)備故障設(shè)備故障時(shí)，應(yīng)停止使用，并清楚標(biāo)記防止誤用。設(shè)備故障后，應(yīng)首先分析故障原因，如果設(shè)備故障可能影響了方法學(xué)性能，故障修復(fù)后的設(shè)備應(yīng)經(jīng)校準(zhǔn)、驗(yàn)證或檢測(cè)等方式表明其達(dá)到規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)后方可使用。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)檢查上述故障對(duì)之前檢驗(yàn)的影響，必要時(shí)對(duì)之前的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估和驗(yàn)證，并確認(rèn)維修后的設(shè)備運(yùn)行情況。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取合理措施在設(shè)備投入使用、修理或退役之前對(duì)其去污染。5. 設(shè)備運(yùn)行的安全問(wèn)題應(yīng)維持設(shè)備處于安全工作狀態(tài)，包括檢查電氣安全、緊急停止裝置、以及化學(xué)和生物材料。只要適用，應(yīng)使用制造商提供的規(guī)格說(shuō)明和/或使用說(shuō)明。應(yīng)將所采取降低污染措施的內(nèi)容清單提供給使用該設(shè)備工作人員。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)留出合適的空間以供設(shè)備修理和放置適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備。6. 設(shè)備的校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室需校準(zhǔn)或驗(yàn)證的設(shè)備，應(yīng)由具備合格資質(zhì)的技術(shù)人員完成，校準(zhǔn)后的設(shè)備應(yīng)貼標(biāo)簽或以其他編碼標(biāo)示設(shè)備的校準(zhǔn)或驗(yàn)證狀態(tài)，并標(biāo)明再次校準(zhǔn)或再次驗(yàn)證的日期。7. 試劑和耗材試劑和耗材的選擇和采購(gòu)應(yīng)遵循血站相應(yīng)的管理制度，同時(shí)滿足核酸檢測(cè)樣本采集、檢測(cè)的質(zhì)量要求。1）試劑耗材的質(zhì)量檢測(cè)：接收試劑耗材時(shí)應(yīng)首先確認(rèn)其包裝是否完整、標(biāo)識(shí)是否清晰、運(yùn)送狀態(tài)是否符合要求。在開(kāi)封后應(yīng)注意觀察試劑耗材有無(wú)破損或條碼不清晰等現(xiàn)象。樣本匯集管、核酸提取純化和擴(kuò)增檢測(cè)使用的消耗品如為非核酸檢測(cè)試劑廠商提供時(shí),應(yīng)每批進(jìn)行有無(wú)干擾物的實(shí)驗(yàn)。2）試劑耗材的使用和保存：試劑和耗材應(yīng)保存在試劑耗材儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)。在經(jīng)過(guò)質(zhì)檢后的試劑可將試劑盒內(nèi)的陽(yáng)性對(duì)照和質(zhì)控品放置于樣本混樣處理區(qū)的冰箱內(nèi)，使用前應(yīng)核對(duì)試劑耗材的規(guī)格、批號(hào)，按相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作并作相應(yīng)記錄，按照先進(jìn)先出的原則，不同批號(hào)的試劑不得混用。五、樣本的采集與管理1.樣本的采集1） 采血管要求：應(yīng)使用適用于核酸檢測(cè)，帶分離膠的真空采血管，無(wú)菌、無(wú)DNA酶、無(wú)RNA酶，樣本為血清或者血漿（EDTA 或者枸櫞酸鹽抗凝），宜采用含惰性分離膠的EDTAK2真空采血管留取。應(yīng)有采血管質(zhì)量要求，規(guī)定儲(chǔ)存條件，包括出庫(kù)前及出庫(kù)后（獻(xiàn)血場(chǎng)所）的保存條件。2）樣本的采集量：用于核酸檢測(cè)的樣本，樣本量對(duì)檢測(cè)非常重要。不同實(shí)驗(yàn)室所使用的檢測(cè)系統(tǒng)不同，對(duì)樣本量的要求也會(huì)有所不同。在確定采血量時(shí)應(yīng)考慮如下因素：混樣聯(lián)合檢測(cè)或者單人份聯(lián)合核酸檢測(cè)中，需進(jìn)行樣本鑒別試驗(yàn)或拆分試驗(yàn)；儀器故障等意外原因，需要重新檢測(cè)；以及對(duì)獻(xiàn)血者感染狀況進(jìn)行進(jìn)一步評(píng)估的檢測(cè)，如DNA或者RNA定量及乙肝五項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)等。3）樣本采集：應(yīng)制定靜脈穿刺和血液采集標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，嚴(yán)格采用無(wú)菌操作技術(shù)進(jìn)行靜脈穿刺。留樣時(shí)用針頭刺穿試管密封塞，按照采血管標(biāo)注的留取量準(zhǔn)確留取，注意使用加抗凝劑的采血管應(yīng)在采血后顛倒混勻5-10次（或按照采血管技術(shù)要求進(jìn)行），使血液與抗凝劑充分混勻。應(yīng)依據(jù)選用的采血管規(guī)格及自動(dòng)加樣儀的條碼掃描要求在采血管相應(yīng)的位置粘貼條碼。條碼粘貼整齊，無(wú)污漬、無(wú)劃痕、無(wú)缺損。2. 樣本采集后的處理與保存應(yīng)制定樣本采集后的處理與保存程序。樣本在采血現(xiàn)場(chǎng)保存溫度通常為2-10。采集后的樣本宜在4小時(shí)內(nèi)實(shí)施低溫離心，分離紅細(xì)胞和血漿。如不能按上述要求處理采集的樣本，應(yīng)對(duì)所采集的樣本保存、處理（離心時(shí)間和條件）等條件進(jìn)行保證弱陽(yáng)性樣本有效檢出的確認(rèn)。并定期制定質(zhì)量監(jiān)控。3. 樣本的運(yùn)送樣本運(yùn)送和保存可參照可感染人類(lèi)的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定（2006年），并符合血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）樣本運(yùn)送的要求。樣本應(yīng)隔離密封包裝，包裝材料應(yīng)滿足防水、防破損、防外泄、易于消毒處理。裝箱時(shí)應(yīng)保持樣本管口向上。運(yùn)輸溫度應(yīng)在2-10，樣本和冷源不應(yīng)直接接觸，并有溫度監(jiān)測(cè)措施。4. 樣本接收1）核對(duì)樣本與送檢單： 樣本接收時(shí)應(yīng)仔細(xì)核對(duì)樣本數(shù)量與送檢單是否一致，宜采用計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行核對(duì)。例如血液采集部門(mén)通過(guò)計(jì)算機(jī)管理程序發(fā)出送檢樣本信息，血液檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室選擇送檢樣本信息接收，通過(guò)樣本實(shí)物逐一掃描錄入樣本信息，計(jì)算機(jī)自動(dòng)進(jìn)行比對(duì)。特別強(qiáng)調(diào)樣本采集時(shí)所留取樣本的采血管均需逐一掃描，以保證不同采血管的同源性。2）檢查樣本質(zhì)量： 運(yùn)輸過(guò)程溫度符合要求，容量符合采血管標(biāo)注的采集量，樣本應(yīng)無(wú)滲漏、稀釋?zhuān)淙苎?、脂血、黃疸程度應(yīng)符合檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)的有關(guān)要求。標(biāo)簽條形碼清晰，無(wú)污漬、無(wú)劃痕，粘貼符合要求。采用帶有分離膠的試管，離心后運(yùn)送的樣本血漿和紅細(xì)胞應(yīng)被分離膠隔離。3）樣本拒收： 如有以下情形應(yīng)拒收樣本：檢測(cè)申請(qǐng)關(guān)鍵信息缺失或不符；樣本管無(wú)標(biāo)識(shí)或標(biāo)識(shí)不清、錯(cuò)誤；樣本管選用錯(cuò)誤；溶血、脂血、黃疸程度不符合檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)的有關(guān)要求；采血量不能滿足檢驗(yàn)需要量或血樣被稀釋?zhuān)徊蓸拥剿蜋z時(shí)間超過(guò)規(guī)定期限；離心后送檢樣本未達(dá)到離心效果（如分離膠膠面不平整等）。5. 樣本接收后的處理及保存1）樣本在接收后應(yīng)按系統(tǒng)確認(rèn)的離心時(shí)間和離心力處理樣本。2）樣本在檢測(cè)前應(yīng)保存在2-8條件下，并于采樣后72小時(shí)內(nèi)完成核酸檢測(cè)。因特殊情況72小時(shí)以?xún)?nèi)不能完成檢測(cè)的樣本應(yīng)在-20以下凍存。3）樣本應(yīng)在檢測(cè)前從冰箱取出平衡至室溫，觀察其管壁外部有無(wú)冷凝水，以免影響條碼的掃描。真空采血管的開(kāi)蓋應(yīng)在生物安全柜或正壓環(huán)境中，或者全自動(dòng)開(kāi)蓋系統(tǒng)中進(jìn)行，自動(dòng)開(kāi)蓋和手工開(kāi)蓋均應(yīng)有防止樣本交叉污染的措施。4）樣本在進(jìn)行混樣后或進(jìn)行聯(lián)檢后應(yīng)密閉保存在2-8，等待結(jié)果全部確認(rèn)無(wú)誤后進(jìn)行處置或長(zhǎng)期保存。六、信息系統(tǒng)應(yīng)建立和使用血液核酸檢測(cè)計(jì)算機(jī)信息管理系統(tǒng)，覆蓋樣本采集、接收、試劑的管理、環(huán)境監(jiān)測(cè)、過(guò)程監(jiān)測(cè)、檢測(cè)報(bào)告發(fā)布、血液發(fā)放或報(bào)廢、不合格獻(xiàn)血者屏蔽等全過(guò)程。實(shí)驗(yàn)室管理軟件應(yīng)采用數(shù)字化的版本號(hào)進(jìn)行管理，建立和實(shí)施版本控制措施。信息系統(tǒng)在將核酸檢測(cè)納入常規(guī)檢測(cè)時(shí)應(yīng)至少對(duì)以下環(huán)節(jié)進(jìn)行確認(rèn)：a) 核酸樣本接收、信息錄入及核對(duì)；b）混樣樣本的篩選及信息利用；c) 核酸檢測(cè)原始數(shù)據(jù)向LIS系統(tǒng)的傳輸；d）核酸檢測(cè)結(jié)果作為血液放行必要條件的控制； e) 核酸檢測(cè)合格、不合格、待查結(jié)果與血液狀態(tài)關(guān)聯(lián)的正確性；f) 核酸檢測(cè)結(jié)果與獻(xiàn)血者獻(xiàn)血狀態(tài)關(guān)聯(lián)的正確性；g）血液檢測(cè)總結(jié)果報(bào)告的正確性。七、核酸檢測(cè)過(guò)程中的質(zhì)量控制具體檢測(cè)流程建議見(jiàn)附錄A、B。1.標(biāo)準(zhǔn)操作程序的要求1） 標(biāo)準(zhǔn)操作程序編寫(xiě)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用經(jīng)過(guò)評(píng)估和確認(rèn)的核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。滿足檢測(cè)的預(yù)期目的，同時(shí)應(yīng)有檢測(cè)過(guò)程的監(jiān)測(cè)記錄。標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)定期評(píng)審。評(píng)審?fù)ǔＣ磕暌淮?。評(píng)審應(yīng)文件化。2）標(biāo)準(zhǔn)操作程序的有效實(shí)施所有檢測(cè)程序應(yīng)文件化并使相關(guān)人員可在工作地點(diǎn)方便得到。文件化的程序可以以制造商提供的使用說(shuō)明書(shū)（如包裝插頁(yè)）為依據(jù)，但文件化的程序及必要的操作程序應(yīng)該是操作人員可理解和易于操作的。在有完整手冊(cè)可供參考的前提下，可以利用總結(jié)有關(guān)鍵信息的卡片文件或類(lèi)似系統(tǒng)供工作人員在工作臺(tái)上快速查閱?？ㄆ募蝾?lèi)似系統(tǒng)應(yīng)與完整手冊(cè)的內(nèi)容相對(duì)應(yīng)。任何類(lèi)似節(jié)略性程序均應(yīng)是文件控制系統(tǒng)的一部分。3）標(biāo)準(zhǔn)操作程序的修訂如果標(biāo)準(zhǔn)操作程序偏離制造商提供的使用說(shuō)明書(shū)，均應(yīng)進(jìn)行評(píng)估和確認(rèn)并有記錄。每個(gè)新采用的檢測(cè)試劑在方法或程序方面發(fā)生重要變化時(shí)，應(yīng)檢查其性能和對(duì)預(yù)期用途的適用性。與其他程序一樣，任何程序性變化都應(yīng)注明日期并經(jīng)授權(quán)。2.污染的控制1）單向工作流向制度實(shí)驗(yàn)室人員和物品的工作流向應(yīng)為試劑耗材儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)樣本處理區(qū)樣本制備（核酸純化）區(qū)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)，不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)用品包括實(shí)驗(yàn)材料（試劑、樣本和耗材等）、實(shí)驗(yàn)器材（包括容器、板架、實(shí)驗(yàn)服、帽子、口罩、手套、鞋套等）、辦公用品（記錄紙、筆等）以及清潔用具等，為便于鑒別，不同的工作區(qū)域應(yīng)使用不同顏色或有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服。當(dāng)工作者離開(kāi)工作區(qū)時(shí)，不得將各區(qū)特定的工作服帶出。2）防止實(shí)驗(yàn)室核酸產(chǎn)物污染和交叉污染的措施要避免污染，首先是預(yù)防而不是排除污染，因此需嚴(yán)格遵守以下原則：嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室分區(qū)制度；各區(qū)域只用于特定的操作，不得從事其它工作。3）儀器和材料的專(zhuān)用制度各區(qū)域的試劑、儀器、設(shè)備及各種物品包括實(shí)驗(yàn)記錄、標(biāo)記筆等均為該區(qū)專(zhuān)用，不得交叉使用；必須使用和儀器配套的帶濾芯吸頭。4）安全的操作行為實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，如處理樣本、對(duì)照品及手套被污染應(yīng)及時(shí)更換手套。在整個(gè)操作過(guò)程中，避免和減少在已經(jīng)開(kāi)蓋的樣本和耗材上部區(qū)域活動(dòng)。5）實(shí)驗(yàn)室的清潔實(shí)驗(yàn)后應(yīng)及時(shí)對(duì)設(shè)備及實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔，特別是廢液及使用過(guò)的消耗品應(yīng)及時(shí)按實(shí)驗(yàn)相關(guān)規(guī)定清離實(shí)驗(yàn)室，以防止擴(kuò)增后的產(chǎn)物對(duì)實(shí)驗(yàn)室的污染。去污染措施可以結(jié)合各種不同的方法以達(dá)到最佳效果，措施包括但不僅限下面幾種：1） 用一次性紙巾或無(wú)紡布清潔設(shè)備及臺(tái)面，清潔液包括含氯的清潔液及75%醫(yī)用酒精，含氯清潔液的有效氯濃度為5g/L，樣本灑漏或類(lèi)似污染狀況時(shí)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行局部清潔。2） 試驗(yàn)后紫外照射實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)面和其他表面應(yīng)達(dá)1h以上；3） 實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)。八、結(jié)果報(bào)告的分析1基本原則 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)對(duì)整體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析：包括陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果是否正常；IC是否有效（對(duì)于PCR檢測(cè)體系，IC應(yīng)在一定的CT值范圍內(nèi)）。在此基礎(chǔ)上觀察被檢測(cè)的特定待測(cè)物的有反應(yīng)、無(wú)反應(yīng)、有效、無(wú)效或可疑結(jié)果。對(duì)于可疑或無(wú)效結(jié)果按照檢測(cè)程序，核對(duì)實(shí)驗(yàn)樣本位置及編號(hào)重新進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于基于PCR檢測(cè)原理的檢測(cè)體系，應(yīng)觀察整體擴(kuò)增曲線，閾值設(shè)定是否合理。分析每個(gè)檢測(cè)的擴(kuò)增曲線，陰性應(yīng)在閾值線下無(wú)起跳，陽(yáng)性（包括室內(nèi)質(zhì)控和內(nèi)對(duì)照）呈典型的“S”擴(kuò)增曲線。對(duì)于判定界值后出現(xiàn)的特異擴(kuò)增曲線或非特異擴(kuò)增的曲線，應(yīng)分析原因，必要時(shí)對(duì)該樣本重新進(jìn)行檢測(cè)。2假陰性結(jié)果的原因分析（僅包括實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)范疇的因素）核酸擴(kuò)增的效率有賴(lài)于酶的活性和離子濃度等條件。影響核酸擴(kuò)增檢測(cè)效率（包括逆轉(zhuǎn)錄效率）的因素包括內(nèi)源性的，即樣本本身有抑制物；同時(shí)也包括外源性的，例如采血管里的某些成分、純化過(guò)程中引入的鰲合劑、表面活性劑、有機(jī)溶劑等。此外樣本裂解純化方法設(shè)計(jì)不合理或操作不當(dāng)，也有可能造成在樣本提取過(guò)程中核酸的降解，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。1） 內(nèi)源性抑制因素內(nèi)源性抑制物是指樣本本身含有的可以抑制DNA聚合酶活性，降低擴(kuò)增效率的物質(zhì)。在血液樣本中最常見(jiàn)的是血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物，因此在啟用核酸檢測(cè)系統(tǒng)前，應(yīng)對(duì)不同溶血程度的溶血樣本對(duì)檢測(cè)的干擾進(jìn)行評(píng)估。2） 外源性抑制因素外源性抑制因素主要來(lái)自于兩個(gè)途徑：一是采血管；二是提取純化過(guò)程。采血管不能采用肝素作為抗凝劑，因?yàn)楦嗡厥荄NA聚合酶的抑制劑；但采用EDTA抗凝的采血管時(shí)，應(yīng)考慮到EDTA有鰲合反應(yīng)體系中的錳離子和鎂離子的作用，同時(shí)采血管可能還有其他干擾反應(yīng)的成分，應(yīng)該在做檢測(cè)系統(tǒng)的確認(rèn)時(shí)，對(duì)采血管的適用性做出評(píng)估。純化過(guò)程有可能引入的包括試劑EDTA、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)、異硫氰酸胍和鹽酸胍以及一些有機(jī)溶劑，核酸純化如果不能有效去除這些溶劑，勢(shì)必影響擴(kuò)增檢測(cè)效率。3） 提取方法和操作因素有效的核酸提取純化方法應(yīng)該是使病毒充分裂解釋放出病毒核酸序列，同時(shí)又能保證該序列在后續(xù)步驟中不被降解或極少降解；最后得到純化核酸不應(yīng)含有內(nèi)源和外源性抑制物。3假陽(yáng)性結(jié)果的原因出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果主要有三方面原因：1） 樣本間的交叉污染陽(yáng)性樣本、陽(yáng)性對(duì)照和陽(yáng)性質(zhì)控都有可能成為交叉污染的污染源。由于交叉污染經(jīng)常是偶然發(fā)生的事件，發(fā)生后很難被發(fā)現(xiàn)。因此應(yīng)該采取避免交叉污染的措施。措施應(yīng)包括在檢測(cè)系統(tǒng)評(píng)估時(shí)，對(duì)開(kāi)蓋、樣本匯集、加樣、核酸純化等環(huán)節(jié)進(jìn)行交叉污染風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；在操作要求中應(yīng)該有避免上述污染產(chǎn)生的措施，包括陽(yáng)性對(duì)照開(kāi)蓋后應(yīng)更換手套、使用帶濾芯的吸頭等。2） 擴(kuò)增產(chǎn)物（擴(kuò)增子）的污染擴(kuò)增產(chǎn)物很小的核酸片段，它們可以存在于空氣中，也可以附著在儀器或操作臺(tái)表面。3） 非特異擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)也可能會(huì)出現(xiàn)非特異的擴(kuò)增，原因有可能是檢測(cè)體系本身的問(wèn)題，也可能是樣本中存在的干擾物質(zhì)造成。4 結(jié)果的審核應(yīng)由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)并被授權(quán)者審核后，才可發(fā)布檢測(cè)結(jié)果。審核應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：1） 檢測(cè)前信息的確認(rèn)：包括樣本、試劑、設(shè)備狀態(tài)；2） 檢測(cè)過(guò)程的監(jiān)測(cè)：設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)，樣本在檢測(cè)過(guò)程中的保存狀態(tài)；3） 結(jié)果有效性的判定：包括內(nèi)對(duì)照、陰陽(yáng)性對(duì)照和室內(nèi)質(zhì)控的情況；4） 陰性或反應(yīng)性結(jié)果的判定：確認(rèn)其無(wú)交叉污染可能，包括同批次或相近樣本有無(wú)強(qiáng)陽(yáng)性、是否本批次檢測(cè)陽(yáng)性率偏高等，然后追溯反應(yīng)性樣本編號(hào)。5結(jié)果的保存實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存所報(bào)告結(jié)果的文檔或復(fù)件，并可快速檢索。所報(bào)告數(shù)據(jù)保留時(shí)間的長(zhǎng)短可不同，但可檢索期限應(yīng)滿足實(shí)驗(yàn)室的需要，并符合國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求。九、質(zhì)量控制核酸檢測(cè)的質(zhì)量保證體系應(yīng)該覆蓋從實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行前的設(shè)計(jì)確認(rèn)到開(kāi)始運(yùn)行后的樣本采集、檢測(cè)、結(jié)果報(bào)告分析的全過(guò)程。其最根本的目的是得到準(zhǔn)確有效的檢測(cè)結(jié)果。核酸檢測(cè)質(zhì)量保證的關(guān)鍵環(huán)節(jié)包括實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、環(huán)境、試劑、設(shè)備、人員等多個(gè)方面。其中最重要的是如何控制假陰性及假陽(yáng)性結(jié)果。因此建立嚴(yán)格的質(zhì)量控制程序是核酸實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的重要保障。1 室內(nèi)質(zhì)控1）室內(nèi)質(zhì)控的基本要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。實(shí)驗(yàn)室的每一批檢測(cè)應(yīng)至少有一個(gè)弱陽(yáng)性室內(nèi)質(zhì)控品，該室內(nèi)質(zhì)控品應(yīng)參與混樣、核酸純化、拆分或聯(lián)檢及鑒別檢測(cè)的全過(guò)程。弱陽(yáng)性質(zhì)控品建議濃度為檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)下限的2-5倍（在混合檢測(cè)的體系中，此檢測(cè)下限是指混合檢測(cè)時(shí)的檢測(cè)下限）。2）室內(nèi)質(zhì)控的模式室內(nèi)質(zhì)控的濃度選擇、頻次、樣本數(shù)量因核酸檢測(cè)模式的不同而不同，建議的模式和流程見(jiàn)附錄E。室內(nèi)質(zhì)控的判定規(guī)則可以是混檢、拆分或聯(lián)檢、鑒別為陽(yáng)性，基于聚合酶鏈反應(yīng)原理的檢測(cè)方法也可以用CT值作為檢測(cè)值做質(zhì)控圖。2.室間質(zhì)量評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加第三方機(jī)構(gòu)組織的血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室管理層應(yīng)定期審核質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果，當(dāng)未達(dá)到控制標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)參與實(shí)施糾正措施。1）室間質(zhì)量評(píng)樣本的接收實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該按照室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃，核實(shí)樣本寄送狀態(tài)，在接收樣本后按要求條件保存，并有相應(yīng)記錄。2）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)樣本的檢測(cè)采用單人份檢測(cè)模式的實(shí)驗(yàn)室可以將樣本按照獻(xiàn)血者樣本相同對(duì)待進(jìn)行檢測(cè)，而采用混樣檢測(cè)模式的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該將每份室間質(zhì)評(píng)樣本都與5份（6份混樣的模式）或7份獻(xiàn)血者樣本（8份混樣的模式）進(jìn)行混合檢測(cè)，混合檢測(cè)陽(yáng)性的進(jìn)行進(jìn)一步拆分，陰性的則可直接填報(bào)陰性結(jié)果，以保證室間質(zhì)評(píng)樣本參與檢測(cè)的全過(guò)程，并與獻(xiàn)血者樣本在相同條件下進(jìn)行檢測(cè)。在用的不同核酸檢測(cè)系統(tǒng)均應(yīng)參加質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)。3）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果的分析反饋的室間質(zhì)評(píng)檢測(cè)結(jié)果如果提示存在假陽(yáng)性或假陰性的問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)及時(shí)分析原因，采取糾正措施并有相應(yīng)記錄。十、監(jiān)控及持續(xù)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室除了應(yīng)有效控制各類(lèi)污染的發(fā)生，保證樣本可以有效地檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)的問(wèn)題及時(shí)采取糾正措施以外，還應(yīng)從數(shù)據(jù)的定期分析、監(jiān)控與不符合分析等方面及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，采取措施，保證質(zhì)量體系的穩(wěn)定運(yùn)行。1.數(shù)據(jù)的定期分析應(yīng)定期分析混樣檢測(cè)陽(yáng)性率和拆分陽(yáng)性率或聯(lián)檢陽(yáng)性率和鑒別陽(yáng)性率等指標(biāo)，同時(shí)結(jié)合當(dāng)?shù)氐牧餍胁W(xué)數(shù)據(jù)和其他實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)，分析檢測(cè)結(jié)果的可靠性。2.監(jiān)控與不符合分析血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)持續(xù)監(jiān)控、回顧和評(píng)價(jià)核酸檢測(cè)全過(guò)程，實(shí)施不符合項(xiàng)管理，使核酸檢測(cè)過(guò)程始終處于受控狀態(tài)，確保核酸檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性。核酸檢測(cè)過(guò)程監(jiān)控方法可收集質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)數(shù)據(jù)，采用統(tǒng)計(jì)過(guò)程控制（SPC）的方法，進(jìn)行過(guò)程趨勢(shì)分析。不符合項(xiàng)管理過(guò)程中，應(yīng)針對(duì)問(wèn)題發(fā)生的根本原因采取糾正措施和預(yù)防措施，防止同類(lèi)不符合的再次發(fā)生。在核酸擴(kuò)增檢測(cè)過(guò)程中，任何一個(gè)環(huán)節(jié)都可能影響到多個(gè)檢測(cè)結(jié)果，因此對(duì)于檢測(cè)結(jié)果無(wú)效或不滿意時(shí)應(yīng)及時(shí)分析原因并給予糾正。3. 實(shí)驗(yàn)室發(fā)生核酸殘余污染的處理及驗(yàn)證原則一旦發(fā)生污染后，圍繞實(shí)驗(yàn)室尋找污染源耗時(shí)且很繁瑣，所以防止污染重在預(yù)防。但如果發(fā)生了污染，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直到發(fā)現(xiàn)了污染源并清除污染為止，并且污染期間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均無(wú)效。污染清除的驗(yàn)證： 可從樣本開(kāi)蓋環(huán)節(jié)開(kāi)始，混樣、提取純化和檢測(cè)每個(gè)步驟用純水代替樣本進(jìn)行驗(yàn)證，觀察是否有陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)果的出現(xiàn)。如有，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室仍有污染存在，必須清潔至所有水樣本均檢測(cè)為陰性，實(shí)驗(yàn)室才可重新啟用。名詞中英文對(duì)照表A附錄A 血液病毒核酸混合樣本檢測(cè)流程AB附錄B血液病毒核酸單人份檢測(cè)流程BC附錄C 核酸檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控流程附件1 血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收?qǐng)?bào)告血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收?qǐng)?bào)告 申請(qǐng)驗(yàn)收血站名稱(chēng)： 驗(yàn)收專(zhuān)家組組長(zhǎng)姓名： 簽名: 驗(yàn)收專(zhuān)家組成員姓名： 簽名: 驗(yàn)收專(zhuān)家組成員姓名： 簽名: 協(xié)調(diào)員姓名： 簽名: 驗(yàn)收時(shí)間： 年 月 日一、血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室基本情況（一）實(shí)驗(yàn)室所屬法人單位名稱(chēng): 地址： 郵編： 法定代表人： 實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人： 聯(lián) 系 人： email： 電 話： 傳真： 核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室數(shù)量 核酸檢測(cè)設(shè)備名稱(chēng)1. 數(shù)量 臺(tái)/套 核酸檢測(cè)設(shè)備名稱(chēng)2. 數(shù)量 臺(tái)/套 核酸檢測(cè)設(shè)備名稱(chēng)3. 數(shù)量 臺(tái)/套 (二)接受現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收的實(shí)驗(yàn)室代表姓名及職務(wù)： 姓名1. 職務(wù)/職稱(chēng) 姓名2. 職務(wù)/職稱(chēng) 姓名3. 職務(wù)/職稱(chēng) 姓名4. 職務(wù)/職稱(chēng) 姓名5. 職務(wù)/職稱(chēng) 二、驗(yàn)收依據(jù): 血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范和血站核酸檢測(cè)工作導(dǎo)則。 三、技術(shù)驗(yàn)收 合格，建議授予驗(yàn)收合格證書(shū)，并開(kāi)始運(yùn)行核酸檢測(cè)。 基本合格，尚存在部份缺陷，缺陷為 項(xiàng),限期改進(jìn),改進(jìn)后將資料報(bào)驗(yàn)收專(zhuān)家復(fù)核，符合要求后方可開(kāi)始試運(yùn)行核酸檢測(cè)。 不合格，實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)后需重新申請(qǐng)技術(shù)驗(yàn)收。(一) 現(xiàn)場(chǎng)對(duì)技術(shù)人員提問(wèn)考核情況(二) 驗(yàn)收中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題及意見(jiàn) 附表1：血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表；附表2：血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收意見(jiàn)匯總表； (三) 需要說(shuō)明的其它問(wèn)題：可以用文字或表格的形式提交。 驗(yàn)收組意見(jiàn): 表1-1 血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn) 收 內(nèi) 容 驗(yàn) 收 意 見(jiàn)符合基本符合不符合缺此項(xiàng)評(píng)論與說(shuō)明1人員1.1應(yīng)有與核酸檢測(cè)業(yè)務(wù)相適應(yīng)的崗位設(shè)置和人員配備，滿足從血液標(biāo)本采集、接收到實(shí)驗(yàn)室報(bào)告發(fā)出的整個(gè)核酸檢測(cè)過(guò)程及其支持保障等需求 。 1.2核酸檢測(cè)相關(guān)工作人員應(yīng)具有明確的崗位說(shuō)明，以明確各個(gè)崗位的職責(zé)和需要達(dá)到的標(biāo)準(zhǔn)。1.3實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)核酸檢測(cè)技術(shù)的專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，并取得培訓(xùn)合格證書(shū)或有相應(yīng)的記錄。1.4實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有技術(shù)培訓(xùn)計(jì)劃，技術(shù)培訓(xùn)內(nèi)容應(yīng)包括工作人員所涉及的所有工作范疇，操作人員的操作誤差分析、檢測(cè)過(guò)程變更可作為培訓(xùn)需求納入培訓(xùn)活動(dòng)。培訓(xùn)的評(píng)估結(jié)果是確定人員能力的依據(jù)。1.5實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立操作人員能力評(píng)估機(jī)制。每年至少實(shí)施一次人員的能力評(píng)估。參照評(píng)估結(jié)果制定人員持續(xù)培訓(xùn)計(jì)劃。需記錄人員的能力評(píng)估過(guò)程。1.6應(yīng)保存其技術(shù)人員有關(guān)資格、培訓(xùn)、技能和經(jīng)歷等技術(shù)業(yè)績(jī)檔案。2實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、設(shè)施2.1實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施、工作區(qū)域、能源、照明、溫控、通風(fēng)等應(yīng)便于檢測(cè)工作的正常進(jìn)行。擴(kuò)增前和擴(kuò)增后區(qū)域應(yīng)具有獨(dú)立通風(fēng)系統(tǒng)。2.2核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有限制進(jìn)入的要求，非授權(quán)人員不得進(jìn)入核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。2.3應(yīng)有實(shí)驗(yàn)室“內(nèi)務(wù)管理”（如人員流動(dòng)、清潔等）制度及相應(yīng)的用具；表1-2血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn) 收 內(nèi) 容驗(yàn) 收 意 見(jiàn)符合基本符合不符合缺此項(xiàng)評(píng)論與說(shuō)明2.4設(shè)置有備用實(shí)驗(yàn)室的，應(yīng)同時(shí)滿足上述要求。2.5實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有UPS電源、消防設(shè)施、醫(yī)療廢物處置區(qū)域、可逃生的通道、生物安全應(yīng)急處理設(shè)施、充足的照明及噪音控制裝置。3實(shí)驗(yàn)室分區(qū)及要求3.1實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化分區(qū)：原則上應(yīng)分為四區(qū)，但根據(jù)使用設(shè)備情況，可適當(dāng)合并區(qū)域，應(yīng)符合以下原則：1）采用樣本匯集及核酸純化一體的設(shè)備，可以將樣本處理區(qū)與樣本制備區(qū)進(jìn)行合并；2）核酸純化及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的全自動(dòng)分析儀，可將樣本制備區(qū)與擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)合并；3）不需做混樣檢測(cè)，且核酸純化檢測(cè)為一體的檢測(cè)系統(tǒng)可將樣本處理區(qū)、樣本制備區(qū)和擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)合并。3.2各工作區(qū)的明確標(biāo)記3.3實(shí)驗(yàn)室設(shè)置應(yīng)能有效地防止核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。各區(qū)應(yīng)具有有效的消毒設(shè)施。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期對(duì)消毒效果實(shí)施監(jiān)控。3.4核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備專(zhuān)用工作服和工作鞋3.5試劑耗材儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)（a） 獨(dú)立設(shè)置（b） 環(huán)境溫濕度的控制（c） 適用的冰箱及冰箱溫度監(jiān)控（d） 可移動(dòng)的物品如實(shí)驗(yàn)凳、取用記錄、筆等有區(qū)域標(biāo)識(shí)3.6樣本處理區(qū)（含混樣區(qū)）表1-3血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn) 收 內(nèi) 容驗(yàn) 收 意 見(jiàn)符合基本符合不符合缺此項(xiàng)評(píng)論與說(shuō)明(a) 環(huán)境溫濕度的控制(b) 適用的冰箱及冰箱溫度監(jiān)控(c) 可移動(dòng)的物品如實(shí)驗(yàn)凳、記錄、筆等有區(qū)域標(biāo)識(shí)(d) 生物安全柜的狀態(tài)標(biāo)識(shí)(e) 有效控制開(kāi)蓋造成交叉污染的設(shè)施(f) 有效消除核酸污染的設(shè)施，如可移動(dòng)紫外燈等。3.7樣本制備（核酸純化）區(qū)(a) 環(huán)境溫濕度的控制(b) 適用的冰箱及冰箱溫度監(jiān)控(c) 可移動(dòng)的物品如實(shí)驗(yàn)凳、取用記錄、筆等有區(qū)域標(biāo)識(shí)(d) 核酸純化儀的狀態(tài)標(biāo)識(shí)3.8擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)(a) 環(huán)境溫濕度的控制(b) 擴(kuò)增檢測(cè)設(shè)備配有穩(wěn)壓電源(c) 擴(kuò)增檢測(cè)設(shè)備的狀態(tài)標(biāo)識(shí)(d) 可移動(dòng)的物品如實(shí)驗(yàn)凳、取用記錄、筆等有區(qū)域標(biāo)識(shí)(e) 核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀的狀態(tài)標(biāo)識(shí)4檢測(cè)系統(tǒng)的確認(rèn)、運(yùn)行與維護(hù)4.1關(guān)鍵設(shè)備：核酸檢測(cè)系統(tǒng)、信息系統(tǒng)（包括硬件和軟件）滿足檢測(cè)工作需要4.2配套設(shè)備：離心機(jī)、冷藏冷凍設(shè)備、純水儀等滿足樣本采集、處理和保存的工作要求4.3對(duì)新進(jìn)核酸檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行確認(rèn)，應(yīng)有廠商的安裝確認(rèn)報(bào)告。表1-4血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn) 收 內(nèi) 容驗(yàn) 收 意 見(jiàn)符合基本符合不符合缺此項(xiàng)評(píng)論與說(shuō)明4.4對(duì)每個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行分析靈敏度驗(yàn)證。4.5實(shí)驗(yàn)室依據(jù)設(shè)備廠家說(shuō)明書(shū)或操作手冊(cè)，建立有可操作性的設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。操作規(guī)程需定期評(píng)審，以適應(yīng)檢測(cè)過(guò)程的變化。4.6實(shí)驗(yàn)室需建立設(shè)備維護(hù)計(jì)劃和維護(hù)程序，明確設(shè)備維護(hù)分級(jí)、周期及職責(zé)，采用監(jiān)控指標(biāo)監(jiān)控設(shè)備的維護(hù)效果，使設(shè)備始終處于在控狀態(tài)。設(shè)備維護(hù)內(nèi)容應(yīng)包括日維護(hù)、周維護(hù)、月維護(hù)和視需要的進(jìn)行的維護(hù)。4.7對(duì)于設(shè)備維護(hù)狀況應(yīng)建立檢測(cè)系統(tǒng)回顧性評(píng)價(jià)指標(biāo)，包括初篩陽(yáng)性率（混檢或聯(lián)檢陽(yáng)性率）、鑒別陽(yáng)性率、拆分陽(yáng)性率等。4.8如果任一設(shè)備有問(wèn)題應(yīng)立即停止使用，并加上明顯標(biāo)識(shí)，防止誤用。4.9*如果設(shè)備故障可能影響了方法學(xué)性能，修復(fù)后的設(shè)備應(yīng)經(jīng)校準(zhǔn)、驗(yàn)證或檢測(cè)表明其達(dá)到規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)后方可使用。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)檢查上述故障對(duì)之前檢驗(yàn)的影響，必要時(shí)對(duì)之前的數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估和驗(yàn)證。4.10實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取合理措施在設(shè)備投入使用、修理或退役之前對(duì)其是否被污染進(jìn)行確認(rèn)。4.11應(yīng)維持設(shè)備的安全工作狀態(tài)，包括檢查電氣安全，緊急停止裝置，以及由授權(quán)人員安全操作及處置化學(xué)和生物材料。4.12應(yīng)將所采取降低污染措施的內(nèi)容清單提供給使用該設(shè)備工作人員。4.13實(shí)驗(yàn)室應(yīng)留出合適的空間以供設(shè)備修理和放置適當(dāng)個(gè)人防護(hù)裝備。4.14混樣設(shè)備、核酸純化設(shè)備、擴(kuò)增檢測(cè)設(shè)備等的檔案應(yīng)遵從血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范設(shè)備檔案管理要求。表1-5血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn) 收 內(nèi) 容驗(yàn) 收 意 見(jiàn)符合基本符合不符合缺此項(xiàng)評(píng)論與說(shuō)明4.15*備用實(shí)驗(yàn)室或者備用設(shè)備應(yīng)滿足4.1-4.13要求，同時(shí)以月為單位實(shí)際完成檢測(cè)樣本量不少于核酸檢測(cè)總量的20%。以其他單位互為備份，應(yīng)保證應(yīng)急情況下實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。本單位有備份實(shí)驗(yàn)室,建議采用不同的檢測(cè)系統(tǒng),以保證實(shí)驗(yàn)室污染或試劑出問(wèn)題時(shí)的應(yīng)急檢測(cè)。5試劑和耗材5.1試劑和耗材的選擇和采購(gòu)應(yīng)遵循血站相應(yīng)的管理制度，同時(shí)滿足核酸檢測(cè)樣本采集、檢測(cè)質(zhì)量要求。5.2應(yīng)有試劑耗材的外觀、包裝及運(yùn)輸狀態(tài)等的質(zhì)量要求；樣本匯集管、核酸提取純化和擴(kuò)增檢測(cè)使用的消耗品如為非核酸檢測(cè)試劑廠商提供時(shí),應(yīng)每批進(jìn)行有無(wú)干擾物的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。5.3試劑和耗材的應(yīng)保存在試劑耗材儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)。在經(jīng)過(guò)質(zhì)檢后的試劑可將試劑盒內(nèi)的陽(yáng)性對(duì)照和質(zhì)控品放置于樣本混樣處理區(qū)的冰箱內(nèi)，使用前應(yīng)核對(duì)試劑耗材的規(guī)格、批號(hào)，按相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作并作相應(yīng)記錄。6樣本的采集與管理6.1血站應(yīng)有采血管規(guī)格和質(zhì)量要求6.2標(biāo)本采集量應(yīng)滿足檢測(cè)要求6.3制定標(biāo)本采集后的處理與保存程序。標(biāo)本在采血現(xiàn)場(chǎng)保存溫度通常為2-10。采集后的標(biāo)本宜在4小時(shí)內(nèi)實(shí)施離心，分離紅細(xì)胞和血漿。如不能按上述要求處理采集標(biāo)本，應(yīng)對(duì)所采用的標(biāo)本保存、處理（離心時(shí)間和條件）等條件進(jìn)行保證弱陽(yáng)性樣本有效檢出的確認(rèn)，并定期進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。表1-6血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn) 收 內(nèi) 容驗(yàn) 收 意 見(jiàn)符合基本符合不符合缺此項(xiàng)評(píng)論與說(shuō)明6.4標(biāo)本應(yīng)隔離密封包裝，包裝材料應(yīng)滿足防水、防破損、防外泄、易于消毒處理。裝箱時(shí)應(yīng)保持標(biāo)本管口向上。同時(shí)運(yùn)輸溫度應(yīng)在2-10，標(biāo)本和冷源不應(yīng)直接接觸，并有溫度監(jiān)測(cè)措施。6.5建議明確的標(biāo)本接受的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，明確拒收原因，標(biāo)本應(yīng)滿足標(biāo)簽條形碼清晰，無(wú)血漬、無(wú)劃痕，離心后運(yùn)送的標(biāo)本血漿和紅細(xì)胞應(yīng)被分離膠隔離等要求。6.6標(biāo)本采集后在檢測(cè)前應(yīng)保存在2-8條件下，并于采樣后72小時(shí)內(nèi)完成核酸檢測(cè)。如樣本無(wú)法在72小時(shí)內(nèi)完成核酸檢測(cè)，樣本應(yīng)保存于-20以下。6.7接收后的標(biāo)本應(yīng)有明確的保存、離心、開(kāi)蓋等的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，并有防止樣本間交叉污染的措施。6.8進(jìn)行混樣后或進(jìn)行聯(lián)檢后的樣本應(yīng)有明確的保存要求并有防止交叉污染的措施。6.9如果對(duì)標(biāo)本是否適用于檢測(cè)有任何疑問(wèn)，包括標(biāo)本與所要求的不符、檢測(cè)的要求規(guī)定不完全等，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該在工作開(kāi)始之前詢(xún)問(wèn)相關(guān)科室，要求進(jìn)一步予以說(shuō)明。 6.10應(yīng)保障標(biāo)本貯存或處置環(huán)境條件（如28、-20和-70低溫），并加以維持、監(jiān)控和記錄；7信息系統(tǒng)7.1應(yīng)建立和使用血液核酸檢測(cè)計(jì)算機(jī)信息管理系統(tǒng)，覆蓋標(biāo)本采集、接收、檢測(cè)報(bào)告發(fā)布、血液發(fā)放或報(bào)廢、不合格獻(xiàn)血者屏蔽等全過(guò)程。7.2信息系統(tǒng)在將核酸檢測(cè)納入常規(guī)檢測(cè)時(shí)應(yīng)至少對(duì)以下環(huán)節(jié)進(jìn)行確認(rèn)：表1-7 血站核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收表序號(hào)驗(yàn) 收 內(nèi) 容驗(yàn) 收 意