第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)-天然藥物化學(xué)課程.doc

第十七章腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)為了提高對(duì)腫瘤的早期檢測(cè)、鑒別診斷、療效觀察以及預(yù)后判斷，人們從腫瘤細(xì)胞的化學(xué)特性、細(xì)胞病理、免疫反應(yīng)和基因表達(dá)產(chǎn)物等諸多方面尋找各種特異性強(qiáng)、靈敏度高的腫瘤標(biāo)志物。腫瘤標(biāo)志物的研究對(duì)腫瘤的診斷有極其重要的意義。第一節(jié)概 述一、腫瘤標(biāo)志物的概念所謂腫瘤標(biāo)志物，指在腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞合成、釋放，存在于組織、細(xì)胞或體液中，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類(lèi)物質(zhì)。通過(guò)對(duì)這類(lèi)物質(zhì)的分析，能幫助人們從正常組織中區(qū)別腫瘤或測(cè)定腫瘤細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)以及對(duì)細(xì)胞膜上的特性進(jìn)行分析，以此作為辨認(rèn)腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志。理想的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)該具有下列條件：標(biāo)志物的含量變化應(yīng)與腫瘤的生長(zhǎng)、消退、轉(zhuǎn)移有直接的定性或定量的比例關(guān)系；標(biāo)志物應(yīng)具有較高的特異性，能比較明顯地區(qū)別于正常人群和良性腫瘤；檢測(cè)這類(lèi)標(biāo)志物的方法簡(jiǎn)便，易推廣，而且成本較低。根據(jù)腫瘤標(biāo)志物的來(lái)源以及它的特異性，大致可分為兩大類(lèi)。1.腫瘤特異性標(biāo)志物 是一種腫瘤所產(chǎn)生的特異性物質(zhì)。例如前列腺特異性抗原（PSA）就是前列腺腫瘤所產(chǎn)生的特異性標(biāo)志物質(zhì)，只有患前列腺癌時(shí)，PSA才會(huì)顯著性升高。2.腫瘤輔助標(biāo)志物 由一類(lèi)組織類(lèi)型相似而性質(zhì)不同的腫瘤產(chǎn)生，其含量有較大的變化。這類(lèi)標(biāo)志物往往易同良性腫瘤或正常組織發(fā)生混淆。二、腫瘤標(biāo)志物的分類(lèi)腫瘤標(biāo)志物分類(lèi)大致有兩種：其一按腫瘤標(biāo)志物的來(lái)源，第二是按腫瘤標(biāo)志物本身的化學(xué)特性。主要包括：腫瘤胚胎性抗原標(biāo)志物；糖類(lèi)標(biāo)志物；酶類(lèi)標(biāo)志物；激素類(lèi)標(biāo)志物；蛋白質(zhì)類(lèi)標(biāo)志物；基因類(lèi)標(biāo)志物。三、腫瘤標(biāo)志物的臨床應(yīng)用近年來(lái)，腫瘤標(biāo)志物在臨床上已得到較廣泛的應(yīng)用， 目前主要應(yīng)用于：腫瘤的普查；腫瘤高危人群的篩選；腫瘤的診斷和鑒別診斷；腫瘤監(jiān)測(cè)；腫瘤分類(lèi)、分期、定位；腫瘤治療。第二節(jié)常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物的測(cè)定一、胚胎性抗原標(biāo)志物的測(cè)定在人類(lèi)發(fā)育過(guò)程中，許多原本只在胎盤(pán)期才具有蛋白類(lèi)物質(zhì)，應(yīng)隨胎兒的出生而逐漸停止合成和分泌，但因某種因素的影響，特別是腫瘤狀態(tài)時(shí)，會(huì)使得機(jī)體一些“關(guān)閉”的基因激活，出現(xiàn)了返祖現(xiàn)象，而重新開(kāi)啟并重新生成和分泌這些胚胎、胎兒期的蛋白。胚胎類(lèi)腫瘤標(biāo)志物名 稱(chēng)性 質(zhì)相 關(guān) 腫 瘤甲胎蛋白糖蛋白70ku肝細(xì)胞、胚細(xì)胞（非精原細(xì)胞瘤）-癌胚抗原80ku結(jié)腸癌胚鐵蛋白糖蛋白600ku肝癌胚抗原糖蛋白22ku結(jié)腸、直腸、胰腺、肺、乳腺胰癌胚抗原糖蛋白40ku胰腺鱗狀細(xì)胞抗原糖蛋白44-48ku肺、皮膚、頭和頸部組織多肽抗原細(xì)胞角蛋白8.18.19乳腺、結(jié)腸這類(lèi)蛋白雖然與腫瘤組織不一定都具有特定的相關(guān)性，但與腫瘤的發(fā)生存在著內(nèi)在的聯(lián)系，故被作為一種較為常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物。（一）甲胎蛋白（AFP）AFP主要是由胎肝細(xì)胞和卵黃囊合成的單一多聚體肽鏈的糖蛋白。其分子量平均為70ku，含糖4。AFP在電場(chǎng)中泳動(dòng)于-球蛋白區(qū)，是胎兒血清中的主要蛋白質(zhì)。1964年Tatarinov發(fā)現(xiàn)肝癌患者血清中檢測(cè)到AFP?！菊⒖挤秶砍扇搜獫{AFP濃度低于25g/L?！九R床意義】AFP是原發(fā)性肝癌的最靈敏、最特異的腫瘤標(biāo)志物，80%以上的原發(fā)性肝癌患者血清AFP明顯增高，AFP檢測(cè)診斷肝癌的標(biāo)準(zhǔn)為：血清AFP測(cè)定結(jié)果大于500g/L持續(xù)4周；AFP含量有不斷增高者；血清AFP測(cè)定結(jié)果大于200g/L持續(xù)8周。肝癌患者血清AFP含量變化的速率和程度與腫瘤組織分化程度高低有一定相關(guān)性，分化程度較高的腫瘤AFP含量常大于200g/L。血清AFP含量的檢測(cè)對(duì)其它腫瘤的監(jiān)測(cè)亦有重要臨床價(jià)值。如睪丸癌、畸胎瘤、胃癌、胰腺癌等患者血清AFP含量可以升高。（二）癌胚抗原（CEA）癌胚抗原是1965年Gold和Freedman首先從胎兒及結(jié)腸癌組織中發(fā)現(xiàn)的，CEA是一種分子量為22ku的多糖蛋白復(fù)合物，45為蛋白質(zhì)。CEA的編碼基因位于19號(hào)染色體。一般情況下，CEA是由胎兒胃腸道上皮組織、胰和肝的細(xì)胞所合成，通常在妊娠前6個(gè)月內(nèi)CEA含量增高，出生后血清中含量很低?！菊⒖挤秶砍扇搜逯蠧EA濃度小于2.5g/L?！九R床意義】當(dāng)CEA大于60g/L時(shí)，可見(jiàn)于結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌和肺癌。CEA值升高，表明有病變殘存或進(jìn)展。如肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌患者血清CEA量會(huì)明顯升高，大多顯示為腫瘤浸潤(rùn)，其中約70為轉(zhuǎn)移性癌。一般來(lái)說(shuō)，手術(shù)切除后6周，CEA水平恢復(fù)正常，否則提示有殘存腫瘤，若CEA濃度持續(xù)不斷升高，或其數(shù)值超過(guò)正常5-6倍者均提示預(yù)后不良。二、糖類(lèi)抗原標(biāo)志物的測(cè)定腫瘤標(biāo)志物相關(guān)物質(zhì)是指由腫瘤細(xì)胞表面的抗原物質(zhì)或者是腫瘤細(xì)胞所分泌的物質(zhì)，這類(lèi)物質(zhì)又是單克隆抗體，故又稱(chēng)為糖類(lèi)抗原（carbohydrate antigen，CA）。這類(lèi)標(biāo)志物出現(xiàn)為臨床腫瘤的診斷帶來(lái)方便，糖類(lèi)抗原標(biāo)志物產(chǎn)生又可分為兩大類(lèi)，為高分子粘蛋白類(lèi)和血型類(lèi)抗原。糖類(lèi)高分子粘蛋白抗原腫瘤標(biāo)志物名 稱(chēng)性 質(zhì)癌 腫常用單克隆抗體CA125糖蛋白200ku卵巢、子宮內(nèi)膜OC125CA15-3糖蛋白400ku乳腺、卵巢DF3和115D3CA549高分子量糖蛋白乳腺、卵巢BC4E549BC4n154CA27.29高分子量糖蛋白乳腺B27.29DU-PAN-2粘蛋白100-500ku胰腺、卵巢、胃DU-PAN-2血型類(lèi)抗原腫瘤標(biāo)志物名 稱(chēng)性 質(zhì)癌 腫常用單克隆抗體CA19-9唾液酸化Lexa胰腺、胃腸、肝116NS19-9CA19-5唾液酸化Lea和Leag胃腸、卵巢116NS19-5CA50唾液酸化Lea胰腺、胃腸、結(jié)腸Colo-50CA72-4唾液酸化Tn卵巢、乳腺、胃腸、結(jié)腸B27.3.cc49CA242唾液酸化CHO結(jié)腸、直腸、胰腺C242這類(lèi)抗原標(biāo)志物的命名是沒(méi)有規(guī)律的，有些是腫瘤細(xì)胞株的編號(hào)，有些是抗體的物質(zhì)編號(hào)，常用檢測(cè)方法是單克隆抗體法。（一）CA19-9CA19-9是1979年Koprowski等用結(jié)腸癌細(xì)胞免疫小鼠，并與骨髓瘤雜交所得116NS19-9單克隆抗體，它是一種分子量為5000ku的低聚糖類(lèi)腫瘤相關(guān)糖類(lèi)抗原，其結(jié)構(gòu)為L(zhǎng)ea血型抗原物質(zhì)與唾液酸Lexa的結(jié)合物?！菊⒖挤秶垦錍A19-9含量為216U/ml（RIA法）?！九R床意義】CA19-9是胰腺癌和結(jié)、直腸癌的標(biāo)志物。血清CA19-9陽(yáng)性臨界值為37U/ml。胰腺癌患者85以上為陽(yáng)性。腫瘤切除后CA19-9濃度會(huì)下降，如再上升，則可表示復(fù)發(fā)。結(jié)直腸癌、膽囊癌、膽管癌、肝癌和胃癌的陽(yáng)性率也會(huì)很高，若同時(shí)檢測(cè)CEA和AFP可進(jìn)一步提高陽(yáng)性檢測(cè)率。良性疾患時(shí)如胰腺炎和黃疸，CA19-9濃度也可增高，但往往呈“一過(guò)性”，而且其濃度多低于120U/ml，必須加以鑒別。（二）CA125CA125是一種大分子多聚糖蛋白，是重要的卵巢癌相關(guān)抗原。分子量為200ku，加熱至100時(shí)CA125的活性破壞?！菊⒖挤秶垦錍A12535.0U/ml（RIA法）。CA125是上皮性卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的標(biāo)志物，漿液性子宮內(nèi)膜樣癌、透明細(xì)胞癌、輸卵管癌及未分化卵巢癌患者的CA125含量可明顯升高。當(dāng)卵巢癌復(fù)發(fā)時(shí)，在臨床確診前幾個(gè)月便可呈現(xiàn)CA125增高，尤其卵巢癌轉(zhuǎn)移患者的血清CA125更明顯高于正常參考值。動(dòng)態(tài)觀察血清CA125濃度有助于卵巢癌的預(yù)后評(píng)價(jià)和治療控制，經(jīng)治療后，CA125含量可明顯下降，若不能恢復(fù)至正常范圍，應(yīng)考慮有殘存腫瘤的可能。（三）CA15-3CA15-3是一種乳腺癌相關(guān)抗原，于1984年由Kufu和Hilkens等人發(fā)現(xiàn)，CA15-3分子量為400ku，分子結(jié)構(gòu)尚未清楚?！菊⒖挤秶垦錍A15-328U/ml（RIA法）?！九R床意義】30%50%的乳腺癌患者CA15-3明顯升高，它也是監(jiān)測(cè)乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的最佳指標(biāo)，當(dāng)CA15-3大于100U/ml時(shí)，可認(rèn)為有轉(zhuǎn)移性病變，其含量的變化與治療結(jié)果密切相關(guān)。肺癌、胃腸癌、卵巢癌及宮頸癌患者的血清CA15-3也可升高，應(yīng)予以鑒別，特別要排除部分妊娠引起的含量升高。（四）CA50CA50是1983年Lindholm等從抗人結(jié)、直腸癌Colo-205細(xì)胞株的一系列單克隆抗體中篩選出的一株對(duì)結(jié)、直腸癌有強(qiáng)烈反應(yīng)，但不與骨髓瘤細(xì)胞及血淋巴細(xì)胞反應(yīng)的單克隆抗體，所能識(shí)別的抗原稱(chēng)CA50。CA50存在于細(xì)胞膜內(nèi)，其抗原決定簇為唾液酸Lea血型物質(zhì)與唾液酸-N-四氧神經(jīng)酰胺?！菊⒖挤秶垦錍A5020U/ml（RIA法）。【臨床意義】CA50是胰腺和結(jié)、直腸癌的標(biāo)志物，因CA50廣泛存在胰腺、膽囊、肝、胃、結(jié)直腸、膀胱、子宮，當(dāng)細(xì)胞惡變時(shí)，由于糖基轉(zhuǎn)化酶的失活或胚胎期才能活躍的某些轉(zhuǎn)化酶被激活，造成細(xì)胞表面糖類(lèi)結(jié)構(gòu)性質(zhì)改變而形成CA50，因此，它又是一種普遍的腫瘤標(biāo)志相關(guān)抗原，而不是特指某個(gè)器官的腫瘤標(biāo)志物。所以在多種惡性腫瘤中可檢出不同的陽(yáng)性率。三、酶類(lèi)抗原標(biāo)志物的測(cè)定酶及同工酶是最早出現(xiàn)和使用的腫瘤標(biāo)志物之一。在腫瘤標(biāo)志酶中根據(jù)來(lái)源可將其分為兩類(lèi)：組織特異性酶，因組織損傷或變化而使儲(chǔ)存在細(xì)胞中的酶釋放，如前列腺特異性抗原等；非組織特異性酶，主要是腫瘤細(xì)胞代謝加強(qiáng)，酶類(lèi)腫瘤標(biāo)志物名 稱(chēng)分子量及同工酶相 關(guān) 腫 瘤醛縮酶160ku3個(gè)肝堿性磷酸酶95ku7個(gè)骨、肝、白血病、肉瘤、卵巢等淀粉酶45ku胰腺等谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶80ku多種肝、胃、結(jié)腸肌酸激酶83ku4個(gè)前列腺、肺、結(jié)腸、卵巢等-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶90ku12個(gè)肝乳酸脫氫酶135ku5個(gè)肝、淋巴瘤、白血病神經(jīng)原特異性烯醇化酶73ku2個(gè)肺（小細(xì)胞）、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、類(lèi)癌、黑色素瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤5-核苷酸酶6區(qū)帶肝-L巖藻糖苷酶230ku8個(gè)肝核糖核酸酶2個(gè)卵巢、肺、大腸等前列腺特異性抗原34ku前列腺在酶標(biāo)志物分析中，腫瘤標(biāo)志同工酶可分為三大類(lèi)型：異位型同工酶：指某種瘤組織改變了自己的分泌特性，而去分泌表達(dá)了其它成年組織的同工酶的類(lèi)型；胚胎型同工酶：某些組織在腫瘤狀態(tài)時(shí)，使酶的同工酶譜退化到胚胎時(shí)未分化狀態(tài)，而分泌出大量的胚胎期的同工酶，這種變化往往與腫瘤的惡性程度成正比；胎盤(pán)型同工酶：有些腫瘤組織會(huì)分泌出某些原屬胎盤(pán)階段的同工酶譜。（一）前列腺特異性抗原（PSA）PSA是1979由Wang等從前列腺肥大癥患者的前列腺組織中分離出來(lái)的絲氨酸蛋白酶，分子量34ku，編碼基因定位于19q13，PSA僅存在于前列腺上皮細(xì)胞的胞質(zhì)、導(dǎo)管上皮和粘液內(nèi)，具有糜蛋白酶樣和胰蛋白酶的活性，PSA具有高度的組織特異性?！菊⒖挤秶磕行院啃∮?.5g/L（RIA法、ElA法）?！九R床意義】PSA是前列腺癌的特異性標(biāo)志物，也是目前少數(shù)器官特異性腫瘤標(biāo)志物之一。前列腺癌是男性泌尿系統(tǒng)的主要囊性腫瘤，前列腺癌患者血清PSA明顯增高，放療后療效顯著者，50%以上2個(gè)月內(nèi)血清PSA降至正常。故PSA測(cè)定可作為監(jiān)測(cè)前列腺癌病情變化和療效的重要指標(biāo)。（二）前列腺酸性磷酸酶（PAP）PAP是前列腺分泌的一種含有兩條肽鏈的糖蛋白酶，分子量102ku，含糖量13%。在pH5.0的酸性環(huán)境中活性最強(qiáng)，能水解各種有機(jī)磷酸酯。【正常參考范圍】4U/L（RIA、ELISA法）【臨床意義】測(cè)定PAP診斷前列腺癌的特異性比PSA高，可達(dá)96%。但靈敏度較PSA低，PAP和PSA聯(lián)合使用可提高診斷的陽(yáng)性率。（三）神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NSE）烯醇化酶是催化糖原酵解途徑的酶。由3個(gè)不同的亞基、，組成5種形式的同工酶、。亞基同工酶存在于神經(jīng)原和神經(jīng)內(nèi)分泌組織，稱(chēng)為NSE。亞基同工酶定位于膠質(zhì)細(xì)胞，稱(chēng)為非神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NNE）。NSE和NNE的分子量分別為78ku和87ku。【正常參考范圍】0.6-5.4g/L?！九R床意義】NSE是神經(jīng)母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌的標(biāo)記物。神經(jīng)母細(xì)胞瘤是常見(jiàn)的兒童腫瘤，占114歲兒童腫瘤的8%-10%。NSE作為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的標(biāo)志物，對(duì)該病的早期診斷具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。小細(xì)胞肺癌（SCLC）是一種惡性程度高的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤，約占肺癌的25%30%，它可表現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的特性，有過(guò)量的NSE表達(dá)，比其它肺癌和正常對(duì)照高5-10倍以上。SCLC患者血清NSE檢出的陽(yáng)性率可高達(dá)65%-100%，目前已公認(rèn)為NSE可作為SCLC高特異性、高靈敏性的腫瘤標(biāo)志物。（四）-L巖藻糖苷酶（AFU）AFU是存在于血清中的一種溶酶體酸性水解酶，分子量230ku，單個(gè)亞基分子量50ku。【正常參考范圍】32490mol/L（化學(xué)法）?！九R床意義】AFU是原發(fā)性肝癌的一種新的診斷標(biāo)志物，廣泛分布于人體組織細(xì)胞、血液和體液中，原發(fā)性肝癌患者血清AFU活力顯著高于其它各類(lèi)疾患。雖然AFU升高的機(jī)制不甚明了，但可能有以下幾種：肝細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的壞死使溶酶體大量釋放入血；正常肝細(xì)胞的變性壞死可使攝取和清除糖苷酶的功能下降；腫瘤細(xì)胞合成糖苷酶的功能亢進(jìn)；腫瘤細(xì)胞可能分泌某種抑制因子，抑制肝細(xì)胞對(duì)糖苷酶的清除能力或釋放某些刺激因子，促進(jìn)肝細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞本身合成糖苷酶。四、激素類(lèi)抗原標(biāo)志物的測(cè)定當(dāng)具有分泌激素功能的細(xì)胞癌變時(shí)，就會(huì)使所分泌的激素量發(fā)生異常。常稱(chēng)這類(lèi)激素為正位激素異常。而異位激素則是指在正常情況下不能生成激素的那些細(xì)胞，轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞后所產(chǎn)生的激素，或者是那些能產(chǎn)出激素的細(xì)胞癌變后，分泌出的是其它激素細(xì)胞所產(chǎn)生的激素。激素類(lèi)腫瘤標(biāo)志物激 素性 質(zhì)相 關(guān) 腫 瘤兒茶酚胺類(lèi)嗜鉻細(xì)胞促腎上腺皮質(zhì)激素4.5ku庫(kù)欣綜合征、肺（小細(xì)胞）抗利尿激素肺（小細(xì)胞）、原發(fā)性類(lèi)癌等降鈣素3.5ku甲狀腺髓質(zhì)生長(zhǎng)激素21ku垂體腺瘤、腎、肺hGG45ku胚胎絨毛膜、睪丸（非精原細(xì)胞癌）人胎盤(pán)催乳素22ku滋養(yǎng)層、性腺、肺、乳腺甲狀旁腺素肝、腎、乳腺、肺等催乳素22ku垂體腺瘤、腎、肺胰高糖素3ku胰高糖素瘤、嗜鉻細(xì)胞瘤（一）人絨毛膜促性腺激素（hCG）hCG是由胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞所分泌的一類(lèi)糖蛋白類(lèi)激素，在正常妊娠婦女血中可以測(cè)出hCG。hCG有、兩個(gè)亞基，-亞基的分子量約為13000，-亞基的生物特性與卵泡刺激素（FSH）和黃體生成激素（LH）的-亞基相同。-亞基的分子量約15000，-亞基為特異性鏈，可被單克隆抗體檢測(cè)，也是一個(gè)較好的標(biāo)志物。【正常參考范圍】尿液：hCG的總量（ELISA法）小于30g/L，血清：hCG小于10g/L，-hCG小于3.0g/L。【臨床意義】當(dāng)發(fā)生絨毛膜上皮癌，胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞惡變?yōu)閻盒云咸烟ズ?，hCG會(huì)明顯增高。乳腺癌、睪丸癌、卵巢癌hCG也會(huì)增高。（二）降鈣素（CT）CT是由甲狀腺濾泡C細(xì)胞分泌的一種多肽激素，分子量3.5ku。【正常參考范圍】100ng/L【臨床意義】CT是甲狀腺髓樣癌的腫瘤標(biāo)志物。肺癌、乳腺癌、胃腸道癌及嗜鉻細(xì)胞瘤病人可因高血鈣或異位分泌使血清CT增高。（三）兒茶酚胺類(lèi)及其衍生物兒茶酚胺類(lèi)激素是由腎上腺髓質(zhì)中的一些交感神經(jīng)節(jié)纖維末梢終止髓質(zhì)細(xì)胞（又稱(chēng)嗜鉻細(xì)胞）產(chǎn)生和分泌，包括腎上腺素（E）、去甲腎上腺素（NE）和多巴胺（DA）等，它們既是激素又是神經(jīng)遞質(zhì)。1.變腎上腺素 變腎上腺素是兒茶酚胺的甲基化代謝產(chǎn)物，甲基化是在肝細(xì)胞微粒體中進(jìn)行，而兒茶酚胺的形成是在腎上腺髓質(zhì)的嗜鉻細(xì)胞及交感神經(jīng)末梢處形成?！菊⒖挤秶?.30-1.50mol/24h尿。變腎上腺素濃度增高是分泌型嗜鉻細(xì)胞瘤的主要標(biāo)志物。2.香草扁桃酸（3-甲氧-4羥苦杏仁酸，VMA） 是腎上腺素和去甲腎上腺素經(jīng)單胺氧化酶（MAO）和兒茶酚胺-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）的作用下，甲基化和脫氨基的降解產(chǎn)物。VMA主要是從尿中排出。【正常參考范圍】成人5.0-35.0mol/24h尿?！九R床意義】常被認(rèn)為是神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤的標(biāo)志物。約有70神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者均有VMA增高，在IV期神經(jīng)瘤患者VMA/HVA的比值可作為預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)，在兒童的神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者中，VMA也是一項(xiàng)重要指標(biāo)。VMA又可作為嗜鉻細(xì)胞瘤的診斷首選標(biāo)志物，但有時(shí)增高程度不穩(wěn)定，宜同時(shí)測(cè)定尿中兒茶酚胺和變腎上腺素。五、基因類(lèi)標(biāo)志物的測(cè)定隨著分子生物學(xué)的理論和技術(shù)的發(fā)展，癌基因和抑癌基因的檢測(cè)已成為腫瘤臨床診斷新一代的標(biāo)志物。（一）癌基因類(lèi)腫瘤標(biāo)志物癌基因或腫瘤基因是指在自然或?qū)嶒?yàn)條件下，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的基因。從目前的資料分析，引起細(xì)胞惡變功能的基因已達(dá)30余種。常見(jiàn)癌基因類(lèi)腫瘤標(biāo)志物癌基因細(xì)胞株或原發(fā)腫瘤相 關(guān) 腫 瘤N-myc細(xì)胞株神經(jīng)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、肺癌（小細(xì)胞）原發(fā)腫瘤神經(jīng)母細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤C-erb-2原發(fā)腫瘤胃腺癌、腎腺癌、乳腺癌N-ras細(xì)胞株胃腺癌C-myc細(xì)胞株乳腺癌、胃腺癌、肺癌（巨細(xì)胞）原發(fā)腫瘤急性粒細(xì)胞白血病、結(jié)腸腺癌H-ras細(xì)胞株黑色瘤原發(fā)腫瘤膀胱癌、皮膚鱗癌K-ras細(xì)胞株結(jié)腸癌、骨肉瘤原發(fā)腫瘤膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌1.ras基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物 ras基因表達(dá)產(chǎn)物是由188個(gè)或189個(gè)氨基酸組成的21ku蛋白質(zhì)，故Ras基因編碼產(chǎn)物為p21ras蛋白。其本質(zhì)為G蛋白，具有GTP酶活性，可水解GTP生成GDP。當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，編碼p21ras蛋白的第12、13及61位氨基酸的核苷酸可以發(fā)生點(diǎn)突變，突變型的p21ras蛋白不具有GTP酶活化，無(wú)法使GTP水解為GDP。另外尚可在腫瘤中發(fā)現(xiàn)p21ras蛋白表達(dá)過(guò)度。ras基因檢測(cè)的方法（1）PCR-SSCP（單鏈構(gòu)象多態(tài)性）、DGGE（變性梯度凝膠電泳，）、PCR-ASO（等位基因特異性寡核苷酸雜交，）和測(cè)序技術(shù)：探測(cè)點(diǎn)突變。（2）免疫組織化學(xué)：用RAP-5單抗。（3）Southern印跡法及Northern印跡法。（4）ELISA法及Western印跡法。ras基因家族與腫瘤的關(guān)系ras基因家族與腫瘤的關(guān)系腫瘤類(lèi)型臨 床 意 義乳腺癌c-Ha-ras基因mRNA水平升高與惡性腫瘤進(jìn)展期中p21ras水平相關(guān)結(jié)直腸癌50的腫瘤出現(xiàn)c-Ki-ras 基因點(diǎn)突變肺癌20-30腫瘤出現(xiàn)ras基因家族成員點(diǎn)突變，其中c-Ki-rad基因點(diǎn)突變與預(yù)后不良相關(guān)胰腺癌90左右的腫瘤出現(xiàn)c-Ki-ras基因點(diǎn)突變胃癌在惡性腫瘤中p21表達(dá)水平明顯升高，c-Ha-ras基因編碼第12位氨基酸突變與腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良相關(guān)髓性白血病10-50的腫瘤中出現(xiàn)c-N-ras基因突變膀胱癌部分病例可出現(xiàn)c-Ha-ras基因點(diǎn)突變及p21ras表達(dá)過(guò)度2.myc基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物 1997年Duesbery等發(fā)現(xiàn)myc癌基因與禽類(lèi)MC29病毒具有相似性。Myc基因家族共有6成員：C-myc、N-myc、L-myc、P-myc、R-myc及B-myc。其中C-myc、N-myc及L-myc與一些人類(lèi)腫瘤相關(guān)。當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，myc基因家族成員可以發(fā)生染色體基因易位、基因擴(kuò)增以及表達(dá)過(guò)度。myc基因檢測(cè)的方法（1）標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞核型分析：基因易位。（2）原位雜交：ELISA法。（3）Southern印跡法及Northern印跡法。（4）RT-PCR方法。myc基因家族成員與腫瘤的關(guān)系myc基因家族成員與腫瘤的關(guān)系腫瘤種類(lèi)臨 床 意 義神經(jīng)母細(xì)胞瘤在20的腫瘤中有N-myc基因擴(kuò)增乳腺癌6-57的腫瘤中可見(jiàn)c-myc基因擴(kuò)增。c-myc基因mRNA水平升高與預(yù)后不良相關(guān)結(jié)直腸癌10-20的腫瘤中可見(jiàn)c-myc基因擴(kuò)增小細(xì)胞肺癌30腫瘤可見(jiàn)L-myc基因過(guò)度表達(dá)宮頸癌c-myc過(guò)度表達(dá)與預(yù)后不良相關(guān)（二）抑癌基因機(jī)體中有一類(lèi)對(duì)正常細(xì)胞增殖起負(fù)調(diào)節(jié)作用的基因稱(chēng)為抑癌基因。當(dāng)這類(lèi)基因丟失、失活或變異時(shí)，往往會(huì)促使細(xì)胞失控而呈惡性生長(zhǎng)。常見(jiàn)抑癌基因類(lèi)腫瘤標(biāo)志物抑癌基因染 色 體相 關(guān) 腫 瘤RB13q14視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、乳腺癌、肺癌WT111p13Wilms腫瘤NF-117q11.1q神經(jīng)纖維瘤DCC13q21.3結(jié)腸癌P5317q21-1q肺癌、結(jié)腸癌、胃癌Erb-B-27p乳腺癌1.RB基因及其表達(dá)產(chǎn)物 1986年Friend等成功地克隆了RB基因。RB基因定位于第13號(hào)染色體的13q14區(qū)，共有27個(gè)外顯子，26個(gè)內(nèi)含子，DNA長(zhǎng)度約200kb。其編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物為p110。當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，RB基因的主要變化形式有：缺失、突變、甲基化、表達(dá)失活及與病毒和細(xì)胞癌蛋白結(jié)合引起功能性失活。RB基因檢測(cè)的方法（1）PCR-SSCP、DGGE、PCR-ASO及測(cè)序技術(shù)：檢測(cè)點(diǎn)突變。（2）PR-PCR、PCR。（3）PCR-RFLP限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性。RB基因與腫瘤的關(guān)系（1）RB基因突變約見(jiàn)于40的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。（2）RB基因還與成骨細(xì)胞肉瘤、軟組織肉瘤、小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、卵巢癌及膀胱癌有關(guān)。2.p53基因及其產(chǎn)物 1981年Crawford等發(fā)現(xiàn)了p53基因，并認(rèn)為其為癌基因。以后Hinds、Finlay等通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)傳染了