常用培養(yǎng)基配方.doc

常用培養(yǎng)基配方（微生物學(xué)與微生物檢驗(yàn)學(xué)部分）渤海大學(xué)生物與食品科學(xué)學(xué)院2006年3月目 錄01糖發(fā)酵管02 ONPG培養(yǎng)基03西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基04緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗(yàn)用)05克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基06丙二酸鈉培養(yǎng)基07葡葡糖銨培養(yǎng)基08HughLeifson培養(yǎng)基(O/F試驗(yàn)用)09 馬尿酸鈉培養(yǎng)基10營養(yǎng)明膠11苯丙氨酸培養(yǎng)基12 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基13蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用)14 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗(yàn)用)15 尿素瓊脂16 氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基17 氧化酶試驗(yàn)18 硝酸鹽培養(yǎng)基19 細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)20 過氧化氫酶試驗(yàn)21 過氧化物酶試驗(yàn)22 磷酸鹽緩沖液23明膠磷酸鹽緩沖液24 乳酸苯酚溶液25 肉浸液肉湯26肉浸液瓊脂27牛肉(或牛心)消化湯28血消化湯29豆粉瓊脂30血瓊脂31營養(yǎng)瓊脂32營養(yǎng)肉湯33 乳糖膽鹽發(fā)酵管34乳糖發(fā)酵管35 EC肉湯36 緩沖蛋白胨水(BP)37 氯化鎂孔雀綠增菌液(MM) 38 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB) 39 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法) 40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)41 GN增菌液42 腸道菌增菌肉湯43 亞硫酸鉍瓊脂(BS) 44 DHL瓊脂45 HE瓊脂46 SS瓊脂47 WS瓊脂48 麥康凱瓊脂49 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB) 50三糖鐵瓊脂(TSI) 51 三糖鐵瓊脂(換用方法) 52 克氏雙糖鐵瓊脂(KI) 53 克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法) 54 葡萄糖半固體發(fā)酵管55 5%乳糖發(fā)酵管56 CAYE培養(yǎng)基57 Honda氏產(chǎn)毒肉湯58 Elek氏培養(yǎng)基(毒素測定用)59 氯化鎂孔雀綠羧芐青霉素培養(yǎng)基60 胰蛋白胨水61 Rustigian氏尿素培養(yǎng)液62 氯化鈉結(jié)晶紫增菌液63 氯化鈉蔗糖瓊脂64 嗜鹽菌選擇性瓊脂65 3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂66 氯化鈉血瓊脂67 3.5%氯化鈉生化試驗(yàn)培養(yǎng)基68 改良磷酸鹽緩沖液(小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌專用) 69 CIN1培養(yǎng)基70 嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基 71 改良Y培養(yǎng)基72 改良克氏雙糖73 快速硫化氫(H2S)試驗(yàn)瓊脂74 DNA酶甲基綠瓊脂(DTA) 75 CaryBlair氏運(yùn)送培養(yǎng)基76 Skirrow氏培養(yǎng)基77 TTC瓊脂78 甘氨酸培養(yǎng)基79 改良磷酸鹽緩沖液80 氯化鎂孔雀綠肉湯81 胰酪胨大豆肉湯82 BairdParker氏培養(yǎng)基83 7.5%氯化鈉肉湯84 匹克氏肉湯85 甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂86 3.8%檸檬酸鈉溶液87 酪蛋白瓊脂88 木糖明膠培養(yǎng)基89 庖肉培養(yǎng)基90 卵黃瓊脂培養(yǎng)基91亞硫酸鹽多粘菌素磺胺嘧啶瓊脂(SPS) 92液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FT) 93含鐵牛奶培養(yǎng)基94 動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基（A法）95 動(dòng)力硝酸鹽培養(yǎng)基(B法) 96 血清肉湯97 馬丁氏肉湯98 明膠培養(yǎng)基99 察氏培養(yǎng)基100 高鹽察氏培養(yǎng)基101 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA) 102 馬鈴薯瓊脂103 孟加拉紅培養(yǎng)基104 玉米粉瓊脂105 大米粉培養(yǎng)基106 亞硒酸鹽煌綠增菌液107 煌綠肉湯增菌液108 腸毒素產(chǎn)毒培養(yǎng)基109 0.1%蛋白胨水稀釋劑110半固體瓊脂01 糖發(fā)酵管成分：牛肉膏5g蛋白胨10g氯化鈉3g磷酸氫二鈉(Na2HPO412H2O)2g0.2%滇麝香草酚藍(lán)溶液12mL蒸餾水1000mLpH7.4制法：1葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi)，121高壓滅菌15min。2其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶100mL，121高壓滅菌15min。另將各種糖類分別配好10%溶液，同時(shí)高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi)，以無菌操作分裝小試管。 注：蔗糖不純，加熱后會(huì)自行水解者，應(yīng)采用過濾法除菌。試驗(yàn)方法：從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種，于361培養(yǎng)，一般觀察23d。遲緩反應(yīng)需觀察1430d。02 ONPG培養(yǎng)基成分：鄰硝基酚D-半乳糖昔(ONPG) 60mg(ONitrophenylDgalactopyranoside)0.01mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5) 10mL1%蛋白胨水(PH7.5)30mL制法：將ONPG溶于緩沖液內(nèi)，加入蛋白胨水，以過濾法除菌，分裝于10mm75mm試管，每管0.5mL，用橡皮塞塞緊。試驗(yàn)方法：自瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物1滿環(huán)接種，于361培養(yǎng)13h和24h觀察結(jié)果。如果半乳糖苷酶產(chǎn)生，則于13h變黃色，如無此酶則24h不變色。03 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基成分：氯化鈉5g硫酸鎂(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氫銨1g磷酸氫二鉀1g檸檬酸鈉5g瓊脂20g蒸餾水1000mL0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液40mLpH6.8制法：先將鹽類溶解于水內(nèi)，校正pH，再加瓊脂，加熱溶化。然后加入指示劑，混合均勻后分裝試管，121高壓滅菌15min。放成斜面。試驗(yàn)方法：挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種，于361培養(yǎng)4d，每天觀察結(jié)果。陽性者斜面上有菌落生長，培養(yǎng)基從綠色轉(zhuǎn)為藍(lán)色。04 緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗(yàn)用)成分：磷酸氫二鉀5g多胨7g葡萄糖5g蒸餾水1000mLpH7.0制法：溶化后校正pH，分裝試管，每管1mL，121高壓滅菌15min。甲基紅(MR)試驗(yàn)：自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于361培養(yǎng)25d，哈夫尼亞菌則應(yīng)在2225培養(yǎng)。滴加甲基紅試劑一滴，立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽性，黃色為陰性。甲基紅試劑配法：10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸餾水。VP試驗(yàn)：用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于361培養(yǎng)24d。哈夫尼亞菌則應(yīng)在2225培養(yǎng)。加入6%萘酚乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL，充分振搖試管，觀察結(jié)果。陽性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性，應(yīng)放在361下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察。05克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基成分：檸檬酸鈉 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g單鹽酸半胱氨酸 0.1g磷酸二氫鉀 1g氯化鈉 5g0.2%酚紅溶液 6mL瓊脂 15g蒸餾水 1000mL制法：加熱溶解，分裝試管，121高壓滅菌15min。放成斜面。試驗(yàn)方法：用瓊脂培養(yǎng)物接種整個(gè)斜面，在361培養(yǎng)7d，每天觀察結(jié)果。陽性者培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。06 丙二酸鈉培養(yǎng)基成分：酵母浸膏 1g硫酸銨 2g磷酸氫二鉀 0.6g磷酸二氫鉀 0.4g氯化鈉 2g丙二酸鈉 3g0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 12mL蒸餾水 1000mLpH6.8制法：先將酵母浸膏和鹽類溶解于水，校正pH后再加入指示劑，分裝試管，121高壓滅菌15min。試驗(yàn)方法：用新鮮的瓊脂培養(yǎng)物接種，于361培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。陽性者由綠色變?yōu)樗{(lán)色。07 葡葡糖銨培養(yǎng)基成分：氯化鈉5g硫酸鎂(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氫銨1g磷酸氫二鉀1g葡萄糖2g瓊脂20g蒸餾水1000mL0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液40mLpH6.8制法：先將鹽類和糖溶解于水內(nèi)，校正pH，再加瓊脂，加熱溶化，然后加入指示劑，混合均勻后分裝試管，121高壓滅菌15min，放成斜面。試驗(yàn)方法：用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面，在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液，肉眼觀察不見混濁，以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在20100之間為宜。將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種，同時(shí)再以同法接種普通斜面一支作為對照。于361培養(yǎng)24h。陽性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長；陰性者不生長，但在對照培養(yǎng)基上生長良好。如在葡萄糖銨斜面生長極微小的菌落可視為陰性結(jié)果。注：容器使用前應(yīng)用清潔液浸泡。再用清水、蒸餾水沖洗干凈，并用新棉花做成棉塞，干熱滅菌后使用。如果操作時(shí)不注意，有雜質(zhì)污染時(shí)，易造成假陽性的結(jié)果。08 HughLeifson培養(yǎng)基(O/F試驗(yàn)用)成分：蛋白胨 2g氯化鈉 5g磷酸氫二鉀 0.3g瓊脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 12mL蒸餾水 1000mLpH7.2制法：將蛋白胨和鹽類加水溶解后，校正pH至7.2。加入葡萄糖、瓊脂煮沸，溶化瓊脂，然后加入指示劑?；靹蚝?，分裝試管，121高壓滅菌15min，直立凝固備用。試驗(yàn)方法：從斜面上挑取小量培養(yǎng)物作穿刺接種，同時(shí)接種兩支培養(yǎng)基，其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面，高度約1cm，于361培養(yǎng)。09 馬尿酸鈉培養(yǎng)基成分：馬尿酸鈉1g肉浸液100mL制法：將馬尿酸鈉溶解于肉浸液內(nèi)，分裝于小試管內(nèi)，并于管壁畫一橫線。以標(biāo)志管內(nèi)液面高度，高壓滅菌12120min。試劑：三氯化鐵(FeCl36H2O)12g，溶于2%鹽酸溶液100mL中即成。試驗(yàn)方法：用純培養(yǎng)物接種，于42培養(yǎng)48h，觀察培養(yǎng)液是否到達(dá)試管壁上記號處，如不足時(shí)，用蒸餾水補(bǔ)足至原量。經(jīng)離心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化鐵試劑0.2mL，立即混合均勻，經(jīng)1015min，觀察結(jié)果。結(jié)果：出現(xiàn)恒久之沉淀物為陽性。10營養(yǎng)明膠成分：蛋白胨5g牛肉膏3g明膠120g蒸餾水1000mLpH6.87.0制法：加熱溶解、校正至pH7.47.6，分裝小管，121高壓滅菌10min，取出后迅速冷卻，使其凝固。復(fù)查最終pH應(yīng)為6.87.0。試驗(yàn)方法：用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種，放在2225培養(yǎng)，每天觀察結(jié)果，記錄液化時(shí)間。或放在36士1培養(yǎng)，每天取出，放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果。11苯丙氨酸培養(yǎng)基成分：酵母浸膏3gDI苯丙氨酸(或L苯丙氨酸1g) 2g磷酸氫二鈉1g氯化鈉5g瓊脂12g蒸餾水1000mL制法：加熱溶解后分裝試管，121高壓滅菌15min，使成斜面。試驗(yàn)方法：自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，移種于苯丙氨酸瓊脂，在361培養(yǎng)4h或1824h。滴加10%三氯化鐵溶液23滴，自斜面培養(yǎng)物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。12 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基成分：蛋白胨5g酵母浸膏3g葡萄糖1g蒸餾水1000mL1.6%滇甲酚紫乙醇溶液1mLL氨基酸或DL氨基酸 0.5或1g/100mLpH6.8制法：除氨基酸以外的成分加熱溶解后，分裝每瓶100mL，分別加入各種氨基酸：賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸。L氨基酸按0.5%加入，DL氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。對照培養(yǎng)基不加氨基酸。分裝于滅菌的小試管內(nèi)，每管0.5mL，上面滴加一層液體石蠟，115高壓滅菌10min。試驗(yàn)方法：從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于361培養(yǎng)1824h，觀察結(jié)果。氨基酸脫羧酶陽性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。陰性者無堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。對照管應(yīng)為黃色。13蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用)成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化鈉 5g蒸餾水 1000mLpH7.4制法：按上述成分配制，分裝小試管，121高壓滅菌15min。靛基質(zhì)試劑柯凡克試劑：將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后緩慢加入濃鹽酸25mL。歐波試劑：將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。試驗(yàn)方法：挑取小量培養(yǎng)物接種，在361培養(yǎng)12d，必要時(shí)可培養(yǎng)45d。加入柯凡克試劑約0.5mL，輕搖試管，陽性者于試劑層呈深紅色；或加入歐波試劑約0.5mL，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面，陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買來后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。14 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗(yàn)用)成分：牛肉膏 3g酵母浸膏 3g蛋白胨 10g硫酸亞鐵 0.2g硫代硫酸鈉 0.3g氯化鈉 5g瓊脂 12g蒸餾水 1000mLpH7.4制法：加熱溶解，校正pH，分裝試管，115高壓滅菌15min，取出直立候其凝固。試驗(yàn)方法：挑取瓊脂培養(yǎng)物，沿管壁穿刺，于361培養(yǎng)12d，觀察結(jié)果。產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏Ｗⅲ耗c桿菌科細(xì)菌測定硫化氫的產(chǎn)生，應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基。 15 尿素瓊脂成分：蛋白胨1g氯化鈉5g葡萄糖1g磷酸二氫鉀2g0.4%酚紅溶液3mL瓊脂20g蒸餾水1000mL20%尿素溶液 100mLpH7.20.1制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121高壓滅菌15min。冷至5055，加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2%，最終pH應(yīng)為7.20.1。分裝于滅菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆?。試?yàn)方法：挑取瓊脂培養(yǎng)物接種，在361培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。16 氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基成分：蛋白胨 10g氯化鈉 5g磷酸二氫鉀 0.225g磷酸氫二鈉 5.64g蒸餾水 1000mL0.5%氰化鉀溶液 20mLpH7.6制法：將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶，121高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100mL培養(yǎng)基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(最后濃度為110000)，分裝于12mm100mm滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4冰箱內(nèi)，至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基，分裝試管備用。17 氧化酶試驗(yàn)試劑：1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液：少量新鮮配制，干冰箱內(nèi)避光保存。1%-萘酚乙醇溶液。試驗(yàn)方法：取白色潔凈濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴，陽性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深；再加-萘酚溶液一滴，陽性者于半分鐘內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色。陰性于兩分鐘內(nèi)不變色。以毛細(xì)吸管吸取試劑，直接滴加于菌落上，其顯色反應(yīng)與以上相同。18 硝酸鹽培養(yǎng)基成分：硝酸鉀 0.2g蛋白 5g蒸餾水 1000mLpH7.4制法：溶解，校正pH，分裝試管，每管約5mL，121高壓滅菌15min。硝酸鹽還原試劑：甲液：將對氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。乙液：將甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。試驗(yàn)方法：接種后在361培養(yǎng)14d，加入甲液和乙液各一滴，觀察結(jié)果。硝酸鹽還原為亞硝酸鹽時(shí)于立刻或數(shù)分鐘內(nèi)顯紅色。 注：本試驗(yàn)陰性的原因有三：細(xì)菌不能還原硝酸鹽；亞硝酸鹽繼續(xù)分解，生成氨和氮；培養(yǎng)基不適于細(xì)菌的生長。如欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否未被分解，可再加入鋅粉少許，可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽而呈現(xiàn)紅色。19 細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)試劑：1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液。1%-萘酚乙醇溶液。試驗(yàn)方法：取37(或低于37)培養(yǎng)20h的斜面培養(yǎng)物一支，將兩種試劑各23滴，從斜面上端滴下，并將斜面略加傾斜，使試劑混合液流經(jīng)斜面上的培養(yǎng)物。如系平板培養(yǎng)物，則可用試劑混合液滴在菌落上。結(jié)果：于2min內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色者為陽性。陽性培養(yǎng)物大多數(shù)于半分鐘內(nèi)出現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng)，2min以后出現(xiàn)微弱或可疑反應(yīng)均作為陰性結(jié)果。20 過氧化氫酶試驗(yàn)試劑：3%過氧化氫溶液：臨用時(shí)配制。試驗(yàn)方法：挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán)，置于潔凈試管內(nèi)，滴加3%過氧化氫溶液2mL，觀察結(jié)果。結(jié)果：于半分鐘內(nèi)發(fā)生氣泡者為陽性，不發(fā)生氣泡者為陰性。21 過氧化物酶試驗(yàn)試劑：2%兒茶酚溶液。3%過氧化氫溶液。試驗(yàn)方法：挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán)，置于潔凈試管內(nèi)，滴加2%兒茶酚溶液1mL及3%過氧化氫溶液1mL。靜置于室溫(20)中3060min，觀察結(jié)果。結(jié)果：陽性反應(yīng)，細(xì)菌變?yōu)楹诤稚魂幮苑磻?yīng)，細(xì)菌不變色。注：過氧化物酶的作用可受氰化鉀的抑制。22 磷酸鹽緩沖液儲(chǔ)存液磷酸二氫鉀34g1mol/L氫氧化鈉溶液175mL蒸餾水825mLpH7.2制法：先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中，用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后，再用蒸餾水稀釋至1000mL。稀釋液：取儲(chǔ)存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL。分裝每瓶100mL或每管10mL，121高壓滅菌15min。23明膠磷酸鹽緩沖液成分：明膠2g磷酸氫二鈉4g蒸餾水1000mLpH6.2制法：加熱溶解，校正pH，121高壓滅菌15min。24 乳酸苯酚溶液成分：苯酚10g乳酸(比重1.21)10g甘油20g蒸餾水10mL制法：將苯酚在水中加熱溶解，然后加入乳酸及甘油。用途：檢驗(yàn)真菌形態(tài)時(shí)用。25 肉浸液肉湯成分：絞碎牛肉500g氯化鈉5g蛋白胨10g磷酸氫二鉀2g蒸餾水1000mL制法：將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g加蒸餾水1000mL，混合后放冰箱過夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過濾，并擠壓收集全部濾液，加水補(bǔ)足原量。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH7.47.6煮沸并過濾，分裝燒瓶，121高壓滅菌30min。26肉浸液瓊脂成分：肉浸液肉湯(PH7.4) 1000mL瓊脂1720g制法：加熱溶化瓊脂，分裝燒瓶或試管，121高壓滅菌30min。根據(jù)需要，傾注平板或放成斜面。27牛肉(或牛心)消化湯成分：絞碎牛肉(或牛心)1000g15%氫氧化鈉溶液 27mL胰蛋白酶40mL三氯甲烷1mL氯化鈉10g蒸餾水2000mL制法：1稱取碎牛肉，加蒸餾水，隔水加熱到80，維持15min。2加氫氧化鈉溶液，對pH試紙呈弱堿性，冷至40。3加胰蛋白酶、氯仿，在361放置45h，每小時(shí)搖動(dòng)一二次。44h后，吸取上層液5mL于試管中，加5%硫酸銅溶液0.1mL、4%氫氧化鈉溶液5mL，混合之。若呈紅色，則不須再消化，可由溫箱取出。5加入15%乙酸溶液45mL，對pH試紙呈酸性。6煮沸15min，使胰蛋白酶破壞，冷后，放冰箱內(nèi)一夜。7次日吸取上層清液，加氯化鈉10g，并加水補(bǔ)足原量，煮沸。8校正pH7.47.6(加15%氫氧化鈉溶液約10mL)，加熱，用濾紙過濾，分裝燒瓶，121高壓滅菌20min。注：此培養(yǎng)基可作為瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，不需加蛋白胨。胰蛋白酶之配制：稱取去脂絞碎的豬胰500g，加入乙醇500mL、蒸餾水1500mL，混合之，裝人玻塞瓶內(nèi)。每日搖勻三次。3d后，用絨布過濾擠出其汁，加鹽酸至0.05%，放冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?8血消化湯成分：絞碎豬胃100g絞碎豬血塊100g蒸餾水1000mL濃鹽酸10mL制法：1洗滌豬胃，除去油脂，保留胃粘膜，用絞肉機(jī)絞碎。2用絞肉機(jī)將豬血塊絞碎。3將蒸餾水加熱至55，加入豬胃、豬血塊和鹽酸，置55水浴中24h，時(shí)常加以搖動(dòng)。4從水浴內(nèi)取出，加入1moL/L碳酸鈉溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱內(nèi)一夜。5吸取上層清液，加磷酸氫二鉀1g，加熱至75，加入1mol/L碳酸鈉溶液45mL，煮沸，校正pH7.27.4。6用濾紙過濾，分裝燒瓶，121高壓滅菌20min。29豆粉瓊脂成分：牛心消化湯(PH7.47.6) 1000mL瓊脂 20g黃豆粉浸液 50mL制法：將瓊脂加在牛心消化湯內(nèi)，加熱溶解，過濾。加入豌豆粉浸液，分裝每瓶100mL，121高壓滅菌15min。豌豆粉浸液制法：取豌豆粉5g、氯化鈉10g，加入蒸餾水100mL。置100水浴內(nèi)加熱1h，放于冰箱中過夜。吸取上清液即為豌豆浸液。30血瓊脂成分：pH7.47.6豆粉瓊脂100mL脫纖維羊血(或兔血)510mL制法：加熱溶化瓊脂，冷至50，以滅菌手續(xù)加入脫纖維羊血，搖勻，傾注平板。亦可分裝滅菌試管，置成斜面。亦可用其他營養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂。31營養(yǎng)瓊脂成分：蛋白胨10g牛肉膏3g 氯化鈉5g瓊脂1520g蒸餾水1000mL制法：將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正pH至7.27.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝燒瓶，121高壓滅菌15min。注：此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計(jì)數(shù)，瓊脂量為1.5%；如作成平板或斜面，則應(yīng)為2%。32營養(yǎng)肉湯成分：蛋白陳10g牛肉膏3g氯化鈉5g蒸餾水1000mLpH7.4制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225mL，121高壓滅菌15min。33 乳糖膽鹽發(fā)酵管成分：蛋白胨20g豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g乳糖10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL蒸餾水1000mLpH7.4制法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管10mL，并放入一個(gè)小倒管，115高壓滅菌15min。注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。34乳糖發(fā)酵管成分：蛋白胨20g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL蒸餾水1000mLpH7.4制法：將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，按檢驗(yàn)要求分裝30mL、10mL或3mL，并放入一個(gè)小倒管，115高壓滅菌15min。注：雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。30mL和10mL乳糖發(fā)酵管專供醬油及醬類檢驗(yàn)用，3mL乳糖發(fā)酵管供大腸菌群證實(shí)試驗(yàn)用。35 EC肉湯成分：胰蛋白胨20g3號膽鹽(或混合膽鹽) 1.5g乳糖5g磷酸氫二鉀4g磷酸二氫鉀1.5g氯化鈉5g蒸餾水1000mL制法：將上述成分混合，溶解后，分裝有發(fā)酵倒管的試管中，121高壓滅菌15min，最終pH為6.90.2。36 緩沖蛋白胨水(BP)成分：蛋白胨 10g氯化鈉 5g磷酸氫二鈉(Na2HPO412H2O) 9g磷酸二氫鉀 1.5g蒸餾水 1000mLpH7.2制法：按上述成分配好后以大燒瓶裝，121高壓滅菌15min。臨用時(shí)無菌分裝每瓶225mL。注：本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用。37 氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)甲液胰蛋白胨5g氯化鈉8g磷酸二氫鉀1.6g蒸餾水1000mL乙液氯化鎂(化學(xué)純)40g蒸餾水100mL4.13.3丙液0.4%孔雀綠水溶液。制法：分別按上述成分配好后，121高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL，以無菌操作混合即可。注：本培養(yǎng)基亦稱Rappaport 10(R10)增菌液。38 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)基礎(chǔ)培養(yǎng)基多胨或眎胨5g膽鹽1g碳酸鈣10g硫代硫酸鈉30g蒸餾水1000mL碘溶液碘6g碘化鉀5g蒸餾水20mL制法：將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中，加熱溶解，分裝每瓶100mL。分裝時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖，使其中的碳酸鈣混勻。121高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2mL、0.1%煌綠溶液1mL。39 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法)基礎(chǔ)液：蛋白胨 10g牛肉膏 5g氯化鈉 3g碳酸鈣 45g蒸餾水 1000mL將各成分加入于蒸餾水中，加熱至約70溶解，校正pH至7.00.1，121高壓滅菌20min。硫代硫酸鈉溶液硫代硫酸鈉(Na2S2O35H2O) 50g蒸餾水加至100mL碘溶液碘片20g碘化鉀25g蒸餾水加至100mL將碘化鉀充分溶解于是少量的蒸餾水中，加入碘片，振搖玻瓶至碘片全部溶解，再加入蒸餾水至規(guī)定量。貯于棕色玻瓶內(nèi)，緊塞瓶蓋備用?；途G水溶液煌綠0.5g蒸餾水100mL存放暗處，不少于1d，使其自然滅菌。牛膽鹽溶液干燥的牛膽鹽10g蒸餾水100mL煮沸溶解，121高壓滅菌20min。制備：基礎(chǔ)液900mL硫代硫酸鈉溶液100mL碘液20mL煌綠溶液2mL牛膽鹽溶液50mL臨用前，按上列順序，以無菌操作依次加入于基礎(chǔ)液中，每加入一種成分，均應(yīng)搖勻后再加入另一種成分。分裝于滅菌瓶中，每瓶100mL。40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)成分：蛋白胨5g乳糖4g亞硒酸氫鈉4g磷酸氫二鈉5.5g磷酸二氫鉀4.58L-胱氨酸0.01g蒸餾水1000mL1%L-胱氨酸氫氧化鈉溶液的配法：稱取L胱氨酸0.1g(或DL胱氨酸0.2g)，加1mol/L氫氧化鈉1.5mL，使溶解，再加入蒸餾水8.5mL即成。制法：將除亞硒酸氫鈉和L胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中，加熱煮沸，俟冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中，加熱煮沸，候冷，以無菌操作與上液混合。再加入1%L胱氨酸氫氧化鈉溶液1mL。分裝于滅菌瓶中，每瓶100mL，pH應(yīng)為7.00.1。41 GN增菌液成分：胰蛋白胨20g葡萄糖1g甘露醇2g檸檬酸鈉5g去氧膽酸鈉0.5g磷酸氫二鉀4g磷酸二氫鉀1.5g氯化鈉5g蒸餾水1000mLpH7.0制法：按上述成分配好，加熱使溶解，校正pH。分裝每瓶225mL，115高壓滅菌15min。42 腸道菌增菌肉湯成分：蛋白胨1 10g葡萄糖5g牛膽鹽20g磷酸氫二鈉8g磷酸二氫鉀2g煌綠0.015g蒸餾水1000mLpH7.2制法：按上述成分配好，加熱使溶解，校正pH。分裝每瓶30mL，115高壓滅菌15min。43 亞硫酸鉍瓊脂(BS)成分：蛋白胨10g牛肉膏5g葡萄糖5g硫酸亞鐵0.3g磷酸氫二鈉4g煌綠0.025g檸檬酸鉍銨2g亞硫酸鈉6g瓊脂1820g蒸餾水1000mLpH7.5制法：1將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中。2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。3將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解，冷至804將以上三液合并，補(bǔ)充蒸餾水至1000mL，校正pH，加0.5%煌綠水溶液5mL，搖勻。冷至5055，傾注平皿。注：此培養(yǎng)基不需高壓滅菌。制備過程不宜過分加熱.以免降低其選擇性。應(yīng)在臨用前一天制備，貯存于室溫暗處。超過48h不宜使用。44 DHL瓊脂成分：蛋白胨 20g牛肉膏 3g乳糖 10g蔗糖 10g去氧膽酸鈉 1g硫代硫酸鈉 2.3g檸檬酸鈉 1g檸檬酸鐵銨 1g中性紅 0.03g瓊脂 1820g蒸餾水 1000mLpH7.3制法：將除中性紅和瓊脂以外的成分溶解于400mL蒸餾水中，校正pH。再將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解，兩液合并，并加入0.5%中性紅水溶液6mL，待冷至5055，傾注平板。45 HE瓊脂成分：脙胨12g牛肉膏3g乳糖12g蔗糖12g水楊素2g膽鹽20g氯化鈉5g瓊脂1820g蒸餾水1000mL0.4%溴麝香草酚藍(lán)溶液16mLAndrade指示劑 20mL甲液20mL乙液20mLpH7.5制法：將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液；將瓊脂加入于600mL蒸餾水內(nèi)，加熱溶解。加入 甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi)，校正pH。再加入指示劑，并與瓊脂液合并，待冷至5055，傾注平板。注：此培養(yǎng)基不可高壓滅菌。甲液的配制硫代硫酸鈉 34g檸檬酸鐵銨 4g蒸餾水 100mL乙液的配制去氧膽酸鈉 10g蒸餾水 100mLAndrade指示劑酸性復(fù)紅 0.5g1mol/L氫氧化鈉溶液 16mL蒸餾水 100mL將復(fù)紅溶解于蒸餾水中，加入氫氧化鈉溶液。數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色不全，再加氫氧化鈉溶液12mL。46 SS瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基：牛肉膏5g眎胨5g三號膽鹽3.5g瓊脂17g蒸餾水1000mL再將兩液混合，121高壓滅菌15min，保存?zhèn)溆?。完全培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基100mL乳糖10g檸檬酸鈉8.5g硫代硫酸鈉8.5g10%檸檬酸鐵溶液 10mL1%中性紅溶液2.5mL0.1%煌綠溶液0.33mL加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均勻，校正至pH7.0，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。注：制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用，或保存于冰箱內(nèi)于48h內(nèi)使用?；途G溶液配好后應(yīng)在10d以內(nèi)使用?？梢再徲肧S瓊脂的干燥培養(yǎng)基。47 WS瓊脂成分：胨12g牛肉膏3g氯化鈉5g乳糖12g蔗糖12g十二烷基硫酸鈉2g瓊脂15gAndrade指示劑 20mL0.4%溴麝香草酚藍(lán)溶液16mL甲液20mL蒸餾水1000mLpH7.0制法：除指示劑和甲液外，將其他成分加熱溶解，不需消毒，校正pH后加入指示劑和甲液，傾注平板應(yīng)呈草綠色。注：供沙門氏菌分離用。Andrade指示劑和甲液的配制均見HE瓊脂。48 麥康凱瓊脂成分：蛋白胨 17g眎胨 3g豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) 5g氯化鈉 5g瓊脂 17g蒸餾水1000mL乳糖10g0.01%結(jié)晶紫水溶液 10mL0.5%中性紅水溶液5mL制法：1將蛋白胨、眎、膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中，校正pH7.2。將瓊脂加入600mL 加熱溶解。將兩液合并，分裝于燒瓶內(nèi)，121高壓滅菌15min備用。2臨用時(shí)加熱溶化瓊脂，趁熱加入乳糖，冷至5055時(shí)，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。注：結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。49 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)成分：蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氫二鉀 2g瓊脂 17g2%伊紅Y溶液20mL0.65%美藍(lán)溶液10mL蒸餾水 1000mLpH7.1制法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，校正pH，分裝于燒瓶內(nèi)，121高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至5055，加入伊紅和美藍(lán)溶液，搖勻，傾注平板。50三糖鐵瓊脂(TSI)成分：蛋白胨 20g牛肉膏 5g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化鈉 5g硫酸亞鐵銨Fe(NH4)2(SO4)26H2O0.2g硫代硫酸鈉 0.2g瓊脂 12g酚紅 0.025g蒸餾水 1000mLpH7.4制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121高壓滅菌15min。放置高層斜面?zhèn)溆谩?1 三糖鐵瓊脂(換用方法)成分：蛋白胨 15g眎胨 5g牛肉膏 3g酵母膏 3g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化鈉 5g硫酸亞鐵 0.2g硫代硫酸鈉 0.3g瓊脂 12g酚紅 0.025g蒸餾水 1000mLpH7.4制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH。加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121高壓滅菌15min，放置高層斜面?zhèn)溆谩?2 克氏雙糖鐵瓊脂(KI)上層培養(yǎng)基成分血消化湯(pH7.6) 500mL瓊脂6.5g硫代硫酸鈉0.1g硫酸亞鐵銨0.1g乳糖5g0.2%酚紅溶液5mL下層培養(yǎng)基成分血消化湯(pH7.6) 500mL瓊脂2g葡萄糖1g0.2%酚紅溶液5mL制法：1取血消化湯按上層和下層的瓊脂用量，分別加入瓊脂，加熱溶解。2分別加入其他各種成分。將上層培養(yǎng)基分裝于燒瓶內(nèi)；將下層培養(yǎng)基分裝于滅菌12mm100mm試管內(nèi)，每管約2mL。115高壓滅菌10min。3將上層培養(yǎng)基放在56水浴箱內(nèi)保溫；將下層培養(yǎng)基直立放在室溫內(nèi)，使其凝固。4當(dāng)下層培養(yǎng)基凝固后，以無菌手續(xù)將上層培養(yǎng)基分裝于下層培養(yǎng)基的上面，每管約1.5mL，放成斜面。53 克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法)成分：蛋白胨 20g牛肉膏 3g酵母膏 3g乳糖 10g葡萄糖 1g