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第七章芳香胺類藥物的分析 常見的芳胺類藥物 對氨基苯甲酸酯類藥物的基本結(jié)構(gòu) 第一節(jié)芳胺類藥物的分析 苯佐卡因 鹽酸丁卡因 鹽酸普魯卡因胺 酰胺類藥物的基本結(jié)構(gòu) 非那西丁 對乙酰氨基苯乙醚 對乙酰氨基酚 撲熱息痛 醋氨苯砜 鹽酸利多卡因 鹽酸布比卡因 一 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 一 具有芳伯氨基或潛在的芳伯氨基 可用重氮化 偶合反應(yīng)鑒別或亞硝酸鈉滴定法測定含量 二 酯鍵或酰胺鍵易水解 三 具脂烴胺側(cè)鏈 弱堿性 可與生物堿沉淀試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)進行鑒別或非水堿量法測定含量 四 游離堿多為堿性油狀液體或低熔點固體 難溶于水 易溶于有機溶劑 其鹽酸鹽具有一定的熔點 易溶于水和乙醇 難溶于有機溶劑 六 UV 七 IR 五 某些特征取代基 如酚羥基 的反應(yīng) 二 鑒別試驗 一 重氮化 偶合反應(yīng) 芳香第一胺類鑒別反應(yīng) 直接 鹽酸普魯卡因 對氨基水楊酸鈉 苯佐卡因 鹽酸普魯卡因胺 鹽酸普魯卡因Ch P 2005 鑒別 4 本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng) 附錄 取供試品約50mg 加稀鹽酸1ml 必要時緩緩煮沸使溶解 放冷 加0 1mol L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴 滴加堿性 萘酚試液數(shù)滴 視供試品不同 生成由橙黃到猩紅色沉淀 間接 對乙酰氨基酚 非那西丁 醋氨苯砜 貝諾酯 對乙酰氨基酚Ch P 2005 鑒別 2 取本品約0 1g 加稀鹽酸5ml 置水浴中加熱40分鐘 放冷 取0 5ml 滴加亞硝酸鈉試液5滴 搖勻 用水3ml稀釋后 加堿性 萘酚試液2ml 振搖 即顯紅色 二 三氯化鐵反應(yīng)對乙酰氨基酚 三 與重金屬離子反應(yīng)1 與銅和鈷離子反應(yīng) 2 羥肟酸鐵鹽反應(yīng) 3 與汞離子的反應(yīng) 四 水解產(chǎn)物的反應(yīng) 1 鹽酸普魯卡因Ch P 2005 鑒別 1 取本品約0 1g 加水2ml溶解后 加10 氫氧化鈉溶液1ml 即生成白色沉淀 加熱 變?yōu)橛蜖钗?繼續(xù)加熱 產(chǎn)生的蒸氣 能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色 熱至油狀物消失后 放冷 加鹽酸酸化 即析出白色沉淀 2 苯佐卡因Ch P 2005 鑒別 1 取本品約0 1g 加氫氧化鈉試液5ml 煮沸 即有乙醇生成 加碘試液 加熱 即生成黃色沉淀 并發(fā)生碘仿的臭氣 五 氯化物的反應(yīng)藥典附錄 一般鑒別試驗 1 沉淀反應(yīng) 2 氧化還原反應(yīng) 六 制備衍生物測熔點 1 三硝基苯酚衍生物 鹽酸利多卡因Ch P 2005 鑒別 取本品0 2g 加水20ml溶解 1 取溶液10ml 加三硝基苯酚試液10ml 即生成沉淀 濾過 沉淀用水洗滌后 干燥 依法測定 附錄 C 熔點為228 232 熔融時同時分解 鹽酸布比卡因Ch P 2005 2 硫氰酸鹽衍生物 鹽酸丁卡因Ch P 2005 鑒別 1 取本品約0 1g 加5 醋酸鈉溶液10ml溶解后 加25 硫氰酸銨溶液1ml 即析出白色結(jié)晶 濾過 結(jié)晶用水洗滌 在80 干燥 依法測定 附錄 C 熔點約為131 鹽酸布比卡因Ch P 2005 鑒別 2 取本品 精密稱定 按干燥品計算 加0 01mol L鹽酸溶液制成每1ml中含0 40mg的溶液 照紫外 可見分光光度法 附錄 A 測定 在263nm與271nm的波長處有最大吸收 其吸光度分別為0 53 0 58與0 43 0 48 七 UV 八 IR 鹽酸布比卡因Ch P 2005 鑒別 3 本品的紅外光吸收圖譜與對照的圖譜 光譜集324圖 一致 三 特殊雜質(zhì)檢查 一 對乙酰氨基酚 1 有關(guān)物質(zhì) 雜質(zhì)來源中間體 副產(chǎn)物及分解產(chǎn)物 對氯乙酰苯胺雜質(zhì)對照品法 檢查方法TLC 其他雜質(zhì)參比雜質(zhì)對照品法 2 對氨基酚 雜質(zhì)來源中間體 水解產(chǎn)物 反應(yīng)原理 檢查方法對照法 取本品1 0g 加甲醇溶液 1 2 20ml溶解后 加堿性亞硝基鐵氰化鈉試液1ml 搖勻 放置30min 如顯色 與對乙酰氨基酚對照品1 0g加對氨基酚50 g用同一方法制成的對照液比較 不得更深 0 005 二 鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸的檢查 檢查方法TLC雜質(zhì)對照品法 雜質(zhì)來源水解產(chǎn)生 精密量取本品 加乙醇稀釋使成為每1ml中含鹽酸普魯卡因2 5mg的溶液 作為供試品溶液 取對氨基苯甲酸對照品 加乙醇制成每1ml中含30 g的溶液 作為對照品溶液 照薄層色譜法 附錄 B 試驗 吸取上述兩種溶液各10 l 分別點于含有羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上 用苯 冰醋酸 丙酮 甲醇 14 1 1 4 為展開劑 展開后 取出晾干 用對二甲氨基苯甲醛溶液 2 對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml 加冰醋酸5ml制成 噴霧顯色 供試品溶液如顯與對照品溶液相應(yīng)的雜質(zhì)斑點 其顏色與對照品溶液的主斑點比較 不得更深 一 亞硝酸鈉滴定法1 原理具芳伯氨基的藥物 四 含量測定 具游離芳伯氨基的藥物可用本法直接測定 具潛在芳伯氨基的藥物 如具酰胺基藥物 對乙酰氨基酚等 經(jīng)水解 芳香族硝基化合物 如無味氯霉素 經(jīng)還原 也可用本法測定 2 主要測定條件 1 加入適量KBr加速反應(yīng)KBr為催化劑 NaNO2 HCl HNO2 NaClHNO2 HCl NOCl H2O 在鹽酸存在下 重氮化反應(yīng)的機理為 1 K1 2 K2 K1 300K2加入KBr 可增大被測溶液中NO 的濃度 所以能加快重氮化反應(yīng)速度 2 加過量鹽酸加速反應(yīng) 在不同酸中重氮化反應(yīng)的速度為 HBr HCl H2SO4 HNO3 鹽酸1 2 5 6 加入鹽酸 重氮化反應(yīng)速度加快 重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定 防止生成偶氮氨基化合物 而影響測定結(jié)果 3 室溫條件下滴定10 30 4 滴定速度 先快后慢滴定管尖端插入液面下2 3處 滴定液一次大部分放下 近終點時方改為慢速滴定 3 指示終點的方法 1 永停滴定法Ch P 2005 BP 2004 永停滴定法 附錄 A 用作重氮化法的終點指示時 調(diào)節(jié)R1使加于電極上的電壓約為50mV 取供試品適量 精密稱定 置燒杯中 除另有規(guī)定外 可加水40ml與鹽酸溶液 1 2 15ml 而后置電磁攪拌器上 攪拌使溶解 再加溴化鉀2g 插入鉑 鉑電極后 將滴定管的尖端插入液面下約2 3處 用亞硝酸鈉滴定液 0 1mol L或0 05mol L 迅速滴定 隨滴隨攪拌 至近終點時 將滴定管的尖端提出液面 用少量水淋洗尖端 洗液并入溶液中 繼續(xù)緩緩滴定 至電流計指針突然偏轉(zhuǎn) 并不再回復(fù) 即為滴定終點 2 電位法USP 28 3 外指示劑法KI 淀粉糊劑或試紙2NaNO2 2KI 4HCl 2NO I2 2KCl 2NaCl 2H2O 4 內(nèi)指示劑法中性紅不可逆指示劑 4 測定方法鹽酸普魯卡因Ch P 2005 取本品約0 6g 精密稱定 照永停滴定法 附錄 A 在15 25 用亞硝酸鈉滴定液 0 1mol L 滴定 每1ml亞硝酸鈉滴定液 0 1mol L 相當(dāng)于27 28mg的C13H20N2O2 HCl 二 非水溶液滴定法脂烴胺側(cè)鏈 具弱堿性 三 分光光度法對乙酰氨基酚在0 4 氫氧化鈉溶液中 于257nm波長處有最大吸收 其紫外吸收光譜特征 可用于其原料及其制劑的含量測定 對乙酰氨基酚原料 片劑 咀嚼片 泡騰片 注射液 栓劑 膠囊 顆粒 對乙酰氨基酚Ch P 2005 取本品約40mg 精密稱定 置25ml量瓶中 加0 4 氫氧化鈉溶液50ml溶解后 加水至刻度 搖勻 精密量取5ml 置100ml量瓶中 加0 4 氫氧化鈉溶液10ml 加水至刻度 搖勻 在257nm的波長處測定吸光度 按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計算 即得 USP 28 對照法 例精密稱取對乙酰氨基酚42mg 置250ml量瓶中 加0 4 氫氧化鈉溶液50ml溶解后 加水至刻度 搖勻 精密量取5ml 置100ml量瓶中 加0 4 氫氧化鈉溶液10ml 加水至刻度 搖勻 在257nm的波長處測定吸光度為0 594 按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計算百分含量 W 42mg V 250ml5ml 100mlD 100 5 片劑 吸收系數(shù)法定量 例取標(biāo)示量為0 3g的對乙酰氨基酚片10片 總重為3 3660g 稱出44 9mg 置250ml量瓶中 加0 4 氫氧化鈉溶液50ml及水50ml 振搖15min 加水至刻度 搖勻 用干燥濾紙濾過 棄去初濾液 精密量取續(xù)濾液5ml 置100ml量瓶中 加0 4 氫氧化鈉溶液10ml 加水至刻度 搖勻 在257nm的波長處測的吸光度為0 583 按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計算本片劑的標(biāo)示量 片劑 吸收系數(shù)法 四 比色法 五 熒光法 熒光探針技術(shù)使熒光衍生化試劑與本身無熒光或熒光效率低的化合物反應(yīng) 其產(chǎn)物具有強熒光 從而使檢測靈敏度大大提高 激發(fā)波長 ex400nm發(fā)射波長 em485nm測定熒光強度 標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量 六 HPLC法鹽酸普魯卡因注射液 可同時測定鹽酸普魯卡因及其降解產(chǎn)物對氨基苯甲酸離子抑制色譜法內(nèi)標(biāo)法定量 七 生物樣品分析 一 分光光度法測定人唾液中對乙酰氨基酚的含量 1 預(yù)處理方法唾液 三氯醋酸去蛋白2 測定方法分光光度法 二 對乙酰氨基酚急性中毒的血藥濃度檢測分析 1 預(yù)處理方法血漿 硫酸鋅去蛋白 乙醚提取 氮氣流揮干 水溶解2 測定方法加預(yù)柱 反相高效液相色譜法測定 第二節(jié)苯乙胺類藥物的分析 苯乙胺類藥物的基本結(jié)構(gòu) 常見的苯乙胺類藥物 鹽酸苯乙雙胍 鹽酸克侖特羅 鹽酸麻黃堿 硫酸沙丁胺醇 一 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 1 脂烴胺基側(cè)鏈 顯弱堿性2 酚羥基 易氧化變色 可發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)3 具手性碳原子 具旋光性 4 溶解性游離堿難溶于水 易溶于有機溶劑 其鹽可溶于水5 UV6 IR7 取代基 具芳伯氨基的鹽酸克侖特羅可用重氮化 偶合反應(yīng)鑒別 亞硝酸鈉滴定法測定含量 二 鑒別試驗 1 三氯化鐵反應(yīng)2 氧化反應(yīng)3 與甲醛 硫酸反應(yīng)4 UV與IR 5 與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng) Rimini反應(yīng) 脂肪族伯胺的專屬反應(yīng) 6 雙縮脲反應(yīng)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)的鹽酸麻黃堿 鹽酸偽麻黃堿可用此反應(yīng)鑒別 三 特殊雜質(zhì)檢查 雜質(zhì)來源原料殘存檢查方法含量測定法 UV法 一 酮體的檢查 檢查原理利用酮體在310nm波長處有最大吸收 而藥物本身在此波長處幾乎沒有吸收 規(guī)定一定濃度溶液在310nm波長處的吸收度限制酮體的量 例中國藥典 2005年版 規(guī)定腎上腺素中檢查酮體的方法為 取本品 加鹽酸溶液 9 2000 制成每1ml中含2 0mg的溶液 于310nm波長處測定 吸光度不得過0 05 已知酮體在310nm波長處的百分吸收系數(shù)為453 腎上腺素在該波長處無吸收 計算腎上腺素中酮體的限量 二 有關(guān)物質(zhì)檢查鹽酸去氧腎上腺素 硫酸沙丁胺醇等藥物檢查方法 TLC中高低濃度對比法配制兩種濃度對照溶液 三 鹽酸苯乙雙胍中有關(guān)物質(zhì)的檢查檢查方法 紙色譜法 PC 分離后 甲醇萃取 照分光光度法于232nm波長處測定吸光度 控制吸光度以控制有關(guān)物質(zhì)的量 四 含量測定 一 非水溶液滴定法原料藥脂烴胺基側(cè)鏈 顯弱堿性 二 溴量法鹽酸去氧腎上腺素及其注射液 重酒石酸間羥胺反應(yīng)摩爾比為1 3 三 比色法鹽酸克侖特羅栓具芳伯氨基 可發(fā)生重氮化 偶合反應(yīng) 對照法定量 偶合劑N 1 萘基 乙二胺遇亞硝酸也能顯色 干擾比色測定 所以在重氮化后 應(yīng)加氨基磺酸銨將剩余的亞硝酸分解除去 再加偶合試劑N 1 萘基 乙二胺 四 提取酸堿滴定法 提取中和法 提取容量法 1 原理與方法 鹽類可溶解于水 不溶于有機溶劑 游離堿不溶于水 易溶于有機溶劑 依據(jù)性質(zhì) 1 堿化 2 有機溶劑提取 3 中和法測定 直接滴定法用于堿性較強的有機堿 剩余滴定法用于堿性較弱的有機堿 酸滴定液返提后剩余滴定法用于對熱不穩(wěn)定的有機堿 1 堿化試劑最常用氨水 2 提取溶劑 提取溶劑選擇的原則 常用的提取溶劑最常用氯仿 2 測定條件的選擇 提取溶劑的用量及提取次數(shù)通常應(yīng)提取4次 第一次用量至少應(yīng)為水液體積的一半 以后幾次應(yīng)各為第一次的一半 3 提取終點的確定用合適的沉淀反應(yīng)確定 4 指示劑的選擇 5 乳化的預(yù)防和消除 儀器簡單 試劑常用 但操作繁瑣 費時 精密度差 準(zhǔn)確度差 主要用于制劑分析 3 特點 4 應(yīng)用 硫酸苯丙胺及