果蔬菜中農(nóng)藥殘留測(cè)定實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)四 果蔬菜中農(nóng)藥殘留測(cè)定 環(huán)境工程 李婷婷 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 練習(xí)使用農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀 掌握其操作過(guò)程 2 掌握酶抑制法的實(shí)驗(yàn)原理 二 實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)采用酶抑制法 有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑酶活性 使本可以由酶參與的顯色反應(yīng)而失去顏色 呈白色 可用比色法定 量抑制程度 抑制率是有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制酶能力的強(qiáng) 弱 在一定條件下 有機(jī)磷和氨基甲酸脂類農(nóng)藥對(duì)膽堿脂酶正常功能 有抑制作用 其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān) 正常情況下 酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物 乙酰膽堿 水解 其水解產(chǎn) 物與顯色劑反應(yīng) 產(chǎn)生黃色物質(zhì) 用分光光度計(jì)在 412nm 處測(cè)定吸 光度隨時(shí)間的變化值 計(jì)算出抑制率 通過(guò)抑制率可以判斷出樣品 中是否含有高劑量有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在 三 實(shí)驗(yàn)步驟 1 參數(shù)設(shè)置 2 校準(zhǔn)測(cè)量 選擇校準(zhǔn)菜單后 取 2 5ml 試劑一移入比色瓶后 各取 100ul 試劑二和試劑三倒入比色瓶中 蓋緊搖勻 放入比色槽中 放置 10min 按校準(zhǔn)鍵 儀器顯示正在預(yù)熱 儀器發(fā)出嘀嘀嘀三聲 后 表示校準(zhǔn)完畢 3 空白測(cè)量 接上步 按空白測(cè)量鍵 儀器顯示正在預(yù)熱 發(fā) 出嘀嘀嘀三聲后 提示加入試劑四 取出比色瓶加入 100ul 試劑四 蓋好搖勻 放入比色瓶中 按回車?yán)^續(xù) 儀器顯示正在測(cè)量 倒計(jì) 時(shí)三分鐘 結(jié)束后同樣發(fā)出嘀嘀嘀三聲 并顯示吸光度值 A1 A2 4 樣品測(cè)量 4 1 樣品制備 選取有代表性的果蔬樣品 擦去表面泥土 葉菜用葉菜取樣器取葉片部分 果實(shí)蔬菜可切割 然后切成 1cm 左右的見(jiàn)方碎片 稱取 2 0g 樣品 4 2 樣品中農(nóng)藥的提取 將 6 個(gè)樣品提取瓶放在支架上 各 放入 2 0g 樣品 各加 10 ml 試劑一 用攪拌針使樣品全部浸入 液體中 放入提取儀中萃取 6 分鐘 之后放回支架 取 2 5ml 注 入比色瓶中 4 3 樣品測(cè)量 選擇測(cè)量鍵 各加 100ul 試劑二和試劑三混 合搖勻 按確認(rèn)鍵進(jìn)行測(cè)量 預(yù)熱結(jié)束后 儀器顯示正在培養(yǎng) 10 分鐘后結(jié)束 發(fā)出嘀嘀嘀三聲 提示加入試劑四 加入后 按 確認(rèn)鍵三分鐘后 屏幕顯示結(jié)果 四 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 1 抑制率公式 E A2 A1 A4 A3 A2 A1 100 E 抑制率 A1 空白測(cè)量 3 分鐘前的吸光度值 A2 空白測(cè)量 3 分鐘后的吸光度值 A3 樣品測(cè)量 3 分鐘前的吸光度值 A4 樣品測(cè)量 3 分鐘后的吸光度值 2 結(jié)果判定 當(dāng)被測(cè)樣品的抑制率在 50 以上時(shí) 表示被測(cè)樣 品中有高劑量有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在 樣品為陽(yáng)性結(jié)果 陽(yáng)性結(jié)果的樣品需要檢測(cè)兩次以上 對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品 可用其他 方法進(jìn)一步確定農(nóng)藥品種的含量 并報(bào)有關(guān)部門處理 實(shí)驗(yàn)所測(cè)樣品為豆角 經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)得 A1 0 029 A2 0 617 A2 A1 0 646 0 300 所以空白有效 A3 0 329 A4 1 117 1 8 所以此樣品檢測(cè)有效 抑制率為 4 1 小于 50 所以樣品檢測(cè)一次即可 五 問(wèn)題與討論 本次實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的問(wèn)題有以下幾點(diǎn) 1 試劑二用量 若 A2 A1 小于 0 300 此空白無(wú)效 需要重新 檢測(cè) 若多次測(cè)定后 仍小于 0 300 則需要增加試劑二的用量 直 到大于為止 2 吸光度確認(rèn) 在樣品測(cè)量結(jié)束后 若 A4 大于 1 80 則此樣 品檢測(cè)無(wú)效 需重新檢測(cè) 多次測(cè)量后仍大于 1 80 為果蔬色素干 擾 需要對(duì)被測(cè)樣品進(jìn)行整株提取 不要剪碎樣品 3 注意時(shí)間間隔 提示加入試劑四時(shí)應(yīng)該在嘀嘀嘀三聲后加入 空白和樣品 且做空白和樣品時(shí)加入試劑