生物制藥進(jìn)展論述復(fù)習(xí).doc

論述主題1、Presentation2、腫瘤免疫治療一、概述人體的免疫狀況與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有著密切的關(guān)系。通常情況下腫瘤與機(jī)體防御之間處于動態(tài)平衡，這種動態(tài)平衡的失調(diào)可導(dǎo)致腫瘤的增殖與播散。免疫系統(tǒng)可以消滅外來的各種有害微生物侵襲，亦時刻監(jiān)視著我們體內(nèi)有害細(xì)胞的生成，一旦發(fā)現(xiàn)異常的有害細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞）立即進(jìn)行消滅、清除。通過人為的方法來恢復(fù)、增強(qiáng)人體免疫功能，從而抑制或消除腫瘤生長的治療方法，稱為腫瘤的免疫治療。在現(xiàn)代分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)飛速發(fā)展的推動下，免疫治療日益受到重視，顯示出良好的效果及應(yīng)用前景，成為世界公認(rèn)腫瘤治療的第四模式。二、腫瘤發(fā)病機(jī)理腫瘤的發(fā)病機(jī)理目前尚不十分清楚。一般認(rèn)為：人體內(nèi)存在兩類基因，一是抑癌基因，一是促癌基因。通常二者處于平衡狀態(tài)，在外界不良因素不斷作用下（化學(xué)致癌因素、物理致癌因素、病毒致癌因素等），二者平衡發(fā)生紊亂，出現(xiàn)異常細(xì)胞并不斷增殖而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。三、腫瘤發(fā)生與免疫的關(guān)系我們每個人均不同程度受到外界不良因素的刺激，腫瘤發(fā)生與我們每個人自身免疫能力有著密切關(guān)系，免疫功能低下者易得腫瘤，這就是我們臨床上常見腫瘤在老年人和兒童高發(fā)的原因。還有一種情況是免疫力正常的人亦能得腫瘤，如年輕體壯的人亦得腫瘤，這主要是腫瘤細(xì)胞逃脫了我們的免疫監(jiān)視。其原因有：（1）腫瘤細(xì)胞的免疫原性弱。（2）腫瘤抗原被封閉。（3）腫瘤誘發(fā)免疫抑制：腫瘤產(chǎn)生免疫抑制細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞分泌免疫抑制因子。（4）腫瘤細(xì)胞漏逸，生長迅速，超越了機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)，使宿主不能有效清除。四、腫瘤的免疫治療腫瘤的免疫治療分為：主動免疫、被動免疫、繼承性免疫治療。（1）被動免疫：指應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，激活機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答，以達(dá)到治療腫瘤的目的。目前效果肯定的藥物：干擾素、白介、胸腺肽、胸腺肽1等。其它如：香菇多糖、豬苓多糖、酵母多糖等。（2）主動免疫（ASI）：利用腫瘤細(xì)胞或腫瘤抗原物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體的特異性免疫和體液免疫，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤能力，阻止腫瘤的生長、擴(kuò)散和復(fù)發(fā)以治療腫瘤的方法。目前最常用的腫瘤疫苗：根據(jù)制備方法不同可分為多肽疫苗、核酸疫苗、含蛋白疫苗、重組病毒疫苗、細(xì)菌疫苗、DC疫苗等。腫瘤疫苗與傳統(tǒng)疫苗在概念上不同，它主要不是用于腫瘤的預(yù)防，而是通過疫苗接種來刺激機(jī)體對腫瘤的免疫應(yīng)答來治療腫瘤，對手術(shù)后清除微小轉(zhuǎn)移灶和隱匿灶，預(yù)防腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有較好的效果。（3）繼承免疫治療（AIT）：又稱過繼免疫治療，是將活化具有殺傷性的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)輸給腫瘤病人，提高機(jī)體的抗腫瘤能力，殺傷患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的一種療法。目前可供轉(zhuǎn)輸?shù)募?xì)胞有LAK細(xì)胞，CTL細(xì)胞等。在各種腫瘤免疫治療方法中，繼承性免疫治療因其具有以下優(yōu)點(diǎn)而最受人們重視：1）免疫細(xì)胞在體外活化，增殖后可以恢復(fù)特異性抗腫瘤作用，腫瘤抗原特異性耐受的免疫細(xì)胞可被逆轉(zhuǎn)。2）由于生物工程技術(shù)的發(fā)展，使體外活化擴(kuò)增大量抗腫瘤免疫細(xì)胞更為方便可行。3）免疫細(xì)胞在體外擴(kuò)增可避免一些制劑體內(nèi)大量應(yīng)用帶來嚴(yán)重的副作用。4）在體外擴(kuò)增免疫細(xì)胞數(shù)量大于腫瘤疫苗在體內(nèi)激活的效應(yīng)細(xì)胞數(shù)，所以繼承性免疫治療是目前應(yīng)用最廣最有希望的腫瘤免疫療法。=*淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）：用自體或異體淋巴細(xì)胞（主要是NK細(xì)胞）在體外經(jīng)大劑量IL2培養(yǎng)后誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類新型殺傷細(xì)胞。其殺傷腫瘤細(xì)胞不需要抗原致敏，具有廣普的抗腫瘤活性，所以殺瘤譜更廣，可殺傷NK細(xì)胞所不能殺傷的腫瘤細(xì)胞。對全身各部位腫瘤有較好療效，對預(yù)防腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)有較好的效果。另外，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，可以顯著改善患者的全身癥狀，恢復(fù)患者骨髓功能，可表現(xiàn)為患者面色紅潤，食欲增進(jìn)，體力改善，癥狀減輕，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)。*腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞（T I L細(xì)胞）：是腫瘤組織分離出的淋巴細(xì)胞，在體外經(jīng)IL2培養(yǎng)產(chǎn)生。是自體腫瘤特異性殺傷細(xì)胞，其抗瘤作用比LAK細(xì)胞強(qiáng)，但因耗時費(fèi)力、容易污染、不易培養(yǎng)擴(kuò)增等而難以廣泛應(yīng)用。=*神奇的LAK細(xì)胞LAK細(xì)胞又稱淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞。它是用自體或異體外周血淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)大劑量IL2培養(yǎng)后誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類新型的免疫細(xì)胞。它除有強(qiáng)大抗腫瘤作用外，還有強(qiáng)大的非特異性的細(xì)胞毒作用，如抗炎、抗細(xì)菌、抗病毒等作用。還有較強(qiáng)恢復(fù)骨髓功能，改善患者體力、精神狀態(tài)。由于LAK細(xì)胞在體外培養(yǎng)及在體內(nèi)都必須有IL2的激活才能發(fā)揮其治療作用，所以亦叫IL2/LAK細(xì)胞療法。亦是近十多年來科學(xué)界發(fā)現(xiàn)并為之驚喜的有別于以前的主動免疫、被動免疫的第三種免疫治療方法，繼承性免疫或叫過繼性免疫治療。其定義：指給患者轉(zhuǎn)輸免疫細(xì)胞或其產(chǎn)物（包括轉(zhuǎn)移因子，免疫RNA等），以轉(zhuǎn)遞并發(fā)揮其免疫效應(yīng)，達(dá)到治療腫瘤和其他疾?。ㄈ缑庖咝约膊?、感染等）的目的。臨床應(yīng)用：一、抗腫瘤：是最有前途的腫瘤免疫治療方法之一，其抗瘤譜廣，無須抗原刺激，抗瘤作用強(qiáng)，能消滅耐NK細(xì)胞的瘤細(xì)胞，對全身各部位腫瘤有較好療效，對腎癌、黑色素細(xì)胞瘤、血液系統(tǒng)惡性腫瘤、結(jié)直腸癌、膀胱癌、肝癌等及癌性胸腹水療效更好，對預(yù)防腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)也有較好的效果。二、風(fēng)濕性疾?。河捎谄渚哂忻庖哒{(diào)節(jié)及抗炎作用，對系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，強(qiáng)直性脊柱炎等有較好治療作用，與其他抗風(fēng)濕治療結(jié)合，可加快癥狀改善，縮短療程，提高療效。三、抗感染：對慢支、支氣管哮喘，支擴(kuò)合并肺部感染，年老體弱合并感染及其他原因合并重癥感染，耐藥肺結(jié)核等均有很好的治療效果。四、抗病毒：對乙型肝炎、丙肝等抗病毒療效較目前干擾素、拉米夫定等藥物好，對乳頭狀瘤及軟下疳等性病的治療效果幾乎可達(dá)100%。五、其他疾?。弘y治性腎病、糖尿病胰島素抵抗等疾病均有較好的治療效果。由于LAK細(xì)胞需在嚴(yán)格的無菌室培養(yǎng)，需特殊培養(yǎng)液，需從外周血中分離出淋巴細(xì)胞并經(jīng)過洗滌等環(huán)節(jié)，需有完善的硬件設(shè)施及先進(jìn)的生物技術(shù)，再加之費(fèi)用較高，限制了其在臨床上應(yīng)用，雖然LAK細(xì)胞療法效果好，但臨床應(yīng)用并不普及。3、世界上著名的生物制藥公司及核心產(chǎn)品全球十大生物技術(shù)公司 全球生物技術(shù)公司的領(lǐng)頭羊-安進(jìn)公司（Amgen）諾和諾德公司（Novo Nordisk）基因技術(shù)公司（Genentech）Serono公司 Biogen公司 Chiron公司 Genzyme公司 Immunex公司MedImmune公司CSL公司 *注：安進(jìn)與Immunex公司合并（1）安進(jìn)，Amgen1980年創(chuàng)建；公司使命：利用細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)的技術(shù)，研究開發(fā)高效、低副作用的疾病治療藥物。1989年6月重組人紅細(xì)胞生成素（EPO）1991年2月重組粒細(xì)胞集落刺激因子1992年首次躋身財富500強(qiáng)2000年財富500強(qiáng)排名第455位。全球醫(yī)藥50強(qiáng)中排在21位。*目前涉足領(lǐng)域有：1）人類基因組領(lǐng)域：osteoprotogerin；2）腫瘤生物學(xué)領(lǐng)域；3）神經(jīng)科學(xué):BDNF、leptin*產(chǎn)品列表藥物名稱 有效成分 合作公司 適應(yīng)疾病 Aranesp 促紅細(xì)胞生成素,新的紅血球生成刺激蛋白，三星期服藥一次 無 各種貧血 Kineret 重組白介素-1受體拮抗劑 無 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 Epogen 促紅細(xì)胞生成素 無 血液系統(tǒng)疾病 Infergen 干擾素-1 無 免疫系統(tǒng),感染性疾病,肝臟及膽囊 Neupogen 粒細(xì)胞集落刺激因子 無 血液系統(tǒng)疾病 *新藥列表藥 物 名 稱 有效成分 開發(fā)公司 合作公司 適應(yīng)疾病 臨床階段 Abarelix-Depot-F 黃體荷爾蒙釋放激素 (LHRH) Praecis Pharmaceuticals AmgenSanofi-Synthelabo SA - France 女性健康 2/3 Stemgen Ancestim,干細(xì)胞因子,與Neupogen一起給藥 Amgen 無 乳腺癌 NDA/BLA 癌癥 移植排斥 StemgenAncestim,Amgen無 貧血 1/2 淋巴瘤 多發(fā)性骨髓瘤 Abarelix-Depot-M (PPI-149)促黃體素釋放激素（LHRH）拮抗劑 Praecis Pharmaceuticals Sanofi-Synthelabo SA - FranceAmgen 癌癥大類 NDA/BLA藥 物 名 稱 有效成分 合作公司 適應(yīng)疾病 臨床階段 CalCimimetiCS 口服小分子化合物，與鈣受體結(jié)合，減少甲狀旁腺激素的分泌 NPSPharmaceuticals 原發(fā)性和繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥 2/3 Kera (KGF) 重組上皮組織生長因子 -治療癌癥放化療患者重度和長期口腔粘膜炎 II期 sTNF-RI重組可溶性腫瘤壞死因子受體-1 - 治療中度到重度的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；2 BDNF 一種腦源性的神經(jīng)營養(yǎng)因子 肌萎縮側(cè)索硬化 2Leptin 脂肪貯存組織與下丘腦之間的信號傳導(dǎo)蛋白-治療肥胖癥和2型糖尿病2NeuroimmunophilinS 口服有效的小分子神經(jīng)營養(yǎng)劑 帕金森綜合征 2Osteoprotegerin(OPC) 一種可抑制骨丟失的蛋白質(zhì) - 預(yù)防骨質(zhì)疏松和抑制腫瘤擴(kuò)散到骨組織引起的骨再吸收 1（2）基因泰克，基因技術(shù)公司（Genentech） 1976年成立年銷售額達(dá)12.8億美元（2000年）2000年在全球醫(yī)藥50強(qiáng)中排在37位目前羅氏公司已控股基因技術(shù)公司公司的目標(biāo)是利用人類遺傳信息，研究開發(fā)、生產(chǎn)和銷售目前難以治療的重要疾病的治療藥物。*研究領(lǐng)域主要集中在腫瘤、心血管系統(tǒng)疾病和內(nèi)分泌疾病。14種生物技術(shù)藥物獲得批準(zhǔn)，公司自己生產(chǎn)并銷售其中的9種產(chǎn)品。*基因技術(shù)公司上市產(chǎn)品*基因技術(shù)公司新藥（3）健贊，Genzyme公司成立于1981年，總部位于美國麻薩諸塞州的劍橋，致力于為醫(yī)療領(lǐng)域提供創(chuàng)新產(chǎn)品與服務(wù)。三家子公司Genzyme Biosurgery 、Genzyme General 、Genzyme Molecular Oncology和一個參股公司Genzyme Transgenics Corporation。2000年公司年總收入為9.03億美元，經(jīng)營虧損4076萬美元。（4）瑞士雪蘭諾，Serono SA（Serono）1906年成立于意大利羅馬，總部設(shè)在瑞士日內(nèi)瓦。2000年公司的銷售額為11.47億美元。以公司年收入進(jìn)行排名，Serono公司排名第四。2000年在全球醫(yī)藥50強(qiáng)中排在41位。*主要集中在以下三個疾病治療領(lǐng)域：生殖健康；多發(fā)性硬化癥；生長和代謝疾病。*主要的治療用蛋白質(zhì)藥物有：干擾素-；生長激素；人絨毛膜促性腺激素等。*Serono產(chǎn)品列表*Serono新藥列表（5）生物基因公司，Biogen Idec,Inc（Biogen）1978年成立于瑞士日內(nèi)瓦，總部設(shè)于法國巴黎。2000年公司的總收入為9.26億美元，總銷售額為7.61億美元，凈收益3.34億美元。2000年在全球醫(yī)藥50強(qiáng)中的排在第45位。*研究領(lǐng)域集中：多發(fā)性硬化癥、炎癥、呼吸道和腎臟疾病以及某些病毒感染和腫瘤疾病。干擾素-1b AVONEX、干擾素-2b Intron、乙肝疫苗( ENGERIX-B/RECOMBIVAX）、凝血酶抑制劑（bivalirudin,ANGIOMAX）*公司上市產(chǎn)品只有干擾素-1b AVONEX。*Biogen新藥列表（6）凱龍，Chiron1981年創(chuàng)立，總部位于美國加利福尼亞。2000年公司的總收入達(dá)9.72億美元，產(chǎn)品銷售額為6.27億美元。2000年在全球醫(yī)藥50強(qiáng)中排行第48位。*產(chǎn)品主要分布在疫苗（30多種）、血液檢測試劑和生物藥物三個醫(yī)藥市場。（8）Novo Nordisk*前身：諾和（Novo）公司和諾德（Nordisk），1989年合并成為諾和諾德公司；主要業(yè)務(wù)范圍是研究和生產(chǎn)生物藥物和工業(yè)用酶制劑；總部設(shè)在丹麥?zhǔn)锥几绫竟?993年進(jìn)入中國；2000年11月14日制藥產(chǎn)業(yè)和工業(yè)酶制劑分離，諾和諾德公司集中在制藥行業(yè)領(lǐng)域里發(fā)展；2000年公司在全球的藥品銷售額為24.79億美元，在全球醫(yī)藥50強(qiáng)中排在27位。*四個治療領(lǐng)域：糖尿??；凝血障礙領(lǐng)域；人生長激素；激素替代療法。*諾和諾德開發(fā)領(lǐng)域1）糖尿病領(lǐng)域：速效胰島素、短效胰島素、中效胰島素、混合胰島素、長效胰島素、各種給藥系統(tǒng)、口服降糖藥（repaglinide瑞格列奈）2）凝血障礙領(lǐng)域：重組凝血因子a3）生長激素：人垂體中提取、基因工程4）激素替代療法：activelle、kliogest、trisequens、estroleme、vagifem*Chiron主要產(chǎn)品*Chiron主要新藥（7）醫(yī)療免疫公司，MedImmune,Inc.(MEDI)（MedImmune公司）1988年成立于美國馬里蘭州的Gaithersburg*開發(fā)生產(chǎn)抗感染藥物、抗腫瘤藥物和免疫調(diào)節(jié)藥物2000年公司的總收入5.405億美元，銷售額為4.958億美元，凈收入1.472億美元。*目前有5個產(chǎn)品上市：1）Synagis人源性單克隆抗體2）CytoGam細(xì)胞巨化病毒免疫球蛋白IV3）Ethyol靜脈用有機(jī)的細(xì)胞硫代磷酸鹽制劑4）Neutrixin脂溶性,靜脈給藥的氨甲蝶呤類似物5）RespiGam呼吸道合胞病毒免疫球蛋白*MedImmune公司新藥列表（9）Immunex公司創(chuàng)建于1981年，位于美國華盛頓，從事腫瘤和自身免疫疾病治療藥物研究開發(fā)、生產(chǎn)和銷售。1995年被美國家用公司收購。收入8.6億美元。2000年公司入選財富雜志“美國100家最佳工作公司”。*已上市的產(chǎn)品：ENBREL (etanercept)；LEUKINE (sargramostim，粒細(xì)胞巨嗜細(xì)胞集落刺激因子)；NOVANTRONE (mitoxantrone for injection concentrate阿霉素和IDARUBICIN的類似化合物)*Immunex新藥列表（10）CSL公司成立于1916年，其前身是聯(lián)邦血清試驗室；總部位于澳大利亞。2000年收入：5.043億美元*經(jīng)營的范圍可分為四大塊：1）藥物領(lǐng)域；2）血液制品；3）獸藥；4）科學(xué)實(shí)驗試劑阿帕萊拉公司，Applera Corporation吉利德公司，Gilead Science,IncCephalon4、嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞免疫療法（CART）5、DNA疫苗一、基因疫苗DNA疫苗是在基因治療技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的。DNA疫苗即將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達(dá)系統(tǒng)的質(zhì)粒上，然后將質(zhì)粒直接導(dǎo)入人或動物體內(nèi)，讓其在宿主細(xì)胞中表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答?？乖蛟谝欢〞r限內(nèi)的持續(xù)表達(dá)，不斷刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，使之達(dá)到防病的目的。DNA疫苗不同于傳統(tǒng)的疫苗，DNA疫苗旨在將病原微生物的某種專門組分的裸露DNA編碼直接注入機(jī)體內(nèi)。二、基因疫苗的機(jī)理激活免疫系統(tǒng)的詳細(xì)機(jī)制尚不十分清楚。一般認(rèn)為，含病原體抗原基因的核酸疫苗被導(dǎo)入宿主骨骼肌細(xì)胞或皮膚細(xì)胞后，可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)病原體的蛋白質(zhì)抗原，經(jīng)加工后形成的多肽抗原可與宿主細(xì)胞MHC類和類分子結(jié)合，并被提呈給宿主的免疫識別系統(tǒng),從而可引起特異性體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。三、基因疫苗與傳統(tǒng)疫苗相比的優(yōu)點(diǎn)基因疫苗相比傳統(tǒng)疫苗，具有顯著的優(yōu)勢：（1）制備簡單，容易大量生產(chǎn)，成本低；（2）非常穩(wěn)定，易于貯存和運(yùn)輸，使用方便；（3）質(zhì)粒DNA無免疫原性，不會像重組疫苗那樣誘發(fā)針對載體的自身免疫反應(yīng)；（4）在宿主體內(nèi)的存在時間長，持續(xù)表達(dá)產(chǎn)生抗原蛋白，不斷刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生長程免疫，免疫效果可靠；（5）用核心蛋白保守DNA序列制備的基因疫苗對病原體的各變異亞型都可產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而避免了因病原體變異而造成的免疫逃避問題；（6）一個質(zhì)粒載體可克隆多個抗原基因組成多價苗，故一種基因疫苗可預(yù)防多種疾?。唬?）DNA可以干粉形式保存數(shù)年，且仍保持起活性。四、影響因素雖然DNA疫苗研究已經(jīng)取得長足的進(jìn)展，但多數(shù)DNA疫苗，尤其是針對大型動物和靈長類動物的DNA疫苗的免疫效果仍不理想，普遍存在免疫原性低、誘發(fā)的抗體滴度低以及不能完全清除病毒感染的問題，妨礙了其進(jìn)一步的臨床應(yīng)用。因此，探索提高DNA疫苗有效性的策略和方法是目前DNA疫苗研制的重要環(huán)節(jié)。已有的研究表明，多種因素影響DNA疫苗的免疫效果，如目的基因的選擇、質(zhì)粒載體的選擇、免疫佐劑的選擇等，其中免疫途徑的選擇是一個重要方面。五、基因疫苗的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑DNA疫苗存在多種不同的免疫途徑，不同免疫途徑和免疫方式可對抗原DNA的吸收、表達(dá)和遞呈產(chǎn)生影響，從而誘導(dǎo)出不同強(qiáng)度的免疫反應(yīng)，其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答機(jī)制也各不相同?，F(xiàn)有資料表明，不同DNA疫苗最佳的接種方式不同。因此，需根據(jù)客觀情況進(jìn)行優(yōu)化選擇。（1）電穿孔方法：近年來的研究結(jié)果顯示，電穿孔能作為一種有效的轉(zhuǎn)運(yùn)方式來提高 DNA 疫苗的免疫原性。電穿孔是利用電脈沖瞬時電擊細(xì)胞的質(zhì)膜提高質(zhì)膜通透性，以促進(jìn)大分子或親水性分子進(jìn)入細(xì)胞的方法，常用于外源基因的導(dǎo)入。作為一種新型的DNA 疫苗轉(zhuǎn)運(yùn)方式，能促進(jìn)宿主細(xì)胞對 DNA 疫苗的吸收，并產(chǎn)生低水平的炎癥反應(yīng)促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞在注射點(diǎn)聚集。（2）基因槍方法：基因槍法又稱粒子轟擊、高速粒子噴射技術(shù)或基因槍轟擊技術(shù)，通過動力系統(tǒng)將帶有基因的金屬顆粒（金?；蜴u粒），將 DNA 吸附在表面，以一定的速度射進(jìn)靶細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的目的。小顆粒穿透力強(qiáng)，不需對靶細(xì)胞進(jìn)行修飾。基因槍具有應(yīng)用面廣、方法簡單、對治療基因的大小要求不嚴(yán)格、轉(zhuǎn)化時間短、瞬時表達(dá)持續(xù)時間長、一次處理多個細(xì)胞、安全性高等優(yōu)點(diǎn)。用比普通的注射法低 23 個數(shù)量級的 DNA 即可產(chǎn)生較高的保護(hù)作用，但轉(zhuǎn)化效率相對較低，是目前廣泛應(yīng)用且十分高效的免疫方法。（3）直接注射：所謂直接注射法就是將重組質(zhì)粒 DNA 直接注射到動物或人體的不同部位，這種方法需要大量重組質(zhì)粒 DNA，但操作簡單，不需復(fù)雜設(shè)備，是臨床和實(shí)驗中的一種常用方法。根據(jù)注射部位不同，可以分為皮下注射、肌肉注射以及淋巴注射。（4）黏膜途徑：黏膜免疫系統(tǒng)是由分布在呼吸道、消化道、泌尿生殖道以及外分泌腺等黏膜組織內(nèi)的淋巴組織和免疫活性細(xì)胞共同形成的一個完整的免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)。與非黏膜免疫相比，黏膜免疫除可引起機(jī)體產(chǎn)生全身免疫應(yīng)答外，還可誘導(dǎo)黏膜免疫應(yīng)答，從而有效提高機(jī)體的免疫保護(hù)力。常用的黏膜免疫途徑包括鼻滴、鼻吸、鼻內(nèi)噴霧、消化道給藥、陰道給藥、口服、口腔內(nèi)噴霧等。黏膜免疫方法還具有安全、簡便、無創(chuàng)傷等優(yōu)點(diǎn)。（5）納米技術(shù)輔助運(yùn)輸：納米技術(shù)的運(yùn)用能為藥物運(yùn)輸，包括基因疫苗的運(yùn)輸帶來很多改進(jìn)?，F(xiàn)在研究較成熟的主要有脂質(zhì)體、殼聚糖納米粒、金顆粒等。脂質(zhì)體是指將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型泡囊體。用脂質(zhì)體包裹 DNA 疫苗可通過非注射方式將 DNA 疫苗轉(zhuǎn)運(yùn)到動物或人體內(nèi)。脂質(zhì)體與其他運(yùn)載體相比具有靶向性和淋巴定向性、緩釋作用、提高主藥穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)。因此，當(dāng)用脂質(zhì)體包裹 DNA 疫苗運(yùn)輸?shù)襟w內(nèi)時，可延長疫苗作用時間。脂質(zhì)體的給藥途徑主要是靜脈注射、肌內(nèi)和皮下注射、口服給藥、眼部給藥、肺部給藥、經(jīng)皮給藥和鼻腔給藥等。六、基因疫苗領(lǐng)域的研究進(jìn)展關(guān)于基因免疫的研究在世界范圍內(nèi)廣泛展開，所涉及的范圍包括人和動物的各種細(xì)菌性疾病、病毒性疾病、寄生蟲病及腫瘤性疾病。目前，在醫(yī)學(xué)上針對結(jié)核桿菌、艾滋病病毒、流感病毒等的基因疫苗已進(jìn)入臨床階段；而針對乙型，丙型，戊型肝炎病毒、狂犬病病毒牛皰疹病毒、人乳頭瘤病毒感染及相關(guān)癌癥、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等的核酸疫苗也正處于研究和開發(fā)之中。七、基因疫苗存在的一些問題（1）安全性問題：質(zhì)粒DNA一般不會整合到宿主細(xì)胞的基因組上，目前也未發(fā)現(xiàn)插入突變的證據(jù)，但不能完全排除少數(shù)質(zhì)粒DNA插入到染色體上引起突變的可能性，一旦整合到基因組中就可能使細(xì)胞癌基因激活或抑癌基因失活；（2）保護(hù)效率問題：目前為止，基因疫苗的免疫效率很難達(dá)到百分之百的免疫保護(hù)，且存在明顯的種屬個體差異，這可能與不同動物細(xì)胞需要不同啟動子、抗原基因、給藥方法途徑、給藥量有關(guān)；（3）免疫耐受問題：基因疫苗體內(nèi)持續(xù)表達(dá)產(chǎn)生抗原蛋白，可能打破機(jī)體本身的免疫平衡，引發(fā)免疫耐受。八、展望基因疫苗是 20 世紀(jì) 90 年代發(fā)展起來的一項新的生物技術(shù)，作為一種新型疫苗，已成為疫苗研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，具有廣泛應(yīng)用前景。目前美國FDA 已批準(zhǔn)艾滋病、流感、結(jié)核、乙肝等 10 余種基因疫苗進(jìn)行臨床試驗，其中有的已進(jìn)入臨床 II、III期試驗階段，有望在不久的將來安全地應(yīng)用于人類疫病的防治，但有關(guān)基因疫苗在理論上的安全性問題，還需通過長時間的實(shí)驗加以克服，并不斷進(jìn)行優(yōu)化，進(jìn)一步提高其免疫效力，這也是今后基因疫苗研究的主要方向?；蛞呙缬捎谄渚哂械莫?dú)特優(yōu)勢，作為疫苗發(fā)展史上的一個里程碑，如果能夠克服現(xiàn)在存在的一些問題，將可作為感染性疾病的預(yù)防，也可作為腫瘤、自身免疫性疾病等的治療工具，為人類的健康和幸福提供可靠的保障。6、新藥研發(fā)新藥開發(fā)的一般程序發(fā)現(xiàn)新藥的途徑（1）定向篩選：設(shè)計某一特定的疾病模型或觀察指標(biāo)；設(shè)計、合成一定結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行篩選。（2）廣泛篩選：有目的、有針對性的對大量樣品進(jìn)行廣泛的活性篩選，以供進(jìn)一步研究，如化學(xué)藥物所用的高通量篩選、生物菌株等的廣泛篩選等。（3）一藥多篩：建立模擬人類疾病的動物實(shí)驗?zāi)Ｐ?，即篩選系統(tǒng)，對每樣品進(jìn)行系統(tǒng)篩選。（4）藥效關(guān)系研究：化學(xué)結(jié)構(gòu)相似或立體結(jié)構(gòu)相似的化合物，可能具有相似或相反的生物活性。（5）新方法、新技術(shù)：評價生物活性的新