NF-κBp 65和HIF-1α在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義.doc

NF-Bp 65和HIF-1在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義作者：萬金華,馬生秀,藺小倩單位：1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院；2.青海大學(xué)附屬醫(yī)院婦科【摘要】 目的 探討宮頸鱗癌組織中NF-κB p65、HIF-1α的蛋白表達(dá)水平及臨床病理意義。方法 采用免疫組織化學(xué)（PowerVision TM）二步法對56例宮頸鱗癌和25例正常宮頸組織進(jìn)行NF-κB p65、HIF-1α蛋白檢測。 結(jié)果 宮頸鱗癌組織NF-κB p65、HIF-1α的表達(dá)均高于對照組正常宮頸組織（P<0.01）。NF-κB p65的蛋白表達(dá)與患者的病理分級及有無淋巴轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性(P<0.05)；HIF-1α的蛋白表達(dá)與患者的臨床分期及有無淋巴轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性(P<0.05)。NF-κB p65和HIF-1α的蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.439,P<0.01）。 結(jié)論 聯(lián)合檢測NF-κB p65和HIF-1α蛋白表達(dá)對診斷宮頸鱗癌的意義優(yōu)于單純檢測NF-κB p65或HIF-1α蛋白表達(dá)。 【關(guān)鍵詞】 宮頸鱗癌 免疫組織化學(xué) NF-κB p65 HIF-1αEXPRESSIONS OF NF-κBp65 AND HIF-1ΑIN TISSUE OF CERVICAL SQUAMOUS CELL CARCINOMA AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE Wan Jinhua1 Ma Shengxiu2 Lin Xiaoqian 1.The Medical College of Qinghai University; 2.Department of Gynecology, The Affiliated Hospital of Qinghai University Abstract Objective To explore the relationship between expression of NF-κB p65 and HIF-1α in tissue of cervical squamous cell carcinoma and the clinical significance. Methods The expressions of NF-κB p65 and HIF-1α were examined by immuohistochemical staining in 56 specimens of cervical squamous cell carcinoma and 25 specimens of normal cervical tissue. Results The expression rates of NF-κB p65 and HIF-1α in cervical squamous cell carcinoma appeared significantly higher than that in normal cervical tissue ( P < 0. 01) . Expression of NF-κB p65 was correlated with histological grade and lymph node metastasis of cervical carcinoma (P < 0. 05); Expressions of HIF-1α was correlated with clinical stage and lymph node metastasis of cervical carcinoma (P < 0. 05). HIF-1αexpression was positively correlated with NF-κB p65 expression (r=0.584, P<0.01). Conclusion The combination of NF-κB p65 and HIF-1α expression in tissue of cervical squamous cell carcinoma shown much more valuable diagnostic indicator than either NF-κB p65 or HIF-1α alone. Key words Cervical carcinoma Immunohistochemistry NF-κB p65 HIF-1α NF-κB（nuclear facter-kappaB， NF-κB）被發(fā)現(xiàn)在控制免疫和炎癥反應(yīng)中具有重要作用：能抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖1 。在人體內(nèi)，NF-κB多為由p65（RelA）和p50組成的異源二聚體，是能調(diào)節(jié)多種基因表達(dá)的蛋白分子。資料表明人類許多不同組織來源的腫瘤中均有不同程度的NF-κΒ被異常激活2。HIF-1α(hypoxia-include factor 1α,HIF-1α)是缺氧條件下廣泛存在于哺乳動物和人體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子,在腫瘤血管生成中起核心調(diào)控作用3。本研究旨在探討聯(lián)合檢測NF-κB p65、HIF-1α的蛋白表達(dá)對早期診斷宮頸鱗癌的意義。 1 材料與方法 1.1 臨床資料 隨機(jī)選取2006年10月至2008年4月在青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤婦科住院治療的56例宮頸鱗癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本（取標(biāo)本前未行放、化療）。中位年齡48歲(2669歲) ； 藏族婦女25例，漢族婦女31例；根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟( FIGO) 分期標(biāo)準(zhǔn)判定,其中原位癌(0 期) 5例, I 期17 例, II 期21例，期13例;根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)組織分級標(biāo)準(zhǔn)判定，級（高分化）16例，級（中分化）21例，級（低分化）19例。正常對照組25例,中位年齡42歲(3254歲) ,標(biāo)本為子宮肌瘤患者行手術(shù)切除的正常宮頸組織，標(biāo)本均經(jīng)組織病理學(xué)確診。 1.2 主要試劑 NF-κB p65單克隆抗體濃縮液購自Santa Cruze 公司; 鼠抗人HIF-1α單克隆抗體、PV9000 二步法免疫組化檢測試劑及濃縮型DAB 底物試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。 1.3 實驗方法 標(biāo)本來自青海大學(xué)附屬醫(yī)院病理科宮頸癌瘤組織石蠟標(biāo)本，所有標(biāo)本連續(xù)切片3張，厚4 μm。NF-κB p65、HIF-1α檢測均采用PV9000二步法免疫組織化學(xué)方法檢測，具體步驟參照說明書進(jìn)行。NF-κB p65濃縮液稀釋100倍使用，HIF-1α為工作液。以正常宮頸組織為陰性對照，以PBS液替代一抗作空白對照。 1.4 結(jié)果判定 NF-κB p65、HIF-1α免疫組化染色均以細(xì)胞核或細(xì)胞漿染成棕褐色或黃色者為陽性。見圖1及圖2。雙盲法隨機(jī)選取5個高倍鏡（×400）視野進(jìn)行計數(shù)及評分。根據(jù)染色顯色強度與及陽性細(xì)胞比例進(jìn)行綜合評分4 : 根據(jù)著色深淺評分:無色或藍(lán)色為0 分,淺黃色為1 分,棕黃色為2 分,棕褐色為3 分; 著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞百分率: ≤5 %為0 分, > 5 %25 %為1分, >25 %50 %為2 分, > 50 %為3 分; 染色分值綜合判斷: 陽性細(xì)胞著色深淺分值( 與的積) , 結(jié)果0 分為陰性,13 分為+ ,46 分為+ + , 9分為+ + + 。 1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，統(tǒng)計推斷采用χ2檢驗和Spearman 等級相關(guān)分析，以 P<0.05作為差別有顯著意義的檢驗標(biāo)準(zhǔn)。 2 結(jié)果 2.1 NF-κB p65、HIF-1α在宮頸組織中的表達(dá) NF-κB p65、HIF-1α均可在細(xì)胞核和細(xì)胞漿中呈陽性表達(dá)，其表達(dá)率分別為69.6（39/56），71.4（40/56），以上兩者與對照組正常宮頸組織相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。詳細(xì)結(jié)果見表1。 表1NF-κB p65、HIF-1α在宮頸鱗癌和正常宮頸組織中的表達(dá) 2.2 NF-κB p65、HIF-1α在宮頸鱗癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系 NF-κB p65的過表達(dá)與宮頸鱗癌的分化程度及盆腔淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；但與年齡、臨床分期及民族差異無顯著性，P>0.05。而HIF-1α的蛋白表達(dá)與患者的臨床分期及有無淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；與年齡、組織學(xué)分級以及民族差異無顯著性，P>0.05。詳細(xì)結(jié)果見表2。表2NF-κB p65、HIF-1α與宮頸鱗癌的臨床病理指標(biāo)關(guān)系 2.3 宮頸鱗癌組織中NF-κB p65與HIF-1α蛋白表達(dá)的相關(guān)性 Spearman 等級相關(guān)分析顯示，NF-κB p65的表達(dá)與HIF-1α的表達(dá)呈明顯正相關(guān)（rs=0.584,p=0.001）。詳細(xì)結(jié)果見表3。表3NF-κB p65、HIF-1α在宮頸鱗癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析 3 討論 本研究結(jié)果顯示NF-κB p65在宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于正常宮頸組織（P<0.01）。在高、中、低分化的宮頸鱗癌組織中NF-κB p65的陽性表達(dá)率差別有顯著性，P<0.05。在有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者的陽性表達(dá)率明顯高于無轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌患者的陽性表達(dá)率，P<0.05。而NF-κB p65的陽性表達(dá)與患者的年齡及臨床分期無關(guān)（P>0.05），該結(jié)果與文獻(xiàn)5， 6研究結(jié)果相似。本研究結(jié)果表明NF-κB p65的異常表達(dá)與宮頸鱗癌的病理學(xué)類型及轉(zhuǎn)移過程相關(guān)。 HIF-1 在缺氧誘導(dǎo)下激活翻譯基因編碼血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)、糖酵解酶等多種靶基因的表達(dá)，在腫瘤血管生成與侵襲中起重要作用7。本研究結(jié)果也顯示HIF-1α在宮頸鱗癌組織中的陽性表達(dá)率為68.9，而在對照組正常宮頸組織中無表達(dá)，差異有顯著性，P<0.01。本實驗結(jié)果也顯示HIF-1α的蛋白陽性表達(dá)與患者的臨床分期及有無淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；而與患者的年齡和病理分級無關(guān)（P>0.05）。該結(jié)果與徐軍等8的研究結(jié)果相似。提示HIF-1α的異常表達(dá)與宮頸鱗癌的發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關(guān)。 本研究對25例藏族及31例漢族宮頸癌患者NF-κB p65的蛋白陽性表達(dá)進(jìn)行比較，其陽性率分別為80.0、63.1；而HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率分別為72.0%、70.9%，均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。暫且考慮在不同民族間NF-κB p65和HIF-1α的蛋白表達(dá)不存在顯著性差異，其最終結(jié)論有待于進(jìn)一步擴(kuò)大樣本和進(jìn)行不同地域的民族之間的研究認(rèn)定。 文獻(xiàn)報道NF-κB為HIF-1α的上游基因并對HIF-1α的表達(dá)及維持其活性起著重要作用9。 本研究對NF-κB p65和HIF-1α在宮頸癌中蛋白表達(dá)的相關(guān)性研究顯示，宮頸癌中NF-κB p65與HIF-1α的蛋白表達(dá)呈明顯正相關(guān)(rs=0.584,P<0.01), 提示NF-κB p65可能調(diào)控并促進(jìn)HIF-1α基因表達(dá)，共同參與了宮頸癌的發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1 Karin M. 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