CD44在胚胎腎組織和腎小球疾病患兒腎活檢組織中的表達.doc

CD44在胚胎腎組織和腎小球疾病患兒腎活檢組織中的表達中華兒科雜志 1998年第4期第36卷 論著作者：蔡毅黃松明甘衛(wèi)華黃文彥費莉姜新猷單位：210029 南京醫(yī)科大學小兒腎臟病研究中心，第二附屬醫(yī)院兒科關鍵詞：抗原；CD44；腎小球腎炎；免疫組織化學【摘要】目的觀察CD44在胚胎腎組織和腎小球疾病患兒腎活檢組織中的表達，以探明CD44在腎組織損傷發(fā)病機理中的作用。 方法應用堿性磷酸酶標記抗體技術，觀察CD44在胚胎腎組織和腎小球疾病患兒腎活檢組織中的表達。 結(jié)果(1)在胎兒和正常人腎組織中，腎小球內(nèi)CD44表達陰性，間質(zhì)弱陽性；(2)腎小球疾病患兒腎活檢組織中，CD44表達異常，其表達部位主要位于系膜細胞嚴重增殖的區(qū)域、硬化病灶形成處和明顯纖維化的間質(zhì)，且表達強度與病變的程度呈正相關。 結(jié)論結(jié)果提示CD44在增殖性腎小球腎炎的發(fā)病及腎小球疾病的慢性進展中發(fā)揮作用。The expression of CD44 in fetal kidneys and renal biopsy material from patients with glomerular diseasesCai Yi, Huang Songming, Gan Weihua, et al.Center of Pediatric Nephrology and Department of Pediatrics, Second Affiliated Hospital, Nanjing Medical University, Nanjing 210029【Abstract 】ObjectiveTo evaluate the role of CD44 in the pathogenesis of the glomerular diseases. MethodsThe expression of CD44 in fetal kidneys and renal biopsy material from patients with glomerular diseases was observed by using alkaline phosphatase labelled antibody technique. Results (1) In normal fetus and mature kidneys, the expression of CD44 was negative in the glomeruli and weakly positive in renal interstitium. (2) In the renal biopsy specimens from patients with glomerular diseases, the expression of CD44 was obviously abnormal. The expression of CD44 was found in the areas of severe mesangial proliferation, glomerular sclerotic lesions and renal interstitial fibrosis, and the intensity of the staining was positively correlated with the degree of renal histopathologic lesions. ConclusionCD44 may play a very important role in the pathogenesis of the proliferative glomerulonephritis and progression of the renal damage.【Key words 】Antigens, CD44GlomerulonephritisImmunohistochemistryCD44又稱H-細胞粘附因子(H-CAM)，屬于細胞粘附因子家族中的一類1，2。CD44通過與配受體結(jié)合介導細胞與細胞間、細胞與基質(zhì)間的粘附3，因而CD44的致病作用近幾年來倍受重視。為探討CD44在腎小球疾病中的意義，我們應用堿性磷酸酶標記抗體技術觀察了CD44在胎兒腎組織、成人正常腎組織及腎小球疾病患兒腎活檢組織中的表達。材料和方法一、標本來源8例胎齡在1630周水囊引產(chǎn)的胎兒腎均取自本院婦科，1例正常成人腎標本來自本校一附院泌尿外科擬行腎移植的未用腎。32例腎活檢組織均來源于本院住院的腎小球疾病患兒，其中微小病變型腎病(MCNS)4例，系膜增殖性腎小球腎炎(MsPGN)15例，毛細血管內(nèi)增殖性腎小球腎炎(EnPGN)2例，局灶節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)3例，IgA腎病2例，IgM腎病2例，狼瘡性腎炎2例，薄基底膜病1例，Alport綜合征1例。實驗用腎組織均用OCT包埋劑包埋，-20下冷凍切片(4 m)，丙酮固定后-60保存?zhèn)錂z。二、主要試劑CD44單克隆抗體購自美國雜交瘤銀行；堿性磷酸酶標記的羊抗小鼠IgG購自Sigma公司，酶作用底物NBT/BCIP購自德國寶靈曼公司。三、方法采用間接免疫堿性磷酸酶標記抗體技術。主要附表CD44在32例腎小球疾病患兒腎組織中的表達部位及強度(例數(shù))疾病分類例數(shù)腎小球間質(zhì)CD44表達強度*系膜區(qū)腎小球囊硬化病灶陰性弱陽性陽性強陽性MsPGN15114144(1)4(4)5(7)2(3)EnPGN210211(1)(1)IgA腎病21121(1)1(1)狼瘡性腎炎22221(1)1(1)IgM腎炎20022(1)(1)FSGS3312311(2)1(1)MCNS40014(2)(2)Alport綜合征10011(1)薄基底膜病10011(1)*括號內(nèi)和外數(shù)值分別表示系膜區(qū)和腎間質(zhì)的CD44表達強度步驟為：冰凍切片的腎組織經(jīng)PBS平衡后，加稀釋度為150的CD44單克隆抗體37孵育1小時，然后加堿性磷酸酶標記的羊抗小鼠IgG 37孵育1小時，再加底物液，避光反應2040分鐘，終止反應。0.5%美籃淡染細胞核，光鏡下觀察、攝片，判斷其表達的強度，若在背景下，底物顯色呈淡棕色，則為弱陽性；底物顯色呈棕色，為陽性；底物顯色呈棕黑色，則為強陽性；無底物顯色則判為陰性。結(jié)果一、CD44在胚胎腎組織中的表達無論是幼稚的腎小球還是成熟的腎小球中CD44均陰性，而腎小囊、小管上皮細胞、血管壁及腎間質(zhì)CD44呈陽性表達。二、CD44在正常腎組織中的表達在正常成人腎組織中，腎小球CD44表達陰性，小管上皮細胞亦無CD44表達；間質(zhì)CD44呈弱陽性表達。三、CD44在腎小球疾病患兒腎組織中的表達在增殖性腎小球病變(MsPGN、EnPGN、IgA腎病和狼瘡性腎炎)時，腎小球有CD44陽性表達主要位于系膜區(qū)，表達的強度與系膜細胞增殖及系膜基質(zhì)增多的程度相一致，間質(zhì)CD44表達亦增強并且與間質(zhì)纖維化的程度一致。在FSGS，CD44在腎小球有陽性表達，主要位于硬化區(qū)域，間質(zhì)CD44表達增強；在MCNS、IgM腎病、薄基底膜病和Alport綜合征中，腎小球CD44陰性，腎間質(zhì)CD44表達較正常對照沒有明顯改變(附表)。討論CD44是位于細胞表面的一種糖蛋白，分子量95 000，主要表達于淋巴細胞，亦分布于成纖維細胞或上皮細胞表面1，2。近年來的研究發(fā)現(xiàn)CD44具有許多重要的生物學功能，在免疫、炎癥反應和組織纖維化中具有重要的作用，如CD44可作為“歸巢”蛋白，誘導炎性細胞的趨化、游走和定位4；CD44能表達于成纖維細胞，并作為細胞外基質(zhì)受體與透明質(zhì)酸、膠原、板層蛋白和纖維連接蛋白結(jié)合而介導細胞與細胞外基質(zhì)的相互作用3，5，6。作為一重要的細胞粘附因子，CD44參與了多種人類疾病(腫瘤、器官移植排斥反應和某些自身免疫性疾病)的發(fā)生發(fā)展7，8，且可能是判斷疾病嚴重程度及預后的一個指標。在腎臟病學領域，初步研究結(jié)果提示CD44可能在腎臟的急慢性損傷中具有重要的病理生理學意義9，10。為此，我們進一步詳細地研究了CD44在胚胎腎組織、正常人腎組織及腎小球疾病患兒腎組織中的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在胚胎腎組織及正常成熟腎組織中，腎小球CD44無陽性表達、腎小管上皮細胞CD44陰性，間質(zhì)及血管有CD44弱陽性表達，在腎小球疾病時，CD44的表達有明顯異常，其異常表達的強度和部位因腎組織病理損傷的程度和類型而異。在增殖性腎小球腎炎(MsPGN、EnPGN、IgA腎病、狼瘡性腎炎)，在有明顯系膜細胞增殖或系膜基質(zhì)增多的系膜區(qū)，CD44呈陽性表達，其強度與系膜病變的程度相一致；間質(zhì)無明顯水腫及炎性細胞浸潤的增殖性腎炎，其腎間質(zhì)CD44表達陰性或弱陽性；2例狼瘡性腎炎，存在明顯的腎間質(zhì)水腫及炎性細胞浸潤，這時CD44的表達明顯增強，提示CD44與系膜細胞的增殖、細胞外基質(zhì)的增多密切相關，在腎間質(zhì)的急性損傷中發(fā)揮作用。在FSGS、CD44在腎小球有陽性表達，主要位于基質(zhì)增生明顯的系膜區(qū)及硬化病灶區(qū)域；在間質(zhì)纖維化明顯的部位，CD44表達強陽性，提示CD44與硬化病灶的形成和間質(zhì)纖維化密切相關。在MCNS及遺傳性疾病薄基底膜病和Alport綜合征的腎組織，與正常腎相比，CD44表達沒有明顯改變。我們的研究顯示，CD44與系膜細胞的增殖、細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生、硬化病灶的形成、間質(zhì)纖維化的程度密切相關。CD44在腎小球及腎間質(zhì)的急慢性損傷中具有重要的作用，它有望成為判斷腎小球疾病慢性進展及預后的一個重要指標。參考文獻1Hughes EN, Colombatti A, August JT. 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