藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)基本知識(shí)PPT課件

主講老師胡建平 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)基本知識(shí) 第一章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)須知第二章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器及技術(shù)第三章實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的簡(jiǎn)單統(tǒng)計(jì)學(xué) 該次課的內(nèi)容安排 第一章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)須知 一藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要性藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)是藥理學(xué)教學(xué)的一個(gè)重要的部分 用來驗(yàn)證一些藥理學(xué)理論部分內(nèi)容 二藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課程的目的選做一些經(jīng)典 實(shí)用的實(shí)驗(yàn) 使得學(xué)生熟悉藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本操作方法和技能 了解新藥評(píng)價(jià)和開發(fā)臨床前的一些藥效學(xué)和毒理學(xué)的一些基本技能 培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立思考 操作 分析 解決問題的能力 第一章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)須知 三藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課前 課中 課后的要求 一 實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 了解實(shí)驗(yàn)的目的 要求 步驟和操作程序 結(jié)合實(shí)驗(yàn)內(nèi)容復(fù)習(xí)有關(guān)理論 做到充分理解 預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)得到的結(jié)果 寫出預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 自己隨意寫 對(duì)自己做實(shí)驗(yàn)有用就好 二 實(shí)驗(yàn)時(shí)實(shí)驗(yàn)器材安放整齊 清潔有序 按照實(shí)驗(yàn)步驟 以嚴(yán)肅認(rèn)真的態(tài)度循序操作 不得進(jìn)行與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的活動(dòng) 注意保護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果 愛護(hù)實(shí)驗(yàn)器材和節(jié)約藥品 仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)過程出現(xiàn)的現(xiàn)象 隨時(shí)紀(jì)錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 聯(lián)系理論進(jìn)行思考 發(fā)生什么 為何這樣 生理意義 三 實(shí)驗(yàn)后把實(shí)驗(yàn)用具整理就緒 如有損壞短缺 應(yīng)向教師報(bào)告 整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 認(rèn)真書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告 按時(shí)上交評(píng)閱 四實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓名 班級(jí) 組別 日期 實(shí)驗(yàn)題目 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)對(duì)象 實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 分析與討論 結(jié)論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述文字上力求從簡(jiǎn) 最好用圖表表示 填寫實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí) 要堅(jiān)持真實(shí)性和科學(xué)性 在分析討論中 可以結(jié)合理論部分進(jìn)行分析 或?qū)?shí)驗(yàn)得到的規(guī)律性的東西進(jìn)行分析討論 提出見解 避免抄書 結(jié)論部分的東西是本次實(shí)驗(yàn)獲得的最為基本的規(guī)律性內(nèi)容 文字務(wù)必簡(jiǎn)明扼要 不可憑空想象加入一些本實(shí)驗(yàn)沒有證實(shí)的內(nèi)容 五實(shí)驗(yàn)室規(guī)則1遵守學(xué)習(xí)紀(jì)律 準(zhǔn)時(shí)上下課 實(shí)驗(yàn)期間不得借故外出或早退 特殊情況下 需要請(qǐng)假 2必須認(rèn)真地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作 觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)期間要保持安靜 不得進(jìn)行任何與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的活動(dòng) 3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)紀(jì)錄 必須經(jīng)過教師審核 否則不能結(jié)束實(shí)驗(yàn) 4各組的儀器 用品 由本組使用 不得與別組調(diào)換 以免混亂 如遇到儀器損壞或丟失 應(yīng)報(bào)請(qǐng)教師處理 5愛護(hù)公共財(cái)物 注意節(jié)約各種實(shí)驗(yàn)用品 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按組發(fā)給 如需要補(bǔ)充使用 須經(jīng)教師同意之后才能補(bǔ)領(lǐng) 6保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊 隨時(shí)清除污物 實(shí)驗(yàn)完畢后 應(yīng)將實(shí)驗(yàn)器材 用具收拾妥當(dāng) 將手術(shù)器械擦洗干凈 清點(diǎn)數(shù)量 放回原處 經(jīng)教師檢查之后才能離開實(shí)驗(yàn)室 一分光光度計(jì)二離心作用三動(dòng)物的捉持四動(dòng)物的給藥方法五動(dòng)物的取血方法六動(dòng)物的處死方法 第二章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器及技術(shù) 一分光光度計(jì) 儀器介紹分光光度計(jì)有幾個(gè)部件 其中包括光源 提供選擇波長(zhǎng)的的單色器 可變狹縫 樣品架 光探測(cè)器和儀表 不同的光譜區(qū)要使用不同的光源 在可見區(qū) 400nm 700nm 和紫外區(qū) 200nm 400nm 分別使用鎢燈和氘燈 在這些區(qū)域的光波長(zhǎng)是由分光光度計(jì)中的單色器選擇的 單色器是由棱鏡或衍射光柵構(gòu)成的 在可見區(qū)和紫外區(qū)給出窄帶波長(zhǎng)的光 光由可控制光強(qiáng)的可調(diào)狹縫進(jìn)入樣品 然后由光電管探測(cè)透過的光 并被電流計(jì)所測(cè)量 下圖為分光光度計(jì)的部件原理圖 紫外和可見光譜的應(yīng)用紫外和可見光譜最為主要的應(yīng)用是 測(cè)量溶液中物質(zhì)的濃度 其基本原理是 光吸收值和吸光物質(zhì)的濃度成正比 二離心作用離心作用是裝有固體顆粒懸浮液的容器迅速旋轉(zhuǎn)的過程 顯著增加的重力場(chǎng)使顆粒沉降 離心力或引力與角速度的平方 2 乘以距轉(zhuǎn)動(dòng)中心的徑向距離r cm 成正比 角速度以每分鐘的轉(zhuǎn)速 rpm 來表示 離心力由下式給出 F 1 12 10 5 2 r 從上式可以看出 對(duì)于徑向距離為7cm的轉(zhuǎn)子 若角速度為10000rpm 則離心力為8000g 成功的離心作用取決于兩個(gè)因素 1 離心時(shí)間和 2 發(fā)揮的g值 如下表 表1在離心場(chǎng)中沉降生物顆粒所需的重力和時(shí)間的比較 所以使用不同的g力 不同的離心t的差速離心法可用來分離細(xì)胞組分 三動(dòng)物的提持 限小鼠和家兔 1小鼠的提持 2種方法 雙手提斥法右手提起鼠尾 放在鼠籠 或其他粗糙面 上 向后輕拉其尾 小鼠即固定于鼠籠上 迅速用左手拇指和食指捏住小鼠頭頸部皮膚 并以左手小指 無名指壓其尾部于手掌尺側(cè) 單手提持法只用左手 先用食指和拇指抓住小鼠尾巴后用手掌尺側(cè)和小指夾住尾根部 然后用左手拇指和食指捏住頭頸部皮膚2家兔的提持一只手抓住兔頸背部皮膚 將兔輕輕提起 另一只手托住臀部 使兔呈蹲坐姿勢(shì) 切不可用手握持雙耳提起兔子 1灌胃方法2皮下注射方法3肌內(nèi)注射方法4腹腔注射方法5靜脈注射方法 四動(dòng)物的給藥方法 限小鼠和家兔 動(dòng)物給藥方式一 灌胃方法 小鼠的灌胃方法左手捉持小鼠 腹部朝向操作者 右手持灌胃管 經(jīng)口角插入口腔 使灌胃管與食管成一直線 將灌胃管沿上腭壁緩慢插入食管2cm 3cm 灌胃管的前端即達(dá)膈肌部位 此時(shí)操作者可有抵抗感 如動(dòng)物安靜 呼吸無異常 即可將藥液注入 操作宜輕柔 防止損傷食管 如遇阻力應(yīng)抽出灌胃管重新插入 若將藥液誤注氣管 動(dòng)物立即死亡 家兔的灌胃方法給兔灌胃需兩人合作 一人坐好將兔軀體夾于兩腿之間 左手抓住雙耳 固定其頭部 左手抓住兩前肢 使兔頭稍向后仰 另一人將開口器橫放于兔口中 慢慢旋轉(zhuǎn)開口器 將兔舌壓住 并固定之 將8號(hào)導(dǎo)尿管經(jīng)開口器中央孔 沿上腭壁慢慢插入食管15cm 18cm 為避免誤入氣管 可將導(dǎo)尿管的外口端放入清水中 無氣泡逸出方可注入藥液 再用少量清水沖洗管內(nèi)殘存藥液 灌畢 慢慢拔出導(dǎo)尿管 取出開口器 小鼠的皮下注射方法一般需要兩個(gè)人合作 一人左手捏小鼠頭部皮膚 右手拉住小鼠尾巴使小鼠固定 另一人左手提起背部皮膚 右手持注射器將針頭刺入皮下 稍稍擺動(dòng)針頭 若容易擺動(dòng)則表明針尖確實(shí)位于皮下 此時(shí)注入藥液 拔針時(shí) 右手捏住針刺部位片刻 以防止藥液逸出 也可一人操作 將小鼠放在粗糙的平面上 左手拉小鼠尾巴 趁小鼠向前爬動(dòng)時(shí) 右手持注射器迅速將針頭刺入小鼠背部皮下 推注藥液 家兔的皮下注射方法通常選擇背頸部皮下注射 操作者左手拇指 食指和中指提起背頸部皮膚 使其折成三角體 右手持注射器自皺折下方刺入皮下 松開皮膚注入藥液 動(dòng)物給藥方式二 皮下注射方法 小鼠的肌內(nèi)注射方法需兩人合作 一人左手捏小鼠頭部皮膚 右手拉住小鼠尾巴使小鼠固定 另一人左手固定注射側(cè)后肢 右手持注射器 將針頭刺入外側(cè)股部肌內(nèi) 小鼠肌肉較少 肌內(nèi)注射不常用 家兔的肌內(nèi)注射方法注射部位為臀部和股部肌肉 動(dòng)物給藥方式三 肌內(nèi)注射方法 小鼠的腹腔注射方法左手捉持小鼠 將腹部朝上 頭部下傾 右手持注射器在下腹左側(cè)或右側(cè) 避開膀胱 向頭端穿刺 針頭與皮膚呈30 刺入腹腔 有落空感 注入藥液 注意針頭不要刺入太深 太靠上 以免刺破肝臟 家兔的腹腔注射方法方法幾乎與小鼠相同 動(dòng)物給藥方式四 腹腔注射方法 小鼠的靜脈注射 多用尾靜脈注射 將小鼠固定在一鐵絲籠或特制筒內(nèi) 使小鼠尾露在外面 用75 乙醇溶液涂擦尾巴或在45 左右溫水中侵泡30s 使尾靜脈充血 注射時(shí) 左手拇指和食指捏持鼠尾 右手持注射器 選擇尾巴兩側(cè)靜脈 使針頭與鼠尾成3 5 幾乎平行 進(jìn)行靜脈穿刺 如推注藥液無阻力 局部皮膚發(fā)白則表明針頭未刺入血管 退出針頭重新穿刺 注意靜脈穿刺時(shí)應(yīng)從遠(yuǎn)端 近尾尖 開始 不僅容易穿刺 而且還可向近端多次穿刺 注射完畢 用棉球按壓穿刺口止血 家兔的靜脈注射 多用耳緣靜脈 注射部位去毛并用酒精棉球涂擦 用左手拇指和中指捏住兔耳尖部 以食指墊于耳下 右手持注射器 從靜脈遠(yuǎn)端將針頭刺入血管 將藥液推入 如推注時(shí)有阻力 局部出現(xiàn)腫脹 表明針頭不在血管內(nèi) 應(yīng)立即拔針重新穿刺 注畢要用棉球壓迫針眼幾分鐘止血 動(dòng)物給藥方式五 靜脈注射方法 小鼠剪尾采血將小鼠固定在鐵絲籠或特別筒內(nèi) 使鼠尾露在外面 剪掉鼠尾1mm 2mm 用拇指和食指由尾根向尾尖按捏 血液即從尾尖流出 小鼠每次可采血0 1ml 注意 只剪去尾尖 如剪去過多組織 反而流血少 下次采血時(shí) 只需將尾尖血痂jia剪掉就可以了 家兔心臟采血將家兔被部固定 剪去左側(cè)胸部相當(dāng)于心臟部位的被毛 用碘酒和酒精消毒皮膚 選擇心臟跳動(dòng)最明顯處穿刺 一般由胸骨左緣外3mm處刺入兔的第三肋間隙 穿刺時(shí) 最好用左手觸診心臟 以作配合 當(dāng)針頭接近心臟時(shí) 就會(huì)感到心臟的跳動(dòng) 這是需將針頭再向里穿刺 便可進(jìn)入心室 由于心臟的搏動(dòng) 血液會(huì)自然進(jìn)入注射器 如認(rèn)為針頭已經(jīng)進(jìn)入心臟 但抽不出血液 可將針頭稍微退出或進(jìn)入一點(diǎn) 一般來講 心臟采血經(jīng)6 7天后 可以重復(fù)進(jìn)行 采血量大約20ml 30ml 五動(dòng)物的取血方法 限小鼠和家兔 家兔耳緣靜脈采血拔去耳緣被毛 用燈泡照射加熱耳朵或75 酒精涂擦局部 使靜脈擴(kuò)張 再用石蠟油涂擦耳緣 防止血液凝固 耳受熱之后用小血管夾夾緊耳根部 用粗號(hào)針頭逆靜脈回流方向刺破靜脈或用刀片切開靜脈 血液可自動(dòng)流出 一般可采血2ml 3ml 取血后棉球壓迫止血 家兔耳中央動(dòng)脈采血將兔子置于兔固定箱內(nèi) 用酒精棉球擦揉兔耳片刻 使其充血 在兔耳中央有一條縱行 較粗 顏色鮮紅的中央動(dòng)脈 左手固定兔耳 右手持注射器 一般用6號(hào)針筒 不可太細(xì) 在中央動(dòng)脈的末端 沿動(dòng)脈平行地向心方向刺入動(dòng)脈 慢慢回抽針筒 動(dòng)脈血立即進(jìn)入針筒 一次可取血15ml 因耳中央動(dòng)脈容易發(fā)生痙攣收縮 容易導(dǎo)致采血無法進(jìn)行 因此必須要先讓兔耳充分充血 并在痙攣前迅速完成抽血 抽血后棉球壓迫止血 五動(dòng)物的取血方法 限小鼠和家兔 六動(dòng)物的處死方法 限小鼠和家兔 小鼠的處死 常采用頸椎脫臼法 用左手拇指和食指將其頭部緊緊按在硬的物體上 右手捏住鼠尾 用力向后上方牽拉 使頸椎脫位 小鼠可瞬間死亡 家兔的處死 常采用空氣栓注法 用50ml 100ml的注射器 往家兔的耳緣靜脈內(nèi)注射20ml 40ml的空氣量 使之發(fā)生栓塞而死亡 一均數(shù)二標(biāo)準(zhǔn)差 SD 三標(biāo)準(zhǔn)誤和t檢驗(yàn) 第三章實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的簡(jiǎn)單統(tǒng)計(jì)學(xué) 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)的意義 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)一般都需要經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以便通過分析樣本 推斷總體 透過偶然 找出規(guī)律 統(tǒng)計(jì)處理數(shù)據(jù)資料的系統(tǒng)知識(shí)比較豐富 這里僅僅對(duì)處理藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的需要 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差 標(biāo)準(zhǔn)誤以及計(jì)量資料的顯著性測(cè)定做一個(gè)簡(jiǎn)單的介紹 以供學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果作出正確的判斷 一均數(shù) 均數(shù)也就是算術(shù)平均值 統(tǒng)計(jì)學(xué)上用表示 均數(shù)是分析計(jì)量數(shù)據(jù)最基本的指標(biāo) 它表示一套變量值的集中趨勢(shì) 平均水平 不僅可以給人一個(gè)簡(jiǎn)明概括的印象 并可用來作事物間的比較 均數(shù)的計(jì)算公式為 其中為總和 x1 x2 xn等為各次的測(cè)定值 變量 n為變量的個(gè)數(shù) 即樣本容量 而為各變量的總和 二標(biāo)準(zhǔn)差 SD 均數(shù)只是集中趨勢(shì)的指標(biāo) 不能反映一組數(shù)據(jù)與均數(shù)的離散程度 特別是數(shù)據(jù)不符常態(tài)分布時(shí) 更是如此 而標(biāo)準(zhǔn)差是最為常用的 最能完整地反映全套變量值離散程度的統(tǒng)計(jì)指標(biāo) 一般用SD表示 而計(jì)算SD的公式為 式子中x為每一個(gè)變量值 為均數(shù) n為變量的個(gè)數(shù) 例1根據(jù)某年級(jí)12名女學(xué)生收縮壓的數(shù)據(jù) 見下表 求其均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差 表一12名女學(xué)生收縮壓數(shù)據(jù) 表一12名女學(xué)生收縮壓數(shù)據(jù) 表一12名女學(xué)生收縮壓數(shù)據(jù) 解 將有關(guān)數(shù)據(jù)帶入公式 1 求出均數(shù)代入公式 2 求出標(biāo)準(zhǔn)差所以可以得到 從上面的例子也可以看出 標(biāo)準(zhǔn)差反映了各變量離開均數(shù)的分布情況 在均數(shù)與單位相同的情況下 標(biāo)準(zhǔn)差越大 則表示各變量離開均數(shù)越遠(yuǎn) 諸變量離散程度也越高 反之 標(biāo)準(zhǔn)差越小 則表示離均數(shù)越近 離散程度越低 偏差小 精密度高 三標(biāo)準(zhǔn)誤 SE 和t檢驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)誤和標(biāo)準(zhǔn)差不同 它表示的是多次測(cè)定的均數(shù)與總體均數(shù)的離散程度 也就是總體中各樣本的均數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差 計(jì)算公式如下 其中 SE為標(biāo)準(zhǔn)誤 SD為標(biāo)準(zhǔn)差 n為樣本數(shù) 值得注意是 SE的目的主要是為了用于兩個(gè)均數(shù)差別的顯著性檢驗(yàn)之中 t檢驗(yàn)的定義 在抽樣研究中 經(jīng)常遇到兩個(gè)樣本均數(shù)的有所差別 對(duì)于兩個(gè)均數(shù)的差別不可以僅看表面數(shù)值的不同而匆忙推論出其本質(zhì)的差異 必須考慮到引起這種差別有兩種可能性 1 差別僅僅又抽樣誤差所引起 它們之間沒有本質(zhì)上的誤差 2 差別已經(jīng)超出了抽樣誤差所引起的范圍 它們之間有本質(zhì)差異 除t值之外 在得到組間差異的概率之前還需要知道自由度 上述例子的自由度為 通過t值和自由度f值可以從t 分布表上找到組間差異的概率P 兩者差別不大且接受抽樣誤差的概率 其中t值的判