蔗糖酶米氏常數(shù)的測(cè)定ppt課件.ppt_第1頁
蔗糖酶米氏常數(shù)的測(cè)定ppt課件.ppt_第2頁
蔗糖酶米氏常數(shù)的測(cè)定ppt課件.ppt_第3頁
蔗糖酶米氏常數(shù)的測(cè)定ppt課件.ppt_第4頁
蔗糖酶米氏常數(shù)的測(cè)定ppt課件.ppt_第5頁
已閱讀5頁，還剩4頁未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

【目的】：了解底物濃度與酶反應(yīng)速度間的關(guān)系，學(xué)習(xí)求蔗糖酶米氏常數(shù)的方法【原理】：米氏方程式v=米氏常數(shù)的求法很多，最常用的是LineweaverBurk的作圖法(雙倒數(shù)作圖法)。米氏方程式可改寫為下列倒數(shù)形式：選擇不同的s，測(cè)定相應(yīng)的v，求出兩者的倒數(shù)，以1/s為橫坐標(biāo)，以1/v為縱坐標(biāo)作圖，繪出一條直線，外推至橫軸相交，橫軸截距即為-1/Km。,蔗糖酶米氏常數(shù)的測(cè)定,1,2,3,還原糖與3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑反應(yīng)：,4,【儀器與試劑】1.儀器：分光光度計(jì)、恒溫水浴、試管、吸管、秒表、坐標(biāo)紙2試劑標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（1mg/mL）3%蔗糖溶液（87.7mM）0.2mol/LNaAc緩沖溶液（pH4.6）0.5mol/LNaOH溶液3,5-二硝基水楊酸試劑,5,【操作步驟】1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定,將各管溶液混合均勻，在沸水浴中加熱5min，取出后立即用冷水冷卻至室溫，以蒸餾水稀釋至25mL，搖勻。測(cè)540nm處A值。以葡萄糖含量（mg）為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。,6,取試管8支編號(hào)，按下表將蔗糖溶液，醋酸緩沖液分別加入試管，于37水浴中保溫10min。一定量酶液同一水浴中保溫約10min。于各管中依次按同樣間隔(0.5min)加入已保溫過的酶液1.0mL，計(jì)時(shí)，立即搖勻，在37中準(zhǔn)確溫浴5min。按同樣次序和時(shí)間間隔，加入1mL0.5mol/LNaOH，搖勻，終止反應(yīng)。吸取反應(yīng)物1.0mL，加入盛有3.0mL3，5-二硝基水楊酸試劑和1.0mL水的試管中混勻，放入沸水浴中加熱5min，冷卻后稀釋至25mL，搖勻，在540nm比色測(cè)定A值。以A值對(duì)應(yīng)的葡萄糖量為相對(duì)反應(yīng)速度，以1/S為橫坐標(biāo)，1/v為縱坐標(biāo)作圖，由圖求出Km值。,2底物濃度和初速度測(cè)定,7

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論