丙二酸對琥珀酸脫氫酶的抑制

丙二酸對琥珀酸的競爭性抑制,主講人：葛靜制作人：胡波,實驗目的,實驗原理,實驗材料與儀器,實驗步驟,實驗結果記錄,注意事項,實驗討論,實驗目的：,1、學習和掌握競爭性抑制作用的特點。2、觀察丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用。,PPT模板下載：,實驗原理,化學結構與酶作用的底物結構相似的物質，可與底物競爭結合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至喪失，這種抑制作用稱為競爭性抑制作用。,琥珀酸脫氫酶：是機體內(nèi)參與三羧酸循環(huán)的一種重要的脫氫酶，其輔基為FAD，如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下，可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫可將藍色的甲烯藍還原成無色的甲烯白。這樣，便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用,實驗材料與儀器：,器材：大白鼠、手術剪、滴管鑷子、紗布、漏斗、量筒、燒杯、研缽刻度吸量管試管及試管架、恒溫水箱、,試劑：0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液0.2mol/L丙二酸溶液0.02mol/L丙二酸溶液、1/15mol/LPH=7.4磷酸鹽緩沖液、0.02%甲烯藍,1、酶提取液的制備：取大白鼠的骨骼肌，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸緩沖液pH在7.4。在研缽中碾碎，然后用紗布過濾，用干凈的燒杯收集過濾的備用。,實驗步驟:,2、取試管6支，編號，在按圖步驟操作,試管6：酶提取液在100水浴中保溫,3.各管溶液立即混均勻，沿試管壁加入液體石蠟，約0.5cm，各管置于37的水浴中保溫，切勿搖動試管，隨時觀察比較各試管顏色的變化，記錄褪色時間。,實驗結果記錄：,【注意事項】：,1、酶提取液的制備應操作迅速，以防止酶活性降低。2、加入液體石蠟的作用是隔絕空氣，以避免空氣中的氧氣對實驗造成影響，因此加石蠟時試管壁要傾斜，注意不要產(chǎn)生氣泡。3、37水浴保溫過程中，不能搖動試管，避免空氣中的氧氣接觸反應溶液，使得還原型的甲烯白重新氧化成藍色。4.、37水浴保溫過程中，要注意隨時觀察各試管的褪色情況。5、實驗結果結束后，一定要洗干凈試管內(nèi)的液體石蠟。,實驗討論：,1、酶提取液中有琥珀酸脫氫酶活性，表1所示，在試管1中沒有抑制劑，但琥珀酸依然能脫氫，使得甲烯藍反應得甲烯白。2、各管的褪色有明顯的時間差別，褪色時間隨I/S逐漸增大，而增大。3、丙二酸對琥珀酸脫氫酶抑制作用的類型是競爭性抑制，其特點：最大反應速率Vmax不變，米氏常數(shù)Km增大，競爭性抑制可以通過增大底物濃度來減輕抑制程度。4、本實驗中5號、6號試管的作用是做對照，5號試管和1號試管做對照，說明酶提取液